DR. SURESHKUMAR A/L KUMARASINGAM JTMP U36 PN. HALIZAH MOHAMAD JTMP U32 EN. SULAIMAN NGALIM JTMP U29 EN. MARVEN DONIL JTMP U29 EN. IDHAM SHARIF JTMP U29 EN. ED RAMLEE BAHTIAR JTMP U32 PN. NOOR AKMANIZA KETUA UNIT TRANSFUSI DARAH DR. SITI AINI SYAZRAH 1. UJIAN PENAKSIRAN ARAS HEMOGLOBIN DONOR OBJEKTIF : Untuk menganggar paras hemoglobin penderma secara semikuantitatif, iaitu melebihi 12.5 g/dl atau kurang dari 12.5 g/dl. BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah kapilari (cucukan jari dengan lanset). !ab alkohol Haemoglobin Automated Analyser PRINSIP UJIAN : "ahap hemoglobin darah ditentukan dengan kaedah kalorimetri pada analyser. KAEDAH UJIAN : i. #ari donor di s!ab dengan s!ab alkohol. ii. $ucukan cari dilakukan menggunakan lanset pakai buang. iii. "itisan darah pertama dilap terlebih dahulu. "itisan darah seterusn%a dititis pada kit plastik anal%ser, dan dimasukkan ke dalam anal%ser. i&. 'acaan %ang terhasil pada anal%ser dicatat. INTERPRETASI UJIAN : 12.( ) 15.(g/d* (aras hemoglobin normal) 2. PENYEDIAAN KNOWN CELLS OBJEKTIF : Untuk men%ediakan ampaian sel darah +', %ang telah diketahui antigenn%a, untuk digunakan semasa melakukan pengumpulan +', serum. BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah di dalam segmen beg darah %ang telah digunting (kumpulan +, ', dan ,). -ormal saline .ipet pasteur .enggempar "abung uji plastik/kaca KAEDAH UJIAN : i. "iga tabung uji dilabel sebagai +, ' dan ,. ii. Darah daripada segmen dimasukkan ke dalam tabung uji (mengikut label kumpulan darah). iii. el dicuci dalam setiap tiub dengan salin normal seban%ak tiga kali. $ara mencuci sel adalah dengan sebatikan sel padat dengan salin normal dan diempar pada kelajuan /((( rpm selama satu minit. i&. "iga tabung uji baru disediakan dan dilabel dengan +, ' dan ,. etitis sel darah padat dimasukkan dan 10 titis normal saline ditambah untuk menghasilkan suspensi sel 51. &. uspensi sel kemudiann%a diuji dengan sampel serum (menggunakan teknik tiub) untuk memastikan ketepatan kandungan antigenn%a. 3. PENYEDIAAN CCC (COOMBS CONROL CELLS) OBJEKTIF : Untuk men%ediakan $$$ %ang akan digunakan untuk mengesahkan keputusan negatif ujian pen%aringan antibodi. BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah kumpulan , rhesus positif -ormal saline .ipet pasteur .enggempar "abung uji plastik/kaca 2eagen +34 (anti-human globulin) PRINSIP UJIAN : el darah merah %ang tersensitasi dengan serum globulin adalah digunakan sebagai kontrol positif untuk menguji fungsi +34. 5a mengandungi 5g4 %ang mana akan bertindak balas dengan +34(mengandungi +nti)5g4). +nti)5g4 di dalam +34 akan mengikat molekul 5g4 seterusn%a membentuk agglutinasi. KAEDAH UJIAN : i. atu tabung uji disediakan dan dilabel 6$$$7. ii. 10 titis normal saline ditambah ke dalam tiub. iii. etitis anti)D (%ang telah dilakukan pencairan 1/2() dimasukkan dan disebatikan. i&. 8mpat titis D9 padat dari kumpulan , 2h(D) positif ke ditambah dalam tabung uji dan disebatikan. &. "abung uji dieram pada suhu /:;$ selama 15 < /( minit. &i. 3asil eraman tadi dicuci / < = kali dengan normal saline. emua larutan normal saline dibuang dengan sempurna pada cucian %ang terakhir. &ii. /> titis larutan normal saline dimasukkan ke dalam tabung uji hasil cucian sel tadi. &iii. $$$ %ang disediakan diuji dengan reagen +34. INTERPRETASI UJIAN : +gglutinasi gred 2? terhasil setelah $$$ diuji dengan reagen +34. 4. UJIAN PENGUMPULAN ABO DAN RHESUS (TEKNIK TIUB) OBJEKTIF : Untuk mengenalpasti jenis kumpulan darah dan rhesus. BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah di dalam tiub 8D"+ (berantikoagulan Ethylenediaminetetraacetic acid). "abung uji kaca (bersai@ kecil) +ntisera anti)+, anti)', anti +,', dan anti)D Known cells tersedia .ipet pasteur .enggempar PRINSIP UJIAN : +gglutinasi langsung sel darah merah dengan reagen tertentu menentukan kehadiran antigen tertentu. ecara umumn%a, tiada agglutinasi menunjukkan ketidakhadiran antigen tersebut. Aumpulan +', dan rhesus D ditentukan dari corak reaksi dengan reagen %ang diuji (anti)+, anti)' dan anti)+' serta anti)D). erum keban%akan indi&idu berusia lebih dari enam bulan menghasilkan antibodi terhadap antigen +', %ang tidak dimiliki oleh indi&idu berkenaan. .engumpulan serum, menggunakan known cells tersedia digunakan untuk mengesahkan keputusan pengumpulan +', sel. KAEDAH UJIAN : ) P!"#$%&$'" ABO (" R)!*$* D '"#*$"# i. uspensi sel 51 disediakan daripada sampel sel darah merah. ii. etitis antisera anti)+, anti)', anti)+' dan anti)D ditambah ke tiub %ang telah dilabelkan. iii. etitis ampaian sel ditambah ke dalam tiub dan disebatikan. i&. ebatian kemudiann%a diemparkan pada kelajuan /((( rpm selama 15 saat. etiap tiub digoncang (kaedah tilt and turn) untuk melihat agglutinasi (sekiran%a ada). +gglutinasi digredkan dan keputusan direkodkan. +) P!"#$%&$'" ABO (" R)!*$* D ,-(. '"#*$"# i. Dua titis serum atau plasma dimasukkan ke dalam tiub %ang telah dilabelkan sel +, sel ', dan sel , ii. etitis known cell +, ', dan , ditambah ke tiub dan disebatikan. iii. ebatian kemudiann%a diemparkan pada kelajuan /((( rpm selama 15 saat. etiap tiub digoncang (kaedah tilt and turn) untuk melihat agglutinasi (sekiran%a ada). +gglutinasi digredkan dan keputusan direkodkan. INTERPRETASI UJIAN : POSITIF : +da agglutinasi/? NEGATIF :"iada agglutinasi/) ANTI/A ANTI/B ANTI/ A0B ANTI/ D SEL A SEL B SEL O KUMPULAN DARAH ? ( ? ? ( ? ( +? ( ? ? ? ? ( ( '? ( ( ( ? ? ? ( ,? ? ? ? ? ( ( ( +'? 1. UJIAN PENGUMPULAN ABO DAN RHESUS (TEKNIK JUBIN) OBJEKTIF : Untuk mengenalpasti jenis kumpulan darah dan rhesus. Aebiasaann%a teknik jubin dilakukan semasa mobile blood bank di luar ka!asan hospital. BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah di dalam tiub 8D"+ (berantikoagulan Ethylenediaminetetraacetic acid). .lat jubin kumpulan darah +ntisera anti)+, anti)', anti +,', dan anti)D Known cells tersedia .ipet pasteur Aa%u aplikator .enggempar (untuk memisahkan D9 dan serum di dalam tiub 8D"+). PRINSIP UJIAN : +gglutinasi langsung sel darah merah dengan reagen tertentu menentukan kehadiran antigen tertentu. ecara umumn%a, tiada agglutinasi menunjukkan ketidakhadiran antigen tersebut. Aumpulan +', dan rhesus D ditentukan dari corak reaksi dengan reagen %ang diuji (anti)+, anti)' dan anti)+' serta anti)D). erum keban%akan indi&idu berusia lebih dari enam bulan menghasilkan antibodi terhadap antigen +', %ang tidak dimiliki oleh indi&idu berkenaan. .engumpulan serum, menggunakan known cells tersedia digunakan untuk mengesahkan keputusan pengumpulan +', sel. KAEDAH UJIAN : ) P!"#$%&$'" ABO (" R)!*$* D '"#*$"# i. .lat jubin dilabel terlebih dahulu. ii. etitis antisera anti)+, anti)', anti)+' dan anti)D dititis pada plat jubin %ang telah dilabelkan. iii. etitis darah ditambah pada plat jubin dan disebatikan dalam bentuk bulatan sebesar s%iling 5(sen menggunakan ka%u aplikator. i&. Aehadiran agglutinasi diperhatikan (sekiran%a ada). +gglutinasi digredkan dan keputusan direkodkan. +) P!"#$%&$'" ABO (" R)!*$* D ,-(. '"#*$"# i. .lat jubin dilabel terlebih dahulu. ii. Dua titis sampel serum dititis pada plat jubin %ang telah dilabelkan. iii. etitis known cell +,', dan , ditambah pada plat jubin dan disebatikan dalam bentuk bulatan sebesar s%iling 5(sen menggunakan ka%u aplikator. i&. Aehadiran agglutinasi diperhatikan (sekiran%a ada). +gglutinasi digredkan dan keputusan direkodkan. INTERPRETASI UJIAN : POSITIF : +da agglutinasi/? NEGATIF :"iada agglutinasi/) ANTI/A ANTI/B ANTI/ A0B ANTI/ D SEL A SEL B SEL O KUMPULAN DARAH ? ( ? ? ( ? ( +? ( ? ? ? ? ( ( '? ( ( ( ? ? ? ( ,? ? ? ? ? ( ( ( +'? 2. UJIAN D$ OBJEKTIF : Untuk mengesan antigen D %ang lemah dalam sampel darah. BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah di dalam tiub 8D"+ (berantikoagulan Ethylenediaminetetraacetic acid). -ormal saline 2eagen anti)D 2eagen +34 2eagen $$$ "abung uji .ipet pasteur .enggempar PRINSIP UJIAN : Du merupakan antigen D %ang lemah. el D memberikan reaksi lemah/negatif dengan +nti)D. KAEDAH UJIAN : i. el darah dicuci seban%ak tiga kali dengan saline dan suspensi 51 darah disediakan ii. Dua titis anti)D dan setitis suspensi 51 darah dimasukkan ke dalam tabung uji %ang dilabelkan. iii. "iub tersebut diempar pada kelajuan /(((rpm selama 15 saat dan agglutinasi diperhatikan. i&. "iub dieram pada suhu /:;$ selama 15 minit. &. "iub dikeluarkan dari inkubator dan sel darah dicuci seban%ak tiga kali. &i. Dua titis reagen +34 ditambah dan tiub diempar pada /(((rpm selama 15 saat. +gglutinasi diperhatikan. &ii. ekiran%a keputusan didapati negatif, tambahkan setitis $$$ untuk mengesahkan ujian dan reagen +34 adalah berkeadaan baik. INTERPRETASI UJIAN : POSITIF : +da agglutinasi di mana)mana peringkat. NEGATIF :"iada agglutinasi %ang terhasil. 3. UJIAN COOMBS (DIRECT DAN INDIRECT) MENGGUNAKAN GEL CARD OBJEKTIF : Untuk mengesan cold antibodies (5g9) dan warm antibodies (5g4). BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : Darah di dalam tiub 8D"+ (berantikoagulan Ethylenediaminetetraacetic acid). "abung uji Coombs gel card with AHG 9ikropipet .enggempar (untuk memisahkan sel darah merah dan serum di dalam tiub 8D"+) .enggempar gel card PRINSIP UJIAN : $old antibodies terdiri daripada 5g9 %ang han%a boleh dikesan pada suhu bilik sahaja. .engesanann%a adalah berdasarkan antibodi %ang tersensitasi pada permukaan sel darah merah. Warm antibodies pula trdiri daripada 5g4 %ang perlu dikesan pada suhu badan (/:;$), maka ia perlu dieram dalam inkubator. .engesanann%a adalah berdasarkan antibodi %ang terbebas di dalam serum. "eknik terkini seperti penggunaan gel card digunakan di mana ka!alan penggemparan serum/sel darah merah adalah melalui gel deBtran akrilamida. KAEDAH UJIAN : ) DIRECT COOMBS : i. 1(C* darah dimasukkan ke dalam tiub %ang mengandungi 1(((Cl D4 solution. ebatian tersebut akan menghasilkan suspensi darah. ii. Coombs gel card %ang mengandungi reagen +34 dilabel dengan nombor 5D pesakit. 5(Cl suspensi darah dimasukkan ke dalam satu mikrotiub gel pada gel card. iii. Gel card diempar pada kelajuan 00(rpm selama sembilan minit. i&. 3asil agglutinasi sel darah merah dibaca dan digredkan. +) INDIRECT COOMBS : i. 5(C* sel panel 5, 55, dan 555 dimasukkan ke dalam / mikrotiub berbe@a pada gel card (%ang telah dilabel terlebih dahulu). ii. 25Cl serum dimasukkan ke dalam semua mikrotiub tersebut. iii. Gel card dieram pada suhu /:;$ selama 15 minit. i&. Gel card diempar selama pada kelajuan 00(rpm sembilan minit. &. 3asil agglutinasi sel darah merah dibaca dan digredkan. INTERPRETASI UJIAN : POSITIF : +da agglutinasi di permukaan/tersebar di dalam mikrotiub gel card. NEGATIF : el darah merah termendap di dasar mikrotiub gel card. 4. UJIAN KESERASIAN/ CROSSMATCH (G5M) MENGGUNAKAN GEL CARD OBJEKTIF : Untuk melihat keserasian antara darah penderma dan penerima BAHAN/RADAS/PERALATAN/SPESIMEN : 1( Cl sel darah merah penderma %ang telah dilarutkan dengan 1(((Cl G !olution untuk mendapatkan suspensi darah. erum pesakit Gel card with AHG 9ikropipet .enggempar (untuk memisahkan sel darah merah dan serum di dalam tiub 8D"+) .enggempar gel card PRINSIP UJIAN : Darah antara penderma dan pesakit adalah tidak serasi apabila terdapat agglutinasi di mana antibodi di dalam serum pesakit akan tersensitasi dengan antigen %ang terdapat pada permukaan sel darah merah penderma. "eknik terkini seperti penggunaan gel card digunakan di mana ka!alan penggemparan serum/sel darah merah adalah melalui gel deBtran akrilamida. KAEDAH UJIAN : &. Gel card %ang mengandungi reagen +34 dilabel dengan nombor 5D pesakit. 3an%a satu mikrotiub sahaja %ang digunakan. &i. 5(Cl suspensi darah penderma dimasukkan ke dalam mikrotiub gel pada gel card tersebut. &ii. 25Cl serum pesakit dimasukkan ke dalam mikrotiub gel %ang sama. &iii. Gel card dieram pada suhu /:;$ selama 15 minit. iB. Gel card diempar pada kelajuan 00(rpm selama sembilan minit. B. 3asil agglutinasi sel darah merah dibaca dan digredkan. INTERPRETASI UJIAN : POSITIF : +da agglutinasi di permukaan/tersebar di dalam mikrotiub gel card. Darah tidak serasi. NEGATIF : el darah merah termendap di dasar mikrotiub gel card. Darah adalah serasi.