Productie van antilichamen in

zaden van Arabidopsis

transformanten
Liesbeth Allais, Kevin De Wit en Cleo
Goyvaerts
Molecular farming
 Planten als gastheer voor recombinante
eiwitproductie
 Voordelen: goedkoop, grote schaal, geen

contaminatie met virus of oncogen,…

 Nadelen: lage expressie, plantspecifieke

glycosylatie, opzuivering
 Transgene zaden: natuurlijk opslagorgaan
 Gevolgen: verstoring secretorische pathway,

periplasmatische ruimte
Molecular farming
 Transgene zaden: natuurlijk opslagorgaan
 Gevolgen: verstoring secretorische pathway,

periplasmatische ruimte
Productie van scFc-Fv

 scFv-Fc genconstruct gelegen in het T-DNA van de

binaire vector pPhas
 3’ocs: 3’ uiteinde van noctopine synthase gen
 Npt II: Neomycine fosfotransferase II gen
 Pnos: Nopaline synthase promoter
 Pphas: β-phaseolin promoter van Phaseolus vulgaris
 5’UTR: afkomstig van arceline51 gen
 ss: signaalseq. van van 2S2 – ER lokalisatie
 KDEL: targetting naar ER
 3’arc: 3’ regulatorische sequenties van arceline51 gen
Genereren van transgene planten
 PCR amplificatie scFv-Fc
 Recombinatie in E. coli vector
 Plasmide in Agrobacterium inbrengen via

elektroporatie Gen van interesse in T-DNA

 Selectie transformanten
 Arabidopsis transformatie via floral dip
 Selectie voor Kanamycine resistentie (NptII)