HIV evolucija, varijabilnost i

posledice po patogenezu i
dijagnostiku

Svakoga dana 14 000 novoinficiranih

SVAKIH 5 SEKUNDI...
... jedna osoba se zarazi HIV-om
SVAKIH 15 SEKUNDI...
... jedan ivot se ugasi zbog AIDS-a

Kako je uoen AIDS

l
l
l
l
l
l
l

Jun 1981 pneumonija uzrokovana pneumocystis carinii (PCP) infekcijom: 5

mladih homoseksualaca iz Los Anelesa, u periodu od oktobra 1980. maja 1981.
Jul 1981 - Kapoijev sarkom (KS): 26 mladih homoseksualaca u Njujorku i
Kaliforniji
Maj 1982 opisano stanje Perzistentne generalizovane limfadenopatije
Jun 1982 uoena uestala pojava non-Hodgkin limfoma
Septembar 1982 definisan termin Acquired Immune Deficiency Syndrome
(AIDS) od strane CDC
Decembar 1982 prvi poznati sluaj infekcije preko putem transfuzije kao i
vertikalno
1983 izolovan retrovirus uzronik na Pasterovom institutu u Parizu (HIV1)

1985 dijagnostikovani prvi sluajevi AIDS-a u Srbiji

1985 izolovan srodan retrovirus (HIV2)

Kako je izolovan HIV

Aktivnost enzimac

Pacijent sa
limfadenopatijom

Potvtda infekcije retrovirusom testom aktivnosti

enzima reverzna transkriptaza

Nalaz slobodnih
virusnih estica

dani

Biopsija limfnog
vora

oko 2 nedelje

Kokultivacija sa zdravim Ly

Virusni antigeni
reaguju sa antitelima
iz krvi inficiranih osoba

replikacija

Nalaz retrovirusnih estica u kulturi elektronskom mikroskopijom

Pojava CPE i smrt inficiranih elija
Barr-Sinoussi i sar. Science, 1984

HIV
gp120
gp41
matriks
omota
kapsid

56oC
30 min
suenje
sati
70% alkohol
povidon-jod
pH <6 i >10
2- 5 min
0.5% Na-hipohlorid
(varikina)

HIV genom

HIV replikacija
Fuzija virusne i elijske membrane

RNK
RNK

DNK sinteza
(virusna RT)

dsDNK
dsDNK

HIV virion

modifikacija

Sinteza virusnih
proteina
proteina
elijsko jedro

integracija

sakupljanje

Proteolitika
obrada

Pupljenje novih
virusnih estica

HIV tropizam
l

Povrni antigen gp120 se vezuje najpre za svoj primarni receptor, CD4

Potom nastaje konformaciona promena i vezivanje za koreceptorski molekul:

l
Hemokinski receptor CCR5 ili CXCR4

Ciljne elije eksprimiraju razliite koreceptore i to u razliitim koliinama

HIV izolati se razlikuju po koreceptorskom molekulu koji prevashodno koriste

tropizam izolata zavisi od koreceptora koji koristi:

l
Prevashodno CCR5 (M-tropian) monociti/makrofagi
l
Prevashodno CXCR4 (T-tropian) T-elije
l
Sposobnost da koristi oba koreceptora (dualni tropizam)

HIV-1: izuzetno varijabilan

reverzna transkriptaza esto grei
nema popravki
prisutne rekombinacije
veliki obim replikacije

kvazispecijesi

HIV-1: izuzetno varijabilan

o M (main)
A1, A2, B, C, D, F1, F2, G, H, J i K
o O (outlier)
o N (new, non-M non O)

o 43 cirkuliue rekombinantne forme (CRFs)

CRF04_cpx

HIV geografija
http://hiv-web.lanl.gov

HIV u Evropi
http://hiv-web.lanl.gov

B
G
C
CRF01

SRBIJA

Poreklo HIV-a?
Humani virusi imunodeficijencije (HIV) potiu od slinih virusa majmuna (Simian
Immunodeficiency viruses SIV)

Nain prelaska virusa u humanu populaciju:

l

Lovac koji se posekao 1,2

Proizvodnja oralne polio vakcine (OPV) 3,4

..........

1. Nathan et al., The Lancet 2004;363: 932.

2. Blancou et al.,Nature 2001;410:1045-1046.
3. Berry N. et al., Nature 2001;410:1046-1047.
4. Chitnis et al., ARHR 2000;16(1):5-8.

SIV impanza

XVII vek ??

SIV mangabej

ta je uzrokovalo irenje HIV

epidemije?
Putovanja/migracije
l
SAD/zapadna Evropa putovanja kasnih 70ih i ranih 80ih
l
Afrika irenje du kamionskih puteva preko kotinenta kao i migracije selo-grad
Krv i krvni produkti
l
Transfuzija krvi kao rutinska medicinksa praksa
l
U nekim sredinama davalatvo krvi je plaano privueni rizini davaoci poputn IV narkomana
l
Kasnih 60ih uvedena primena krvnih produkata - za hemofiliare Faktor VIII
Narkomanij
l
Porast zloupotrebe heroina tokom 70ih
l
Vea dostupnost droga kao i pribora

Patogeneza HIV infekcije

Direktna infekcija CD4+T ly, Mf i dendritinih elija
Hronina generalizovana hiperaktivacija T elija
Aktivacijom indukovana smrt neinficiranih bystender elija

Perzistencija virusa u rezervoarima

Izbegavanje imunskog odgovora (hipervarijabilsnost....)

CD4 T

Konaan slom imunskog odgovora

........

CD8 T

CD4 T cell

DC
HIV specific
CD4 T

Patogeneza HIV infekcije

model dinamike HIV-a i CD4+ T ly
HIV

1010 viriona na dan

CD4+ T ly

PROIZVODNJA

REZERVOAR
3x1010 viriona
poluivot 2 sata

2x109 elija na dan

4x1010 CD4+ elija

produktivno inficirane
elije - 2 dana
latentno inficirane elije
- 150 dana

POTRONJA
1010 viriona na dan

2x109 elija na dan

elijski rezevoari HIV-a

l

Mesta na kojima HIV opstaje bez bitnog

uticaja anti-HIV terapije

Dugaak poluivot elija-rezervoara

(npr. memorijske T elije), omoguava
nove izvore replikacije

Za izleenje HIV infekcije potrebna je

strategija koja eliminie virus iz ovih
rezervoara

Hematopoetske elije
Pomoniki T ly
Monociti
Makrofagi
Dendritske elije
B ly
Stem elije
Memorisjke T elije
elije nervnog sistema
Astrociti
Oligodendrociti
Mikroglija
elije koe
Langerhansove elije
Fibroblasti
Ostale elije
Kolon, mrenjaa...

elijski rezevoari HIV-a

Aktivirane i mirujue T elije i makrofagi
Slobodni virioni u plazmi:
1/2 ivot oko 6 h

slobodni virion
produktivno inf.
CD4+ limfoblast

Virus endocitovan od strane DC:

1/2 ivot 6-12 h

mirujua CD4+ T elija sa

neintegrisanom HIV DNK

Produktivno inficirana T elija:

1/2 ivot 1 dan

virioni na FDC

inficirani makrofag

ivot (dani)

mirujua CD4+ T elija sa

integrisanom provirusnom
HIV DNK

Inficirani makrofag:
1/2 ivot ~ 2 nedelje
Latentno inficirana Telija centralne
memorije:
1/2 ivot meseci/godine

Patogeneza HIV infekcije

domain

virus

elija
imunski odgovor

Sloena interakcija virusa i domaina

HIV RNK

imunski odgovor antitela (4 nedelje)

CD4+ elije

Viremija (PCR)

meseci

simptomi

godine

simptomi

Prirodni tok HIV-1 infekcije

rana

simptomatska HIV infekcija

kasna

Primarna HIV infekcija

uznapredovala
HIV bolest

Viremija

CD4

asimptomatska HIV infekcija

1-12 nedelja

6-10 godina

1-2 godine

Viremija

CD4

Primarna HIV infekcija

1-12
1-12weeks
nedelja

8-10 years

1-2 years

Viremija

CD4

Klinika latencija asimptomatska HIV infekcija

6-10
godina
6-10
years

1-2 years

Viremija

CD4

Simptomatska HIV infekcija

uznapredovala HIV bolest (AIDS)

1-2 godine

Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije

Dijagnostiki testovi otkrivanje i
potvrda infekcije
Prognostiki testovi prognoza, poetak i
praenje terapije

Imunski odgovor na HIV infekciju

Humoralni:
Anti-HIV antitela
(B ly)

Celularni:
Anti-HIV CD4+Tly
(pomoniki)
T4

T4

= HIV

Celularni:
Anti-HIV CD8+Tly
(citotoksini)

T8

T8

HIV Dijagnostiki testovi

Seroloka dijagnostika (najvie 4 nedelje)
ELISA: HIV 1 & 2, ponavljanje sa novim
uzorkom krvi
Western blot (WB):

potvrdni test

ELISA za anti HIV antitela

Western blot za HIV

Western Blot za HIV

HIV-1 Western Blot

1: Pozitivna kontrola
2: Negativna kontrola
3: uzorak A: Negativan
4: uzorak B: Neodredjen
5: uzorak C: Pozitivan

3 gena:
-GAG
-POL
-ENV

POZITIVAN

Barem po 1 antitelo za produkt svakog gena (3)

(CDC) Bilo koja 2 antitela upravljena na antigene:

p24, gp41, gp120/160 (2)

pozitivan

Ponovo ELISA test,

drugi uzorak

ELISA test HIV1/2

negativan

Western blot

negativan

neodreen *
Pozitivan
(barem 2 trake!!)

Ponoviti testiranje
za mesec dana

negativan

neodreen *
Ponoviti testiranje
za 6 meseci
HIV +
(REAKTIVAN)

Neodreen

* Uz negativan PCR nalaz!!!

HIV -

HIV Dijagnostiki testovi

Virusoloka dijagnostika
Detekcija virusnog genoma
(5 dana-2 nedelje)
PCR ili bDNA

Detekcija virusnog genoma u

dijagnozi HIV infekcije
Rana dijagnoza, pre pojave antitela
Akutna HIV bolest
Izloenost HIV infekciji
Vertikalna transmisija

testovi: PCR (RNK i DNK),

bDNA

HIV DNK PCR

- detekcija provirusne DNK u inficiranim
limfocitima
- preduslov - dovoljan broj CD4+ T limfocita
- kvalitativan test

HIV RNK PCR

- detekcija virusne RNK u plazmi
- kvantitativan test

HIV Dijagnostiki testovi

Ag/At testovi
Brzi testovi

Praenje HIV infekcije

-Detekcija HIV RNK u plazmi:
viremija (viral load) broj kopija/mL plazme

-Broj CD4+ T limfocita

-Testovi rezistencije virusa

Odnos izmeu broja CD4 & VL

VL (viremija) = brzina voza (<5000/sporo; >50.000/brzo)

700

600

500

400

Broj CD4+ elija

300

200

100

= udaljenost od sudara

AIDS

Antiretrovirusni lekovi
NIRT

Zidovudin(AZT) Retrovir Stavudin(d4T) Zerit

Zalcitabin(ddC) Hivid
Abacavir(ABC) Ziagen
didanosin(ddI) Videx Tenofovir Viread
lamivudin (3TC) Epivir

HAART

NNIRT
Efavirenz(EFV) Stocrin , Sustiva
Nevirapin(NVP) Viramune
Delavirdin (DLV)
Sakvinavir*(SQV) Invirase Fortovase , Ritonavir(RTV)-Norvir
Nelfinavir(NFV) Viracept
Atazanavir
Indinavir*(IDV) Crixivan
Amprenavir*(APV) Agenerase

PI

Lopinavir*/r(LPV/r) Kaaletra

FI
T-20 (Fuseon)

Inhibitori integraze
Inhibitori koreceptora

Kako se razvija rezistencija?

ARV lek
Zaustavljeno umnoavanje
osetljivih sojeva

Sojevi
osetljivi
na lek

Rezistentan
soj

Preovlauju varijante
otporne na lek

Praenje HIV infekcije

-Detekcija HIV RNK u plazmi:
viremija (viral load) broj kopija/mL plazme

-Broj CD4+ T limfocita

-Testovi rezistencije virusa

Rizik za transmisiju HIV-a

(po epizodi!)
transfuzija
vertikalno

95%
15 - 30%

igla, IV
homoseksualni kontakt

0.6 - 3.0%
0.03% - 3.0%

heteroseksualni kontakt

0.03% - 0.8%

igla, profesionalno

0.3 - 0.4%