Методи дослідження клітин.

Типи
мікроскопії

Методи дослідження клітин

 Пригадаймо
⦿Яка наука вивчає клітинний рівень життя?
⦿Які методи використовуються в цитологічних
дослідженнях?
⦿Який вчений вперше побачив клітини під
мікроскопом?
⦿Що таке мікроскопія?
⦿Яку будову має сучасний світловий мікроскоп?
ОПТИЧНІ ПРИЛАДИ
⦿Знання законів відбивання і заломлення світла у
дзеркалах і лінзах дали змогу створити ряд
оптичних приладів, що мають важливе значення
для сучасної науки і техніки:
⦿ мікроскоп біолога;
⦿ фотоапарат журналіста;
⦿кінокамера оператора;
⦿ телескоп астронома;
⦿перископ підводника .
⦿оптичним приладом є окуляри мільйонів людей
різного віку і спеціальностей.
ОПТИЧНІ ПРИЛАДИ
⦿Найпростішим оптичним приладом є лупа.
⦿Лупа (франц. loupe - «наріст») - оптичний прилад,
що є збиральною лінзою, застосовується для
розглядання дрібних деталей, погано помітних
неозброєним оком.
⦿щоб побачити зображення предмета збільшеним,
лупу потрібно розмістити так, щоб даний предмет
був між лупою і її фокусом (мал. 181, б).
⦿Промені, що падають на лупу від крайніх точок
предмета, заломлюються в лінзі і сходяться.
ЛУПА(ЗБІЛЬШУВАЛЬНЕ СКЛО)
⦿ оптичний прилад (збиральна лінза або система
лінз) для розглядання дрібних деталей;
⦿ це збірна короткофокусна лінза (фокусна відстань
від 1 до 15см);
⦿Лупа дає збільшення в 10-40 разів.
КОРИСТУВАННЯ ЛУПОЮ
РОБОТА МІКРОСКОПА
⦿значне збільшення зображення предметів можна
отримати за допомогою двох лінз, розміщених у
металевій трубі на певній відстані одна від одної.
Такий прилад називають мікроскопом.
⦿Мікроскоп (грец. mikro - «малий», skopeo -
«розглядаю») - оптичний прилад для розглядання
дрібних предметів та їх деталей (мал. 182, а).
⦿Лінзу, яка розміщена з боку ока, називають
окуляром (лат. oculus - «око»), а лінзу, розміщену з
боку даного предмета, називають об’єктивом (лат.
objectivus -«предметний»).
РОБОТА МІКРОСКОПА
⦿Перше збільшення зображення предмета дає
об’єктив. Предмет у мікроскопі розміщується трохи
далі від фокуса об’єктива. У результаті цього
виходить збільшене і перевернуте зображення
предмета;
⦿це зображення збільшується ще раз лінзою-
окуляром: воно ніби слугує для окуляра предметом.
Окуляр, подібно до лупи, розміщують на відстані
(меншій від фокусної) від проміжного зображення.
У результаті ми отримуємо нове, значно збільшене
зображення.
РОБОТА МІКРОСКОПА
⦿Якщо, наприклад, об’єктив мікроскопа дає
зображення предмета, збільшене у 20 разів, а окуляр
збільшує це зображення в 15 разів, то загальне
збільшення, яке дає мікроскоп, складатиме вже 20 •
15 = 300 разів;
⦿На мал. 183 зображення при збільшенні у 25000
разів .
ХІД ПРОМЕНІВ У МІКРОСКОПІ
Мікроскопія
 Мікроскопія
⦿Світлова мікроскопія - малим
вважається збільшення до 120
разів, великим - до 600,
максимальні збільшення-2000-3400
разів;
⦿Об'єкт розглядається на просвіт,
лінзи скляні;
⦿Можна вивчити загальний план
будови клітини та окремих її
органел, розміри яких не менше за
200 нм (0, 2 мкм);
⦿Добре помітні мітохондрії та
хлоропласти..
ВИДИ МІКРОСКОПІВ
 Мікроскопія
⦿Електронна мікроскопія -
збільшення в 100000-500000 разів і
більше;
⦿Сконструйовано у 1933 році,в
біологічних дослідженнях
використовується з 1946 року;
⦿Замість потоку променів світла
застосовують потік електронів в
магнітному полі;
⦿Об'єкт розглядається на просвіт,
замість лінз працюють
електромагніти;
⦿Використовують для вивчення
дрібних органел( рибосом) та
мембран;
 Мікроскопія
⦿Тунельний мікроскоп дає змогу вивчити ультраструктуру
клітини на рівні окремих атомів;
⦿Сканувальні електронні мікроскопи роблять об'ємні
зображення і фотографії мікроскопічних об'єктів;
⦿ у них потоки електронів відбиваються від поверхні
досліджуваного об'єкта,на який напилено метал.
ПРАВИЛА КОРИСТУВАННЯ
МІКРОСКОПОМ
⦿Поставити мікроскоп дзеркальцем освітлювальної
системи від себе, а окуляром – до себе;
⦿Видалити пил з оптичних поверхонь за допомогою
спеціально призначеної м'якої тканини;
⦿перевести в робоче положення об'єктив малого
збільшення (×8) так, щоб він був розташований по
центру отвору предметного столика (об'єктив
фіксується зачіпкою револьверної системи);
⦿максимально відкрити діафрагму;
 ПРАВИЛА КОРИСТУВАННЯ МІКРОСКОПОМ
⦿ наблизивши око до окуляра, за допомогою освітлювального
дзеркальця відрегулювати освітлення поля зору;
⦿ покласти препарат на предметний столик так, щоб аналізована
частина була розташована над отвором столика. Покривне
скельце має бути зверху;
⦿ Рухами гвинта знайти чітке зображення мікроскопічного
об'єкта, сфокусувавши на ньому оптичну систему мікроскопа;
⦿ якщо препарат потрібно проаналізувати детальніше, то слід
плавно, не змінюючи положення тубуса, перевести револьверну
систему на об'єктив ×40.
⦿
 ПОМИЛКИ КОРИСТУВАННЯ МІКРОСКОПОМ

⦿ затовстий зріз препарату;

⦿щоб свідомо сприйняти видиму картину та
правильно прочитати препарат, треба насамперед
визначити, в якій саме площині пройшов розріз та
уявити будову цього органу;
⦿препарат покладено на предметний столик у
перевернутому вигляді покривним скельцем униз;
⦿ препарат дуже забруднений – неможливо досягти
чіткого зображення;
⦿лінзи мікроскопа, найчастіше об'єктива, забруднені.
ПОМИЛКИ КОРИСТУВАННЯ МІКРОСКОПОМ

⦿поле зору несподівано зробилось туманним, обриси

препарату стали нечіткими - скло окуляра запотіло
від дихання чи теплоти ока дослідника
⦿препарат погано освітлюється - закрита діафрагма;
⦿поле зору освітлене наполовину - змінилася
установка дзеркальця,револьвер неправильно
переведено, й об'єктив не стоїть проти отвору в
предметному столику.
Метод центрифугування
⦿Пов’язаний з розділенням різних компонентів клітин;
⦿Спочатку клітини руйнують, а потім розділяють суміш
органел у центрифузі за високої швидкості обертання;
⦿Різні шари “ центрифугату” досліджують іншими
методами
Метод мічених атомів ( авторадіографія)
⦿Дає змогу вивчити місця синтезу
біополімерів та шляхи їх
транспортування за допомогою
радіоактивних атомів, що вводяться в
живу клітину.
Метод мікрохірургії
⦿За допомогою мікроманіпулятора проводяться
операції на живій клітині щодо видалення з клітини
або внесення в неї органел, введення різних
речовин
 Культивування клітин
⦿Дрібні шматочки тканини або ізольовані клітини переносять у
стерильне поживне середовище, де клітини здатні
розмножуватися і виявляти ознаки життєдіяльності;
⦿Змінюючи середовище, можна вивчати його вплив на клітини;
⦿На таких модельних системах перевіряютьдію лікувальних
засобів, стимуляторів, різних фізичних чинників.
Метод прижиттєвого вивчення
⦿Можна вивчати будову і такі процеси
життєдіяльності як рух цитоплазми, процес поділу
клітини.
Метод цитохімічного аналізу
⦿Фарбування певними реактивами різних речовин, що
входять до складу цитоплазми, окремих органел клітини
чи її компонентів( хромосом).