MAKMAL SITOLOGI

Unit Makmal Sitologi Jabatan Patologi Hospital Kuala Lumpur terdiri daripada
beberapa seksyen dimana setiap seksyen berfungsi mengendalikan ujian–ujian tertentu
mengikut jenis–jenis ujian atau jenis spesimen. Seksyen– seksyen di dalam makmal
sitologi adalah:

a ) Seksyen penerimaan sampel

b ) Seksyen penyediaan sampel
c ) Seksyen FNA (fine needle aspiration)
d ) Seksyen pewarnaan
e ) Seksyen sitologi bentuk cecair (liquid based sitologi)
 SEKSYEN PENERIMAAN SAMPLE

Carta aliran kerja :

Terima borang&spesimen

Semak

Cop tarikh&masa penerimaan pada borang dan catatan mikroskopi

Barkod

Nombor makmal sitologi

Demografi

Spesimen eksfoliatif Kenalpasti spesimen Aspirat FNA

Bukan ginekologi Ginekologi calitan/ Kes medikal-legal

fluid-based untuk spermatozoa (calitan)
Proses

Calitan Pencelupan
 Pemeriksaan mikroskopi

Kes bukan gine Kes mediko-legal Kes gine Kes FNA

Saringan JTMP Saringan JTMP Saringan PP

Sputum Lain-lain Abnormal -ve

-ve +ve -ve

JTMP kanan JTMP kanan

Rujuk PP Rujuk PP

Draf laporan
 Rekod keputusan

Kes lain-lain Kes gine

Laporan dimasukkan ke dalam LIS

Salinan pendua Draf laporan asal
Semakan
Tiada
pembetulan
Pengesahan Laporan gine -ve

Dua set laporan& Laporan gine abnormal

borang permintaan
dipisahkan

Salinan untuk edaran Fail simpanan

Calit dalam buku edaran

Edaran
Jenis spesimen dan kontainer yang sesuai:

Jenis spesimen Kontainer Isipadu/kuantiti Rumusan

Cecair ascitik/ Cecair Sterile spesimen Seberapa banyak yang Hantar dengan segera,
pleural/ kontainer dikumpulkan jika lambat letakkan
dalam suhu 2-80C.
Washing

Bronchial brushing Smear dalam coplin 1-3 smear Fiksasi basah dalam
jar dengan 95% 95% Etanol
Etanol

Bronchial washing Steril spesimen Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
kontainer dikumpulkan tambahkan 95% Etanol
dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Bronchial alveolar Steril kontainer Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera
lavage dikumpulkan

Cervical vaginal (PAP) Smear dalam coplin 1-2 smear Fiksasi basah dalam
smear jar dengan 95% 95% Etanol
Etanol

Cerebrospinal fluid Steril botol bijou/tiub Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
(CSF) pengumpulan dikumpulkan tambahkan 95% Etanol
dalam nisbah 1:1.

Cyst fluid Steril spesimen Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
kontainer dikumpulkan dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Eye fluid/Eye washing Dalam steril tiub Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
pengumpulan dikumpulkan dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Fine Needle Aspiration Fiksasi basah smear Seberapa banyak yang Fiksasi basah dalam
untuk semua organ dalam coplin jar dikumpulkan 95% Etanol/fiksasi
dengan 95% Etanol spray

Smear ‘air dried’ Seberapa banyak yang Fiksasi basah dalam

 dikumpulkan 95% Etanol/fiksasi
spray

Spesimen untuk sel Seberapa banyak yang Fiksasi basah dalam

block dalam sitospin dikumpulkan 95% Etanol/fiksasi
fluid spray

Oesophageal washing Steril spesimen Seberapa banyak yang Fiksasi basah dalam
kontainer dikumpulkan 95% Etanol/fiksasi
spray

Oesophageal brushing Smear dalam coplin Seberapa banyak yang Fiksasi basah dalam
jar dengan 95% dikumpulkan 95% Etanol/fiksasi
Etanol spray

Cecair perikardial Steril spesimen Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
kontainer dikumpulkan dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Cecair pleural Steril spesimen Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
kontainer dikumpulkan dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Cecair peritoneal Steril spesimen Seberapa banyak yang Dihantar dengan segera,
kontainer dikumpulkan dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Sputum Steril spesimen Seberapa banyak yang Tambahkan 95% Etanol

kontainer dikumpulkan. dan letakkan dalam suhu
2-80C.

Kriteria penolakan spesimen:

Periksa butiran-butiran seperti berikut:

1. Nama pesakit
2. Wad atau Klinik
3. No. IC atau no. Pasport
4. Spesimen berlabel
5. Maklumat pada spesimen dan borang adalah sama.
a) Jika tidak lengkap ikut arahan seperti berikut
i. Catat dalam buku
ii. Telefon wad/klinik
iii. Bergantung pada ketidaklengkapan :
 Minta wad ambil semula borang dan spesimen
 Butiran dilengkapkan melalui telefon.
 Spesimen ditolak dalam bentuk cecair badan tidak diambil.
 Disimpan dalam peti sejuk 24 jam selepas dilupuskan.
 Borang permintaan dan borang penolakan dihantar semula ke wad/klinik
6. Calitan PAP smear dan sputum pecah semasa diterima makmal, slaid dan borang
permintaan ditolak dan dimaklumkan pada pemohon.
 SEKSYEN PENYEDIAAN SPESIMEN

Teknik penyediaan specimen sitologi digunakan bagi memproses specimen

sitologi supaya pengumpulan sel daripada specimen dapat dimaksimakan dan
representative. Teknik yang digunakan bergantung kepada jenis specimen.

Penyediaan spesimen secara “direct smear”

a) Sputum
1. Sediakan slaid yang berlabel.
2. Periksa spesimen dan pilih tempat yang mencurigakan seperti terdapat darah.
3. Letak specimen ke atas slaid menggunakan pipet.
4. Letak satu slaid ke atas slaid yang mengandungi specimen tesebut, tekan dan tarik
perlahan-lahan ke atas specimen hingga ke hung slaid. Calitan bileh juga
dilakukan dengan gerakan memanjang atau bulatan.
5. Ulang untuk slaid yang berikutnya.
6. Awet di dalam 95% ethyl alcohol sekurang-kurangnya 30 minit.
7. Lakukan oencelupan PAP.
8. Mount dengan depax.
9. Label slaid dan lekatkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
10. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.

b) Aspirat FNA
1. Sediakan slaid yang berlabel.
2. Letakkan specimen di atas slaid.
3. Buat calitan dengan menggunakan spreader.
4. Keringkan beberapa calitan di udara (air dried) dan beberapa lagi diawet di dalam
ethyl alcohol (wet fixed) sekurang-kurangnya 30 minit.
5. Lakukan pencelupan MGG bagi calitan air dried.
6. Lakukan pencelupan PAP bagi calitan wet fixed.
7. Mount slaid dengan menggunakan depax.
 8. Label slaid dan lekatkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
9. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.
10. Bagi pencelupan khas, buat calitan di atas slaid polysine.

Penyediaan spesimen secara penggunaan centrifuge

a) Cecair FNA (Plural, peritoneal, pericardial fluid & bronchial washing)

i. Peringkat Pertama – penggunaan centrifuge
1. Periksa dan buat cacatan makroskopik ke atas specimen.
2. Goncang supaya sebati.
3. Tuangkan specimen ke dalam tabung uji dan masukkan ke dalam centrifuge,
empar dengan kelajuan 2000 rpm selama 10 minit.
4. Sediakan sekurang-kurangnya 2 slaid yang berlabel.
5. Selepas emparan, buang supernatant dengan menggunakan pipet.
6. Ambil mendapan dan titiskan ke atas slaid yang berlabel.
7. Buat calitan dengan menggunakan spreader. Calitan membulat boleh juga
dilakukan dengan menggunakan pipet.
8. Awet satu slaid dengan segera ke dalam 95% ethyl alcohol sekurang-kurangnya
30 minit dan satu lagi slaid dikeringkan di udara.
9. Lakukan pencelupan PAP bagi slaid wet fixed dan pencelupan MGG bagi slaid air
dried.
10. Mount slaid dengan enggunakan depax.
11. Label slaid dan letakkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
12. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.

ii. Peringkat Kedua- Penggunaan cytospin centrifuge.

1. Sediakan 2 slaid berlabel.
2. Klipkan slaid pada slide clip bersama dengan filter card dan cytofunnel.
3. Letakkan ke dalam cytospin centrifuge.
4. Letakkan 4 titik baki emparan tadi ke dalam cytofunnel.
 5. Empar specimen dengan kelajuan 1500 rpm selama 5 minit.
6. Awet satu slaid dengan segera ke dalam 95% ethyl alcohol sekurang-kurangnya
30 minit dan keringkan satu slaid di udara.
7. Lakukan pencelupan PAP bagi slaid wet fixed.
8. Lakukan pencelupan MGG bagi slaid air dried.
9. Mount slaid dengan depax.
10. Label slaid dan letakkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
11. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.

b) Urin
i. Peringkat Pertama – penggunaan centrifuge
1. Periksa dan buat cacatan makroskopik ke atas specimen.
2. Goncang supaya sebati.
3. Tuangkan specimen ke dalam tabung uji dan masukkan ke dalam centrifuge,
empar dengan kelajuan 2000 rpm selama 10 minit.
4. Sediakan sekurang-kurangnya 2 slaid yang berlabel.
5. Selepas emparan, buang supernatant dengan menggunakan pipet.
6. Ambil mendapan dan titiskan ke atas slaid yang berlabel.
7. Buat calitan dengan menggunakan spreader. Calitan membulat boleh juga
dilakukan dengan menggunakan pipet.
8. Awet satu slaid dengan segera ke dalam 95% ethyl alcohol sekurang-kurangnya
30 minit dan satu lagi slaid dikeringkan di udara.
9. Lakukan pencelupan PAP bagi slaid wet fixed dan pencelupan MGG bagi slaid air
dried.
10. Mount slaid dengan menggunakan depax.
11. Label slaid dan letakkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
12. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.
 ii. Peringkat Kedua- Penggunaan cytospin centrifuge.
1. Sediakan 2 slaid berlabel.
2. Klipkan slaid pada slide clip bersama dengan filter card dan cytofunnel.
3. Letakkan ke dalam cytospin centrifuge.
4. Letakkan 4 titik baki emparan tadi ke dalam cytofunnel.
5. Empar specimen dengan kelajuan 1000 rpm selama 5 minit.
6. Awet 2 said didalam 95%ethyl alcohol selama 30 minit.
7. Lakukan pencelupan PAP untuk kedua-dua slaid.
8. Mount slaid dengan menggunakan depax.
9. Label slaid dan letakkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
10. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.

c) CSF
i. Peringkat Pertama – penggunaan centrifuge
1. Periksa dan buat cacatan makroskopik ke atas specimen.
2. Goncang supaya sebati.
3. Tuangkan specimen ke dalam tabung uji dan masukkan ke dalam centrifuge,
empar dengan kelajuan 2000 rpm selama 10 minit.
4. Sediakan sekurang-kurangnya 2 slaid yang berlabel.
5. Selepas emparan, buang supernatant dengan menggunakan pipet.
6. Ambil mendapan dan titiskan ke atas slaid yang berlabel.
7. Buat calitan dengan menggunakan spreader. Calitan membulat boleh juga
dilakukan dengan menggunakan pipet.
8. Awet satu slaid dengan segera ke dalam 95% ethyl alcohol sekurang-kurangnya
30 minit dan satu lagi slaid dikeringkan di udara.
9. Lakukan pencelupan PAP bagi slaid wet fixed dan pencelupan MGG bagi slaid
air dried.
10. Mount slaid dengan menggunakan depax.
11. Label slaid dan letakkan pelekat mengikut nombor accession dan nama pesakit.
12. Kes-kes segera diasingan di dalam tray yang berasingan.
 ii. Peringkat Kedua- Penggunaan cytospin centrifuge.
1. Sediakan 2 slaid berlabel.
2. Klipkan slaid pada slide clip bersama dengan filter card dan cytofunnel.
3. Letakkan ke dalam cytospin centrifuge.
4. Letakkan 4 titik baki emparan tadi ke dalam cytofunnel.
5. Empar specimen serospinal dengan kelajuan 1000 rpm selama 30 minit.
6. Awet satu slaid dengan segera ke dalam 95% ethyl alcohol sekurang-
kurangnya 30 minit dan keringkan satu slaid di udara.
7. Lakukan pencelupan PAP bagi slaid wet fixed.
8. Lakukan pencelupan MGG bagi slaid air dried.
9. Mount slaid dengan depax.
10. Label slaid dan letakkan pelekat mengikut nombor accession dan nama
pesakit.
11. Kes-kes segera diasingkan di dalam tray yang berasingan.

*Spesimen yang isipadunya adalah kurang dari 1ml terus melalui proses cytospin.

Penyediaan cell block

a) Thermo Shandon Cytoblock Method
1. Periksa dan buat cacatan makroskopik ke atas specimen.
2. Goncang supaya sebati.
3. Tuangkan specimen ke dalam tabung uji dan masukkan ke dalam centrifuge,
empar dengan kelajuan 2000 rpm selama 10 minit.
4. Selepas emparan, buang supernatant dengan menggunakan pipet.
5. Mendapan dan sacromano dicampurkan dengan cytospin fluid. Biarkan selama 2
jam atau semalaman.
6. Empar sekali lagi pada kelajuan 2000 rpm selama 10 minit. Buang supernatant,
tinggalkan sedikit untuk dicampurkan dengan mendapan.
7. Ambil mendapan dan letakkan ke atas kertas turas. Masukkan kedalam kaset..
8. Titiskan 2-3 titik reagen cryo drip (2).
9. Letakan corong dan klipkan. Kemudain empar pada kelajuan 1500 rpm selama 5
minit.
10. Keluarkan dari centrifuge. Titiskan 2-3 titik reagen cryo (1).
11. Tutup kaset dan biarkan rendam di dalam 10% formalin untuk 2 jam sebelum
menghantar sample ke makmal histopatologi berserta borang permintaan.
 SEKSYEN FINE NEEDLE ASPIRATION

Ujian:
Fine Needle Aspiration (Bagi lesi palbable)

Prinsip:
FNA ialah prosedur yang digunakan bagi mensampelkan sel-sel dengan Fine Needle dan
ia boleh digunakan bagi mengambil sampel daripada organ tetapi ia tidak sesuai bagi
sampel eksfoliatif. Contohnya payudara, tiroid, kelenjar air liur, dan nodus limfa. Kaedah
ini diterima pakai oleh pesakit kerana ia tidak menggunakan anestetik.

Spesimen:
Lesi payudara, kelenjar tiroid, kelenjar air liur, nodus limfa, dan lesi superfisial yang lain.

Bahan dan radas :

 Cameco Syringe Pistol bagi transcutaneous FNA’s
 20mL plastik syringe pakai buang (disposable) dengan Lour Lock Tip
 Jarum pakai buang dalam pelbagai saiz: 25 gauze-21 gauze
 Swab alkohol
 Sterile gauze pads
 Slaid kaca mikroskopik dengan hujung ‘frosted’
 Slaid polysine mikroskopik bagi pewarnaan khas (special stain) &
immunohistochemical stain adalah diperlukan.
 Choplin Jar mengandungi 95% Etil Alkohol untuk fiksasi smear segera.
 Rak slaid digunakan untuk meletakkan smear yang kering.
 Rak bagi tabung uji
 Pensil digunakan untuk melabel slaid dan pen marker permanent digunakan untuk
melabel tabung uji.
 Bekas spesimen dengan larutan cytospin untuk menyimpan jarum yang mungkin
mengandungi residual tisu fragmen pada hujung jarum tersebut.
 Mikroskop.
 Reagen untuk Diff Quick Stain.

Gambarajah 1.4 menunjukkan alat radas dan bahan untuk FNA.

Reagen:
a) Cecair pengumpulan Cytospin yang komersial (berwarna hijau).
b) Reagen pewarnaan Diff Quick.
c) 95% Etil alkohol.
d) Metanol.

Prosedur:
a) Pengumpulan spesimen
Aspirasi diambil dengan kehadiran staf perubatan. Juru Teknologi Makmal
Perubatan turut hadir bersama bagi melakukan prosedur penyediaan smear. Alat radas
dan bahan yang diperlukan bagi melakukan FNA (Fine Needle Aspiration) secara efisien
dan cepat ialah:

b) Teknik aspirasi

Swab kulit dengan swab alkohol

Selaraskan kawasan lesi dengan posisi yang sesuai

Masukkan jarum dalam plunger syringer

Jarum dikeluarkan kembali

Setelah selesai aspirasi, tekanan syringe membenarkan plunger dikeluarkan.

Ia digunakan bagi memastikan bahan-bahan material yang terkandung dalam jarum

tersebut tidak sukar untuk dikeluarkan.
c) Biopsi jarum tanpa aspirasi

Biopsi jarum tanpa aspirasi boleh dilakukan kerana tekanan kapilari dalam fine needle
adalah sesuai digunakan bagi mengekalkan sel yang dikikis dalam lumen. Ia sesuai
dilakukan bagi lesi tiroid dan nodus limfa yang kecil.

Jarum 25-23 gauze dipegang di hujung jari

Jarum dimasukkan ke dalam lesi dan dikeluarkan semula.

Bahan-bahan dari jarum diletakkan dalam slaid kaca berlabel menggunakan syringe 20cc.

d) Aspirasi biopsi lesi sistik

Jika ia aspirasi lesi sistik, prosedur di atas digunakan tetapi cecair boleh dikeluarkan
daripada syringe dan dikumpulkan dalam tabung uji dan akan diproses sebagai body
fluid (cecair badan).

e) Penyediaan smear

Labelkan slaid aspirasi (sekurang-kurangnya 4 slaid).

Setelah aspirasi yang lengkap dilakukan dan jarum dikeluarkan, syringe dikeluarkan
daripada jarum dan diisikan dengan udara dan disambungkan.

Bahan-bahan material dalam jarum diletakkan di atas slaid kaca berlabel.

Bahan-bahan material dipisahkan daripada slaid dengan menggunakan satu slaid bersih
yang lain.

Bilangan smear dibuat berdasarkan jumlah bahan aspirasi tersebut.

 Fiksasi boleh dilakukan pada sel yang terdapat pada slaid dan sel-sel diletakkan di atas
rak slaid supaya ia kering.

f) Rapid stain (pewarnaan yang cepat) menggunakan pewarnaan Diff Quick

1. Sel-sel dalam kes yang memerlukan penyaringan seperti yang diminta dan
dihadiri oleh pathologist bagi melihat selulariti dan mengenalpasti kematangan
lesi. Contohnya ialah kes-kes yang disyaki limfoma.
2. Penyediaan smear adalah ‘air dried’ iaitu kering.
3. Smear bagi pewarnaan Diff Quick.
4. Penilaian smear di bawah mikroskop perlu dihadiri oleh pathologist yang akan
menentukan sama ada aspirasi perlu diulangi dan atau disediakan ekstra smear
bagi special stain atau immunochemistry.

Klinikal signifikans:
1. Tidak ada rasa sakit dan prosedur ini adalah berisiko rendah.
2. Ia menjimatkan masa dan wang.
3. Ia membolehkan diagnosis dilakukan berulangkali.
4. Diagnosis yang tepat dan interpretasi keputusan oleh pelatih (practitioner) yang
berpengalaman dan terlatih.
5. Ia boleh dilakukan secara berulang-ulang.
Ujian :
Fine Needle Aspiration Sitologi bagi lesi non-palbable

Prinsip:
Lesi non-palbable yang boleh digunakan dalam diagnostik sampel sel-sel.

Spesimen:
Lesi dalam daripada organ ataupun tisu yang dilihat melalui teknik ‘imaging’.

Reagen:
1. Cecair pengumpulan Cytospin
2. 95% Etil alkohol

Bahan/Alat radas:
1. Coplin Jar yang mengandungi 95% Etil alkohol untuk fiksasi smear.
2. Slaid kaca mikroskopik yang mempunyai frosted end (berwarna putih di hujungnya).
3. Rak slaid digunakan untuk meletakkan smear yang dikeringkan di udara.
4. Pensil digunakan untuk melabel slaid dan pen marker permanent digunakan untuk
melabel tabung uji.
5. Bekas spesimen dengan larutan cytospin digunakan untuk menyimpan jarum di mana
ia mungkin mengandungi fragment tisu-tisu.

Prosedur:
1. Prosedur dilakukan oleh radiologist dan dibantu oleh alat-alat seperti ultrasound dan
CT scanner.
2. Semua permintaan akan dicatatkan dalam buku temu janji radiologi.
3. Bagi kes permintaan untuk segera (urgent) perlu dituliskan oleh pathologist atas
panggilan FNA.
4. Bahan yang diperlukan akan dibekalkan di dalam makmal dan seorang sitoteknikal
(cytotechnician) akan hadir bersama bagi membantu penyediaan smear.

Smear/Calitan
1. Smear disediakan dengan segera seperti yang dilakukan bagi FNA lesi palbable.
2. Smear difiksasi dalam 95% Etil alkohol dan disediakan sebagai smear yang kering.

Klinikal signfikans
1. Meminimumkan prosedur yang invasif.
2. Prosedur yang berisiko rendah dengan sedikit ataupun tiada komplikasi.
3. Diagnosis yang dilakukan adalah cepat.
4. Membekalkan atau memberikan diagnosis yang tepat dan keputusan diinterpretasi
oleh pathologist yang terlatih dan berpengalaman.
 SEKSYEN PEWARNAAN

a) Pewarnaan papanicolau

Prinsip:
Kaedah pewarnaan papanicolau merupkan pewarnaan reaksi polikrom, bertujuan
untuk menunjukkan pelbagai variasi morfologi sel yang menunjukkan darjah kematangan
serta aktiviti metabolic. Hasil pewarnaan mempamerkan ciri-ciri nucleus ke sitoplasma
dan pembezaan sel.

Spesimen:
Hanya sesuai untuk fiksasi smear 95% ethyl alcohol.
1. Sitologi gynaecological
 Smear servik-vagina
2. Sitologi bukan gynaecological
 Sputum
 Cecair badan
3. Smear sitologi fine needle aspirasi (FNA)

Kaedah:
1. Smear di rehadrasi dalam;
 80% ethyl alkohol (10 celupan)
 70% ethyl alkohol (10 celupan)
 50% ethyl alkohol (10 celupan)
2. Slaid dicuci dengan air selama 1 minit.
3. Warnakan dengan Harris Haematoxylin (4-6 minit)
4. Cuci slaid sehingga bersih.
5. Celup smear di dalam 0.25% HCl (2 celupan)
6. Cuci slaid dengan air (3 minit)
7. Smear di dihirasi dengan;
  50% ethyl alcohol (10 celupan)
 70% ethyl alkohol (10 celupan)
 80% ethyl alkohol (10 celupan)
 95% ethyl alkohol (10 celupan)
8. Celup di dalam eosin A 50 (4-6 minit)
9. Cuci dengan 95% ethyl alcohol (2 pertukaran) – (5 celupan setiap satu)
10. Cuci dengan absolute alcohol (2 pertukaran) – (5 celupan setiap satu)
11. Histoclear (3 pertukaran) – (5 celupan setiap satu)
12. Mount

*Langkah (xi) dan (xii) dilakukan didalam kebuk wasap.

Reagen:
1. Harris Haematoxylin
 Bahan aktif;
- Haematoxylin 4.7%
- Alum ammonium sulfate 94.8%
 Untuk membuat Haematoxlyn segera
- Campurkan isi A dan B ke dalam bekas.
- Tambahkan 1 liter deionized/ air suling. Jangan gunakan air pili.
- Kacau/ goncang campuran untuk beberapa minit. Campuran
dibiarkan untuk lebih kurang 1 jam (keputusan yang lebih baik
diperolehi selepas campuran dibiarkan lebih dari 12 jam)
- Saring sebelum menggunakannya.

2. 0.25% Asid Hidroklorik

- 700ml absolute alcohol
- 300ml air suling Dicampurkan
- 2.5ml konsentrasi HCl
 3. 95%, 80%, 70%, 50% ethyl alcohol
4. Absolute alkohol
5. Xylene
6. OG 6
7. Eosin A 50

Keputusan :
 Nuclei: Biru
 Sitoplasma: Hijau cair, biru kehijauan, biru/ merah jambu

Kawalan Kualiti :
 Slaid dilabel dengan betul.
 Smear adalah nipis dan disebar sama rata.
 Ciri-ciri sitomorfologi ditunjukkan dengan jelas. Contohnya nucleus, corak
kromatin dan ciri sitoplasma ditunjukan dengan jelas.
 Tiada artifak akibat daripada pewarnaan, pengeringan dan mouting.
 Penyediaan adalah sesuai qualitinya untuk photomicrography.
(b) pewarnaan may grunwald giemsa (mgg)

Prinsip :
Pewarnaan ruitn untuk penyediaan slaid sitologi yang dibiarkan kering pada suhu
bilik (air dried). Ia menekankan pembezaan saiz sel dari pelbagai jenis sel dan
menunjukkan pembesaran nuclear yang merupakan salah satu ciri penting untuk
malignancy.

Spesimen:
Sesuai untuk smear
i) Bukan gynaesitologi
- Cecair badan, Tzanc smear
ii) Smear sitologi FNA

Kaedah :
i) Fiksasi smear dalam methanol (20 minit)
ii) Susun slaid secara mendatar atas rod di atas sinki
iii) Banjir slaid dengan campuran MG (10 minit)
iv) Cuci dengan air
v) Banjir slaid dengan pewarna Giemsa (10 minit)
vi) Cuci dengan air
vii) Keringkan
viii) Mount dengan depax

Reagen :
1. Stok pewarna May Grunwald
2. Untuk menyediakan campuran MG, cairkan stok MG dengan phosphate buffer pH
6.8 (dilution 1:1)
 3. Stok pewarna Geimsa
4. Untuk menyediakan campuran Giemsa, cairkan stok Giemsa dengan phosphate
buffer pH 6.8 (dilution 1:10)
5. Fosfat buffer pH 6.8
6. Cairkan satu kapsul fosfat buffer di dalam 100ml air suling.
7. Methanol untuk fiksasi

Keputusan:
 Nuclei: Biru
 Sitoplasma: Merah Jambu

Kawalan Kualiti :
 Slaid dilabel dengan betul.
 Smear adalah nipis dan disebar sama rata.
 Ciri-ciri sitomorfologi ditunjukkan dengan jelas. Contohnya nucleus, corak
kromatin dan ciri sitoplasma ditunjukan dengan jelas.
 Tiada artifak akibat daripada pewarnaan seperti scum
 Tiada artifak hasil daripada mounting
(c) Pewarnaan diff quick

Prinsip:
Pewarnaan Diff Quick merupakan pewarnaan cepat yang digunakan untuk smear
AIR DRIED untuk

Spesimen :
Sesuai untuk smear yang dibiarkan kering pada suhu bilik (air dried) ,
terutamanya untuk smear sitologi FNA.

Kaedah :
1. Fiksasi smear dalam methanol (5 saat)
2. Stain di dalam campuran Diff Quick I (5 saat)
3. Stain di dalam campuran Diff Quick II (5 saat)
4. Cuci di dalam air
5. Keringkan
6. Mount dengan depax

Reagent:
1. Methanol
2. Campuran Diff Quick I
3. Campuran Diff Quick II

Keputusan :
 Nuclei: Biru
 Sitplasma: Biru cair
d) PEWARNAAN KHAS DAN PEWARNAAN IMMUNOHISTOKIMIA

Prinsip :
Pewarnaan khas dan pewarnaan immunohistokimia yang dipohon adalah seperti berikut;

Pewarna Khas
 Periodic Acid Shiff (PAS) dengan atau tanpa diastase
 Pewarna Zhel-Neelson
 Congo Red

Pewarna Immunohistokimia
 Cytokeratin
 Marker sel T
 Marker sel B
1. Kalsitonin
 SEKSYEN SITOLOGI BENTUK CECAIR

Ujian :
Cecair berasaskan sitologi untuk sampel ginaekologikal

Prinsip :
ThinPrep processor dibuat untuk kegunaan mekanikal, pneumatik dan prinsip
cecair (fluidic) untuk sel dispersi, pengumpulan dan pemindahan. Sistem pneumatik atau
cecair dikawal dengan mikroprocessor, monitor pengumpulan sel. Setiap ThinProcessor
penyediaan pemprosesan slaid dioptimumkan untuk ciri-ciri biologikal daripada pelbagai
spesimen sitologikal.
ThinPrep processor proses penyediaan slaid boleh dibahagikan kepada fasa
berikut:
1. Penyediaan sampel/instrumen loading
2. Permulaan kitar
3. Pengesanan paras cecair
4. Dispersi
5. Penapis/Filter Wetting
6. Pengumpulan sel
7. Pembersihan sisa-sisa
8. Bubble point
9. Pemindahan sel
10. Ejeksi slaid
11. Kelengkapan kitar

Seksyen berikut di bawah menerangkan prinsip setiap fasa dengan teliti:

1. Penyediaan sampel/instrumen loading
Sebelum ThinPrep Processor boleh memproses sampel ginekologikal, sampel
mesti diletakkan ke dalam larutan Preservcyt melalui kaedah yang digunakan. Dalam
penyediaan untuk sampel diproses, operator load fokus pada keperluan benda ke dalam
ThinPrep 2000 Processor iaitu sampel Preservcyt melalui penapis transcyt yang
dikelipkan pada penutup penapis, slaid ThinPrep dan fiksatif bath yang mengandungi
fiksatif standard makmal.

2. Permulaan kitar
Apabila operator memulakan kitar, ThinPrep 2000 Processor mengesahkan
pemasangan pakai buang, posisi motor, dan tekanan positif dan negatif dalam takungan
tekanan tersebut. Selepas peralatan ini memproses slaid, pilih kitar tersebut.

3. Pengesanan paras cecair (fliud level detection)

Penutup botol seal memperlahankan seal penapis dan sampel vial dikumpulkan
melalui penapis membran. Sampel vial berhenti apabila penapis membran membuat
hubungan dengan permukaan cecair. Jika paras membran memuaskan, peralatan ini akan
menyambung proses penyediaan slaid. Bunyi amaran dan mesej menunjukkan paras
cecair yang tidak memuaskan.

4. Dispersi (Penyebaran)
Penutup botol seal diangkut dan sistem dispersi memusingkan penapis Transcyt
dengan suspensi sel, mereka atau membuat smear dalam cecair yang sangat kuat untuk
memisahkan secara rawak, bahan material dan dispersi mukus dan bahan yang tidak
diketahui akan mempunyai kesan pada arkitek selular.
5. Penapis/Filter Wetting
Hadapan seal direndahkan pada seal penapis. Tekanan negatif digunakan,
bilangan cecair yang kecil akan melalui penapis Transcyt untuk membasahkannya.
Diikuti wetting, sistem akan membawa keluar cecair dalam penapis Transcyt. Ia
membersihkan bahan selular daripada permukaan penapis.

6. Pengumpulan sel
Membran penapis secara biologikal, neutral dan dimount pada satu di hujung
penapis silinder Transcyt. Sistem pneumatik menggunakan tekanan negatif pada penapis
dalam siri nadi. Tekanan negatif membenarkan larutan preservcyt melalui penapis
membran dan mengumpulkan bahan selular ke dalam permukaan luar membran. Proses
pengumpulan bermula apabila kawasan penapis ditentukan oleh kitar proses tersebut.
Selepas pengumpulan, sel terkumpul pada single plane melepasi pores, sedia untuk
dipindahkan pada slaid.

7. Pembersihan sisa-sisa (waste cleaning)

Apabila pengumpulan tamat, penapis Transcyt dikeluarkan daripada sampel vial
dan penapis diaspirat ke dalam botol pembuangan sisa-sisa sebagai penapis diterbalikkan.

8. Bubble point
Bubble point membuang cecair ekses daripada membran penapis dengan
memindahkan sel pada slaid untuk mendekatkan sel adhesion pada slaid tersebut.

9. Pemindahan sel
Apabila bubble point sudah lengkap, pemegang slaid bergerak pada slaid ke
dalam kontak dengan menterbalikkan penapis Transcyt. Natural adhesion daripada sel
dan perubahan elektrokimia daripada slaid kaca bertanggungjawab untuk sel dipindahkan
daripada penapis membran pada slaid. Sel mempunyai afiniti yang tinggi untuk slaid kaca
daripada membran, tekanan udara berdekatan dengan penapis membran mendekatkan
pemindahan sel.

10. Ejeksi slaid

Apabila sel dipindahkan sudah lengkap, slaid diubah daripada kontak dengan
penapis dan secara automatik diejeksi ke dalam fiksatif bath vial.

11. Kelengkapan kitar

Semua mekanisma motor kembali pada posisi semula dan kembali pada menu
utama.

Reagen :
Larutan Preservcyt

Spesimen :
Sampel ginakeologikal dalam larutan Preservcyt.

Prosedur :
Seksyen ini menyediakan arahan untuk beroperasi menggunakan ThinPrep 2000
Processor. Kaedah menggunakan ThinPrep 2000 Processor:
 Senarai preoperasi

Loading ThinPrep 2000 Processor

Loading penapis Transcyt

Loading ThinPrep slaid mikroskop

Loading fiksatif bath vial

Tutup pintu ThinPrep 2000 Processor

Pemilihan dan permulaan kitar

Unloading ThinPrep 2000 Processor

Keputusan :
Pengumpulan sel yang bulat mempunyai satu lapisan mono berukuran 21mm
diameter dalam taburan yang sama tanpa sebarang periferal.