* a Paradontológiai osztály vezetőprofesszora Orális & Állkapocs-sebészet
**Orális és Állkapocs sebészeti osztályvezető professzor ***Mikrobiológiai osztály vezetőprofesszora, N.G.H. Szájsebészeti kutatóintézet, Belgaum – 590010, Önálló kutatás Karnataka, India.
Összegzés Kézhez kapva:
Április, 2010 Bevezetés: A Candida albicans a leggyakoribb gombafaj az orális kandidális fertőzések esetében. Különböző gom- baellenes hatóanyagok vannak használatban és a keresés Elfogadva: folytatódik az újabb anyagok iránt, melyek anti-kandidáns Július, 2010 tulajdonságokat mutatnak. A Ganoderma lucidumot évek óta használják a hagyományos kínai orvoslásban. Szép- irodalmi források bizonyítják antimikrobiális, antivirális hatását, mint gyógyászatban használt gombafaj. Célkitűzés: Bibliográfiai lista: Egy Ganoderma lucidum tartalmú fogkrém különböző koncentrációinak tesztelése, in vitro körülmények között, EBSCO Publishing a Candida albicans elleni gombaölő hatás felmérésére. Módszer: Egy Ganoderma tartalmú fogkrém Candida Database, Index ellenes hatása sorozatos higításos tesztben lett vizsgálva, a legalacsonyabb gátló koncentrátum (MIC) kimutatásával. Copernikus, Genamics Eredmények: A fogkrém antifungális tulajdonságokat mutatott a vizsgált kórokozóval szemben. A Candida Journalseek Database albicans MIC értékét 0,2mgm/ml állapították meg. Kulcsszavak: Ganoderma lucidum, fogkrém, Candida albicans, sorozatos higításos kísérlet, MIC.
JIOH, August 2010, Volume 2 (Issue 2) www.ispcd.org
Bevezetés A fogkrémek a leggyakrabban használt ható- anyag-közvetítő anyagok a szájüregben. Ennek Egy egészséges szervezetben az esetleg meg- az elsődleges tanulmánynak a célja a legalacso- jelenő gombás fertőzés okozói többnyire nyabb gátló koncentrátum (MIC) megállapí- közönséges gombafajok, melyek általában az tása egy ilyen Ganoderma lucidum* tartalmú emberi szervezet nyálkás felszínein szapo- fogkrémnek a Candida albicanssal szemben rodnak. A Candida albicans egy ilyen humán egy in vitro sorozatos higításos tesztben. Ez patogén, mely több, anatómiailag különböző a fogkrém nem tartalmaz semmilyen egyéb helyszínen megtelepedhet, köztük a szájüreg- összetevőt, melynek gombaellenes hatása lehet. ben, a bőrön, az emésztőrendszer mentén vagy a hüvelyben. A Candida albicanst kimu- Alapanyagok és Módszerek tatták már minden korosztályban, különösen csecsemők szájnyílásában, és geriátriai korcso- Egy standard eljárás következett az MIC portban. A Candida albicans túlburjánzása, és teszt végrehajtására (21). Az ebben a kísérlet- bekerülése a nyálka, vagy bőrszövetbe patogén ben használt standard Candida albicans törzs fertőzést okoz. A fertőzés neve Candidiasis. az ATCC 2091 volt. Sabouraud dextróz tápta- A szájüregi Candidiasis előfordulhat pácien- laj, Ganoderma lucidum tartalmú paszta, steril seknél, akik hosszantartó antibiotikumkúrát MIC üvegcsék és mikropipetták kerültek még kaptak, immunkompromizált hordozó, vagy használatba. Eljárás: Az organizmus feléleszté- citotoxikus kemoterápia, esetleg sugárterápia se – A Candida albicans törzs véres agar közeg- alanya. Az előbbiek a pácienst szisztémás ben elhelyezve lett feltámasztva. Egy éjszakán Candida fertőzésre is fogékonnyá tehetik. át 37°C-os inkubátoros tárolás után elkülöní- A ma elérhető antifungális gyógyszerek nagy- tett telepeket választottak ki, és az organizmus többsége nemkívánatos mellékhatásokat okoz, azonosságát megerősítették. Az elkülönített és a gyógyszer rezisztancia gyors kialakulásá- kolóniákat steril Sabouraud dextróz táptalajra hoz vezetnek, mély hatást gyakorolva a beteg helyezték, majd egy újabb éjszakán át inkubálták. egészségére (1). Ez szükségessé tette egy új, A növekedési koncentrációt 105 organizmus/ hatékony gombaölő gyógyszer kifejlesztését. ml állították be 0.5 McFarland zavarossági A tradicionális orvoslás hatalmas kincstárral szabványa segítségével. rendelkezik olyan antifungális hatású gyógy- Hogy a fogkrémből nagyobb mennyiséget növények és orvosságok terén, melyek alapul készítsünk egy gramm fogkrémet adtunk egy szolgálhatnak gombaellenes hatóanyagok ml steril sóoldathoz steril kémcsőben. elkülönítésére a növények, állatok, vagy gom- Kétszáz µl Sabouraud dextróz táptalajt ada- bák királyságából tudományos kutatás révén. goltak tíz MIC kémcsőbe. Az első MIC kém- A Candida albicans egy bazídiumos gombafaj csőben 200 µl tápoldathoz 200 µl törzsoldatot a Polyporaceae (2) családjából. Évezredek óta adtak. Alapos keverés után 200µl-t a második használják gyógyhatása miatt a hagyományos MIC kémcsőbe helyeztek át. Ezt az eljárást kínai orvoslásban (3). Rengeteg biológiailag az utolsó (10.) kémcsőig ismételték. Az utol- aktív összetevője miatt ismert, mint a só kémcsőből 200 µl végső oldatot vettek le. triterpének (4,5), poliszacharidok (6,7), Ez által a sorozatos higítás által a következő ganoderic savak (5), stb., melyeknek koncentrációjú oldatokat kaptuk: 500, 250, antimikrobális (8,9,10,11,12,13), vírusellenes 125. 62.5, 31.25, 16, 8, 4, 2 mgm/ml az adott (10, 14, 15, 16,17), immunmodulátor (15), sorrendben. antioxidáns (18), tumorellenes (19), és rákel- A tíz így előkészített MIC kémcsőben, a lenes (20) hatását köszönheti. A Ganoderma különböző koncentrációjú oldatokhoz 200 µl antimikrobális és antivirális hatását már tudo- korábban elkészített Candida albicans törzset mányosan dokumentálták. adtak, úgy, hogy a végső oldat tartalom kém- Ezzel szemben gombaellenes hatásait emberi csövenként 400 µl lett. A kémcsöveket ez után kórokozókkal szemben csak néhol említették tu- 48 órán át 35°C-on inkubálták. dományos folyóiratokban. Úgy döntöttek, hogy szükségessé vált egy, a Candida albicans elle- * Márkajellel ellátott, védett termék ( Ganozhi fogkrém, ni gombaölő hatásait feltáró előzetes vizsgálat. gyártva: DXN Industries (M) SDN, BHD. Malaysia), mely Ganoderma lucidumot tartalmaz egy gél állagú táptalajban. Világszerte elérhető 1993-óta. Az inkubáció után az MIC értékeket a kém- 45% volt, (22), egészséges gyermekekben 45%- csövek megfigyelésével állapították meg. 65% , (23), egészséges felnőtteknél 30%- 45% Az MIC kémcsövekkel pozitív és negatív kont- (24,25), kivehető fogsort hordó személyekben rollmintákat állítottak fel. A pozitív kontroll- 50%-65% , (25), azoknál akik akut, vagy hos�- minta, mely Candida törzset és tápoldatot szútávi gondozási szolgáltatásokkal élnek 65%- tartalmazott zavaros volt, míg a negatív kont- 88% (25, 26,27), az akut leukémiában szenve- rollminta, mely csak tápoldatot tartalmazott dő, kemoterápiával kezelt pácienseknél 90% tiszta volt. A vizsgált kémcsövek közül az utolsó (28), és a HIV fertőzött betegeknél 95% (29). A minta, melynek felszíne tiszta volt növekedés- Candida fajok negyedik helyen állnak az újszü- mentesnek számított, és ezt vették MIC érték- lött vérkeringési fertőzések kórokozói között az ként. Egyesült Államokban, és a nekik tulajdonítható A zavarosság az MIC kémcsőben gombanöve- halálozási arány 30% (30). kedést jelentett, jelezve, hogy a gomba ellenálló Fejlődések a gyógyászati technológia, a ke- volt a fogkrémre. moterápia, rákterápia és a szervátültetés terü- letein jelentősen csökkentették az életveszélyes Eredmények betegségek morbiditását és fatalitását. A kriti- kus beteg, vagy intenzív osztályon elhelyezett Az eredmények, melyek az 1-es táblázat- páciensek a jelentkező nozocomiális gomba- ban láthatók azt mutatják, hogy az MIC érték fertőzések elsődleges célpontjai, elsősorban Candida albicans ellen kevesebb volt, mint 02 a Candida fajoknak köszönhetően. Naponta mgm/ml. szinte az összes orvos találkozik pozitív Can- dida izolátummal különböző anatómiai hely- Értekezés: színekről. A Candida fertőzés legvalószínűbb helyszínei közt szerepelnek az újszülött, gyer- Jelentések szerint a Candida albicans meg- mekgyógyászati és felnőtt intenzív osztályok, jelenése a szájüregtől izolálva újszülötteknél orvosi és sebészeti egyaránt (31).
organizmus A Ganoderma lucidum tartalmú fogkrém koncentrációja mg/ml.
500 250 125 62.5 31.25 16 08 04 02 Candida albicans R R R R R R R R R
Az oropharyngeális candidiasis megjelen- HIV fertőzés esetében a HIV pozitiv
het álmembrános candidiasis, akut atrophiás személyek 90%-a tapasztalja az oropharingeális candidiasis, krónikus hiperplasztikus candidiasis tüneteit. Mind a veleszületett candidiasis, krónikus atrophiás candidiasis, ellenállás, mind a szerzett rezisztencia szerepet középtáji rombuszos glisszitisz és szögletes játszik a Candida albicans jóindulatú szinten cheilitisz formályában is (32). A szuvasodások tartásában, és a szisztémás keringés megóvásá- mindig is kitűnő tenyészterületnek bizonyul- ban (35). tak a Candida albicans számára. Astrid Vanden Abate - 60 különböző bazídiumos kultúrát Abbeele (33) tanulmányában megfigyelte, hogy vizsgált másodlagos antimikrobiális a felső szájpadi protézisek vizsgálata során az metabolitokat kutatva. Ezek között a többpó- alanyok 75.9%-ánál mutatott ki a protézist rusú Ganoderma lucidum tenyészet szűrlete ellepő Candida kolóniát. Az elkülönített fajok szolgáltatta a leghatékonyabb antimikrobiális közül a leggyakoribb a Candida albicans 77.9%, összetevőket. A 201A legkisebb gátló koncent- a Candida glabrata 44.1%, és Candida tropicalis rátuma (MIC) a Candida albicans ellen keve- 19.1% volt. Hirokowi Nikawa (34) megállapí- sebb, mint 1 mcg/ml volt (36). A Ganoderma totta, hogy a candidát tartalmazó fogsor plakk tartalmú fogkrém, amelyet mi teszteltünk (plakkosodás a műfogsoron) nem csak szájüre- 2 mgm/ml-el MIC értéket mutatott a Candida gi candidiasist, mint szájpenészt, vagy a műfog- albicans ellen. Ez egy reális érték, figyelembe sor okozta szájgyulladást, de csontszuvasodást, véve, hogy a fogkrém a Ganodermát egy egyszerű foggyökér szuvasodást, valamint az egymással tápoldatban tartalmazza, bármilyen egyéb határos fogaknál periodontitist okozhat. antifungális tulajdonságú összetevő nélkül. Hexaiang Wang (37) egy 15-kDa fehér- hyphal-sejtképzésben, és a fenotípus megha- jét, Ganodermint különített el a Ganoderma tározásában (1). Figyelembe véve mindezen lucidumból. A Ganodermin megakadályozta faktorokat, úgy gondoltuk, bölcs eljárás lenne a micéliumos növekedést a B. cincera, egy Ganoderma tartalmú fogkrém használata, F. oxysporum és P. piricola patogén gombafajok amely kényelmesnek és hasznosnak bizonyul- esetében. A Candida albicans elleni esetleges na a nyálkahártya, a fogsor és fogkefén való antifungális tulajdonságai azonban még meg- használatra is. erősítésre várnak egy jövőbeli tanulmányban. Hossain (42) megállapította, hogy a szuvas Néhány bioaktív fehérjét, köztük egy lektint fogak által biztosított ökológiai közeg felelős (38) és egy ribonukleázt (39) már izoláltak a lehet a visszatérő szájüregi, és szájüregen kívüli Ganoderma lucidumból. Csekély mennyiségű candidiasisért. irodalmi adat áll rendelkezésre a Ganoderma Fagade & Oyelade kutatásukban kimutatták, lucidum más gombák ellen tanúsított gomba- (43) hogy Ganoderma lucidum alkoholos ölő hatásáról. kivonatait vizsgálva különböző mikro- Mind a veleszületett, mind a szerzett organizmusokkal szemben a Candida rezisztencia szerepet játszik a Candida albicans albicans MIC értéke, (minimum hatásos mennyiségének elviselhető szinten tartásában, koncentráció), 750 mgm/ml. és a szisztémás körforgás megóvásában. A poli- Mi a tanulmányunkban egy Ganoderma morf magvú leukociták létfontosságú szerepet tartalmú fogkrémet teszteltünk Candida játszanak a szisztémás fertőzések elleni véde- albicans ellen. Kifejezetten érzékeny volt, keve- lemben, míg a -a Th1 típusú CD4+ T-sejtekkel sebb, mint 2 mgm/ml- es MIC értékkel. Ennek létrehozott - celluláris immunválasz (CMI), a az oka, hogy a fogkrém spórákat is tartalmaz, nyálkahártya- fertőzések esetében fontos (35). míg Fagade a termőtest etanolos kivonatait Fidel (35) a közelmúltban felfedezte, hogy használta. Ez a fogkrém kiemelkedően hasznos egészséges egyének nyál és hüvelyváladék min- lehet HIV fertőzés, sugárkezelés vagy kemo- táiban található hámsejtek megakadályozzák terápia alatt álló, immuncsökkentett pácien- a Candida növekedését in vitro körülmények seknél és magas rizikójú környezetben, mint között. Ez a hámsejti anti-Candida tevékeny- az orvosi és sebészeti intenzív osztályok, helyi ség sejt-kontaktust igényel oldódási faktorok alkalmazásként a fogsoron és oropharyngeális tekintetében nem szerepet játszó, életképes candidiasisban. Mindazonáltal javasolt lenne sejtekkel, beleértve a nyálat is. Érdekes egy ezeket a laboratóriumi eredményeket módon a HIV pozitiv személyek szájüregi hám- alátámasztó klinikai vizsgálat elvégzése. sejtjeinek tevékenysége OPC (Oropharyngeal Candidiasis) esetén jelentősen csökkent, jelezve a hámszöveti sejtek valamilyen védőszerepét. Referenciák A TNF-α-t is jelentős közvetítőnek találták az oropharingeális candidiasisból való felépü- 1) Yun-Liang Yang. Virulence factors of lés során (40). A Candida albicans szájüregi Candida species. J Microbiol Immunol Infect fibroblasztok által beindítja az interleukin-6 és 2003; 36:223-228. interleukin-8 válaszokat, in vitro környezetben. 2) Hibbett DS et al. A higher level phylogenetic A szájüregi nyálkahártya fibroblasztjainak kivo- classification of the Fungi Mycol Res 2007; natában lévő gyulladást megelőző citokininek 111(5):509–547. (interleukin-6 és interleukin-8) által a Candida 3) Wasson RG. Divine mushroom of albicans-ra adott reakciója arra utal, hogy immortality: Los Angeles: Harcourt, Brace, ezek a sejtek rendelkeznek a képességgel, hogy Jovanovich,1968, p. 83-96. elősegítsék a védelmet legalábbis in vivo környezetben. Ennek fontos vonatkozásai 4) Zhu M, Chang Q Wong LK, Chong FS, Li lehetnek a fungális túlszaporulat kontrollálásá- RC Triterpene antioxidants from Ganoderma ban a szájüregben (41). lucidum. Phytother Res 1999; 13 (6):529 –31. A Candida albicans fertőzőképességi 5) Luo J, Zhao YY, Li ZB. A new lanostane – faktorait különböző gének működésének type triterpene from the fruiting bodies of tulajdonítják, melyeknek szerepe van a meg- Ganoderma lucidum. J Asian Nat Prod Res kötődésben, a proteinázok kiválasztásban, a 2002; 4 (2):129-34. 6) Hsu MJ, Lee SS, Lee ST, Lin WW. Signaling 16) Min BS, Nakamura N, Miyashiro H, Bae mechanisms of enhanced neutrophil KW, Hattori M. Triterpenes from the spores phagocytosis and chemotaxis by the of Ganoderma lucidum and their inhibitory polysaccharide purified from Ganoderma activity against HIV-1 protease. Chem Pharm lucidum. Br J Pharmacol 2003; 139(2):289-98. Bull 1998; 46(10):1607-1612. 7) Fang JN, Bao XF, Wang XS, Dong Q, Li XY. 17) El-Mekkawy S, Meselhy MR, Nakamura N, Structural Features of Immunologically Tezuka Y, Hattori M, Kakiuchi N et al. Anti- Active Polysaccharides from Ganoderma HIV-1 and anti-HIV-1-protease substances lucidum. Phytochemistry 2002; 59(2):175-181. from Ganoderma lucidum. Phytochemistry 8) Yoon SY, Eo SK, Kim YS, Lee CK and Han 1998; 49(6):1651-7. SS. Antimicrobial activity of Ganoderma 18) Mau JL, Lin HC, Chen CC. Antioxidant lucidum extract alone and in combination properties of several medicinal mushrooms. J with some antibiotics. Arch Pharm Res 1994; Agric Food Chem 2002; 50(21):6072-7. 17(6):438-442. 19) Wang SY, Hsu ML, Hsu HC, Tzeng CH, Lee 9) Wasser SP, Weis A. Medicinal Mushrooms. SS, Shiao MS, Ho CK. The anti-tumour effect Ganoderma lucidum, (Curtis: Fr.), P Karst. In: of Ganoderma lucidum is mediated by Nevo, E, Editors. Medicinal Mushrooms cytokines released from activated Haifa, Israel: Peledfus Publ House; 1997, p39. macrophages and T lymphocytes. Int J Cancer 10) Gao Y, Zhou Sh, Huang M, Xu. A. 1997; 70(6):699-705. Antibacterial and antiviral value of the genus 20) Sliva D, Labarrere C, Slivova V, Sedlak M, Ganoderma P. Karst. species Lloyd FP Jr, Ho NW. Ganoderma lucidum (Aphyllophoromycetideae) : a review. Int J suppresses motility of highly invasive breast Med 2003; 5(3):235–246. and prostate cancer cells. Biochem. Biophys. 11) Smith J, Rowan N, Sullivan R. Medicinal Res. Commun. 2002; 298(4):603-12. Mushrooms: Their Therapeutic Properties and 21) Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Current Medical Usage with Special Schreckenberger PC and .Winn Jr.WC. Emphasis on Cancer Treatment; Special Colour Atlas and textbook of Diagnostic Report Commissioned by Cancer Research Microbiology 5th ed. Philadelphia: Lippincott UK; The University of Strathclyde in Williams & Wilkins; 1997: p 1320 – 1322. Glasgow: 2003, 5 (3):235–246. 22) Manning DJ, Coughlin RP, Poskit EM. 12) Suay I, Arenal F, Asensio FJ, Basilio A, Candida in mouth or on dummy? Arch Dis Cabello MA.; Diez, MT et al. Screening of Child 1985; 60:381–2. Basidiomycetes for antimicrobial activities. 23) Berdicevsky I, Ben-Aryeh H, Sazargel R, et Antonie van Leeuwenhoek 2000; 78:129–139. al. Oral Candida in children. Oral Surg Oral 13) Jann Ichida. Healthy Mushrooms: Med Oral Pathol 1980; 57:37–40. Antibacterial Effects of Medicinal Shiitake 24) Lucas VS. Association of psychotropic drugs, (Letinula edodes) and Reishi/Ling Chi prevalence of denture-related stomatitis and (Ganoderma lucidum) Mushroom Extracts. oral candidosis. Community Dent Oral 106th General Meeting of the American Epidemiol 1993; 21:313–16. Society for Microbiology. ;May 21-25, 2006, 25) Arendorf TM, Walker DM. The prevalence Orlando, Florida. and intra-oral distribution of Candida albicans 14) Eo SK, Kim YS, Lee CK, Han SS. Antiviral in man. Arch Oral. Biol 1980; 25:1–10. activities of various water and methanol 26) Cumming CG, Wight C, Blackwell CL, et al. soluble substances isolated from Ganoderma Denture stomatitis in the elderly. Oral lucidum. J Ethnopharmacol 1999; 68(1-3):129-36. Microbiol Immunol 1990; 5:82–5. 15) Van der Hem LG, Van der Vliet JA, Bocken 27) Holbrook WP, Hjorleifsdottir DV. CF, Kino K, Hoitsma AJ, Tax WJ. Ling Zhi- Occurrence of oral Candida albicans and 8: studies of a new immunomodulating agent. other yeast-like fungi in edentulous patients in Transplantation; 1995; 60(5):438-43. geriatric units in Iceland. Gerodontics 1986; 2:153–6. 28) Rodu B, Carpenter JT, Jones MR. The 40) Farah CS, Gotjamanos T, Seymour GJ, pathogenesis and clinical significance of Ashman RB. Cytokines in the oral mucosa of cytologically detectable oral candida in acute mice infected with Candida albicans. Oral leukaemia. Cancer 1988; 62: 2042–6. Microbiology and Immunology 2002; 29) Dupont B, Graybill JR, Armstrong D et al. 17(6):375-378. Fungal infections in AIDS patients. J Med 41) Dongari-Bagtzoglou A, Wen K, Lamster IB. Vet Mycol 1992; 30 (suppl 1):19–28. Candida Albicans triggers interleukin-6 and 30) Wenzel RP. Nosocomial candidemia: risk interleukin-8 Responses by Oral fibroblasts in factors and attributable mortality. Clin Infect Vitro Oral Microbiology and Dis 1995; 20:1531-4. Immunology 1999; 14 (6):364. 31) Pappas PG, Rex JH, Lee J, et al. A 42) Hossain H, Ansari F, Schulz-Weidner N, prospective observational study of Wetzel WE, Chakraborty T, Domann E. candidemia: epidemiology, therapy, and Clonal identity of Candida albicans in the oral influences on mortality in hospitalized adult cavity and the gastrointestinal tract of preschool and pediatric patients. Clin Infect Dis 2003; children. Oral Microbiology and 37(5):634-43. Immunology 2003; 18 (5):302-308. 32) Apkan A, Morgan R. Oral candidiasis - 43) Fagade, O. E, Oyelade, A.A. A comparative Postgraduate Medical Journal 2002; study of the antibacterial activities of some 78(922):455-459. wood-decay fungi to synthetic antibiotic discs.EJEAFChe 2009; 8 (3): 184-188. 33) Abbeele AV, De Meel H, Ahariz M, Perraudin JP, Beyer I, Philippe C. Denture Contamination by Yeasts in the Elderly. Gerodontology 2008; 25(4):222-228. 34) Nikawa H, Hamada T, Yamamoto T. Denture Plaque — Past and Recent Concerns. Journal of Dentistry 1998; 26(4):299-304. 35) PL Fidel. Immunity to Candida. Oral Dis- eases 2002; 8(S2):69-75. 36) Abate D, Bitew A. Antifungal metabolites from submerged culture of Ganoderma Lucidum (Polypore). Ethiopian Journal of Health Development. 1994; 8(1):63-70. 37) Wanga H. Ganodermin, an antifungal protein from fruiting bodies of the medicinal mushroom Ganoderma lucidum. Peptides 2006; 27:27-30. 38) Tanaka S, Ko K, Kino K, Tsuchiya K, Yamashita A, Murasugi A et al. An immunomodulatory protein from a fungus Ganoderma lucidum having similarity to immunoglobulin variable region. J Biol Chem 1989; 264:16372–7. 39) Wang HX, Ng TB, Chiu SW. A distinctive ribonuclease from fresh fruiting bodies of the medicinal mushroom. Ganoderma lucidum. Biochem Biophys Res Commun 2004; 314:519–22.