Sreyya ZCAN

Hacettepe niversitesi Gda Mh. Bl.

Hacettepe niversitesi

erik

HPLCnin Tarihesi HPLCde Ayrma Ayrmada Rol Alan Unsurlar HPLC Sistemleri HPLCde Kullanlan Dedektrler Floresans Dedektr HPLCnin Kullanm Alanlar

HPLC Tarihesi

M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)

1906 - Mikhail Semenovich Tswett

HPLC Tarihesi
1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919) Calcium Carbonate, Petroleum Ether 1931- Kuhn ve Lederer 1938 - Ismailov ve Schraiber 1940's Consden, Gordon ve Martin Partisyon ve Kat Kromatografisi 1950's Stahl Gaz, nce-Tabaka, Jel-Szme ve Gradient Elution Kromatografisi 1960's - Ticari HPLCye giri

Ayrma

ABsorpsiyon

ADsorpsiyon

Ayrma
Ayrma, durgun faz ile hareketli faz arasndaki ge baldr. Durgun Faz Kolon ierisinde sabit duran faz r. C18, Silica
Enjektr

Kartrc

Hareketli Faz Numuneyi durgun faz zerinde tayan fazdr.

Pompalar

Kolon

Detektr

Solvan

Atk

Yksek Performansl Sv Kromatograf

Ayrma
mAU
Afl G2 Afl G1

Afl B1

Afl B2

Enjektr

Enjeksiyon
Kartrc

zaman

Pompalar

Kolon

Detektr

Solvan

Ayrma
mAU

Kromatogram

Afl B1

Afl G2

Afl B2 Afl G1

Enjektr

Enjeksiyon
Kartrc

zaman

Pompalar

Kolon

Detektr

Solvan

Ayrmada Rol Alan Unsurlar

Kolon Seimi Durgun faz, partikl bykl, vs.. Kolon Uzunluu Hareketli Faz Bileimi Kolon Scakl Ak Hz

HPLC Sistemleri

zc Kabini Vakum degasser Pompa

Kontrol Modl Otornekleyici

Kolon kompartman Dedektr

Genel HPLC Dedektrleri

Rayoaktivite letkenlik LC/IR

MS FLD 8% Elektro 10% RI 10% LS UV-VIS 65%

Performans zellikleri

Detektr performans zellikleri: Hassasiyet (LOD, LOQ) Seicilik Lineerlik Kalitatif Bilgi Gvenilirlik Kullanm kolayl niversal olmas

Floresans Dedektr

Excitation Light Source

Flow Cell

Variable Excitation and Emission Wavelengths

Emission

Photomultiplier Tube

Floresans Dedektr zellikleri

Floresans sadece seyreltik zeltiler iin lineerdir. Emisyon lm sadece 900 de yaplmakta ve a ile bir tek dalga boyu seimi yaplmaktadr. Bu sebeple lm ok hassastr. Baz kimyasallar floresans yok ederek hassasiyeti azaltr (i.e., O2). Eksitasyon dalga boyunda absorbsiyon yapan zcler kullanlmamaldr. FLD detektrleri ak hz ve s deiikliinden fazla etkilenmemektedir. Seici detektrlerdir.

FLD Uygulamalar
Mikotoksin Analizleri

HPLC Uygulamalar

Biyolojik Bilimler Kimyasal

polistirenl er boyalar fitalatlar proteinler peptidler nucleotidler

tetrasiklinler lalar hormonlar antidepressantlar barbituratlar

Tketici rnleri
yalar Antioksidan bileikler ekerler

evre
poliaromatik hidrokarbonlar Inorganik iyonlar herbisitler

Klinik
amino asitler vitaminler

Teekkrler...