1.

ทฤษฎีที่เกี่ยวข้ อง
2.ขันตอนการทำ
้
3.ตัวอย่างชนิดแบคที่ใช้ วิธีนี ้ + สัณฐานวิท

Endospore strain
endospore รูปไข่ เซลล์มีชีวิต ไม่เจริญ ไม่เพิ่มจำนวน พบในแบคทีเรี ย ทนความ
ร้ อน สารเคมี และสภาพแวดล้ อมไม่เหมาะสม อาจปนเปื อ้ นในอุตสาหกรรมอาหารที่ใช้
ความร้ อน
แบคทีเรี ยที่มีเอ็นโดสปอร์ (endospore-forming bacteria) = จันสั
bacillus และ Clostridium อยูใ่ นสภาวะไม่เอื ้อการเจริญ เช่น อาหารลดลง จะ
อยูใ่ นระยะ stationary phase(อายุ > 1 วัน)  endospore เพิ่ม 
เซลล์ตายแล้ วแตก  ปล่อยออก เป็ น free endospore
แบคทีเรี ยที่ไม่มีสปอร์ (vegetative cell) = endospore กลับไปอยูส่ ภาพ
แวดล้ อมเหมาะสม
Endospore ใส สะท้ อนแสง และไม่ติดสีย้อม (เช่น methylene blue และ
crystal violet) ถ้ าย้ อมจะใช้ malachite green ความร้ อนเป้นตัวพา
และย้ อมซ้ำด้ วย safranin O โดย vegetative cell ติดสีชมพู ส่วน
endospore และ free endospore ติดสีเขียว

ขันตอน
้
1..ใช้ loop ตักน้ำกลัน่ หรื อน้ำปะปา 1 หยด แตะด้ านซ้ ายและขวาของแผ่นสไลด์
2.ใช้ loop แตะเชื ้อ B.cereus อายุ 1 วัน ปริมาณน้ อย แล้ ว smear บนหยดน้ำ
ด้ านซ้ ายได้ ฟิล์มบาง (วน loop ทางเดียว)
3.ทำซ้ำ*ข้ อ 2 B.cereus อายุ 7 วัน ลงบนสไลด์เดียวกัน (ด้ านขวา)
4.Air dry แล้ ว heat fix 3-5 ครัง้ แล้ วย้ อม spore strain
5.วางสไลด์บนรางย้ อมแล้ วหยด 0.5%(w/v) malachite green จนท่วมแผ่น
สไลด์ (@อ่างน้ำ)
6.อุน่ สีย้อมด้ วยเปลวไฟ 2-3 นาที เลื่อนตะเกียงไปมาตามแนวยาวแผ่นสไลด์ (เพื่อให้
เกิดการย้ อม endospores และ free endospores) ถ้ ามีไอสีขาวให้ ชกั
ตะเกียงออก รอไอสีขาวหายแล้ วลนใหม่ (ระวังอย่าให้ สีย้อมเดือดหรื อแห้ ง)
7.ล้ างสีสว่ นเกินออกด้ วยน้ำประปาที่ไหลอย่างช้ าๆ แล้ วย้ อมซ้ำด้ วย 0.5% (w/v)
safranin O ตังทิ ้ ้งไว้ 30 วินาที
8.ล้ างสีสว่ ยเกินออกด้ วยน้ำประปาที่ไหลอย่างช้ าๆ แล้ วซับด้ วยกระดาษทิชชู (ห้ ามเช็ด)
9.ส่องดูภายใต้ oil-immersion objective แล้ ววาดรูปขนาดเท่ากับภาพที่เห็น
ภายใต้ กล้ องจุลทรรศน์