In Vitro Neuronal Networks From

Culturing Methods to Neuro

Technological Applications Michela
Chiappalone
Visit to download the full and correct content document:
https://textbookfull.com/product/in-vitro-neuronal-networks-from-culturing-methods-to-
neuro-technological-applications-michela-chiappalone/
More products digital (pdf, epub, mobi) instant
download maybe you interests ...

Quantitative Methods in Environmental and Climate

Research Michela Cameletti

https://textbookfull.com/product/quantitative-methods-in-
environmental-and-climate-research-michela-cameletti/

Optogenetics From Neuronal Function to Mapping and

Disease Biology Krishnarao Appasani

https://textbookfull.com/product/optogenetics-from-neuronal-
function-to-mapping-and-disease-biology-krishnarao-appasani/

Plasma and Fusion Science From Fundamental Research to

Technological Applications 1st Edition B. Raneesh

https://textbookfull.com/product/plasma-and-fusion-science-from-
fundamental-research-to-technological-applications-1st-edition-b-
raneesh/

Diffuse Algorithms for Neural and Neuro Fuzzy Networks

With Applications in Control Engineering and Signal
Processing Boris A. Skorohod (Auth.)

https://textbookfull.com/product/diffuse-algorithms-for-neural-
and-neuro-fuzzy-networks-with-applications-in-control-
engineering-and-signal-processing-boris-a-skorohod-auth/
Complex Networks Principles Methods and Applications
1st Edition Vito Latora

https://textbookfull.com/product/complex-networks-principles-
methods-and-applications-1st-edition-vito-latora/

In Vitro Fertilization Kay Elder

https://textbookfull.com/product/in-vitro-fertilization-kay-
elder/

Estimating Functional Connectivity and Topology in

Large-Scale Neuronal Assemblies: Statistical and
Computational Methods Vito Paolo Pastore

https://textbookfull.com/product/estimating-functional-
connectivity-and-topology-in-large-scale-neuronal-assemblies-
statistical-and-computational-methods-vito-paolo-pastore/

Numerical Methods in Mechanics of Materials, 3rd ed:

With Applications from Nano to Macro Scales Third
Edition Boresi

https://textbookfull.com/product/numerical-methods-in-mechanics-
of-materials-3rd-ed-with-applications-from-nano-to-macro-scales-
third-edition-boresi/

Computing in Communication Networks: From Theory to

Practice 1st Edition Frank Fitzek

https://textbookfull.com/product/computing-in-communication-
networks-from-theory-to-practice-1st-edition-frank-fitzek/
Advances in Neurobiology 22

Michela Chiappalone
Valentina Pasquale
Monica Frega Editors

In Vitro
Neuronal
Networks
From Culturing Methods to Neuro-
Technological Applications
Advances in Neurobiology

Volume 22

Series Editor
Arne Schousboe, Dept of Drug Design & Pharmacology, University of Copenhagen,
Copenhagen, Denmark
More information about this series at http://www.springer.com/series/8787
Michela Chiappalone • Valentina Pasquale
Monica Frega
Editors

In Vitro Neuronal Networks

From Culturing Methods to
Neuro-Technological Applications

123
Editors
Michela Chiappalone Valentina Pasquale
Rehab Technologies IIT-INAIL Joint Lab Neuroscience and Brain Technologies
Istituto Italiano di Tecnologia Istituto Italiano di Tecnologia
Genova, Italy Genova, Italy

Monica Frega
Department of Clinical Neurophysiology
University of Twente
Enschede, The Netherlands

ISSN 2190-5215 ISSN 2190-5223 (electronic)

Advances in Neurobiology
ISBN 978-3-030-11134-2 ISBN 978-3-030-11135-9 (eBook)
https://doi.org/10.1007/978-3-030-11135-9

Library of Congress Control Number: 2019935515

© Springer Nature Switzerland AG 2019

This work is subject to copyright. All rights are reserved by the Publisher, whether the whole or part of
the material is concerned, specifically the rights of translation, reprinting, reuse of illustrations, recitation,
broadcasting, reproduction on microfilms or in any other physical way, and transmission or information
storage and retrieval, electronic adaptation, computer software, or by similar or dissimilar methodology
now known or hereafter developed.
The use of general descriptive names, registered names, trademarks, service marks, etc. in this publication
does not imply, even in the absence of a specific statement, that such names are exempt from the relevant
protective laws and regulations and therefore free for general use.
The publisher, the authors, and the editors are safe to assume that the advice and information in this book
are believed to be true and accurate at the date of publication. Neither the publisher nor the authors or
the editors give a warranty, express or implied, with respect to the material contained herein or for any
errors or omissions that may have been made. The publisher remains neutral with regard to jurisdictional
claims in published maps and institutional affiliations.

This Springer imprint is published by the registered company Springer Nature Switzerland AG.
The registered company address is: Gewerbestrasse 11, 6330 Cham, Switzerland
This book is dedicated to our mentors
Preface

In vitro cultures of dissociated neurons coming from different brain areas retain
important functional properties of the tissue of origin, thus representing a perfect
trade-off between more realistic (but complex) experimental models and theoretical
(but limited) modeling approaches. Moreover, the possibilities offered by the
latest technologies allow the simultaneous monitoring of several units at high
spatiotemporal resolution and for very long time periods, from hours to days and
even months. These technological developments are giving new opportunities in
terms of experimental design, but also posing new problems in terms of data
management and interpretation.
In this book, the authors provide an overview of the incredible developments
achieved in the study of in vitro neuronal networks to make the scientific com-
munity aware of the enormous potential of this experimental model but also of
its limitations. We will start from culturing methodologies, including the use of
innovative nanotechnologies and nanomaterials. The establishment of stem cell-
derived neuronal cultures will be also discussed, as well as the description of in
vitro experimental models exhibiting pathological behaviors. We will review the
techniques used for measuring networks’ activity from many channels, mostly
focusing on planar microelectrode arrays. Then, we will present recent improve-
ments in large-scale data analysis and interpretation. Finally, we will introduce a set
of applications for novel experimental designs, including neurotoxicology, stem cell
technology, closed-loop electrophysiology, and hybrid systems.
The book has four major parts:
Part I: In Vitro Neuronal Cultures: Experimental Models and Nanomaterials
Part II: Recording Techniques
Part III: Data Analysis Methods
Part IV: Applications
This book is designed for professionals from both academic and non-academic
fields working, or starting to work, with cultures of neurons in vitro. Target special-
ists among academics could be professors, technicians, postdocs, and graduate and

vii
viii Preface

undergraduate students. Outside academia, managers in business development/sales

could be interested in knowing the latest state-of-the-art achievements. It is also
designed for teaching undergraduate and graduate students and researchers.

Genova, Italy Michela Chiappalone

Genova, Italy Valentina Pasquale
Enschede, The Netherlands Monica Frega
Acknowledgments

The editors would like to thank the Project Coordinator Miss Jayashree Dhaksh-
namoorthy at Springer Nature Publisher for her constant advice.

I would like to thank my PhD advisors, Prof. Massimo Grattarola and Prof.
Sergio Martinoia, for introducing me to the fantastic world of in vitro neuronal
systems. I thank all my lab members for the great job they do every day. I would
also like to thank my family, my husband Emanuele and my kids Nicolò, Filippo,
and Elena, for their constant support in any step of my career in research.
Michela Chiappalone

I would like to thank Prof. Sergio Martinoia, Dr. Michela Chiappalone, and Dr.
Paolo Massobrio, who taught me everything I know about in vitro neuronal systems
and MEAs. They always encouraged me to pursue my career with passion and
courage. This book is dedicated to them.
Valentina Pasquale

I express my gratitude to my PhD advisor, Prof. Sergio Martinoia, because his

passion and his way of working inspired me and led me during my first steps into
the research world. I would also like to thank my husband Mattia who is always
present by my side. Both of them have always encouraged me to follow my passions,
supporting my research path and helping me in any step of my career.
Monica Frega

ix
Contents

Part I In Vitro Neuronal Cultures: Experimental Models and

Nanomaterials
Past, Present, and Future of Neuronal Models In Vitro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Jason M. Keller and Monica Frega
In Vitro Models of Brain Disorders . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Joost le Feber
Neuronal Cultures and Nanomaterials . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
Mattia Bramini, Anna Rocchi, Fabio Benfenati, and Fabrizia Cesca

Part II Recording Techniques

Large-Scale, High-Resolution Microelectrode Arrays for
Interrogation of Neurons and Networks . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
Marie Engelene J. Obien and Urs Frey
Multisite Intracellular Recordings by MEA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 125
Micha E. Spira, Shun-Ho Huang, Nava Shmoel, and Hadas Erez
From MEAs to MOAs: The Next Generation of Bioelectronic
Interfaces for Neuronal Cultures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155
Andrea Spanu, Mariateresa Tedesco, Sergio Martinoia,
and Annalisa Bonfiglio

Part III Data Analysis Methods

Scaling Spike Detection and Sorting for Next-Generation
Electrophysiology . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171
Matthias H. Hennig, Cole Hurwitz, and Martino Sorbaro
Burst Detection Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
Ellese Cotterill and Stephen J. Eglen

xi
xii Contents

Reconstruction of Functional Connectivity from Multielectrode

Recordings and Calcium Imaging . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207
Paolo Bonifazi and Paolo Massobrio
Open-Source Tools for Processing and Analysis of In Vitro
Extracellular Neuronal Signals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 233
Mufti Mahmud and Stefano Vassanelli

Part IV Applications
Active High-Density Electrode Arrays: Technology
and Applications in Neuronal Cell Cultures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 253
Davide Lonardoni, Hayder Amin, Stefano Zordan, Fabio Boi,
Aziliz Lecomte, Gian Nicola Angotzi, and Luca Berdondini
Application of Microelectrode Array Approaches to Neurotoxicity
Testing and Screening . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 275
Timothy J. Shafer
Advances in Human Stem Cell-Derived Neuronal Cell Culturing
and Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 299
Laura Ylä-Outinen, Jarno M. A. Tanskanen, Fikret E. Kapucu,
Anu Hyysalo, Jari A. K. Hyttinen, and Susanna Narkilahti
Long-Term Activity Dynamics of Single Neurons and Networks . . . . . . . . . . . 331
Sebastian Reinartz
Closed-Loop Systems and In Vitro Neuronal Cultures: Overview
and Applications . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 351
Marta Bisio, Alexey Pimashkin, Stefano Buccelli, Jacopo Tessadori,
Marianna Semprini, Timothée Levi, Ilaria Colombi, Arseniy Gladkov,
Irina Mukhina, Alberto Averna, Victor Kazantsev, Valentina Pasquale,
and Michela Chiappalone
About the Editors

Michela Chiappalone’s research interests are in the

field of neuroengineering. She obtained a PhD in
Electronic Engineering and Computer Science from
the University of Genova (Italy) in 2003. In 2002,
she has been visiting scholar in the Department of
Physiology, Northwestern University (Chicago, IL,
USA). After a postdoc at the University of Gen-
ova, in 2007, she joined the Neuroscience and Brain
Technologies Department at the Istituto Italiano di
Tecnologia (IIT) as a postdoc. In 2013, she got a group
leader position (“researcher”) in the same institution.
In 2015, she has been visiting professor at KUMED
(Kansas City, KS, USA), hosted by Prof. R.J. Nudo.
From 2012 to 2015, M. Chiappalone has been coordi-
nator of the FET Open European Project BrainBow,
judged excellent. In 2017, M. Chiappalone joined
the Rehab Technologies IIT-INAIL joint lab of IIT
to lead a group aimed at interfacing robotic devices
with the nervous system for applications in neuropros-
thetics, neuromodulation, and neurorehabilitation. In
2018, she got the National Scientific Habilitation as
Full Professor of Bioengineering. She authored 60
papers published in international journals, 50 peer-
reviewed contributions to international conferences,
and 8 book chapters, and she gave more than 60
scientific talks at international/national conferences
and research institutions.

xiii
xiv About the Editors

Valentina Pasquale got the PhD in “Humanoid Tech-

nologies” from the University of Genova and Istituto
Italiano di Tecnologia in 2010. During her PhD, she
focused on developing analysis tools to character-
ize the spontaneous and evoked activity of cortical
and hippocampal networks cultured on microelec-
trode arrays, seen as a reduced biological model
for the generation of coordinated neuronal activity.
During postdoc, she was involved in neuro-robotics
and neuro-prosthetics studies, aimed at understanding
how to interface artificial devices (as a small robot
or a simulated neural network) and neuronal sys-
tems, with the final goal of advancing the design of
future brain-machine interfaces and brain prostheses.
Currently, she has been working as senior postdoc
in Dr. Tommaso Fellin’s lab (Optical Approaches to
Brain Function). Her interests include in vivo studies
combining optogenetics and electrophysiology for a
deeper understanding of inhibitory interneurons’ con-
tribution to the generation and control of sleep waves.
She is also involved in the design and development
of technological tools for patterned optical stimulation
through light phase modulation.

Monica Frega received her PhD in Bioengineering

from the University of Genova in 2014. During her
PhD, she developed a novel 3D neuronal model,
and she demonstrated the possibility of coupling cul-
tured 3D networks to microelectrode array devices
and functionally monitoring their electrophysiologi-
cal activity. Her thesis “Neuronal network dynamics
in 2D and 3D in vitro neuro-engineered systems,”
carried out under the supervision of Prof. Dr. Sergio
Martinoia, was judged “excellent” by the PhD com-
mittee and recognized as “outstanding PhD research”
from Springer. Between 2014 and 2018, she worked
as a postdoctoral researcher in the group of Prof.
Dr. Nael Nadif Kasri at Radboudumc (Nijmegen,
the Netherlands), where she applied her expertise in
bioengineering to state-of-the-art stem cell biology
to study neurodevelopmental disorders. While her
academic path and PhD allowed her to develop engi-
neering and technical capabilities, during the postdoc,
she acquired expertise in stem cell biology. Through
About the Editors xv

these working experiences, Monica Frega became a

truly interdisciplinary researcher. In 2018, Monica
Frega started her job at the University of Twente as
assistant professor in the Clinical Neurophysiology
group. Her research mainly focuses on neurological
disorders, with the aim to bridge the gap between
research and clinic. She makes use of human in vitro
models (neuronal cells derived from human-induced
pluripotent stem cell from healthy subject and patients
grown on microelectrode arrays) in combination with
EEG data recordings from patients to study basic
physiological processes involved in neurological dis-
orders.
 Part I
In Vitro Neuronal Cultures: Experimental
Models and Nanomaterials
Past, Present, and Future of Neuronal
Models In Vitro

Jason M. Keller and Monica Frega

Abstract Over the past century, robust methods were developed that enable the
isolation, culture, and dynamic observation of mammalian neuronal networks in
vitro. But even if neuronal culture cannot yet fully recapitulate the normal brain, the
knowledge that has been acquired from these surrogate in vitro models is invaluable.
Indeed, neuronal culture has continued to propel basic neuroscience research,
proving that in vitro systems have legitimacy when it comes to studying either
the healthy or diseased human brain. Furthermore, scientific advancement typically
parallels technical refinements in the field. A pertinent example is that a collective
drive in the field of neuroscience to better understand the development, organization,
and emergent properties of neuronal networks is being facilitated by progressive
advances in micro-electrode array (MEA) technology. In this chapter, we briefly
review the emergence of neuronal cell culture as a technique, the current trends in
human stem cell-based modeling, and the technologies used to monitor neuronal
communication. We conclude by highlighting future prospects that are evolving
specifically out of the combination of human neuronal models and MEA technology.

Keywords In vitro models · Neuronal cell culture techniques · Microelectrode

arrays

J. M. Keller
Department of Human Genetics, Radboudumc, Donders Institute for Brain, Cognition, and
Behaviour, Nijmegen, The Netherlands
M. Frega ()
Department of Clinical Neurophysiology, University of Twente, Enschede, The Netherlands
Department of Human Genetics, Radboudumc, Donders Institute for Brain, Cognition, and
Behaviour, Nijmegen, The Netherlands
e-mail: m.frega@utwente.nl

© Springer Nature Switzerland AG 2019 3

M. Chiappalone et al. (eds.), In Vitro Neuronal Networks,
Advances in Neurobiology 22, https://doi.org/10.1007/978-3-030-11135-9_1
Past, Present, and Future of Neuronal Models In Vitro 15

Chanda, S., Ang, C. E., Davila, J., Pak, C., Mall, M., Lee, Q. Y., et al. (2014). Generation of
induced neuronal cells by the single reprogramming factor ASCL1. Stem Cell Reports, 3(2),
282–296.
Charkhkar, H., Meyyappan, S., Matveeva, E., Moll, J. R., McHail, D. G., Peixoto, N., et al. (2015).
Amyloid beta modulation of neuronal network activity in vitro. Brain Research, 1629, 1–9.
Colombi, I., Mahajani, S., Frega, M., Gasparini, L., & Chiappalone, M. (2013). Effects of
antiepileptic drugs on hippocampal neurons coupled to micro-electrode arrays. Frontiers in
Neuroengineering, 6, 10.
Di Lullo, E., & Kriegstein, A. R. (2017). The use of brain organoids to investigate neural
development and disease. Nature Reviews. Neuroscience, 18(10), 573–584.
Dimos, J. T., Rodolfa, K. T., Niakan, K. K., Weisenthal, L. M., Mitsumoto, H., Chung, W., et al.
(2008). Induced pluripotent stem cells generated from patients with ALS can be differentiated
into motor neurons. Science, 321, 1218–1221.
Dyson, F. J. (2012). History of science. Is science mostly driven by ideas or by tools? Science,
338(6113), 1426–1427.
Engle, S. J., Blaha, L., & Kleiman, R. J. (2018). Best practices for translational disease modeling
using human iPSC-derived neurons. Neuron, 100(4), 783–797.
Frey, U., Sedivy, J., Heer, F., Pedron, R., Ballini, M., Mueller, J., et al. (2010). Switch-matrix-based
high-density microelectrode Array in CMOS technology. IEEE Journal of Solid-State Circuits,
45, 467–482.
Garcez, P. P., Loiola, E. C., da Costa, R. M., Higa, L. M., Trindade, P., Delvecchio, R., et al. (2016).
Zika virus impairs growth in human neurospheres and brain organoids. Science, 352, 816–818.
Golgi, C. (1873). Sulla struttura della sostanza grigia del cervello. Gazzetta Medica Italiana
(Lombardia), 33, 244–246 (in Italian).
Gordon, J., Amini, S., & White, M. K. (2013). General overview of neuronal cell culture. Methods
in Molecular Biology, 1078, 1–8.
Gortz, P., Siebler, M., Ihl, R., Henning, U., Luckhaus, C., Supprian, T., et al. (2013). Multielectrode
array analysis of cerebrospinal fluid in Alzheimer’s disease versus mild cognitive impairment:
A potential diagnostic and treatment biomarker. Biochemical and Biophysical Research
Communications, 434(2), 293–297.
Gray, E. G. (1959). Axo-somatic and axo-dendritic synapses of the cerebral cortex: An electron
microscope study. Journal of Anatomy, 93, 420–433.
Gross, G. W., Rieske, E., Kreutzberg, G. W., & Meyer, A. (1977). A new fixed-array multi-
microelectrode system designed for long-term monitoring of extracellular single unit neuronal
activity in vitro. Neuroscience Letters, 6(2–3), 101–105.
Gullo, F., Manfredi, I., Lecchi, M., Casari, G., Wanke, E., & Becchetti, A. (2014). Multi-
electrode array study of neuronal cultures expressing nicotinic beta2-V287L subunits, linked to
autosomal dominant nocturnal frontal lobe epilepsy. An in vitro model of spontaneous epilepsy.
Frontiers in Neural Circuits, 8, 87.
Hales, C. M., Zeller-Townson, R., Newman, J. P., Shoemaker, J. T., Killian, N. J., & Potter, S.
M. (2012). Stimulus-evoked high frequency oscillations are present in neuronal networks on
microelectrode arrays. Frontiers in Neural Circuits, 6, 29.
Halevy, T., Czech, C., & Benvenisty, N. (2015). Molecular mechanisms regulating the defects in
fragile X syndrome neurons derived from human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports,
4(1), 37–46.
Hamburger, V. (1980). S. Ramón y Cajal, R. G. Harrison, and the beginnings of neuroembryology.
Perspectives in Biology and Medicine, 23(4), 600–616.
Han, S. S., Williams, L. A., & Eggan, K. C. (2011). Constructing and deconstructing stem cell
models of neurological disease. Neuron, 70(4), 626–644.
Harrison, R. G. (1910). The outgrowth of the nerve fiber as a mode of protoplasmic movement.
The Journal of Experimental Zoology, 9(4), 787–846.
Herzog, N., Shein-Idelson, M., & Hanein, Y. (2011). Optical validation of in vitro extra-cellular
neuronal recordings. Journal of Neural Engineering, 8(5), 056008.
16 J. M. Keller and M. Frega

Hierlemann, A., Frey, U., Hafizovic, S., & Heer, F. (2011). Growing cells atop microelectronic
chips: Interfacing electrogenic cells in vitro with CMOS-based microelectrode arrays. Pro-
ceedings of the IEEE, 99, 252–284.
Hubel, D. H. (1957). Tungsten microelectrode for recording from single units. Science, 125, 549–
550.
Komor, A. C., Badran, A. H., & Liu, D. R. (2017). CRISPR-based technologies for the
manipulation of eukaryotic genomes. Cell, 168(1–2), 20–36.
Lancaster, M. A., Renner, M., Martin, C.-A., Wenzel, D., Bicknell, L. S., Hurles, M. E., et al.
(2013). Cerebral organoids model human brain development and microcephaly. Nature, 501,
373–379.
López-Muñoz, F., Boya, J., & Alamo, C. (2006). Neuron theory, the cornerstone of neuroscience,
on the centenary of the Nobel prize award to Santiago Ramón y Cajal. Brain Research Bulletin,
70(4–6), 391–405.
Louis, E. D., & Stapf, C. (2001). Unraveling the neuron jungle: The 1879-1886 publications by
Wilhelm his on the embryological development of the human brain. Archives of Neurology,
58(11), 1932–1935.
Marchetto, M. C., Carromeu, C., Acab, A., Yu, D., Yeo, G. W., Mu, Y., et al. (2010). A model
for neural development and treatment of Rett syndrome using human induced pluripotent stem
cells. Cell, 143(4), 527–539.
Mariani, J., Coppola, G., Zhang, P., Abyzov, A., Provini, L., Tomasini, L., et al. (2015). FOXG1-
dependent dysregulation of GABA/glutamate neuron differentiation in autism spectrum
disorders. Cell, 162, 375–390.
Marín, O. (2013). Human cortical interneurons take their time. Cell Stem Cell, 12(5), 497–499.
Maroof, A. M., Keros, S., Tyson, J. A., Ying, S. W., Ganat, Y. M., Merkle, F. T., et al.
(2013). Directed differentiation and functional maturation of cortical interneurons from human
embryonic stem cells. Cell Stem Cell, 12(5), 559–572.
Martens, M. B., Frega, M., Classen, J., Epping, L., Bijvank, E., Benevento, M., et al. (2016).
Euchromatin histone methyltransferase 1 regulates cortical neuronal network development.
Scientific Reports, 6, 35756.
McCarthy, K. D., & de Vellis, J. (1980). Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell
cultures from rat cerebral tissue. The Journal of Cell Biology, 85(3), 890–902.
Mertens, J., Marchetto, M. C., Bardy, C., & Gage, F. H. (2016). Evaluating cell reprogramming,
differentiation and conversion technologies in neuroscience. Nature Reviews. Neuroscience,
17(7), 424–437.
Millet, L. J., & Gillette, M. U. (2012). Over a century of neuron culture: From the hanging drop to
microfluidic devices. Yale Journal of Biology and Medicine, 85, 501–521.
Napoli, A., & Obeid, I. (2016). Comparative analysis of human and rodent brain primary neuronal
culture spontaneous activity using micro-electrode Array technology. Journal of Cellular
Biochemistry, 117(3), 559–565.
Neher, E., & Sakmann, B. (1976). Single-channel currents recorded from membrane of denervated
frog muscle fibres. Nature, 260(5554), 799–802.
Nehme, R., Zuccaro, E., Ghosh, S. D., Li, C., Sherwood, J. L., Pietilainen, O., et al. (2018).
Combining NGN2 programming with developmental patterning generates human excitatory
neurons with NMDAR-mediated synaptic transmission. Cell Reports, 23(8), 2509–2523.
Nicholas, C. R., Chen, J., Tang, Y., Southwell, D. G., Chalmers, N., Vogt, D., et al. (2013).
Functional maturation of hPSC-derived forebrain interneurons requires an extended timeline
and mimics human neural development. Cell Stem Cell, 12(5), 573–586.
Oberheim, N. A., Takano, T., Han, X., He, W., Lin, J. H. C., Wang, F., et al. (2009). Uniquely
hominid features of adult human astrocytes. Journal of Neuroscience, 29(10), 3276–3287.
Odawara, A., Katoh, H., Matsuda, N., & Suzuki, I. (2016). Physiological maturation and drug
responses of human induced pluripotent stem cell-derived cortical neuronal networks in long-
term culture. Scientific Reports, 6, 26181.
Another random document with
no related content on Scribd:
The Project Gutenberg eBook of Lord Lister
No. 0116: Een drama uit de groote wereld
 This ebook is for the use of anyone anywhere in the United
States and most other parts of the world at no cost and with
almost no restrictions whatsoever. You may copy it, give it away
or re-use it under the terms of the Project Gutenberg License
included with this ebook or online at www.gutenberg.org. If you
are not located in the United States, you will have to check the
laws of the country where you are located before using this
eBook.

Title: Lord Lister No. 0116: Een drama uit de groote wereld

Author: Theo von Blankensee

Kurt Matull

Release date: October 25, 2023 [eBook #71959]

Language: Dutch

Original publication: Amsterdam: Roman- Boek- en Kunsthandel,

1910

Credits: Jeroen Hellingman and the Online Distributed

Proofreading Team at https://www.pgdp.net/ for Project
Gutenberg

*** START OF THE PROJECT GUTENBERG EBOOK LORD LISTER

NO. 0116: EEN DRAMA UIT DE GROOTE WERELD ***
[Inhoud]

[1]

[Inhoud]
EEN DRAMA UIT DE GROOTE
WERELD.
EERSTE HOOFDSTUK.
 Een hertogin in zicht.

Lord Lister, alias John C. Raffles, de Groote Onbekende, legde de

„Times” neer, nadat hij bijna een half uur lang de laatste nieuwtjes uit
Engeland had zitten lezen.

En terwijl hij zijn kop koffie aan den mond bracht, sprak hij tot Charly
Brand, zijn vriend en secretaris:

„Willy Montglad heeft weer eens tienduizend pond in zijn club

verloren.”

„Willy Montglad,” antwoordde zijn metgezel aan de ontbijttafel, die

inmiddels zijn derde sneedje geroosterd brood boterde en met een
lachje opzag naar zijn knappen overbuurman, „was altijd door den
speelduivel bezeten. Hij zal zichzelf en zijn ouden vader geheel
ruïneeren.”

„Als de oude man dat tenminste niet reeds lang is,” voegde lord Lister
eraan toe.

„Ik geloof niet,” meende Charly, „dat hier in Holland zoo grof gespeeld
wordt. Na Monte Carlo geloof ik wel, dat in de Londensche clubs.…..”

Hij voltooide zijn zin niet, want na een bescheiden tikken op de deur
was James, de vertrouwde huisknecht, binnengekomen en bracht op
een zilveren blad de pas aangekomen brieven.

Eén daarvan, gesloten in een groote gele enveloppe, was gericht aan
Charly, de andere waren bestemd voor graaf Van Haaren, onder
welken naam Raffles eenige maanden geleden een prachtige villa in
een der buitenwijken van Amsterdam had gehuurd.
Met een smal pennemesje sneed Charly voorzichtig het couvert open
en nadat hij den brief, dien het bevatte, vluchtig had doorgelezen,
riep hij op vroolijken toon uit:

„Goed nieuws, Edward! Raad eens wat?”

Glimlachend keek lord Lister zijn jongen vriend aan.

„Dat is moeilijk te raden, zelfs voor mij. Een erfenis soms?”

„Ja, waarempel, een erfenis! Ik ben erfgenaam van een oudoom, van
oom Willibald Brand!”

Dit zeggende overhandigde Charly den brief aan zijn vriend en terwijl
hij vol grappigen trots, de beide handen in de broekzakken en het
blonde, jongensachtige hoofd eenigszins achterovergeworpen, voor
lord Lister ging staan, vervolgde hij:

„Ik wist het wel, Edward, dat ik nog eenmaal schatrijk zou worden!
Vijfduizend pond heeft de oude baronet mij nagelaten; denk eens,
Edward, vijf duizend pond! Dat is in Hollandsche munt de kapitale
som van zestigduizend gulden! Ik weet niet, wat ik met al dat geld zal
doen!”

Glimlachend keek de Groote Onbekende op en zijn vriend de blanke,

smalle hand toestekende, antwoordde hij:

„Ik wensch je geluk met dat buitenkansje, boy! Allereerst zul je nu,
om aan de noodige formaliteiten te voldoen, even naar Engeland
moeten oversteken. Onderweg kunnen we dan eens overleggen, op
welke [2]wijze jij je onmetelijke rijkdommen het best kunt besteden.”

Charly lachte hartelijk.

„Dus je bent van plan om mij te vergezellen?”

„Ja, ik verlang er naar, mijn geliefkoosde Londen weer eens terug te
zien. Het is nu ruim een half jaar sinds we er voor het laatst een paar
weken waren.”

„Goed, Edward, wanneer zullen we gaan?” vroeg Charly, „dan kan ik

James alvast de noodige bevelen geven. Nemen we hem mee?”

„Laat hem nog vandaag vertrekken. Hij kan dan zorgen, dat we ons
vossenhol in Regentstreet een beetje behaaglijk vinden.

„Maar vertel eens, boy, had die oom zooveel geld, dat-ie jou een
kapitaaltje kon nalaten?”

„Ja zeker, Edward. Het was oom Willibald, de scheepskapitein. Heb

ik je nooit verteld van de merkwaardige weddenschap, waaraan oom
Willibald zijn kapitaal te danken heeft gehad?”

„Neen, mijn jongen, ik herinner mij niet, daarvan ooit iets te hebben
vernomen. Als het een interessante geschiedenis is, houd ik me zeer
voor dat verhaal aanbevolen.”

„Ja, het is interessant en hoogst grappig tevens,” antwoordde de

jonge secretaris. „Luister maar, Edward! Het is gauw verhaald.”

Lord Lister leunde op zijn gemak in zijn stoel achterover en Charly

begon zijn vertelling:

„Zooals ik je reeds zei, was oom Willibald scheepskapitein en het was

op een zijner reizen, welke hij naar Engelsch-Indië maakte, dat zich
onder zijn passagiers een Londensch geneesheer bevond, die in
opdracht van een vereeniging van zeer geleerde oudheidkundigen
zich naar Egypte begaf.

„De dokter moest daar een mummie zien machtig te worden.

„De vereeniging, die hem had uitgezonden, was samengesteld uit
zeer achtenswaardige mannen, die hun dagen en nachten aan
wetenschappelijke onderzoekingen hadden gewijd en zij hadden hun
geleerden broeder opgedragen om de mummie zoo mogelijk langs
eerlijken weg te bemachtigen.

„Hij mocht zich echter in geen geval door een verkeerde opvatting
van het begrip eerlijkheid in zijn taak laten belemmeren.

„De dokter had een blanco-chèque met de handteekening van den

secretaris er op, in zijn portefeuille en hij had volmacht van de
vereeniging om daar de som op in te vullen, die hem goed dacht.

„Maar ofschoon hij een geleerd man was, was de dokter zeer zuinig
van aard en hij vatte het stoute plan op om een mummie uit Egypte
mee te brengen, die hemzelf niets zou hebben gekost.

„Hij wist zeer goed, dat er een overvloed van mummies in de

catacomben lagen.

„„Niemand heeft iets aan die dingen,” zoo redeneerde hij tot zichzelf,
„en derhalve is het volstrekt geen inbreuk op de wet der eerlijkheid
om er eentje mee te nemen—natuurlijk in het belang der
wetenschap.”

„In den loop der jaren had de dokter ook het een en ander van het
Arabisch geleerd en het kostte hem heel weinig moeite om drie
Arabieren over te halen, hem in de berooving van een graftombe bij
te staan.

„Op een stikdonkeren nacht begaven zij zich op weg naar de

catacombe van een Pasha en het gelukte hun werkelijk hun plan ten
uitvoer te brengen.
„De mummie, die zij hadden weten te bemachtigen, was geen
bijzonder goed exemplaar.

„Het dreigde elk oogenblik uit elkaar te zullen vallen, als er niet
spoedig iets aan werd gedaan om het bijeen te houden.

„Maar dit was juist een voordeel voor den genialen dokter. Het was
een teeken van buitengewonen ouderdom en hij wreef zich van
genoegen de handen bij de gedachte, aan het aanzienlijke bedrag,
dat hij op de chèque zou invullen.

„„Dit is de mummie van den Pharao,” had een van de Arabieren den
dokter verteld.

„De dokter had te veel gezond verstand om een dergelijk verhaaltje te

gelooven, maar hij overlegde bij zichzelf, dat het hem niet al te veel
moeite zou kosten, zijn collega’s in het vaderland van die gewichtige
waarheid te overtuigen.

„De Arabieren waren zoo handig geweest om tegelijk met de

mummie ook de steenen kist mee te nemen.

„Deze kist was ontegenzeggelijk een prachtig voorbeeld van antieke

kunst en geheel bedekt met geheimzinnige hiëroglyphen.

„Bovenop het deksel van de kist was een ruw gelaat geschilderd—
een afbeelding van den dood.

„De kleur had de tand des tijds weerstaan en het gelaat grijnsde den
Engelschen dokter nog tegen, toen deze met onverholen voldoening
op het resultaat van zijn zonderling avontuur neerzag.

„„Een koningsmummie?” bromde hij in zichzelf, terwijl hij de steenen

kist rechtop zette.
„„Goed, dan zal het ook een echte koningsmummie wezen! Ik zal er
een inscriptie op maken, die in den [3]rook zwart laten worden en er
dan in Engeland mee voor den dag komen.

„„De geleerde heeren collega’s zullen verbaasd staan te kijken over

mijn belangrijke vondst.

„„Ha, ik zie den straal van vreugde al, die de gezichten van mijn
vrienden zal verlichten, wanneer zij dit staaltje van antieke kunst en
antiek bederf onder de oogen krijgen.””

Charly zweeg een oogenblik en keek zijn vriend glimlachend aan.

Toen vroeg hij:

„Nu, Edward, boeit mijn verhaal je of zal ik de rest maar liever vóór
mij houden?”

„Ik ben geheel en al aandacht, beste jongen,” antwoordde de Groote

Onbekende, „vertel verder, hoe het afliep met dezen oudheidkundige
en hoe die koningsmummie in verband staat met jouw erfenis?”

„Nog een oogenblik geduld, Edward, ik ben er bijna!” lachte Charly en

toen vervolgde hij:

„De dokter had dien nacht een aangenamen droom. Hij vulde
namelijk de blanco-chèque in voor een bedrag van honderdduizend
gulden. Dit was wel geen geringe prijs, doch hij was er zeker van, dat
zijn vrienden dat bedrag er met vreugde voor zouden betalen.

„Maar, helaas! Op dien aangenamen droom zou een wreed ontwaken

volgen.

„Hij nam een passagebiljet voor den terugtocht en verstopte de

mummie veilig in zijn hut.
„Het was wel geen erg pleizierig idee om zoo’n oud lijk in dezelfde
ruimte te hebben, waar hij moest slapen, maar hij was met dat idee
verzoend door de gedachte, dat het al zoo lang een lijk was geweest,
dat zijn macht om onheil te stichten wel niet heel groot meer kon zijn.

„Op een middag had er gedurende het diner een eigenaardig

onderhoud plaats.

„De kapitein—oom Willibald—vertelde van een zijner matrozen en

sprak tot den dokter, die naast hem zat:

„„U kent dien matroos Bilson toch wel, dokter?”

„„Zeker,” antwoordde de Engelsche geleerde.

„„Die kerel heeft een eigenaardigheid,” vervolgde de kapitein, „die

men zelden aantreft in zoo sterke mate als bij hem.”

„„En dat is?”

„„Hij kent absoluut geen vrees. Hij weet letterlijk niet, wat angst is!”

„„Ik wed met u om een hoog bedrag,” sprak de dokter, terwijl een
geheimzinnige glimlach op zijn gelaat verscheen, „dat ik dien held
van u bang heb gemaakt, eer we een dag verder zijn.”

„„Ik neem de weddenschap aan,” sprak de kapitein, die zeker van zijn
zaak meende te zijn, „maar dan ook om een flink bedrag.”

„„Uitstekend!” klonk het van des dokters lippen. „Laat ons zeggen, dat
we om tienduizend wedden.”

„„Drommels, dat is geen bagatel, maar top! Ik ga de weddenschap

met u aan, dokter. Dus u zult onzen Bilson vrees aanjagen vóór
morgen? Ik ben bang voor uw tienduizend gulden, dokter!”
„„Ik stel echter deze ééne voorwaarde, het moet een gepaste scherts
blijven! Ik weet maar al te goed, hoe dergelijke zoogenaamde
aardigheden soms ontaarden in roekeloosheid of baldadigheid.”

„„Zeker,” zeide de dokter, „ik zal niet te ver gaan, ik zal zelfs niets
tegen hem zeggen.”

„De weddenschap werd dus aangegaan en de belangstelling van alle

passagiers was op den uitslag gericht.

„Te drie uur ’s nachts liep de dokter op het dek rond met een glimlach
op het gelaat. Hij was er zeker van, zijn geld te zullen winnen en hij
maakte het plan om voor zijn vrouw een prachtigen juweelen
armband te koopen.

„Juist toen de maan vol door een dik gordijn van wolken heenbrak,
hoorde hij mijn oom, Bilson bevel geven, om den ankerketting uit het
ruim te halen.

„De dokter glimlachte en hij had al een opwekkend middel gereed,

om Bilson weer bij te brengen, als deze soms flauw mocht vallen van
schrik en angst.

„De matroos ging het ruim in, maar de ketting was nergens te vinden.
Hij zocht er op elke denkbare plaats naar, maar vond hem nergens.

„Toen hij den kapitein dit kwam vertellen, beval deze hem, om in de
raderkas te gaan kijken.

„De matroos opende de deur.

„De maan zond een stroom van zilverlicht naar binnen.

„Wat zag hij daar recht voor zich staan?

„Het was een zonderlinge gestalte, die daar in een soort van kist
tegen den muur stond—zoowaar een mummie.

„„O, ben jij de schurk, die den ankerketting verstopt heeft, zeg?” riep
hij uit.

„Zonder een woord meer te zeggen, of zich een oogenblik te

bedenken, greep hij een groote ijzeren staaf van den grond op en
sloeg er met zooveel geweld op [4]los, dat er van de koningsmummie
niets meer overbleef, dan een hoopje waardeloos stof.

„De dokter had ongeduldig op zijn triomf staan wachten, maar op

deze ontknooping had hij geen oogenblik gerekend.

„Dat was hem toch wel een beetje àl te erg!

„„O, mijn koningsmummie!” riep hij uit, terwijl hij over het dek rende.

„Hij wierp een wanhopigen blik op zijn vernietigden schat.

„Daarop schoot hem de gedachte te binnen, dat hij misschien zijn

tienduizend gulden toch nog wel zou kunnen redden en hij zeide tot
den matroos:

„„Hier heb je wat van mij mijn jongen, veeg dat stof weg!”

„Maar hij had nauwelijks uitgesproken, of de kapitein klopte hem op

den schouder en sprak:

„„Dokter, wilt u mij de tienduizend gulden uitbetalen? U zult moeten

bekennen, dat u de weddenschap verloren hebt!”

„Zeer onwillig gaf de dokter mijn oom een cheque over het
aanzienlijke bedrag en, als een beeld der wanhoop, sloop hij naar zijn
hut en bleef daar den geheelen nacht op den rand van zijn hangmat
zitten peinzen, hoe hij zich uit de moeilijkheid kon redden, waarin hij
geraakt was.

„Op welke wijze hij daarin geslaagd is, kan ik je niet vertellen, maar
zeker is het, dat het bedrag van die weddenschap de grondlegger is
geweest tot het aardige kapitaal, dat mijn oom bij zijn dood heeft
nagelaten.

„Zie je, Edward, dat was nu het verhaal van de koningsmummie! En

zeg me nu wanneer we naar Londen gaan, opdat ik de erfenis van
oom Willibald in ontvangst kan nemen.”

„Wel,” antwoordde Lord Lister, „laat ons overmorgen afreizen. James

heeft dan twee dagen om de noodige maatregelen te nemen.”

„Uitstekend, Edward! Dan behoeven wij morgen het avondfeest in

hotel de l’Europe en het bal ook niet te missen. Ik heb reeds verleden
week den eersten dans afgesproken met het jongste freuletje van
Verdooren, je weet wel, Edward, dat slanke meisje met haar
prachtige bruine oogen.”

„Waar ik je al eenige keeren mee zag praten in den foyer van den
schouwburg?”

„Ja, ik ben dolgraag in haar gezelschap, hoewel ik ook haar oudere

zuster charmant vind. Maar nu zal ik eerst James zeggen, dat hij zich
reisvaardig maakt.”

Charly drukte op het knopje der electrische bel en toen de oude

getrouwe weer in de kamer was gekomen, deelde hij dezen mede,
wat er voor de eerstvolgende dagen besloten was.

Eenige dagen daarna was de weelderig ingerichte villa in Regent

Park, die geruimen tijd onbewoond was geweest, weer in gebruik
genomen door de beide vrienden.
Gedurende zijn afwezigheid had Raffles de woning eenigszins laten
moderniseeren.

Overal was electrisch licht aangebracht en centrale verwarming

bevond zich nu door het geheele huis, alleen in de studeerkamer van
den Grooten Onbekenden was op diens uitdrukkelijk bevel de breede
haard gebleven.

Charly had reeds een conferentie gehad met den notaris, die belast
was met het ten uitvoer brengen van de laatste wilsbeschikkingen
van den overleden baronet en zijn verblijf in Londen zou slechts
gedurende eenige weken noodig zijn.

Dien avond had lord Lister zich naar de „Club of Lords” begeven,
waarvan hij reeds jarenlang lid was.

Hij stond bij de leden bekend als de schatrijke lord Aberdeen en was
zeer gezien bij de heeren, die het prachtig ingerichte clublokaal
geregeld bezochten.

Men wist, dat de knappe, elegante lord bijna de geheele wereld had
doorgereisd, dat hij zoowel Indië als Amerika kende en dat hij ook op
het gebied van litteratuur, muziek en schilderkunst uitmuntte boven
verreweg de meesten van hen.

Lord Lister had aan een der grootere tafels plaats genomen, waar
reeds een zestal heeren omheen zaten, die hem allen met blijdschap
hadden begroet na zijn lange afwezigheid.

De Groote Onbekende vertelde van een groot sportfeest, dat hij

eenige weken te voren in Brussel had bijgewoond en vol
belangstelling luisterden de aanwezigen naar zijn interessant verhaal,
toen hun aandacht werd afgeleid door het verschijnen van een der
jongste leden van de Club, Sir Basil Malwood, die eveneens aan het
tafeltje plaats nam en glimmend van genoegen vertelde, dat hij het
allerlaatste nieuwtje wist, heet uit den oven.

„Hebt gij het groote nieuws al gehoord, omtrent Silverton?” vroeg hij
aan graaf Simkins, dien hij het meest van nabij kende.

„Merkwaardig, wa-blief?”

„Wat is er dan gebeurd? Ik dacht, dat hij goed en wel in Amerika zat,”
luidde het antwoord van den [5]graaf, die nu een en al belangstelling
was geworden, want het gold hier een in de Londensche voorname
kringen veel besproken persoonlijkheid.

„Nu dat is ook zoo,” gaf Basil te kennen, „en daar is het ook gebeurd.
Je weet, dat hij al een jaar of drie heeft rondgekeken naar een
erfdochter, met voldoende fortuin om zijn hart, hand en schulden te
kunnen aanvaarden, maar dat het hem nog niet gelukt was om zoo’n
goudvischje aan den haak te slaan.”

„Ik herinner mij nog,” viel graaf Simkins hem in de rede, „dat hertog
Silverton indertijd een kansje heeft gewaagd bij die rijke Iersche
brouwersdochter, die zoo ordinair spreekt en zulk rood haar heeft,
maar dit dametje kon hem niet bekoren, misschien omdat zij zoo kort
aangebonden was of omdat zij zoo onaangenaam lachte of omdat er
iets niet in den haak was met de huwelijksvoorwaarden.

„Ik weet het rechte niet en ik geloof, dat niemand dit weet, maar een
feit is het, dat er iets in den weg kwam en dat het afraakte.”

„Ja”, vervolgde nu Malwood weer het verhaal, „daarna is hij nog aan
het hengelen geweest naar een fabelachtig rijk Indisch meisje, dat
met haar vader tijdelijk in Birmingham woonde.

„Een neusje, als een vuurspuwende berg. Toen hij haar niet kreeg,
hengelde hij achtereenvolgens naar de dochter van een
Sheffieldschen messenfabrikant; naar een meisje uit Glasgow, wier
vader in de reederij rijk is geworden; naar een dametje uit Zuid-Wales
met aandeelen in steenkolenmijnen en naar nog een half dozijn rijke
erfdochters.

„Maar bij geen van allen wilde het goed vlotten.

„Men zegt, dat Silverton te moeilijk was in zijn keuze en te veel geld
verlangde.”

„Dat hij veeleischend was, kan ik constateeren,” sprak de bejaarde

lord Crofton, een heer met een scherpen neus, sterk bijziende oogen
en een glimmenden, kalen schedel.

„Hij hechtte bijvoorbeeld veel aan uiterlijk en manieren,” vervolgde hij,

„en daarom kon hij het nooit met zichzelf eens worden omtrent de
rechte persoon.

„Hij zocht een ideaal meisje, dat alles en alles in zich vereenigde:
jeugd, schoonheid, voorname manieren, uitmuntende opvoeding en
een kapitaal, dat klonk als een klok.”

„En daarom is hij dus naar Amerika overgestoken op jacht naar

dollars?” opperde een der andere heeren.

„Juist,—precies als zijn lotgenooten,—en ik vind, dat hij groot gelijk

gehad heeft. Maar wat meer zegt, hij heeft ten langen laatste ook
gevonden wat hij zocht,—het moet juist iets van zijn gading zijn.”

„Hoe heet zij?” klonk het uit eenige monden tegelijk.

„Miss Ansberg heet zij,—het is de zuster van dien man van den
Ansberg-motor, herinnert ge u niet?—die machine, die zoo’n
enormen opgang heeft gemaakt.”