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Comparative Anatomy and Histology A

Mouse Rat and Human Atlas Piper M.


Treuting
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COMPARATIVE ANATOMY
AND HISTOLOGY
A MOUSE, RAT, AND HUMAN ATLAS

Second Edition
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Comparative Anatomy
and Histology
A MOUSE, RAT, AND HUMAN ATLAS
Second Edition

EDITED BY

Piper M. Treuting, DVM, MS, Diplomate, ACVP


Associate Professor, Chief of Comparative Pathology
Department of Comparative Medicine
Adjunct Associate Professor, Department of Pathology
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States

Suzanne M. Dintzis, MD, PhD


Associate Professor, Department of Anatomic Pathology
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States

Kathleen S. Montine, PhD, ELS


Senior Principal Research Scientist, Department of Pathology
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States
Academic Press is an imprint of Elsevier
125 London Wall, London EC2Y 5AS, United Kingdom
525 B Street, Suite 1800, San Diego, CA 92101-4495, United States
50 Hampshire Street, 5th Floor, Cambridge, MA 02139, United States
The Boulevard, Langford Lane, Kidlington, Oxford OX5 1GB, United Kingdom

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ISBN: 978-0-12-802900-8

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Publisher: Mica Haley


Acquisition Editor: Tari Broderick
Editorial Project Manager: Pat Gonzalez
Production Project Manager: Lucía Pérez
Designer: Matthew Limbert

Typeset by MPS Limited, Chennai, India


CONTENTS

List of Contributorsâ•… xi Sectioningâ•…49


Preface to the Second Editionâ•…xv Stainingâ•…49
Further Reading and Relevant Websitesâ•… 51
Acknowledgments from the First Editionâ•… xvii

CHAPTER 4↜╅ M�IC�RO�SC�OPY, I�MMUNO��H�IS�TO�CH�EMISTRY,

CHAPTER 1â•…INTRODUCTIONâ•… DIGITAL IMAGING, AND QUANTITATIVE MICROSCOPYâ•…


Paul C. Goodwin, Brian Johnson and Charles W. Frevert
Piper M. Treuting, Suzanne M. Dintzis and Kathleen S. Montine
Introductionâ•… 53
Overview and Introduction to the Second Editionâ•… 1 Key Elements of Microscopyâ•… 53
Comparative Pathology: Closing a Gapâ•… 1 Magnificationâ•…53
C57BL/6 Mice as Index Strainâ•… 5 Resolutionâ•…54
Sprague-Dawley Rats as Index Strainâ•… 5 Contrastâ•…54
Atlas Scope and Design╅ 5 Key Elements o�f IHC╅ 56
Further Reading and Relevant Websitesâ•… 6 Backgroundâ•…56
Tissue Processingâ•… 56
Validation of Antibody Specificityâ•… 56
CHAPTER 2â•…PHENOTYPINGâ•… Protocol Optimizationâ•… 58
Antibody Controlsâ•… 60
Cory F. Brayton and Piper M. Treuting Tissue Controlsâ•… 60
Introductionâ•… 9 Key Elements of Digital Imagingâ•… 61
Phenotyping Study Designâ•… 10 Key Elements of Quantitative Microscopyâ•… 62
Strategiesâ•…10 Backgroundâ•…62
Materials and Methodsâ•… 10 Stereologyâ•…63
Reportingâ•…16 Image Analysisâ•… 64
Conclusion╅20 I�HC and Imaging Reproducibility╅ 64
Further Reading and Relevant Websitesâ•… 20 Acknowledgmentsâ•…65
Further Readingâ•… 65

CHAPTER 3╅ NECROPSY AND HISTOLOGY╅ CHAPTER 5↜╅ SKELETAL SYSTEM╅


Sue E. Knoblaugh and Julie Randolph-Habecker Christopher Jerome, Benjamin Hoch and Cathy S. Carlson
Introductionâ•… 23 Introductionâ•… 67
Fixation Considerations Prior to Necropsyâ•… 24 Skeletonâ•…68
Major Groups of Fixativesâ•… 24 Gross Anatomyâ•… 68
Tissue Fixation Variables to Considerâ•… 25 Histologyâ•…69
Decalcification of Bone Samplesâ•… 26 Long Bonesâ•… 73
Frozen Tissue for Histologic Evaluationâ•… 27 Gross Anatomyâ•… 73
Necropsyâ•…27 Histologyâ•…75
Recommended Materialsâ•… 28 Spineâ•…82
External Examinationâ•… 29 Gross Anatomyâ•… 82
First Incisionâ•… 30 Histologyâ•…83
Internal Examinationâ•… 32 Jointsâ•…83
Next Stepsâ•… 45 Gross Anatomyâ•… 83
Histologyâ•…45 Histologyâ•…83
Processingâ•…47 Soft Tissuesâ•… 85
Embeddingâ•…49 Further Readingâ•… 87
vi Contents

CHAPTER 6↜╅ NOSE, SINUS, PHARYNX, AND LARYNX╅ Bronchi to Terminal Bronchioles╅ 151
Jack R. Harkema, Stephan A. Carey, James G. Wagner, Gross Anatomyâ•… 151
Suzanne M. Dintzis and Denny Liggitt Histologyâ•…152
Respiratory Zoneâ•… 156
Introductionâ•… 89 Gross Anatomyâ•… 156
Nose and Sinusâ•… 90 Histologyâ•…156
Gross Anatomyâ•… 90 Lung Circulatory Systemâ•… 159
Preparation of Nasal Tissues for Microscopic Examâ•… 92 Gross Anatomyâ•… 159
Histologyâ•…94 Histologyâ•…159
Other Nasal Cavity Featuresâ•… 103 Pleuraâ•…159
Pharynx and Larynxâ•… 105 Gross Anatomyâ•… 159
Gross Anatomyâ•… 105 Histologyâ•…160
Preparation of Rodent Pharynx and Larynx for Further Readingâ•… 162
Microscopic Examâ•… 106
Histologyâ•…106
Further Readingâ•… 112
CHAPTER 10↜╅ C�AR�DI�OV�AS�CULAR╅
Bernard S. Buetow and Michael A. Laflamme
CHAPTER 7â•… ORAL CAVITY AND TEETHâ•… Introductionâ•… 163
Heartâ•…167
Piper M. Treuting, Thomas H. Morton Jr. and Peter Vogel Gross Anatomyâ•… 167
Introductionâ•… 115 Relative Size Considerationsâ•… 170
Oral Cavityâ•… 115 Histologyâ•…172
Gross Anatomyâ•… 115 Cardiac Valvesâ•… 178
Histologyâ•…117 Gross Anatomyâ•… 178
Teethâ•…121 Histologyâ•…178
Gross Anatomyâ•… 121 Conduction Systemâ•… 181
Histologyâ•…125 Great Vessels and Coronary Vasculatureâ•… 181
Further Readingâ•… 133 Gross Anatomyâ•… 181
Histologyâ•…184
Common Incidental Findings in Rodentsâ•… 187
CHAPTER 8â•… SALIVARY GLANDSâ•…
Further Readingâ•… 188

Renee R. Hukkanen, Suzanne M. Dintzis and Piper M. Treuting


Introduction╅ 135 CHAPTER 11↜╅ U�PP�ER G�AS�TR�OINTESTINAL TRACT╅
Salivary Gland Featuresâ•… 135 Piper M. Treuting, Mark J. Arends and Suzanne M. Dintzis
Gross Anatomyâ•… 135
Introductionâ•… 191
General Histologyâ•… 135
Esophagusâ•…191
Submandibular Glandâ•… 139
Gross Anatomyâ•… 191
Gross Anatomyâ•… 139
Histologyâ•…192
Histologyâ•…142
Stomachâ•…194
Parotid Glandâ•… 142
Gross Anatomyâ•… 194
Gross Anatomyâ•… 142
Histologyâ•…195
Histologyâ•…142
Small Intestineâ•… 201
Sublingual Glandâ•… 143
Gross Anatomyâ•… 201
Gross Anatomyâ•… 143
Histologyâ•…202
Histologyâ•…144
Methodsâ•…211
Further Readingâ•… 144
Further Readingâ•… 211

CHAPTER 9╅ RESPIRATORY SYSTEM╅ CHAPTER 12╅ L�OW�ER G�AS�TR�OINTESTINAL TRACT╅


David K. Meyerholz, Carlos J. Suarez, Suzanne M. Dintzis and Piper M. Treuting, Mark J. Arends and Suzanne M. Dintzis
Charles W. Frevert Introductionâ•… 213
Introductionâ•… 147 Cecumâ•…213
Tracheaâ•…147 Gross Anatomyâ•… 213
Gross Anatomyâ•… 147 Histologyâ•…216
Histologyâ•…148 Appendixâ•…216
Lungâ•…151 Gross Anatomyâ•… 216
Gross Anatomyâ•… 151 Histologyâ•…218
Contents vii

Colonâ•…220 Gross Anatomyâ•… 275


Gross Anatomyâ•… 220 Histologyâ•…282
Histologyâ•…223 Ureters, Urinary Bladder, and Urethraâ•… 291
Gut-Associated Lymphoid Tissueâ•… 228 Gross Anatomyâ•… 291
Gross Anatomyâ•… 228 Histologyâ•…296
Histologyâ•…228 Further Readingâ•… 301
Further Readingâ•… 228

17â•…
13↜╅
CHAPTER F�EM�ALE R�EP�RODUCTIVE SYSTEM╅
CHAPTER HEPATOBILIARY SYSTEMâ•…
Kelli L. Boyd, Atis Muehlenbachs, Mara H. Rendi,
Arlin B. Rogers and Renee Z. Dintzis Rochelle L. Garcia and Katherine N. Gibson-Corley
Introductionâ•… 229 Introductionâ•… 303
Liverâ•…230 Ovaryâ•…303
Gross Anatomyâ•… 230 Gross Anatomyâ•… 303
Histologyâ•…233 Histologyâ•…307
Gallbladderâ•…238 Oviduct (Uterine Tube)â•… 310
Further Readingâ•… 239 Gross Anatomyâ•… 310
Histologyâ•…312
Uterus and Cervixâ•… 315
CHAPTER 14↜╅PANCREAS╅ Gross Anatomy╅ 315
Histologyâ•…315
Denny Liggitt and Suzanne M. Dintzis
Vagina and Clitorisâ•… 320
Introductionâ•… 241 Gross Anatomyâ•… 320
Pancreasâ•…241 Histologyâ•…321
Gross Anatomyâ•… 241 Placentaâ•…321
Histologyâ•…243 Gross Anatomyâ•… 321
Further Readingâ•… 249 Histologyâ•…324
Further Readingâ•… 334

CHAPTER 15↜╅ ENDOCRINE SYSTEM╅


Krista Marie DuBray La Perle and Suzanne M. Dintzis CHAPTER 18╅ M�AL�E R�EP�RODUCTIVE SYSTEM╅

Introductionâ•… 251 Sue E. Knoblaugh, Lawrence True, Maria Tretiakova and


Thyroid Glandâ•… 251 Renee R. Hukkanen
Gross Anatomyâ•… 251 Introductionâ•… 335
Histologyâ•…253 Testesâ•…336
Parathyroid Glandâ•… 255 Gross Anatomyâ•… 336
Gross Anatomyâ•… 255 Histologyâ•…338
Histologyâ•…256 Efferent Ductsâ•… 341
Adrenal Glandâ•… 256 Gross Anatomyâ•… 341
Gross Anatomyâ•… 256 Histologyâ•…342
Histologyâ•…258 Epididymisâ•…342
Pituitary Glandâ•… 262 Gross Anatomyâ•… 342
Gross Anatomyâ•… 262 Histologyâ•…343
Histologyâ•…262 Vas Deferensâ•… 343
Pineal Glandâ•… 268 Gross Anatomyâ•… 343
Gross Anatomyâ•… 268 Histologyâ•…345
Histologyâ•…269 Seminal Vesicles (Vesicular Glands)â•… 346
Paragangliaâ•…270 Gross Anatomyâ•… 346
Gross Anatomyâ•… 270 Histologyâ•…346
Histologyâ•…271 Prostate Glandâ•… 348
Further Readingâ•… 272 Gross Anatomyâ•… 348
Histologyâ•…349
Ampullary Glandsâ•… 354
CHAPTER 16↜╅ URINARY SYSTEM╅ Gross Anatomy╅ 354
Histologyâ•…354
Martha A. Delaney, Jolanta Kowalewska and Piper M. Treuting Bulbourethral Glandsâ•… 355
Introductionâ•… 275 Gross Anatomyâ•… 355
Kidneyâ•…275 Histologyâ•…355
viii Contents

Preputial Glandsâ•…
Gross Anatomyâ•…
355
355 CHAPTER 21â•… SPECIAL SENSES: EYEâ•…
Histologyâ•…355 Caroline J. Zeiss, Daniel C. Tu, Isabella Phan, Rachel Wong and
Urethraâ•…357 Piper M. Treuting
Gross Anatomyâ•… 357 Introductionâ•… 445
Histologyâ•…360 The Eyeâ•… 445
Penisâ•…360 Gross Anatomyâ•… 445
Gross anatomyâ•… 360 Cornea and Scleraâ•… 446
Histologyâ•…360 Gross Anatomyâ•… 446
Further Readingâ•… 362 Histologyâ•…446
Uveaâ•…448
Gross Anatomyâ•… 448
CHAPTER 19â•… HEMATOPOIETIC AND LYMPHOID TISSUESâ•… Histologyâ•…451
Retinaâ•…455
Jerrold M. Ward, Sindhu Cherian and Michael A. Linden
Gross Anatomyâ•… 455
Introductionâ•… 365 Histologyâ•…456
Bone Marrowâ•… 365 Vitreous Chamber and Lensâ•… 460
Methodsâ•…366 Gross Anatomyâ•… 460
Histology and Cytologyâ•… 369 Histologyâ•…460
Peripheral Bloodâ•… 370 Optic Nerveâ•… 461
Methodsâ•…371 Gross Anatomyâ•… 461
Histology and Cytologyâ•… 372 Histologyâ•…463
Thymusâ•…375 Extraocular Musclesâ•… 463
Gross Anatomyâ•… 376 Gross Anatomyâ•… 463
Histologyâ•…376 Histologyâ•…463
Lymph Nodesâ•… 381 Conjunctivaâ•…463
Regional Anatomyâ•… 381 Gross Anatomyâ•… 463
Histologyâ•…385 Histologyâ•…464
Spleenâ•…390 Eyelidsâ•…464
Gross Anatomyâ•… 391 Gross Anatomyâ•… 464
Histologyâ•…391 Histologyâ•…464
Mucosa-Associated Lymphoid Tissueâ•… 397 Lacrimal Gland and Drainage Systemâ•… 467
Milky Spotsâ•… 400 Gross Anatomyâ•… 467
Acknowledgmentsâ•…400 Histologyâ•…467
Further Readingâ•… 400 The Developing Eyeâ•… 467
Further Readingâ•… 470

CHAPTER 20↜╅ NERVOUS SYSTEM╅


Jessica M. Snyder, Catherine E. Hagan, Brad Bolon and CHAPTER 22â•… SPECIAL SENSES: EARâ•…
C. Dirk Keene Piper M. Treuting, Suzanne M. Dintzis and Rani Sellers
Introductionâ•… 403 Introductionâ•… 471
Brainâ•…405 External Earâ•… 471
Gross Anatomyâ•… 405 Gross Anatomyâ•… 471
Histologyâ•…424 Histologyâ•…471
Related Structuresâ•… 432 Middle Earâ•… 473
Spinal Cordâ•… 433 Gross Anatomyâ•… 473
Gross Anatomyâ•… 433 Histologyâ•…478
Histologyâ•…434 Inner Earâ•… 479
Nerves and Gangliaâ•… 435 Gross Anatomyâ•… 479
Regional Anatomyâ•… 435 Histologyâ•…479
Histologyâ•…439 Further Readingâ•… 485
Other Considerationsâ•… 440
Conventions for Neuroanatomic Terminologyâ•… 440
Special Methods in Neurohistologic Preparationâ•… 441
Acknowledgmentsâ•…443
Further Reading and Relevant Websitesâ•… 443
Contents ix

CHAPTER 23↜╅ MAMMARY GLAND╅ CHAPTER 24↜╅ SKIN AND ADNEXA╅


Robert D. Cardiff, Sonali Jindal, Piper M. Treuting, James J. Going, John P. Sundberg, Carmen J. Booth, Lillian B. Nanney,
Barry Gusterson and Henry J. Thompson Philip Fleckman and Lloyd E. King Jr.
Introductionâ•… 487 Introductionâ•… 511
Mammary Glandâ•… 487 Skinâ•…512
Gross Anatomyâ•… 487 Histologyâ•…513
Subgross Anatomy and Histologyâ•… 490 Adnexaâ•…523
Mammary Gland Natural History and Reproductive Histologyâ•…523
Cyclesâ•…499 Further Readingâ•… 540
Early Developmentâ•… 499
Ovarian (Estrous and Menstrual) Cycleâ•… 502
Pregnancy and Lactationâ•… 502 Indexâ•… 543
Postpartum Involutionâ•… 503
Senescenceâ•…506
Further Readingâ•… 508
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LIST O�F C�ON�TRIBUTORS

Mark J. Arends Renee Z. Dintzis


University of Edinburgh, Edinburgh, Scotland, United Johns Hopkins School of Medicine, Baltimore, MD, United States
Kingdom
Philip Fleckman
Brad Bolon University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
GEMpath, Inc., Longmont, CO, United States United States

Carmen J. Booth Charles W. Frevert


Yale University School of Medicine, New Haven, CT, United University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
States United States

Kelli L. Boyd Rochelle L. Garcia


Vanderbilt University Medical Center, Nashville, TN, United University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
States United States

Cory F. Brayton Katherine N. Gibson-Corley


Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, MD, University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa City, IA,
United States United States

Bernard S. Buetow James J. Going


Pfizer, Inc., San Diego, CA, United States University of Glasgow, Glasgow, Scotland, United Kingdom

Robert D. Cardiff Paul C. Goodwin


University of California at Davis, Davis, CA, United States GE Healthcare, Issaquah, WA, United States

Stephan A. Carey Barry Gusterson


Michigan State University College of Veterinary Medicine, East University of Glasgow, Glasgow, Scotland, United Kingdom
Lansing, MI, United States
Catherine E. Hagan
Cathy S. Carlson The Jackson Laboratory, Sacramento, CA, United States
University of Minnesota College of Veterinary Medicine,
St. Paul, MN, United States Jack R. Harkema
Michigan State University College of Veterinary Medicine, East
Sindhu Cherian Lansing, MI, United States
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
United States Benjamin Hoch
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
Martha A. Delaney United States
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
United States Renee R. Hukkanen
Eisai US, Andover, MA, United States
Suzanne M. Dintzis
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, Christopher Jerome
United States Wake Forest Innovations, Winston-Salem, NC, United States
xii List o�f C�on�tributors

Sonali Jindal Isabella Phan


Oregon Health & Science University, Portland, OR, United Kaiser Permanente, San Francisco, CA, United States
States
Julie Randolph-Habecker
Brian Johnson Fred Hutchinson Cancer Research Center, Seattle, WA,
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States
United States
Mara H. Rendi
C. Dirk Keene University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States
United States
Arlin B. Rogers
Lloyd E. King Jr. Tufts University, North Grafton, MA, United States
Vanderbilt University Medical Center, Nashville, TN, United
States
Rani Sellers
Pfizer Drug Safety Research and Development, New York, NY,
Sue E. Knoblaugh United States
The Ohio State University College of Veterinary Medicine,
Columbus, OH, United States
Jessica M. Snyder
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
Jolanta Kowalewska United States
Eastern Virginia Medical School, Norfolk, VA, United States

Carlos J. Suarez
Krista Marie DuBray La Perle
Stanford University School of Medicine, Palo Alto, CA,
The Ohio State University College of Veterinary Medicine,
United States
Columbus, OH, United States

Michael A. Laflamme John P. Sundberg


University Health Network, Toronto, ON, Canada The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, United States

Denny Liggitt Henry J. Thompson


University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, Colorado State University, Fort Collins, CO, United States
United States
Maria Tretiakova
Michael A. Linden University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
University of Minnesota, Minneapolis, MN, United States United States

David K. Meyerholz Piper M. Treuting


University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa City, IA, University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
United States United States

Kathleen S. Montine Lawrence True


University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, University of Washington School of Medicine, Seattle, WA,
United States United States

Thomas H. Morton Jr. Daniel C. Tu


University of Washington School of Dentistry, Seattle, WA, Oregon Health & Science University, Casey Eye Institute,
United States Portland, OR, United States

Atis Muehlenbachs Peter Vogel


Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, St Jude Children’s Research Hospital, Memphis, TN, United
United States States

Lillian B. Nanney James G. Wagner


Vanderbilt University Medical Center, Nashville, TN, United Michigan State University College of Veterinary Medicine,
States East Lansing, MI, United States
List o�f C�on�tributors xiii

Jerrold M. Ward Harm HogenEsch


Global VetPathology, Montgomery Village, MD, United States Purdue University College of Veterinary Medicine, West
Lafayette, IN, United States
Rachel Wong
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, Michael Leach
United States Pfizer, Boston, MA, United States

Caroline J. Zeiss Dave Malarkey


Yale University School of Medicine, New Haven, CT, National Institute of Environmental Health Sciences, Research
United States Triangle Park, NC, United States

Elisabeth McInnes
INTERNATIONAL ADVISORY PANEL Cerberus Sciences Ltd., Adelaide, SA, Australia
Mark J. Arends
University of Edinburgh, Edinburgh, Scotland, United David Meyerholz
Kingdom University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa City, IA,
United States
Alexander “Sandy” D. Borowsky
University of California at Davis, Davis, CA, United States Alessandra Piersigilli
Weill Cornell Medicine, New York City, NY, United States
Donna M. Bouley
Stanford University Medical Center, Stanford, CA, Cheryl Scudamore
United States Mary Lyon Centre, MRC Harwell Institute, Harwell Campus,
Oxford, United Kingdom
Virginia L. Godfrey
University of North Carolina Medical Center, Chapel Hill, NC,
United States
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PREFACE TO THE
SECOND€EDITION

For the second edition of this atlas, we are illustrations, we are delighted to have the rat
honored to continue to work with our talented rendered in the style of medical illustrator Frank
group of first edition contributors and to welcome H. Netter, MD. We thank the Netter family and
a few new individuals to enrich the scope of Dragonfly Media Group, especially Rob Duckwall,
expertise. We thank our contributors for their for their contributions to the new rat images. The
willingness to participate in the revision and cover art for both editions was conceptualized
enthusiasm for the addition of the rat. While we and drafted by Dr. Scout Chou, whose assistance
learned much about the writing, editing, and allowed for rapid evolution of the designs with
publishing process with the first edition, there minimal revisions. We thank the members of our
were new challenges with the second edition. departments, especially Denny Liggitt, who served
We appreciate the patience and tenacity of our as support systems, contributors, and champions of
contributors, editors, and colleagues as we met this academic pursuit.
challenges and created this new edition.
To our families, we owe a significant debt as the
In addition to the contributors, there were time needed for a reference text of this scope is
many individuals who assisted in the successful hewn from weeknights, weekends, and holidays.
navigation of the revision process. We hope that We greatly appreciate their understanding and
they find the second edition worthy of their efforts. support even in the face of knowing its impact
We enlisted a group of international expert end- on family life, having lived through the process
users to critique the first edition chapters and during the first edition. Their sacrifice enabled
provide us with detailed feedback to improve this work.
our atlas. The members of this International
Advisory Panel are listed after the contributors In closing, we would like this atlas to serve as a
in the Front Matter. They are our comparative tribute to all rodents used in biomedical research.
pathology colleagues who volunteered to perform We hope to honor these critical animals by
this critical task in order to strengthen the atlas. improving the first edition and expanding it to
Their input and encouragement made writing and include rat. In doing so, the overall goal remains
editing the second edition an efficient process and the same: supporting a greater understanding of
rendered a second edition that we feel is improved the comparative anatomy of laboratory rodents
in content and layout. We thank our editors at and humans. This understanding, ultimately, will
Elsevier, Jeffery Rossetti and Pat Gonzalez, for their inform refined models of human disease and
guidance. As with the first edition mouse anatomic strategies for prevention and treatment.
This page intentionally left blank
ACKNOWLEDGMENTS
FROM THE FIRST EDITION
PIPER M. TREUTING AND SUZANNE M. DINTZIS
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States

An atlas of this scope does not come together (http://histocs.com/index.html) and we thank
without the committed talents of many people. LeRoy Brown, CEO, for his assistance. Tissue
In addition to thanking the expert authors and and slide organization, virtual slide scanning,
assistant editors, we (the co-editors in chief) wish and database management were performed by
to thank the many people whose time, effort, and the expert technical staff of the University of
encouragement helped us to complete this work. Washington (UW) Histology and Imaging Core—
We humbly recognize that we may inadvertently Kerrie Allen and Brian Johnson—along with
miss some that are deserving of a personal thank- student helpers Cara Appel and Kelsie Ovenell.
you. To all who participated in this work, we are We wish to acknowledge and thank S. Chou who
thankful for you and your contributions. We hope provided encouragement for and gave form to the
that the final product serves as a proper thank-you cover art concept. She also provided a portion of
for a job well done. the final cover drawing and the Chapter 1 figures.
Sara Samuelson, S. S. Illustrations (sarasamuelson.
Gross and microscopic images are the mainstay com), provided the drawings for Chapter 20,
of this text, and obtaining publication quality including the unique rendition of the sensory and
images to compare mouse and human tissues motor musculi.
was a formidable challenge. Production of the
mouse anatomic images began with skilled and The successful completion of this work would not
detailed anatomic dissections performed in part have been possible without the collegial support
by Sue Knoblaugh. Expert macro photography of our Department Chairs: Denny Liggitt, Nelson
was provided by Gavin W. Sisk. We wish to warmly Fausto, and Tom Montine. Major contributions
thank Sue and Gavin for their efforts and good- were also provided by faculty, residents, and
natured understanding of the need to get “The students in the UW Departments of Comparative
Perfect Dissection and Shot” and tolerance of Medicine and Pathology, and by our patient
our “assistance” with their efforts. We are pleased editors at Elsevier, Mara Conner and Megan
to present the mouse anatomical preparations Wickline. Special recognition is reserved for Kathy
rendered, by Dragonfly Media Group, in the style Montine, our UW technical editor, who organized
of medical illustrator Frank H. Netter, MD. We the chapters and coordinated the submissions. Her
thank the Netter family and Elsevier for providing contribution is immeasurable both for the timely
access to Netterimages.com the Netter color completion of this work and for our collective
palette, and for great patience when working with mental health.
one of us (PT) in editing the final mouse images.
Throughout this process, we have learned to
To obtain mouse microscopic images, harvested float with the ebb and flow of the writing and
mouse tissues were processed by Histology editing process, pulling authors along with us and
Consultation Services (HCS) of Everson, WA occasionally even stalking them in order to make
xviii Acknowledgments from the First Edition

their unpaid labor a top priority—only to then edit of our academic pursuits enabled this work. We
their carefully chosen words. recognize the burden this placed on you, and we
are grateful for your willingness to cheerfully step
We suspect that most of our critical readers will be in during our absences.
pathologists and will be vociferously opinionated.
We welcome their opining along with suggestions Finally, we wish to thank the mice. It is our hope
for improvement. We recognize that there will that this Atlas will allow for greater understanding
be errors in this Atlas for which we take full of the comparative anatomy of the mouse and,
responsibility. ultimately, refined models of human disease.

To our families and the Montine family, we owe


many thanks. Your understanding and support
INTRODUCTION
PIPER M. TREUTING, SUZANNE M. DINTZIS AND
1
KATHLEEN S. MONTINE
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States

Overview and Anatomica (TA) is included in Further Reading


and Relevant Websites.

Introduction to In the second edition we have revised and refined


the Second Edition the first edition material based on reviews and
comments from readers, our solicited advisory
Comparative Anatomy and Histology is written both panel of international experts, and the chapter
for the new rodent investigator and for students, contributors. This group effort has helped
histologists, and pathologists who wish to expand improve the original material, especially the
their knowledge of comparative anatomy and figures and offers a more pragmatic organization.
histology. It guides the reader through normal In addition to revising the original mouse and
mouse and rat anatomy and histology with human material, the second edition adds the rat.
direct comparisons to human. The side-by-side The rat is currently the primary rodent used in
comparison of rodent and human tissues also toxicologic and industrial research. Increased
highlights the unique biology of the mouse and use of genetically modified rats in basic research
rat. Such differences have a great impact on the is anticipated due to the advent of CRISPR/Cas9
investigation and validation of rodent models system for genetic modification. We note that in
of human disease. As the silos of basic academic this atlas, the term “rodents” is defined as only Mus
and preclinical research breakdown, comparative musculus and Rattus norvegicus, the most common
pathologists must be well versed in mouse and rat laboratory mouse and rat species. Thus the term
anatomy and histology as it compares to human. “rodents” herein does not include all Rodentia.

This atlas was created with the goal of being an


easy to use, practical reference for neophytes, as Comparative
Pathology:
well as experts who may be embarking on the study
of a new species, organ system, or tissue. Thus it
uses the preferred clinical anatomic terminology
used in everyday practice and most familiar to Closing a Gap
biomedical researchers. The formal Latinized Biomedical research institutions worldwide are
nomenclature recommended by the Nomia literally overrun with mice and, increasingly, rats.
Anatomica Veterinaria (NAV) and Terminologia More than 60% of extramural National Institutes

Comparative Anatomy and Histology. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-802900-8.00001-4


© 2018 Elsevier Inc. All rights reserved.
2 COMPARATIVE ANATOMY AND HISTOLOGY

of Health (NIH)–funded grants use animals; most increasingly asked to interpret rodent pathologic
of these are mouse models of human disease, lesions. Likewise, veterinary pathologists need to
many of which involve genetically engineered know more about human disease, because the
mice. Rats are used in both toxicologic and bulk of the animals they care for and work with
industrial research and genetically modified rats arise from funded research on human disease.
are poised to compete with mice in their use In addition, many new rodent investigators are
as genetically modified models. The perceived eager to acquire training in comparative pathology
value of mice and rats is to model the human that will assist them in planning experiments and
condition and to support hypothesis-generating interpreting results. Because formal training in
and hypothesis-testing research. Rodent models of rodent pathology to support translational research
human disease have proven valuable to biomedical is limited, the research community looks to novel
research, but only with appropriate validation solutions such as online training academies or
and careful translation of rodent data to human annual intensive laboratory animal pathology
systems. Validation of rodent models as defined workshops to bring together geographically
by Cardiff and colleagues involves determining and culturally dispersed comparative pathology
to what extent the attributes of the experimental experts. There are numerous online resources
system (in this case, the rodent phenotype) match and journal articles, rodent pathology atlases,
the attributes of human disease. As the phenotype laboratory animal pathology mini courses,
of the human disease or condition being modeled and ever-expanding virtual communities of
becomes more complex, the validity of the rodent comparative pathologists that in concert serve to
model becomes more important. A rodent model train individuals interested in expanding their
that is not appropriately validated does not comparative pathology skills.
value the use of those animals, wastes research
dollars, and can even result in risks to humans To this growing body of knowledge, our modest
if preclinical data are incorrectly translated to contribution is a side-by-side comparison of normal
human patients. mouse, rat, and human tissue that highlights the
unique morphophysiology of the rodent, which
Validation of rodent models through phenotyping has great impact on its histopathology. Although
(discussed in Chapter 2: Phenotyping) in order to most tissues at the level of the light microscope
translate of experimental findings in mice and rats are similar among Mus musculus, Rattus norvegicus,
to human disease is best done by a comparative and Homo sapiens, there are critical differences
pathologist and requires a broad and unique skill (Table 1.1); in order to understand differences
set covering rodent and human anatomy, histology, arising from various models, normal must be
and pathobiology. Formally trained comparative recognized. Recognition of these differences
pathologists understand how a research question begins with anatomic directional terms and planes
may be impacted by the interplay of the rodent’s of section, which vary between the quadruped
background strain, genetic manipulations, rodent and biped human (Fig. 1.1 and Tables 1.2
breeding schema, sex, housing, diet, age, and and 1.3). Use of appropriate directional rodent
intercurrent pathogenic or commensal organisms. terms and their human analogs is important in
Unfortunately the population of formally trained effective communication about rodent models
comparative pathologists is not increasing of human disease. This atlas strives to establish a
as rapidly as that of rodents. Instead, in our reliable baseline in order to fill a gap in rodent
experiences at the University of Washington, phenotypic evaluation in translational research
we recognize that medical pathologists are settings. To observe and measure deviants, normal
CHAPTER 1 - Introduction 3

TABLE 1.1â•… Representative Features and Major Differences


General Features Mouse Rat Human
Class Mammalia Mammalia Mammalia
Order Rodentia Rodentia Primata
Family Muridae Muridae Hominidae
Genus and species Mus musculus Rattus norvegicus Homo sapiens
Chromosome numbers (2n) 40 42 46
Sexual maturity 4–6 weeks 4–7 weeks 10–15 years
Average adult body weight (female) 18–35â•›g 250–300â•›g 75â•›kg
Average adult body weight (male) 20–40â•›g 300–400â•›g 87â•›kg
Life span 1–3 years 2.5–3 years Average 71 years
Maximum life span reported 4 years 4 years 122 years
No. of offspring 5–11, strain dependent 8–14, strain dependent 1–2
Gestation 18.5–21 days 21–24 days Average 40 weeks (or full term:
39–40 weeks)
Young Altricial Similar to mouse Similar to rodent
Legs 4 Similar to mouse 2
Arms 0 Similar to mouse 2
Digits 5 Forefeet and hind feet Similar to mouse 5 Fingers; 5 toes
Nails Present Similar to mouse Similar to rodent
Tail Present Similar to mouse None or poorly developed
Vertebral formula C7 T13 L6 S4 Cd28 C7 T13 L6 S4 Cd27-30 C7 T12 L5 S5 Cd4
Integument Haired skin predominates Similar to mouse Glabrous skin predominates
Sweat glands Eccrine only, restricted to feet Similar to mouse Apocrine and eccrine
Vibrissae Present Similar to mouse Absent
Mammary glands 10 (5 pairs), females only 12 (6 pairs) 2 discrete, pectoral
Male nipples Absent Absent Present
Exorbital lacrimal glands Present Similar to mouse Absent
Harderian glands Present Similar to mouse Absent
Lung lobes 4 Right, 1 left Similar to mouse 3 Right, 2 left
Cerebral gyri and sulci Absent Similar to mouse Present
Liver lobes 4: Right, left, medial, caudate Similar to mouse 4: Right, left, caudate, quadrate
Nonglandular forestomach Present Similar to mouse Absent
Pancreas Relatively diffuse in mesentery, Similar to mouse Well-demarcated, left and right
indistinct lobation lobes, connected by body
Seminal vesicles Present, very prominent Similar to mouse Present, not as prominent as rodents
Prostate 6 Lobes 3 Lobes Not lobulated, has 3 zones
Bulbourethral gland Present Similar to mouse Similar to rodent
Coagulating gland Present Similar to mouse Absent
Preputial gland Present Similar to mouse Absent
Clitoral gland Present Similar to mouse Absent
Uterus Bicornate Duplex, Bicornate Simplex
Placenta Discoid, labyrinth, hemotrichorial Similar to mouse Discoid, villous, hemochorial
Tonsils Absent Similar to mouse Present
Gut-associated lymphoid tissue Present Similar to mouse Similar to rodent
Nasal-associated lymphoid tissue Present Similar to mouse Absent
Bronchus-associated lymphoid tissue Variable Similar to mouse Present
Zymbal gland Present Similar to mouse Absent, smaller sebaceous glands in
external acoustic meatus
Os clitoris Present Similar to mouse Absent
Os penis Present Similar to mouse Absent
Vomerulonasal organ Present Similar to mouse Controversial

must be well understood. Only then can phenotypic more complex, is not within the scope of this
differences in the vast array of human disease atlas. Together with the educational resources
models be understood and appreciated. We hope noted previously, this atlas provides practical
this reference helps improve communication information to improve technical proficiency in
between veterinary and medical pathologists, basic comparative rodent and human anatomy and
and among rodent investigators, regarding histology. Perhaps just as importantly, we hope this
normative structures. Pathology of disease, in atlas will provide insight into when it is prudent to
which the debate regarding terminology is even enlist the aid of an expert.
4 COMPARATIVE ANATOMY AND HISTOLOGY

(A) (B)
Superior
Cranial (cranial)
Rostral

Dorsal

l
im a
x
Pro
Caudal
Anterior Posterior
(ventral) (dorsal)

Radial
Palmar
Ventral Dorsal

al
Dist
Lateral
Dorsal
Ulnar

Medial
Medial L L
a a
t t
e e
r r
a a
Plantar l l
Inferior
Caudal (caudal)

(C) (D)

Posterior
(dorsal)
Anterior
(ventral)
Transverse
plane
Transverse Superior
plane (cranial)

Dorsal Inferior
(caudal)

Dorsal
Ventral plane

Sagittal Cranial Caudal


(midsagittal)
plane
Sagittal Frontal
(midsagittal) plane
plane

FIGURE 1.1 Anatomic Directional Terms and Planes of Section. (A) Rodent (mouse). (B) Human. Directional terminology
in quadrupeds include ventral and dorsal, whereas for bipeds the favored terms are anterior and posterior. Cranial and caudal
are the quadruped synonyms for bipedal superior and anterior. In all three species, proximal and distal are used on the
appendicular regions, medial and lateral used to refer to relative positions to the center of the body, dorsal/palmar and dorsal/
plantar are used on forefeet/hands and feet, respectively. (C) Quadruped (Goat). (D) Biped (Human). Shown are the planes
of a quadruped goat and a bipedal human. The midsagittal plane divides the body exactly in half, into right and left portions.
The frontal plane divides the front and back, and the transverse plane divides the body into upper and lower portions. Source:
(A and B) Drawing by Dr. S. Chou, Charles River, with permission; (C and D) Modified after: OpenStax, Animal Form and
Function. OpenStax CNX. June 26, 2013 http://cnx.org/contents/44503b54-9a4c-40c4-ae59-369526d2f9ef@8.
CHAPTER 1 - Introduction 5

mutant or knockout mice. Other strains used with


TABLE 1.2â•… Directional Anatomy Terms
some frequency in genetically-engineered model
Direction Quadruped Biped (Human)a
(Rodent) production are FVB and strain 129. Because of
Toward the head Cranial, craniad Cranial (axial the predominant use of C57BL/6 mice, we have
skeleton)
Toward the nose Rostral (on head), Anterior chosen to focus the atlas on this inbred strain using
cranial (on rest of representative female and male, 3- or 4-month-
body)
Toward the tail Caudal, caudad Caudal (axial old C57BL/6J (Jackson Laboratories, Bar Harbor,
skeleton)
Toward the abdomen Ventral, ventrad Anterior ME) to contrast with the human equivalents at the
Toward the feet Distal Distal age of 20–30 years. We recognize that there are
(appendicular
skeleton) many different mouse background strains used
Toward the trunk Proximal Similar to rodent
Toward the spine Dorsal, dorsad Posterior
in biomedical research. Where appropriate, we
Toward the palms or Palmar (front), Similar to rodent highlight important strain-specific differences from
soles plantar (rear)
Away from the palms Dorsal Similar to rodent the C57BL/6J standard within each organ system
or soles chapter. Numerous references and resources are
a
Human anatomy differs if one is speaking of the axial or provided at the end of each chapter for expanded
appendicular skeleton.
details on mouse pathobiology, background strains,
and specific models.
TABLE 1.3â•… Anatomic Sectional Planes
Anatomic
Sectional Planes
Definition Synonym(s)
Sprague-Dawley Rats
as Index Strain
Sagittal Divides the body or structure Midsagittal,
vertically into even right median
and left halves
Parasagittal Divides the body or structure Lateral The Sprague-Dawley (SD) rat serves as the most
vertically into uneven right
and left halves commonly used strain in the United States and
Transverse Divides the body or structure Cross-
(Quadrupeds) vertically into even front sectional,
Japan for pharmaceutical research. For this reason,
(cranial) and back (caudal) axial and the ease of availability for our contributors,
halves
Transverse (Bipeds) Divides the body or structure Cross- we chose this strain as index. Compared to the
horizontally into upper and sectional,
lower portions axial
laboratory mouse, there are fewer rat strains
Dorsal Divides the body or structure Frontal commonly available and used in biomedical
(Quadrupeds) horizontally into upper and
lower portions research. Other frequently utilized strains include
Frontal (Bipeds) Divides the body or structure Coronal the inbred Fischer 344 and the outbred Wistar.
vertically into even front
(anterior) and back As with the mouse, numerous references and
(inferior) halves
resources are provided at the end of each chapter
for expanded information on rat pathobiology,
background strains, and specific models.

C57BL/6 Mice as
Atlas Scope
Index Strain
There are many mouse background strains used in
and Design
biomedical research, and each has peculiarities in The subsequent chapters will introduce readers
physiology and occasionally anatomic structures. to many of the unique differences among mouse,
The C57BL/6 mouse is the most commonly used rat, and human gross and histologic anatomy. This
mouse strain in academic institutions. This is likely atlas is not meant to be a comprehensive review of
due to the use of C57BL/6 blastocysts for targeted all histologic, biologic, and physiologic differences
6 COMPARATIVE ANATOMY AND HISTOLOGY

between rodents and humans or between rodents biopsied in young adults or when presenting the
of different background strains. Nor is it a the entire tissue (e.g., the eye). The difference
comprehensive histology atlas detailing cellular in sizes between mouse, rat, and human bodies,
structure to the level of the election microscope or organs and tissues makes it challenging to capture
immunologic identification of subsets of cells or subgross and histologic images at the same
tissues. We focus on differences between mouse, magnification, because this would result in poorly
rat, and human tissues encountered in routinely oriented and minuscule rodent images. Instead,
processed sections fixed by immersion in 10% we have optimized magnifications for ease of
neutral buffered formalin and visualized with visualization, most often capturing mouse images
hematoxylin and eosin (H&E) staining. Unless at a higher magnification than rat or human.
otherwise noted, all histologic images are stained There are notable exceptions where we have
with H&E. noted original magnifications or commented on
the sizing differences. Micrometer bars are not
The chapters follow a similar format, describing included on the majority of images.
gross anatomical structure first followed by
histologic descriptions. In most instances, the FURTHER READING AND
order of discussion is rodent then human, with
RELEVANT WEBSITES
any differences between mice and rats covered. Barthold SW: “Muromics”: genomics from the perspective of
We designed this atlas to be an easy and practical the laboratory mouse. Comp Med 52:206–223, 2002.
reference for the busy investigator. Key differences Barthold SW, Borowsky AD, Brayton C, et al: From whence
are illustrated in the figures and within a summary will they come? A perspective on the acute shortage of
pathologists in biomedical research. J Vet Diagn Invest
table, and they are described in more detail in the 19:455–456, 2007.
text. Critical information can be gleaned from
Bolon B, Couto S, Fiette L, et al: Internet and print resources
the figures and the bulleted Need to Knows. At to facilitate pathology analysis when phenotyping
the end of each chapter, authors offer resources genetically engineered rodents. Vet Pathol 49(1):224–235,
2012.
for additional or specialized study. Figures
include gross anatomy of organ systems and Cardiff RD, Rosner A, Hogarth MA, et al: Validation: the new
challenge for pathology. Toxicol Pathol 32(Suppl 1):31–39,
photomicrographs of histologic images and thanks 2004.
to Elsevier; we are delighted to present mouse and Cardiff RD, Ward JM, Barthold SW: “One medicine–One
rat gross anatomy illustrations as a companion pathology”: are veterinary and human pathology prepared?
to the classic Netter medical images. Many of Lab Invest 88:18–26, 2008.

the histologic images were from contributors’ Clemente C: Anatomy: a regional atlas of the human body,
ed 6, , 2010, Lippincott Williams and Wilkins.
collections and from rodent tissues processed
specifically for this atlas. Whenever possible, Federative International Programme on Anatomical
Terminologies Terminologia Anatomica: http://www.unifr.
we have presented similar gross and histologic ch/ifaa/Public/EntryPage/ViewTAOnLine.html. 2011.
images from rodents and human adjacently, Greaves P: Histopathology of preclinical toxicity studies:
either on the same page or on the facing pages, interpretation and relevance in drug safety evaluation,
for ease of comparison. Where mice and rats do ed 4, New York, NY, 2011, Academic Press.

not differ, one or the other species is presented Greene EC: Anatomy of the rat, Braintree, MA, 1935,
Braintree Scientific, Inc.
to represent rodents and the species illustrated
Ince TA, Ward JM, Valli VE, et al: Do-it-yourself (DIY)
in the particular figure is noted in parenthesis.
pathology. Nat Biotechnol 26:978–979, 2008.
In some of the human examples, there are
INHAND: International harmonization of nomenclature and
histopathologic lesions present or aging changes. diagnostic criteria for lesions in rats and mice. http://www.
This was necessary when normal tissues are not toxpath. org/inhand.asp.
CHAPTER 1 - Introduction 7

Jackson Laboratories: Festing’s inbred strains of mice and rats Rohen JW, Yokochi C, Lutjen-Drecoll E: Anatomy:
and their characteristics. http://www.informatics.jax.org/ a photographic atlas, ed 8, Philadelphia, 2016, Wolters
external/festing/mouse/INTRO.shtml. Kluwer.
Jackson Laboratory. Mouse nomenclature. http://www. Ross MK, Pawlina W: Histology: a text and atlas, ed 7,
informatics.jax.org/mgihome/nomen/index.shtml. 2010. Philadelphia, 2015, Lippincott Williams and Wilkins.
Kittel B, Ruehl-Fehlert C, Morawietz G, et al: Revised guides Ruehl-Fehlert C, Kittel B, Morawietz G, et al: Revised guides
for organ sampling and trimming in rats and mice: part for organ sampling and trimming in rats and mice: part
2. Exp Toxicol Pathol 55:413–431, 2004. http://reni.item. 1. Exp Toxicol Pathol 55:91–106, 2003. http://reni.item.
fraunhofer.de/reni/trimming/index.php. fraunhofer.de/reni/trimming/index.php.
Mendlowitz L. Diseases of research animals. Columbia, MO: Scudamore CL: A practical guide to the histology of the mouse,
University of Missouri, Research Animal Diagnostic 2013, John Wiley & Sons.
Laboratory. http://www.radil.missouri.edu/info/dora/
Society of Toxicologic Pathology: Standardized system of
Dora.htm.
nomenclature and diagnostic criteria (SSNDC) guides. http://
Mescher A: Junqueira’s basic histology: text and atlas, ed 14, 2016, www.toxpath.org/ssndc.asp.
McGraw Hill.
Suckow MA, Weisbroth SH, Franklin CL: The laboratory rat,
Moore KL, Dalley AR, Agur AMR: Clinically oriented anatomy, 2015, Elsevier Science.
ed 6, Baltimore, 2012, Wolters Kluwer and Lippincott
Suttie AW, Leininger JR, Bradley AE: Boorman’s pathology of
Williams and Wilkins.
the rat: reference and atlas, ed 2, New York, 2017, Academic
Morawietz G, Ruehl-Fehlert C, Kittel B, et al: Revised guides Press.
for organ sampling and trimming in rats and mice: part
Valli T, Barthold SW, Ward JE, et al: Over 60% of NIH
3. Exp Toxicol Pathol 55:433–449, 2004. http://reni.item.
extramural funding involves animal-related research.
fraunhofer.de/reni/trimming/index.php.
Vet Pathol 44:962–964, 2007.
Netter FH: Atlas of human anatomy, ed 6, New York, 2014,
Walker WFJ, Homberger DG: Anatomy and dissection of the rat,
Elsevier.
New York, NY, 1998, WH Freeman & Co.
OpenStax: Animal form and function. OpenStax CNX. Jun 26,
World Association of Veterinary Anatomists: Nomina Anatomica
2013. http://cnx.org/contents/44503b54-9a4c-40c4-ae59-
Veterinaria, ed 5, http://www.wava-amav.org/Downloads/
369526d2f9ef@8.
nav_2012.pdf.
Ovalle WK, Nahimey PC: Netter’s essential histology, 2007,
Young B, Woodford P, O’Dowd G: Wheater’s functional histology:
Saunders.
a text and colour atlas, ed 6, 2013, Churchill Livingstone.
Popesko P, Rajtova V, Horak J: Colour atlas of anatomy of small
laboratory animals, London, UK, 2003, WB Saunders.
This page intentionally left blank
CORY F. BRAYTON
PHENOTYPING 2
Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, MD, United States

PIPER M. TREUTING
University of Washington School of Medicine, Seattle, WA, United States

Introduction are mapped and amenable to manipulation, and


rodent physiology is similar to human. These
In order to identify and assess deviant phenotypes, features have led to the development of thousands
and to optimize and validate phenotypically of potential genetically relevant mouse and rat
relevant rodent models of human disease, it is models of human diseases. The use of genetically
essential to establish a useful baseline and lexicon modified (GM) mice and GM rats to elucidate
for “normal” anatomy and expected phenotype roles of genes, gene products, and pathways in a
variations. This chapter introduces some basic complex mammalian system continues to increase.
phenotyping concepts and broadly relevant
resources, and discusses the implementation of Coordinated international efforts in the
anatomic, histology, and pathology phenotyping International Knockout Mouse Consortium
evaluations to optimize and validate rodent models (IKMC), and the International Mouse Phenotyping
of human disease and gene function. Consortium (IMPC), are near completion. IKMC
aims to develop GM mice on a single (C57BL/6N)
Phenotyping refers to assessing observable or background with mutations in every protein
measurable characteristics (normal features, coding gene. IMPC is phenotyping mice from
traits, and possible abnormalities). In genetically IKMC. IKMC and IMPC make the embryonic
engineered animals, phenotyping usually is done stem (ES) cells, protocol detail, and curated data
to gain insight about gene function. A major accessible to the research community. Additional
goal in much of basic biomedical research is mouse genome and phenome information is
to understand the action of a gene product or accessible through Mouse Genome Informatics
pathway in vivo. This is pursued in functional (MGI), Mouse Phenome Database (MPD), and
genomics approaches that involve manipulating other efforts. IMPC, MGI, MPD, and related
genomes in diverse species, including yeast, worms, resources enhance the value of mice as highly
fruit flies, fish, and rodents. As gene targeting and characterized genetic tools for translational
transgenic technologies developed, the mouse— research applications. Rats have been widely used
and more recently the rat—emerged as champions in experimental medicine, especially in behavioral
of genetically modified animals. Rodents are research and drug development. Genomics,
relatively inexpensive to maintain, the genomes bioinformatics, and phenotyping tools for rats are

Comparative Anatomy and Histology. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-802900-8.00002-6


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Gelsi le si fece incontro e le parlò piano. La Giuseppina s’era
ricomposta, senza però allontanarsi dal letto; un istinto sicuro
l’avvertiva che quello era il solo asilo inviolabile per lei, e che
nonostante la protezione di Raimondi, l’indulgenza del medico, la
simpatia della servitù, se si moveva dal suo posto non avrebbe più
potuto tornarvi.
S’intese la voce della baronessa. — Come? Ha scritto e non è lecito
saper che cosa ha scritto?
— Oh — rispose il medico — per quello che può aver scritto!... Ha
fatto pochi segni confusi.... Del resto diede egli stesso la carta a....
quella giovine....
— Quella giovine ne capì il senso.... Doveva comunicarlo....
— Perdoni.... Secondo i casi.... In ogni modo....
E l’onesto dottore, animato da uno spirito conciliativo, si accostò alla
Giuseppina.
Ma ella, che aveva côlto una parte della conversazione era già sulle
difese.
— Quella carta?... No, dottore.... non la dò a nessuno.... Le giuro per
quanto ho di più caro che non c’è nulla che possa interessar
nessuno.... altri che me....
E cedendo all’affanno che la soverchiava, continuò: — Dio mio, Dio
mio.... Mi lascino stare.... che male faccio?... Per che ragione
credono ch’io sia qui?... Ho delle colpe, ho dei peccati tanti.... ma
questi sospetti non li merito.... Oh se quel poveretto potesse
parlare!... Mi difenda lei, dottore, lei ch’è buono....
Gelsi le fece segno di quietarsi, di tacere, e si accinse a calmar gli
spiriti belligeri della baronessa. Vedeva bene che non era lecito
insistere.... non c’era stata frode, non c’era stato artifizio, non c’era
stata violenza.... egli n’era buon testimonio, e il foglio si trovava in
possesso della signora.... di quella giovine, per manifesto desiderio
del cavaliere Achille.... S’era un segreto ch’ella voleva custodire
nessuno aveva il diritto di strapparglielo.... Egli l’intendeva
perfettamente, certe cose urtavano la suscettività della baronessa;....
ma come si fa?... A questo mondo bisogna tante volte sacrificarsi
per evitar guai maggiori.... e in un momento simile....
La savia perorazione fu troncata da un gesto dell’infermiere.
Le condizioni del malato peggioravano di minuto in minuto. Al
grande eccitamento di prima succedeva una grande prostrazione di
forze, e i polsi declinavano rapidamente. Ciò era stato previsto fino a
un certo punto dal dottore Gelsi; tuttavia egli supponeva la reazione
meno subitanea, meno precipitosa. Così pure non illudendosi
sull’esito finale, egli non aveva creduto a una catastrofe imminente.
Adesso invece si presentavano sintomi tali da giustificare i più gravi
pronostici, e il medico, dopo aver fatto tutto ciò che la sua arte gli
suggeriva, stimò suo dovere di metter sull’avviso la baronessa
Eleonora e gli altri parenti ch’erano alzati.
La Giuseppina non aveva bisogno d’essere avvertita da alcuno. Ella
vedeva, ella sentiva spegnersi a oncia a oncia quella cara vita per la
quale avrebbe dato con entusiasmo la vita propria.

VIII.

E di nuovo quella sera, come la sera addietro, l’intera famiglia era


raccolta in salotto. D’estranei non c’era nessuno; oltre ai Rudeni, ai
Quaglia, ai Minucci non c’era che il cugino Raimondi. Il dottor Gelsi,
dopo una visita fatta alle sette, aveva promesso di tornare fra le dieci
e le undici quantunque, pur troppo, l’opera sua fosse inutile; il
cavaliere Achille non avrebbe passata la notte.
Un attacco di nervi avuto nella mattina aveva prostrato le forze della
baronessa Eleonora. Ella aveva rinunziato alla lotta, e distesa su
una poltrona e con una boccetta di sali sotto il naso, si contentava di
gemere sul proprio destino e di querelarsi dell’immoralità di certe
relazioni che turbano persino la santità dei lari domestici.
Nondimeno, anche nella sua anima frivola ed egoista, vibrava di
tratto in tratto qualche nota sincera di dolore. Pensava alla sua
vecchia casa di cui fra poche ore non sarebbe sopravvissuta che lei.
Morti i genitori, morte le sorelle, moribondo questo fratello nel pieno
vigore degli anni. E lui, se lo ricordava fanciullo, biondo, ricciuto,
accarezzato da tutti, alquanto selvatico forse ma ragionevole e
buono. Perchè s’erano amati così tepidamente, perchè negli ultimi
tempi s’eran visti così poco? Di chi era la colpa? Eppure, ella non
poteva negarlo, in due o tre occasioni quando s’era ricorso a lui per
uscir dagl’impicci nei quali il maledetto vizio del giuoco di Borsa
aveva messo il barone James, egli aveva aperto il suo scrigno senza
farsi troppo pregare. È vero che, dando il danaro, protestava di non
voler immischiarsi in nient’altro. Non voleva ricever confidenze, non
voleva che gli domandassero consigli, schivava gl’incontri e non
incoraggiava le visite.... Ma già teneva l’identico sistema con tutti i
parenti.... Possibile a ogni modo che avesse lasciato un testamento
per spogliare la sorella, i nipoti, il suo sangue insomma?
Mentre la baronessa Eleonora piagnucolava sommessamente, gli
uomini tacevano. Darling movendosi sotto la tavola faceva ogni tanto
tintinnare i sonaglini del suo collare d’ottone.
L’incidente della mattina era stato, durante la giornata, esaminato
sotto tutti gli aspetti. Non c’era più nulla da dire e non c’era nessuna
disposizione da prendere. Quali pur fossero le due o tre parole
scritte dal cavaliere e da lui consegnate a Giuseppina, era chiaro
ch’esse non potevano avere un valore legale. Potevano contenere
un’indicazione, un nome; chi sa? S’era cosa importante la
Giuseppina avrebbe cercato di servirsene, e allora si sarebbe visto
quel che si doveva fare.
Fin dalle prime ore del pomeriggio il malato aveva perduto ogni
conoscenza. Non apriva gli occhi che a lunghi intervalli, e quegli
occhi erano vitrei, immobili; solo la Giuseppina s’illudeva ch’egli la
ravvisasse ancora. Ormai anche il braccio destro giaceva inerte, la
mano umida d’un freddo sudore non rispondeva più alle strette della
gentile mano di donna che tentava scaldarla.
Dinanzi a quel corpo che s’irrigidiva a poco a poco nella sinistra
fissità della morte la Giuseppina sembrava una statua. Non vedeva
che lui, non sentiva che lui. S’accorgeva appena delle persone che
entravano ed uscivano dalla stanza; le era apparsa come in un
sogno una nera tonaca di prete, come in un sogno l’era giunto
all’orecchio un mormorìo di preghiere ch’ella, macchinalmente,
aveva accompagnato con parole salite al labbro dal fondo della
memoria. Poi l’apparizione era svanita; era venuto di nuovo il medico
per andarsene via senza ordinar nulla. Adesso (da quanto tempo? la
Giuseppina non lo sapeva) il silenzio della camera non era rotto che
da un rantolo affannoso.... Ah, finchè quel rantolo durava, il posto
della Giuseppina era lì, sempre lì.
Al tocco dopo mezzanotte il rantolo cessò. La testa del moribondo si
scosse per ricader sul guanciale.
— È finito, — disse l’infermiere.
Finito?... Ma allora?... Allora era finito anche per lei.... Ella non
poteva più rimanere.
Raccolse le sue forze, represse i suoi gemiti, si alzò in piedi, baciò la
fronte del morto, baciò gli occhi, baciò la bocca, ahi tante volte
baciata, e prima che altri la cacciasse dalla camera e dalla casa, si
dileguò inavvertita per l’uscio dello spogliatoio da cui era entrata
circa quarantott’ore innanzi, appena saputa la malattia improvvisa
del cavaliere Achille.

IX.

Due giorni dopo, i Quaglia, i Minucci e il barone James Rudeni,


pacatamente e decorosamente afflitti, accompagnarono fino al
cimitero la salma del loro amato congiunto, nè occorreva essere
profondi psicologhi per legger loro in viso sotto il lutto ufficiale dei
parenti la soddisfazione intima degli eredi. Il cugino Raimondi,
l’ottimo cugino Raimondi, s’era apposto al vero. Il cavaliere Achille
non aveva lasciato testamento; nei suoi cassetti frugati con la
massima diligenza non s’era trovata neanche una riga che
accennasse a disposizioni prese pel caso di morte. D’altra parte
nessuno s’era fatto innanzi a vantar diritti, e per conseguenza la
sostanza del defunto stimata quasi un milione andava divisa in tre
parti tra la baronessa Rudeni, come sorella, e i due giovani Minucci
e Quaglia, come figli di sorelle premorte. Era proprio il meglio che
potesse succedere. Perchè dato un testamento, anche a favore della
sorella e dei nipoti, ci sarebbero state certo delle prelevazioni da fare
per legati, per beneficenze, ecc. Così invece non c’era nulla di
obbligatorio e dell’elargizioni che si fossero fatte avrebbero avuto
lode soltanto gli eredi. Ed eran preparati a farne in congrua misura e
la sera stessa sarebbe comparsa ne’ fogli cittadini una bella lista
d’offerte. Ma sicuro, bisognava onorar la memoria del caro estinto,
bisognava mostrarsi generosi coi poveri. La maggior compiacenza
che dà la ricchezza è quella di giovare ai diseredati dalla fortuna.
Quei signori erano pieni di nobili sentimenti. Il barone James,
prendendo il braccio dell’ottimo cugino Raimondi, gli aveva detto, in
nome proprio e dell’Eleonora rimasta a casa indisposta, che si
sarebbe domandato consiglio a lui su quel che si doveva fare per la
servitù. Gente così affezionata al padrone! Gente che lo aveva
assistito in quel modo! Non c’è dubbio che il povero Achille, se
avesse avuto tempo da far testamento, se ne sarebbe ricordato. Ma!
Come si muore! Oggi si è sani come pesci, domani.... patatrac.
E i giovani Minucci e Quaglia avevano anch’essi tirato in disparte il
cugino Raimondi per sentire da lui in quali condizioni restava quella
ragazza.... quella Giuseppina.... In quanto a loro.... seppur la zia non
voleva saperne.... non sarebbero stati alieni.... per una volta tanto....
dal fare un sacrificio di qualche migliaio di lire.... s’intende che ciò
non doveva costituire un precedente.... la ragazza non aveva diritti
da accampare, s’intende.... era così per un impulso spontaneo.... In
somma Raimondi aveva capito le loro idee; si regolasse da
quell’uomo cauto e savio ch’egli era.
Raimondi aveva lasciato dire per creanza, ma poi aveva dichiarato
che la Giuseppina sarebbe morta di fame prima d’accettare un
centesimo, che la proposta l’avrebbe offesa, ch’egli non avrebbe
certo osato di fargliela.
E i due cugini s’erano guardati dall’insistere, contentandosi di
esternare la loro ammirazione pel disinteresse che si riscontra
talvolta dove meno si supporrebbe. A ogni modo si sarebbe potuto
discorrerne di nuovo dopo la cerimonia.
All’ultimo momento l’avvocato Rizzoli pronunziò brevi ed acconcie
parole in nome dei congiunti troppo turbati da compiere essi
quest’ufficio pietoso; un altro signore aggiunse un saluto per parte
degli amici, e la bara fu calata nella fossa. Allora, sul triste margine,
risuonò un ululato di cane. Era Bibì. O come mai era capitata in
cimitero? In che barca s’era nascosta? L’allontanarono a forza,
volevano prenderla, ma essa sguisciò via fra le tombe. Sul tumulo si
deposero parecchie corone, fra cui tre splendidissime delle famiglie
Quaglia, Minucci e Rudeni. Poi altre strette di mano, altri sospiri e
condoglianze e ringraziamenti, e il corteggio si sciolse.
— Caro Raimondi, — disse il barone James, quando fu presso alla
riva del cimitero, — se avete moneta spicciola date un soldo a quel
povero vecchio che tiene la gondola..... Io non ho più rame in tasca.

· · · · · · · · · · · · · · · ·

La Giuseppina era venuta prima di tutti e aveva aspettato


pazientemente in un’altra parte dell’ampio recinto. Se si fosse unita
all’accompagnamento funebre l’avrebbero frustata come Bibì; ma già
ella stessa non voleva unirsi a nessuno, voleva esser sola a pregare
ed a piangere. S’inginocchiò sulla terra appena smossa, tolse di
sotto alla mantiglia una semplice ghirlanda di semprevivi e la collocò
fra quelle ghirlande sfarzose dai lunghi nastri di seta nera con ricami
d’argento.... E pianse, e pianse, e pianse. E pregò pace a lui ch’era
stato così buono, a lui che poche ore innanzi di morire aveva con la
mano tremante scritto quelle due parole adorabili: Giuseppina mia.
Perchè il misterioso foglio che aveva tanto sgomentato i parenti non
conteneva di più.
Ed era questa l’eredità di Giuseppina.
Non l’unica però.
Ella credeva di esser sola e non era. Accanto a lei Bibì raspava la
terra e guaiva. — O Bibì, povera Bibì! — esclamò la Giuseppina. —
Tu gli volevi bene.
Se la prese in grembo e la portò via seco.
IL NATALE DI NINETTA.

I.

Era la vigilia di Natale più fredda che si ricordasse da gran tempo in


Venezia. Da tre o quattr’ore nevicava senza tregua, una neve fitta,
sottile, che messa in giro vorticoso da un vento gelato batteva con
un suono metallico sui muri delle case e sui vetri delle finestre.
Grave, impettito, solenne, col capo coperto da un berretto gallonato,
le mani strette in un paio di guanti di pelle di dante, e la maestosa
persona chiusa in un lungo soprabito dai bottoni d’argento, il signor
Barnaba, il guardaportone della nobile famiglia Costi, passeggiava
su e giù per l’ampia entratura del palazzo, illuminata da un gran
fanale a gaz che pendeva dall’alto. Di tratto in tratto si suonava alla
porta della riva. Allora un gondoliere andava ad aprire, ed il signor
Barnaba, senza perder nulla della sua gravità diplomatica, moveva
incontro ai nuovi arrivati, faceva loro un inchino silenzioso, e li
accompagnava fino allo scalone di cui s’affrettava a richiudere
l’uscio a vetri appena essi avessero posto il piede sul primo gradino.
Qualcheduno veniva anche dalla parte di terra, ma erano persone di
minor conto, almeno agli occhi del signor Barnaba, uomo incapace,
sebbene spesso radicale in politica, di accordar la sua stima a della
gente la quale non aveva gondola propria o non prendeva una
gondola a nolo con una serata simile. E la faccia diplomatica
dell’eminente funzionario si atteggiava a un sorrisetto ironico
mentr’egli aiutava quei disgraziati a scuotersi di dosso la neve e
riceveva l’ombrello dalle loro mani intirizzite.
— Che tempo, caro Barnaba, che tempo d’inferno! — esclamavano i
poveri diavoli fatti espansivi dalla consolazione di trovarsi finalmente
al coperto e dalla dolce prospettiva del pranzo che li aspettava.
— Brutte feste di Natale, — soggiungeva il signor Barnaba con la
sua voce di basso profondo. — Peccato!
— E l’ombrello non serve a nulla.
— Già, col vento.
— In gondola dev’esser peggio ancora.
Nonostante quest’asserzione di quelli che venivano a piedi, la
maggior parte degli invitati venivano in gondola. Del resto, non erano
mica molte persone, una ventina al più. Si capisce che per la vigilia
di Natale non si potevano invitare a pranzo che i parenti e quelli tra
gli amici intimi che non avevano famiglia.
Dallo spiraglio dell’uscio della portineria una fanciulla di undici o
dodici anni, magra, pallida, freddolosa, assisteva non vista al passar
della gente, guardava con ammirazione quelle belle signore
incappucciate (almeno ella se le figurava belle), quei signori avvolti
nelle morbide pelliccie, quei bimbi e quelle bimbe (oh quelle bimbe
sopratutto) così ben coperte, così ben vestite, con quei mantellini
dalle tinte gaie come doveva esser la loro vita, come doveva esser la
loro anima. E quand’esse erano scomparse a’ suoi occhi ella le
seguiva con la fantasia; le seguiva su per lo scalone, nelle sale
tiepide, dinanzi alla tavola scintillante di lumi, di cristalli, d’argenteria,
dinanzi all’albero di Natale carico di tanti regali preparati apposta per
loro.... O perchè ci dovevano esser dei bimbi così felici e degli altri
invece che stentavano il pane e non avevano da aspettarsi che i
rimbrotti e le busse?

II.
Dopo le sette non venne più nessuno e il signor Barnaba poteva
ripromettersi qualche ora di quiete e riposare alquanto dalle sue
gravi fatiche. Rientrato in portineria, egli non era più l’uomo dalla
faccia decorosamente ossequiosa che i padroni e i visitatori erano
avvezzi a vedere; come per incanto la sua fronte s’aggrinziva, le sue
sopracciglia si corrugavano, le sue labbra prendevano
un’espressione amara e disgustata, e la sua voce di basso profondo
acquistava delle note stridule ed aspre. Gli è che il signor Barnaba,
intimamente convinto che la società non rendesse giustizia ai suoi
meriti, accumulava nella giornata una buona dose di fiele, ch’egli poi
distribuiva in equa misura tra quelli che avevano la fortuna di
avvicinarlo nell’intimità. Non che fosse proprio cattivo il signor
Barnaba, ma era un povero cervello in cui le più matte idee
cozzavano insieme. A volte pareva più aristocratico d’un
Montmorency, a volte, specie dopo la lettura dei giornali, diventava
giacobino e comunardo. In tutt’e due queste fasi, sua moglie, la mite
e timida siora Marianna, aveva le sue grandi tribolazioni. Perchè
quando suo marito faceva il demagogo ella temeva che le pazze
sfuriate di lui arrivassero all’orecchio dei padroni; quando invece egli
s’atteggiava a conservatore, a persona rispettosa delle regole
gerarchiche, ell’era sicura ch’egli avrebbe finito col trovar l’equilibrio
del suo spirito applicando una sua massima favorita: — La
subordinazione è giusta, ma bisogna rifarsi sui più deboli delle
umiliazioni che ci tocca subir dai più forti.
E il signor Barnaba si rifaceva particolarmente sulla moglie e sulla
Ninetta, ch’era quella bimba di cui abbiamo parlato prima. La Ninetta
non era nè figlia nè parente del signor Barnaba e della siora
Marianna: era una povera orfana, la quale veniva di mattina e di sera
a prestar dei piccoli servigi in portineria, ricevendone in compenso la
colazione e il desinare ch’ella portava nel suo tugurio e divideva con
uno zio, abile operaio, ma giuocatore e beone, il quale l’avrebbe
cacciata di casa s’ella gli si fosse presentata davanti con le mani
vuote. Non era una vita allegra quella della Ninetta, palleggiata fra la
brutalità dello zio e la pedanteria meticolosa e loquace del signor
Barnaba, ma ell’aveva indole buona e tranquilla e sopportava la sua
sorte disgraziata con infinita pazienza. Del resto, i suoi umili uffici al
palazzo Costi, oltre ai vantaggi economici le procuravano anche
qualche momento di svago. Già le tre camerette della portineria,
sebben piccole e scure, erano una reggia al paragone di quella
specie di magazzino umido ov’ella passava la notte. E poi c’era la
distrazione della gente che veniva a far visita, dei barcaiuoli che
apparecchiavano o sparecchiavano la gondola, dei padroni e delle
padroncine che uscivano di casa o rientravano lasciando dietro di sè
quel profumo acuto che hanno i signori, come la Ninetta soleva dire;
senza tener conto delle volte in cui per risparmiar la fatica al signor
Barnaba la bimba saliva lei stessa le scale e portava nel piano nobile
un’imbasciata, un pacco, una lettera. Allora, se le riusciva di dare
una capatina nelle stanze, ella ridiscendeva rossa rossa in viso con
l’impressione di esser stata in un soggiorno di fate.

III.

Quella sera il signor Barnaba era più bisbetico del consueto. Egli
non sapeva capacitarsi che la vigilia di Natale un uomo suo pari,
anzichè goder la sua piena libertà e banchettare gli amici, fosse
costretto a misurar per lungo e per largo l’androne di un palazzo e
ad aprir la porta a una ventina di parassiti d’ogni età e sesso. Il
mondo era proprio fatto male, e ci voleva una rivoluzione per
rinnovarlo ab imis fundamentis. — Per fortuna il 1889 non è lontano
e quello sarà un gran centenario.
La siora Marianna sbarrò tanto d’occhi, e il signor Barnaba
soggiunse con disprezzo: — Ecco ciò che vuol dire non avere
istruzione, non aver letto nulla.... E doveva toccare a me un’oca
simile!.... Il 1889 è il centenario del 1789.... l’anno della grande
Rivoluzione francese, quando s’è tagliata la testa ai re, ai nobili, ai
preti....
— Zitto! — gridò la siora Marianna spaventata.
— Ma che zitto! — replicò il consorte. — Qui nessuno mi sente.... E
se anche mi sentissero e volessero far i gradassi... sono un uomo
capace di anticipar di qualche anno il centenario, io.... E il primo che
deve pagarmela è il signor Schmaus, il mastro di casa.... quel
tedesco petulante che cerca il pelo nell’uovo.
A questo punto, nello spirito del signor Barnaba accadde
un’improvvisa reazione in senso conservativo, ed egli trovò che,
quantunque ingiustamente, il signor Schmaus era suo superiore in
ordine gerarchico e non aveva tutti i torti di voler rifarsi sopra di lui
delle risciacquate di capo prese dai padroni. Ma, come il solito,
l’indulgenza verso i superiori rese il signor Barnaba più aspro
cogl’inferiori. Se il signor Schmaus si rifaceva sopra di lui, il signor
Barnaba aveva ben il diritto di rifarsi su qualchedun altro.... — È
come nelle fabbriche, — egli diceva fra sè con bella similitudine. —
Le pietre che stanno in alto pesano sulle pietre che stanno abbasso.
— In omaggio al quale principio, egli strapazzò la moglie, strapazzò
la Ninetta, e finalmente, guardando di punto in bianco l’orologio,
ordinò alla fanciulla di fare un salto al chiosco più vicino per
prendergli il Secolo che doveva essere arrivato.
La pietosa siora Marianna arrischiò un ma....
— Che c’è? — ruggì il signor Barnaba.
— Niente.... niente.... Però la Ninetta ha da andar presto a casa
sua.... e con questa neve... farle fare una strada di più....
Il marito diede un pugno sulla tavola. — Ah vorrei vedere anche
questa!... Per un po’ di neve.... Come se fossero sassi.... Via,
signora delicatina.... si metta il suo scialle e non perda tempo....
Marsch!
La siora Marianna non fiatava più, ma guardava la Ninetta in un
certo modo come a dire: — Abbi pazienza. È una bestia e non
intende ragione.
E la Ninetta ubbidì in silenzio. Staccò da un chiodo lo scialletto di
lana che le copriva appena le spalle, guardò con un sospiro le sue
scarpe rattacconate, si fece dare un soldo dal signor Barnaba,
aperse a fatica il portone e uscì in istrada. Nevicava sempre,
nevicava fitto, e il vento s’ingolfava nella calle con un urlo lungo,
sinistro, somigliante a un gemito umano. Mal difesa dalla sua
vesticciuola leggera, la povera fanciulla sentiva il freddo penetrarle
nell’ossa, e studiava il passo segnando una piccola orma sul
candido lenzuolo steso per terra.
La distanza dal palazzo Costi al primo chiosco di giornali non era
mica grande, ma quella sera, con quel tempo, con quelle vie
solitarie, pareva alla Ninetta di dover percorrere un deserto
immenso. Lungo tutta la via ella incontrò appena un paio di persone,
imbacuccate nei loro cappotti, bianche e mute come fantasmi; solo
attraversando un Campielo chiamato Campielo dei morti (ce n’è più
d’uno di questi Campieli in Venezia e il loro nome deriva dall’esservi
stati secoli addietro in quei luoghi dei piccoli cimiteri) la ferì il
miagolio lamentevole d’un gattino perduto in mezzo alla neve.
Quando poi credeva di esser giunta alla meta, le toccò un’amara
delusione. Il chiosco era chiuso, forse a cagione del tempo, forse a
cagione della festa. Che partito prendere? Tornarsene indietro a
mani vuote, o andare in cerca d’un altro chiosco a rischio di trovar
chiuso anche quello? Però in quel punto ella sentì gridare in fondo
alla strada: il Secolo, appena arrivato il Secolo. — Secolo, — ella
gridò ripetutamente, correndo dietro al rivenditore. Ma questi non la
intese o non le badò, nè a lei riuscì di raggiungerlo, finchè un
passante impietosito che aveva la fortuna di possedere un vocione
non ebbe tuonato due volte: — Ehi, del Secolo, siete sordo? — Il
rivenditore si fermò con malagrazia, prese il soldo dalla mano della
Ninetta, tirò fuori di sotto il soprabito un numero del giornale, e dopo
averlo dato alla fanciulla si allontanò rapidamente ripetendo come un
pappagallo: Appena arrivato il Secolo. Con molte notizie il Secolo.
La Ninetta rifece il cammino di prima senza trovar anima viva, senza
udire una voce umana che rompesse il silenzio; bensì nel Campielo
dei morti suonava ancora, ma più rauco, più flebile, il miagolìo del
povero gattino smarrito, e una forma nera si dibatteva nella neve.
IV.

La siora Marianna aveva preparata una bella scodella di roba da


mangiare per la Ninetta, l’aveva coperta con un piatto, ravvolta in un
tovagliuolo e riposta entro un paniere, quando la bimba ricomparve
in portineria col giornale.
— In che stato sei! — esclamò impietosita la donna.
— Gran che! — borbottò il signor Barnaba che si dondolava sopra
un seggiolone di paglia presso il camino. — Per quattro fiocchi di
neve! La bella educazione che mia moglie avrebbe dato ai suoi
figliuoli se ne avesse avuti!... Gira di più la chiavetta del gaz, che non
ci vedo a leggere, — soggiunse il maestoso guardaportone aprendo
il Secolo. — Una fiamma sola! E piccola per giunta.... Questi padroni
sono d’una taccagneria....
Mentre il signor Barnaba succhiava avidamente il miele del foglio
lombardo, la siora Marianna parlava a bassa voce con la Ninetta.
— Mi fa pena che tu torni ad uscire con questo tempo.
— Non c’è rimedio....
— Se si potesse farti qui un letticciuolo provvisorio... per una notte....
Io credo che quell’orso, — e accennava a suo marito, — non ci
troverebbe a ridire.... E neanche tuo zio....
— No, no, — rispose la bimba atterrita alla sola idea di poter cedere
alla tentazione. — Se mio zio non mi trova a casa quando torna lui,
sto fresca.
La siora Marianna tentennò la testa. — Che peste questi uomini!
— Vado, — ripigliò la Ninetta, infilando il paniere nel braccio.
— Bevi almeno un sorso di vino, — insistè l’altra. — E gliene
mescette un mezzo bicchiere.
Finalmente, togliendo dalle spalle della fanciulla lo scialletto tutto
bagnato gliene prestò uno di suo, un po’ più grande e pesante. —
Me lo riporterai domani.
— Auff! La terminerete con queste smorfie? — saltò su impazientito
il signor Barnaba.
— Buona notte, buona notte, — disse la Ninetta. Ed uscì.
Uno dei barcaiuoli ch’era nell’entratura le aperse il portone di strada.
— E vai fino a Rialto?
— Sì.
— Bada che il vento non ti porti via.
No, il vento non la portava via, ma una tristezza invincibile le si
addensava sull’anima mentr’ella per la terza volta s’inoltrava sulla
via deserta. E di nuovo il suo pensiero correva involontariamente a
quei bimbi eleganti e felici ch’ell’aveva visti entrare in palazzo e che
adesso senza dubbio ridevano e saltavano davanti all’albero di
Natale. Non era invidiosa per sua natura; era buona, tollerante,
contenta di poco; i cattivi esempi non l’avevano ancora guastata....
Anzi la brutalità dello zio, brutalità cagionata specialmente dall’abuso
dei liquori, le aveva inspirato il ribrezzo dell’intemperanza, la
passione della vita sobria e massaia; e d’altra parte il freddo
egoismo del signor Barnaba ripugnava profondamente al suo cuore
disposto alla simpatia. Quella sera però ella domandava a sè stessa
se suo zio non avesse ragione di annegare i suoi affanni
nell’acquavite, e se non avesse ragione il signor Barnaba di mettere
in pratica a casa propria quella massima, da lui ripetuta dieci volte al
giorno, che bisogna rifarsi su qualcheduno. Rifarsi?.... Ma ella, per
esempio, su chi avrebbe potuto rifarsi? Chi c’era al mondo di più
debole, di più derelitta di lei?
Mentr’ella faceva tra sè queste considerazioni, gli orologi
cominciarono a batter le nove. Per solito a quell’ora ell’era già a
casa, prima che suo zio fosse tornato dalla bettola; accendeva il
lume, gettava un po’ di stipa nel focolare, e dopo aver preso un
boccone per sè lasciava pel suo caro parente il buono e il meglio
delle provvigioni portate seco dal palazzo. Una volta ella doveva
anche aspettarlo alzata e l’aspettava realmente, cascante dal sonno
o addormentata sulla sedia; poi l’era stata data licenza di coricarsi
alle nove e mezzo, e ne approfittava con entusiasmo, evitando in tal
modo di sentire, poichè chiudeva gli occhi appena messa la testa sul
capezzale, le divagazioni stupide e le frasi sboccate dell’ubbriaco il
quale finiva spesso col gettarsi attraverso la tavola e pigliar sonno
così.
Comunque sia, quella sera la Ninetta era in ritardo e le conveniva
affrettarsi.
Camminava con la testa bassa, rasente il muro, stringendosi
addosso quanto più poteva lo scialle, raccomandandosi l’anima nel
far gli scalini dei ponti, lasciando sfuggir un piccolo grido a ogni
sdrucciolone che dava, a ogni folata di vento che la investiva, a ogni
falda di neve che accumulata sulle grondaie, sulle cornici, sugli
sporti delle finestre, precipitava giù nella strada. Così arrivò a quel
Campielo dei morti che aveva già passato due volte e che doveva
ripassar nuovamente per recarsi a casa sua, e non potè a meno di
volger l’occhio verso la parte da cui pochi minuti innanzi, veniva il
lamento dell’infelice bestiuola implorante aiuto. Adesso non si udiva
più nulla, ma lì accanto al muro, dove la Ninetta aveva visto agitarsi
una forma nera, ella notò qualche cosa che si staccava ancora sul
fondo candidissimo, e bench’ella non avesse tempo da perdere, una
forza irresistibile la spinse verso quella cosa immobile, che (fors’era
un’allucinazione della sua fantasia) la guardava con occhi fissi e
vitrei. Non s’era ingannata.... Era il gattino di prima; freddo, irrigidito,
morto.... Morto davvero?.... Per un momento lo credette tale; poi,
chinandosi sopra di lui e toccandolo con mano paurosa, le parve che
nello pupille dilatate balenasse un raggio di vita. E nelle sue fibre di
fanciulla sorse un impeto di pietà e di tenerezza; e in petto le si
svegliò subitaneo e imperioso quell’istinto gentile che fa della donna
la protettrice naturale dei deboli e degli afflitti. Raccolse da terra
l’animale agonizzante, lo avviluppò nelle pieghe del suo scialle e
ripigliò il suo cammino. Non sentiva più il freddo, non s’accorgeva
del vento che le scompigliava i capelli; angustiata soltanto dall’idea
che il suo soccorso fosse giunto troppo tardi. Ah, non se lo sarebbe
perdonato mai.

V.

Arrivò a casa trafelata, col cuore che le batteva tumultuosamente;


ma quando, aperta la porta di strada, vide tutto buio e capì che suo
zio non c’era, fu sollevata da un grande incubo. Se c’era lui e s’ella
si presentava al suo cospetto con quella strana compagnia,
figuriamoci, egli era uomo capace di far fare alla bestia, morta o viva,
un gran salto per la finestra. Volesse pure il cielo ch’egli rimanesse
fuori per un pezzo! Ella trovò a tastoni i fiammiferi, accese un
moccolo di sego, e depose delicatamente sulla tavola il suo prezioso
fardello, incerta ancora se il calore ch’ella sentiva rinascere in quel
corpicino fosse altro che il calore proprio, ch’ella gli aveva trasfuso
tenendolo stretto alla sua persona. Ma il dubbio non durò molto.
Lisciato, accarezzato, stropicciato in tutti i sensi, l’animale non tardò
a dar segni manifesti di vita. Mosse la coda, stirò a una a una le
zampe, aperse languidamente gli occhi, mise un lieve miagolìo; la
risurrezione era compiuta. Oh che felicità fu quella per la Ninetta! E
la parola felicità non ci meravigli. Quando mai le nostre gioie e i
nostri dolori sono proporzionati alle cause da cui derivano? La
fanciulla era in estasi davanti alla leggiadra bestiuola ch’ella aveva
salvata. Era un gattino di cinque o sei mesi, dalle forme snelle, dal
pelo nerissimo, fino, lucido, vellutato; senza dubbio, appena si fosse
rimesso in forze, avrebbe avuto tutte le grazie che i gattini giovani
sogliono avere. Intanto si fregava intorno alla sua benefattrice e
pareva mansueto e riconoscente. — Caro, caro, caro! — esclamava
la Ninetta nel suo entusiasmo, baciandolo come un bambino. Lo
fece partecipare alla sua piccola cena; poi, spogliatasi in furia, lo
portò seco nel suo letticciuolo. Poverino! Aveva patito tanto freddo;
era ben giusto che si riscaldasse.
Di fuori continuava a soffiare il vento e a cader la neve, e nella
stanzuccia mal riparata giungevano i rumori sinistri della bufera;
tuttavia la Ninetta non istette molto ad addormentarsi. E sognò.
Sognò le belle bambine covate teneramente dagli occhi amorosi
delle mamme e dei babbi, le belle bambine che aveva viste lievi e
agili come farfalle ascendere lo scalone del palazzo; sognò d’essere
una di loro e di trovarsi con loro dinanzi all’albero di Natale,
abbarbagliata dallo scintillìo delle candele, dalla mostra dei balocchi
che pendevano dai rami come frutti maturi. Quand’ecco un gemito
lungo e pietoso salir dalla strada ove il tempo seguitava ad
imperversare. Ed ella si staccava dall’ilare schiera delle sue
compagne, lasciava il salotto tiepido e profumato, e correva
attraverso una fila interminabile di stanze giù per un labirinto di scale
senza poter mai metter capo a un’uscita.... Alla fine, si destò di
soprassalto. Era nel suo letto, rannicchiata sotto le coperte; il gattino,
rivolto a spira, faceva le fusa accanto a lei. La visione era svanita:
solo una cosa restava vera; ell’aveva salvato un essere che soffriva,
e questo pensiero le dava un’infinita dolcezza. — Bisogna rifarsi sui
più deboli delle umiliazioni che ci tocca subir dai più forti, — soleva
ripetere il signor Barnaba. Ecco, s’era rifatta anche lei, ma a suo
modo, un modo tanto diverso, e tanto migliore di quello che il signor
Barnaba suggeriva.
Era la mezzanotte. Lo zio era tornato a casa e lo si sentiva russare
in cucina. Dalle cento chiese della città l’allegro scampanìo del
Natale portava una soave promessa a tutti i derelitti del mondo.
LA NIPOTE DEL COLONNELLO.

I.

Battista, già ordinanza e adesso cameriere del colonnello Annibale


Bedeschi, accese il lume, chiuse le imposte, tirò le tende, e poi,
mettendosi in posizione militare dinanzi al padrone, gli domandò se
doveva aggiungere dell’altra legna nella stufa.
— No, — rispose il colonnello, — non fa freddo. Andate pure.
Ma prima che l’altro richiudesse l’uscio dietro a sè gli fece una
interrogazione. — La signorina?
Battista tentennò il capo con aria grave. — Oh, signor colonnello, la
signorina è in gran faccende per quel dolce.... sa, quel dolce di cui
trovò la ricetta nel libro.... Anzi ho paura che oggi il desinare non
sarà pronto per l’ora solita.
— In causa del dolce?
— Appunto, signor colonnello.
— Che razza d’idea è saltata in mente alla Bice d’occuparsi di
cucina? — esclamò Bedeschi. — Ditele che appena può venga da
me.
— Appena può, appena può? — brontolò il colonnello quando
Battista fu uscito. — Avrei soggezione di mia nipote? Mi sarei preso
in casa un tiranno domestico?... Io che fui sempre uso a comandare
a bacchetta, io che conducevo la mia famiglia come il mio
reggimento?
Ebbe la tentazione di richiamare Battista e di mandare per suo
mezzo un ordine perentorio alla ragazza, ma se ne pentì. In fin dei
conti se la Bice faceva un dolce, questo non era un delitto, e se
facendolo ella portava un piccolo ritardo nel pranzo, questa non era
una sventura.... Era poi innegabile che la ragazza era un tiranno sui
generis, pieno di grazia, di dolcezza e di buon umore, incapace di
dire una parola sgarbata e di commettere una prepotenza. Senza di
lei il colonnello sarebbe stato ben solo, ed egli avrebbe avuto torto
marcio a lagnarsi d’averla accolta presso di sè quando all’uscir di
collegio ella s’era trovata orfana di padre e di madre.... E in fondo
non se ne lagnava, quantunque gli paresse di non esser sotto certi
rispetti più quello d’una volta, dacchè c’era la Bice.
Le mani sprofondate nell’ampie saccoccie della vestaglia, la testa
coperta da un berretto di seta nera sotto a cui spuntava qualche
ciuffo di capelli che avevano acquistato da poco il coraggio del loro
candore, il vecchio militare si mise a camminare su e giù per la
stanza, trascinando alquanto la gamba sinistra ferita nel 1866 a
Custoza. Era un uomo sulla sessantina, alto, con le spalle larghe, i
baffi folti e lunghi, lo sguardo franco e leale, ma un po’ duro e
imperioso.
Dopo tre o quattro giri egli si riavvicinò alla tavola, e inforcate le lenti
rilesse due telegrammi arrivati quel giorno stesso da’ suoi figliuoli
Vittorio ed Augusto, militari tutti e due, il primo nell’esercito, il
secondo nella marina. I telegrammi con gli auguri pel Natale
venivano l’uno da Massaua, l’altro da Nuova York. Nientemeno.
Antico soldato dell’indipendenza italiana, non ritiratosi dal servizio
che per motivi di salute, il colonnello Bedeschi aveva favorito,
accarezzato la vocazione del suo primo e del suo secondogenito, e
allorchè Vittorio aveva chiesto e ottenuto di andare in Africa e
Augusto s’era imbarcato per un viaggio di circumnavigazione di circa
tre anni, egli li aveva accommiatati con ciglio asciutto, dicendo loro
soltanto: — Fate il vostro dovere, ragazzi.
Tuttavia quella sera, nel rileggere i due dispacci arrivati da due sì
lontane e diverse parti del mondo, anch’egli, l’uomo forte ed austero,

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