Trường Đại học Nông Lâm-Đại học Huế

Khoa Cơ khí và công nghệ



Sản xuất papain

tái tổ hợp từ E.coli

Nhóm thực hiện : Nhóm 10
GVHD : NGUYỄN ĐỨC CHUNG
Trường Đại học Nông Lâm-Đại học Huế
Khoa Cơ khí và công nghệ


Thành viên:
1.Trần Bá Anh Vũ
2. Ngô Đình Chung
3. Nguyễn Tú Quyên
4. Nguyễn Đăng Anh Tiến
5. Lê Thị Thu Hương
Nội dung:

I Sơ lược về Enzyme papain

II Sơ lược về E.coli

III Quy trình sản xuất papain tái

tổ hợp trong E.coli

IV Một số thách thức trong quá

trình sản xuất papain tái tổ
hợp
I. Sơ lược về
Enzyme papain
• Papain là một
enzyme protease
được tách từ nhựa
đu đủ.
* Tính chất và hoạt tính của papain :
Khả năng phân giải protein
01
Có khả năng phân giải các liên kết peptide
ở vị trí sâu hơn so với các protease khác
01
Hoạt động ổn định
02
Papain có khả năng chịu được nhiệt độ 02
cao và các điều kiện môi trường khác
nhau. 03
03
Phạm vi pH hoạt động
04
Có vùng pH tương đối rộng : 4.5-8.5.
Thường bền trong môi trường trung tính và 05
kiềm yếu ( 7-8.5)
* Tính chất và hoạt tính của papain :
Tương tác với thiols
04
Điều này cho phép nó tham gia vào các
phản ứng tạo liên kết disulfide trong quá
trình tái tổ hợp protein.
04
Chất hoạt hóa papain 05
05
Là những chất khử như : cystein, glutation,
….

Chất ức chế papain

06
06
Là chất có hoạt tính oxy hóa như : ozon,
hydro, iod acetat và các hợp chất disulfua
khác.
* Ứng dụng của papain:
• Làm mềm thịt
• làm nước mắm
• chưng cất bia và xử lý sữa.
• Giúp tăng cường quá trình chín,
làm mềm và tăng cường hương vị.
II. Sơ lược về E.coli:
E.coli là vi khuẩn E.coli có hai đầu tròn, kích
gram âm, hình que. thước từ O.5- 3
Được tìm thấy chủ micromet. Di động bằng
yếu trong đường tiên mao, không tạo bào
ruột của động vật. tử, loại có độc lực thì có
capsul.
* Lý do sử dụng E.coli để sản xuất enzym:
Conclusion 01 Conclusion 01
Dễ tiếp cận cận và
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit.
Môi trường phát triển
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit.
Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices. Nulla aliquam
nhân giống.
congue enim. Duis imperdiet bibendum.
dễ kiếm và chi phí
Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices. Nulla aliquam
congue enim. Duis imperdiet bibendum.

thấp

Conclusion 01
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit.
Nền tảng khoa học.
Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices. Nulla aliquam Dễ dàng biến đổi gen.
congue enim. Duis imperdiet bibendum.

Conclusion 01
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit.
Hiệu quả trong sản
Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices. Nulla aliquam

xuất.
congue enim. Duis imperdiet bibendum.
 III. Quy trình sản xuất

papain tái tổ hợp E.coli:

 Quá trình sản xuất papain tái tổ hợp
E.coli:

1.Lựa chọn gen papain • Vi khuẩn E. coli được sử dụng dưới dạng vi sinh
• •• Sau Vectơ
Đầu
Những khi
tiên,tái
quá
mảnh tổ
một hợp
trình
gen là
di một
truyền
mã
papain đoạn
hóa gen DNA
papain
được hoàncó
chèn kích
tất,
vào
vật tự thụ phấn để sản xuất enzyme papain.
2.Chuẩn bị vecter tái tổ hợp • thướcE. colinhỏ
protein
được
vectơ được cho
papain
lựa
tái tổ phép
chọnhợp
khuyếch cài
sẽvà được
DNA
đại các
tách đoạn
thu
ra ra
đểthông
tạo từ DNA
hoạch
nguồn
qua
một sốkhác.
từ
quá tế
trình
lượng
• lớn
bào
tựVector
gắn vi
vinhiênkhuẩn
liền
khuẩn này
(chứa chứa
trong
(ligation) genpapaya
E.enzyme
coli.
cây mã hóatái
papain papain
). hợp.cùng
Gen
tổ
3.Xử lý vecter tái tổ hợp và •• •cácGenyếu
Quá
này tố tái
trình
sau
papain
Vectơ điều
đó tổ khiển
này
chứa sẽbao
hợp được
trong như:
gồm
chứa promotor,
đưa
vectơ các
táivào
gen giai vùng
đoạn
vectơ
tổpapain
hợp sẽ sau RBS
được di
đó
gen đã chọn vàtruyền
vùng
như
tái
được tổtrong
kỹ
cấyhợp.
chuyển tế bào
thuật
lọc, E. coli.
CRISPR-Cas9.
chiết
vào xuất
tế bào và vitinh chế sắc
khuẩn ký
E. coli
• Quá trình di truyền gen bao gồm các giai đoạn như
• transkripsion
để Các
táchyếu
thông lấytố
qua này
papain
phương giúp từ đảm
tế
pháp bảo
bào.biến gen
đổi papain
gen
4.Di truyền gen papain (biến đổi gen thành mRNA),
được như biểu hiện và sản
electroporation
translation (chuyển đổi xuất
mRNA protein
hoặc chuyển
thành papain.
tụcvà
protein),
trong E.coli
•• folding
Có (gập
Quá thể
trình sử dụng
lạinày DNA
nhằm
thành dạngđưa plasmid
chứcvectơ để làm
năng). vào vector
tế
5.Thu hoạch và tinh chế =>tái Kếttổquả
bào hợpvilàkhuẩn
protein để papain
tạo sẽ đượcmột
thành sản xuất
dòngtrong
vi tế
papain bào vikhuẩnkhuẩn tái E. coli.
tổ hợp papain.
 IV. Một số thách thức

trong quá trình sản xuất

papain tái tổ hợp:

• Chọn nguồn gốc Enzyme và vi khuẩn

• Các điều kiện vật lý và sinh học

• Quá trình chiết xuất và tinh chế

• Stabil hóa và bảo

• Thách thức về kinh tế

THANK
YOU