MUTATION & DNA REPAIR

กระบวน การ DNA Re Pkat " "

บน
เ)ด ความ -ด ปก/ → เ)ด การ mutation i 0างกาย 3อง 5 DNA repair (6อมแซม 9ว เอง)
/ ;ใ= การ mutationไ? เ)ด ผล ไป
Bนแรง มาก เ)น
กระบวน การ
ควบ:ม centraldogma
↳

MUTATIONS ะ การ กลาย

CนD
.

การ E DNA
1 โครงสHาง DNA
,
IJบ nvdeotid e) 5 การ เปKยนแปลง อLาง ถาวร lprodue permanent changes ) → Nง ผล Oอ phenotype
-

Single -
base changes ะ เปKยน แP เบสใด เบส Qง ( ชSด nvdeotide เปKยนำ

ไ? Nง ผล กระทบ Oอ transcription , replication

'

เ)ดจาก replication -ด ปก/

ะ เอา เบส ชSด E -ด มา Wบ

เXม ใน
การ
กYม lovalent ล base
-

Strvctvral distortions ะ การ เปKยนแปลง โครงสHาง ของ DNA

'

เ)ด จาก การ สHาง Cนธะ Covalent ระห]าง เบส → dimev

ไ^ _บ จาก _ง`
ะ
การ กระ
3าน w

เ/ม
หa molecvle
หa เbา
ไป ใน โครงสHาง nvcleotide bases
ะ
บาง

Nง ผลใ= transcription , replication ; งานไ^ไ? เcม E →

Protein แสดง ออก ไ^ dอย ลง → Nง ผล กระทบ Oอ phenotype ใน 0างกาย

tfftLTOFMUTATIONONPHENOTYPt.mu tation →• 5 การ เปKยนแปลง ของ DNA แO ไ? Nง ผล กระทบ Oอ Phenotype

imvtdtion →
Nง ผล กระทบ Oอ Phenotype
เปKยน Phenotype ไป ใน
Possitive selection
อe fปแบบ E; ใ= gง 5 hiต อe รอดไ^ k lน mายทอด
i ะ →

Neaative
purifying selection gง 5 hiต nรง hiต
อeไ^ ลดลง
ะ or ะ

MUTATION & t VOLUTION i ioฒนาการ → mutation ชSด positive

TYPE Of MVTATIONS

}
1. Point mvtation tide base
"" "

5 การ เปKยนแปลง เ/ม ขาดหายไป ของ nvcletide base

ำ Frameshift mutatm

3. Chromosome mvtation ะ Lhromosome ขาดหาย ไป ,

เ/ม

1.
POINT MUTAT 10N ะ เปKยนแปลง ชSด Base

เปKยน ชSด เปKยน แบบ เปKยนแปลง ใน

Base substition nvcleotide Transition Base
กYม เkยว qน
.
ะ .
ะ

เปKยน
สาเหr การ
เปKยน แบบ Transversion เปKยนแปลง Base เsน
กYม tน
'

tautomevicshift.Deaminationotadenine.ly
i
Tautomerism ,

หายไป Wบ เปKยน
tosine
หa amino
ะ → การ

Depurination inuleotide
lpurin e) หuด ออก
จาก สาย
 Tavtomerism เ"ด $น ตาม ธรรมชา,
-

-
-
p + e- ltl ) เค/อน 1 ใน nvdeotid base

3ใ4 7ง9:น (อง; ประกอบ @กษณะทาง เค- สาร 1 เปEยนแปลง O

ห6
→

เ"ด Tautomerism
-

ห6 amino ,
หI
บ
keto

Deamination Depvrination เ"ด mutation

'

75 %
'
→

เอา
หJ amino ออก → ชKด base เปEยนไป -

nucleotid base เMอม Nตาล pentose โดย Pนธะ N -

p
-

glycosyl
b
เอา ออก เอา ออก
เอา ออก เปEยน จาก อ โดน สลาย
สลาย โดย การ hydrolysis
ๆ

CEG U=A

เปEยนจากT
b

tff t.LT BAS t 1.

เปEยน Sว 3

1. Silent mvtation ะ
mutation แV ไI กระทบ Vอ phenotype laminoa Sว เWม ) U

: เปEยนแปลง Base Sว 1 31 Xบ antiwdon Yอย)

1. Missense mutationi Zง ผล กระทบ Vอ phenotype ( เปEยน ชKด aminoa ) 2.

i

Conservative ะ Zง ผ ใ4 เ"ด neutral mutation 1 เปEยน aminoa ไI \ง ผล Vอ การ 3 งาน )

,

c. onservative เปEยน ชKด aminoa Protein 3 งานไI ไ^

inon : คน ละ
ก]ม →
-

Zง ผล กระทบ
_นแรง ก`า
→

3.
3. Nonsense Mutation ะ เปEยนแปลงชKด nvcleotide →
stop codon

Zง ผล กระทบ
_นแรง aด
ะ

LODON LHANGED

Silent mutation

Nonsense mvtation

Missense mutation

2.FR AME -
SHIFT MUTATION

เ"ด $นไ^ ะ แบบ

1. Base หาย ไป 1,1 bวะ Frame -

shift เปEยน

3 Sว ะ Frame -

shift ไI เปEยน

า .
เ,ม nvdeotide base แ Sว ะ
เ"ด frame shift
-

3 Sว i. frame ไI เปEยน
3.
CHROMOSOME MUTATION ะ
การ เป'ยน แปล ใน ระ-บ Lhromosome

โครงส3าง
-
เป'ยน strvctvre 4๊6่ำ ar ของ chromosome

ะ ขาดหายไป เ>ม @น : การ เAยง B-บ เป'ยนแปลง

Deletion
ะ

mvtation

เCด จาก Translocation ะ

แลก EนFวน
'

lrossing overi EนFวน บาง Fวน ขาดหายไป Hก Eน เ>ม

Breking withovt rejoining ะ Iกขาด

Insertion mutation
-

EนFวนIกขาด →
แลก EนFวน r

เCด จาก ใน lhromosome J EนFวน DNA K แMวไป Hก บOเวณ เAยก transposon

หLด แทรก
e

J
entyme Qวย transposase
↳

RาไS แทรก บOเวณ ไS Fง ผล Uอ

.
Gene จะ
phenotype
i. กใV Bl B ไS ไW ใV A) ะ แลกเป'ยน
Lhromosome number Lhanges การ เป'ยนแปลง Xนวน
: lhromosome
e

แYง ไW i

Anevploidy ะ Xนวน lhromobome บาง Eน เ>ม @น ,

ขาดหายไป ldrawn syndrom e)

ipolyploidy เป'ยน Zง
[ด
ะ lhromosome

MECHANISM OF MUTAT 10N ะ

กระบวน การ เCด

1.
Spontaneovs mvtatiom เCด @น ไW เอง ไS \อง J ]ว กระ \ุ
นะ เCด จาก กระบวน การ Tautomerism

1. Chemical mutagens i. เCด จาก การ กระ_น ของ สาร เคJ

สาร เคJ .

Base analogues ะ เCด mutation K คMาย `บ Tautomerism

อa ใน bป Keto tnol →
สามารถ dบ `บ L & G →
เCด mutation ไW

Deaminating agents กระ_นใV J การ efด

หSู Amino จาก nucleotide
'

hก เiน กรด Nitrous เjง การ ]ด Wวย กระบวน OXI dativedeamination

l HNN หk amino การ
ะ →

Alkylating agents เ>ม เlาไป ใน โครงส3าง molewle

หk Methyl tthyl nucleotide
ะ
e

e. เmม Alkyl tthyl methane svlphonatelt MSI

i. า -

methyt 3- nitro -

า -
nitroso -

guanidinel MNN G)

Ames test for carcinogens

ะ no การ ทดสอบ pา B ใด
กระ_น mutation ,
มะเqง i เrยง เsอ Salmonella typhimvrium KJ การ เmม histidine เtา uน

แMว โตใน อาหาร เrยง เsอ K ไS J

ผสม histidine →
กระ
\านใV เCด mutation และมะเqง

ilntercalting เwน K เiน เwน

agents ะ แทรก ระหpาง DNA 2
x ะ กระบวน การ

ใน กระบวน การ
ะ
แทรก
อa ระหpาง yน zนไดรบกวน การ { งาน ของ
entyme DNA perimevase DNA template

irradiation
3. Ultraviolet ะ
การ
กระ_น Wวย |ง}
i ส3าง ~นธะ covalent ระหpาง pyrimidine า ]ว ใV เÄอม `น เiน pyrimidine dimers →
thymine dimers

pyrimidine dimers :p yrimidinebase L ]ว K 5 `บ เ ส3าง ~นธะ covalent dบ `บ ]ว Åดไป 1 J covalent ะ ~นธะ )

base ]ว แรกใÇ L ]ว 6 ส3าง ~นธะ lovalent `บ l ]ว K Hก ]ว l J Lovalent ~น จะ 1

:p yrimidine 4 ของ า
DNA Rt PAIR กระบวน การ (อง+น การ mutation ,อมแซม DNA0 เ2ยง 4อ การ
,
mvtation

Direct repair ะ เ5อ 6 ความ เ8ยหาย เ:ด<น จะ,อม ตาม ความ เ8ยหาย ?น

,อมแซม กร@ 0 Aง 8
-

Photolyase ะ UV
กระBนใD เ:ด pyrimidine dimers

Eวย +น สลาย Hนธะ pyrimidine dimers

+
ะ f ADH
,
folate covalent สลาย

ไK เจอใน Lง 6 MNต เOยง Rนม

Pก Qวย
ะ

folate ใD 6
ะ folate Aบ พTงงาน แสง อาUตV →

กระBน e-
กระBน →
FAD W๋ Aบ Y จาก folate

กTบ เ[น สาร ^ง_น

Zง 4อใD Covalent ใน pyrimidinedimers
→ → Hน ระบาด จาก +น
pyvimidine เ[น \สระ ]
0 ไQ Aบ โดน aง กTบไป FADH
+
e-

0 เอา
i
AIK yltransferasei entyme หc Alkyl ltthy Methyl ) ,
ออก จาก nudeotidebase

nulleotide 0 0 เ[น สาร _น 0 e งานไQ ตาม ปกf

หdด ออก มา กTบ เ[น nudeotie
→
ะ

ไK เจอใน Lง 6 MNต เOยง Rนม

Pก Qวย

เ:ดใน กร@ 0 replication เ:ด สมgรhแiว

Mismatch repair ะ DNA ะ พบ jา 6 บาง บkเวณ 0 ทบ 4 eotide base ไK เnา
o+น
โดย entyme
หTง จาก motification เfม
หKู methyl เnา สาย DNA เqน
o
" tein
methylase
ะ
ะ Dam

เ[น rว บอก เqน เsาใหK

ะ
หc methyl แK แบบ 6
หc methyl เ:ด directed
ะ
Methyl -

mismatch repair
เqนใหK YงไK เfม หKู methyl

txcisionrepair.Baseexci.io n repair 1 Bt RI ะ เfม base tด ไK u rว ะ

เอา RNA ใa DNA

DNA
glylosylase
i

Uralil rด hudeotid rด สาย เnา มา vบ 0

wก_อง 0
DNA glycosylase polymerase เอา base มา แทน
→
ะ
ออก DNA
-

→ →

เ8ยหาย
nvdeotide
เ:ด การ

Nvcleotide excision repair l Nt RI ะ เ:ด pyrimidine dimersibase เ8ยหาย หลาย rว

'

e หxา0 y
เอ
ม

_อง ,อมแซมใน ระzบ 0

ให{ กjา เ|ม
.

rด rด

เอก ออก
excinvclease 1 e หxา0 ,อม )
enzyme
-

โคนใ} เ[น template

DNA heli (d) e l เอา ออก ) nuueotiae 0 wก เnา มา แทน

ใน กระบวน การ ,อมแซม จะ เ:ด แ~ เqน เ•ยว เqน 0 ปกf จะ ใ} เ[น template เÄอ สÅาง มา ใหK
wก
.

Recombination lpost replication ) repair -

ะ เ8ยหาย Çง 2 เqนของ สาย DNA หÑอ ขาด ออก หายไป

ใ} สาย DNA ของ Lhromosome Öก เqน มา เ[น แKแบบ ใน การ ,อมแซม สาย DNA 0 tด ปกf ของ เqน 0 tด
โรค $ เ&ด จาก POINTMUTATION

1. Sickle lell anemia 1 เ+ด เ,อด จาง ) : เป0ยน base 3ว เ5ยว An

ะ
7ใ9 aminoa เป0ยน

1. Thalassemia ะ แบบ nonseme →

mvtation แ<ว เ&ด stoplodon

i. ส>าง Hemogrobin ไ@ Aอย ลง → 3ว $ เห,อ ส>าง มาก กEา ปกF

↳
Gบ Hน เIน Jอน →
ตก ตะกอน → เ+ด เ,อด แตก Lาย

Gt Nt Ttctl NOLOGY TO DETECT GENE MUTAT 10N

'

Polymerase Lhain reactionl Pl B) ใM ใน การ เNม Oนวน PนQวน DNA ภาย ใน หลอด ทดลอง

เTน เIน เTน เVยว (ใM เFม \ง]น ^น )

Denatvred ะ แยก DNA
U WณหYZ [ง )
→
Primer เIน สาร l DNA สาย
i

Annealing ลด
WณหYZ เ_อใ9 Primer `บ Hบ Template เFม entyme Polymevase Gบ Primer nudeotide มา aงเคราะb สาย DNA
. ะ → →

txtension ะ c สาย nvcleotide มา Oลอง สาย DNA

เสdจ จะไ@ เTน

า รอบ DNA
U จาก าU U
→
→

ไg รวม 5 " \ง ตน
fงหมด
Oนวน รอบ
e DNA
U produa ไ@ fงหมด 2m
"
: 2 → 230 ะ

Verification ot PLR Prodvct

7 ใ9 >อน หhอ ใน แgแบบ เjยง ใน แnน

Agarose gel electrophoresis i. เอา
agarose gel มา → ล
อiภาค gd
มา เ&ด
k พmน
Gel
i
→ →

ะ
เอา Pl Rproduut โหลด ลง แnน Gel แ<วใ9 กระแสไฟpา →
DNA จะ qง จาก rว ลบ rว บวก
→

↳
e phosphate
ะ tอม u cell → Qองใ] vงu UV →
เwอง แสง ประs
ลบ

DNA xyบ nucleotide

Seqvencing DNA
i

: หา ของ

เNม Oนวน ชน Qวน ldeoxyribonudeic IJ

DNA เอา Base $ เ|า
U มา เFม nucleotide base
: →

: เFม สาร Flvorescence 3ว ละ u → }อ เ|า สาย DNA ใน กระบวน การ Oลอง 3ว เอง → ใM เลเซอ•