การเพิ่มจำนวนDNAด้วย

เทคนิคPCR
-การเพิ่มจำนวน DNA ด้วยเทคนิค PCR
สามารถเพิ่มจำนวน DNA ในหลอดทดลอง
ด้วยเทคนิคPCR (polymerase chain
reaction)ด้วยเครื่องเทอร์มัลไซเคล
อร์(thermal cycler)ซึ่งควบคุมอุณหภูมิ
ให้ปรับเปลี่ยนอย่างรวดเร็วตามความ
ต้องการการเกิดปฏิกิริยาในหลอด อาศัย
ไพรเมอร์(primer)ที่เป็น DNA สายสั้นๆ
เกาะกับดีเอ็นเอแม่แบบ(DNA
template)ในบริเวณที่ต้องการเพิ่มจำนวน
โดยไพรเมอร์จะมีลำดับเบสที่เป็นเบสคู่สม
กับลำดับเบสบนสายแม่แบบจึงสามารถเกาะ
กับอีเด็นเอแม่แบบได้อย่างจำเพาะ

วิดิโอการเพิ่มจำนวนDNAด้วยเทนนิคPCR -การเพิ่มปริมาณ DNA ด้วย PCR มี

สไลด์การเพิ่มจำนวนDNAด้วยเทคนิคPCR
วัตถุประสงค์
เพื่อให้ได้ DNA จำนวนมากเพียงพอสำหรับ
การนำไปใช้เช่นเป็นแหล่งของยีนสำหรับการ
โคลนยีนโดยใช้พลาสมิดของแบคทีเรียหรือ
ตรวจสอบยืนที่แทรกในพลาสมิดของเซลล์
แบคทีเรียที่ได้จากการโคลนยีนนั้นเป็นยีนที่ใส่
เข้าไปหรือไม่โดยนำผลิตภัณฑ์ PCR ไปหา
ขนาดหรือหาลำดับนิวคลีโอไทด์ต่อไปหรือเพิ่ม
ปริมาณ DNA สำหรับการตรวจสอบ DNA
เพื่อประยุกต์ใช้ในด้านต่าง ๆ
-สารเคมีที่เกี่ยวข้องในปฏิกิริยา PCR
1.Deoxynucleotides (dNTPs)
2. DNA polymerase
3.Primer
4.PCR buffer
5.Template
-หลักการทำงานของเทคนิคพีซีอาร์
เทคนิคนี้ใช้หลักการพื้นฐานในการเพิ่มดีเอ็นเอ
ด้วยการจำลองดีเอ็นเอสายใหม่จากสายดีเอ็นเอ
ที่เป็นต้นแบบหนึ่งสาย ด้วยเอนไซม์ดีเอ็นเอโพลี
เมอเรส (DNA polymerase) โดยใช้ดีเอ็นเอ
เริ่มต้นหรือไพรเมอร์ (Primer) 1 คู่ ทำให้
สังเคราะห์ดีเอ็นเอได้คราวละ 2 สายพร้อมกัน
ประกอบด้วยปฏิกิริยาสำคัญ 3 ขั้นตอน คือ

-ขั้นแร
ก
-ขั้นที่ ส Denatura
องAn t
-ขั้นที่ ส nealin ion
า
(Synt มExtensio
g
h n
และหมุ esis of ne
นเวียน w DN
สมของ ต่ A)
แต่ ละขั้ อเนื่ องกั นไป
จากขั้น น ภายใต้
ตอนที่ ตอน สภาวะ
cycle 1-3 ซึ่ ง ที่ เหมา
) ให้ผล นับเป็น ะ
เป็นคู่ ส ผ ลิ ต เป็น จำ น วน
มกั บดี
เท่ า เอ็ นเอ ดีเอ็ นเอสาย 1 รอบ (One
ที่ เป็นต้ คู่
เทคนิค นแบบ ที่ มีลำดับเบ
เพิ่ มขึ้ น ส
ประมา PCR เป็นกา เป็นสอ
ง
ณ 25- ร
40 รอ สังเคราะห์สา
บตามที่ ย
กำหนด DNA ซ้ำๆ
โดยสา
ย DNA
-ประโยชน์ของ PCR
1.ทางด้านการแพทย์ ได้แก่ การตรวจ
วินิจฉัยโรคโดยการตรวจหาเชื้อไวรัสหรือ
แบคทีเรียที่เป็นสาเหตุของโรค (เช่น โรค
เอดส์,วัณโรค,มาเลเรีย) การตรวจหายีนก่อ
มะเร็ง (เช่นมะเร็งเต้านมมะเร็งลำไส้ใหญ่)
ซึ่งประโยชน์ของ PCR ทางการแพทย์เหล่า
นี้ทําให้การวินิจฉัยโรคเพื่อป้องกันและรักษา
เป็นไปอย่างมีประสิทธิภาพมากยิ่งขึ้น

2.ทางด้านการเกษตร มีบทบาทมากในงาน
ด้านการปรับปรุงพันธุ์พืช การตรวจสอบ
สายพันธุ์พืช การตรวจวินิจฉัยโรคสายพันธุ์
พืชต้านทานโรค ซึ่งเทคนิค PCR นี้ช่วยให้
เข้าใจถึงพันธุกรรมของเชื้อโรคพืชและพืช
อาศัยตลอดจนการนำไปใช้ในการป้องกัน ในต่างประเทศ
ตรวจหาเชื้ อแอ นักวิทยาศาสตร์ได้พัฒนาเทค
นแทรกซ์ ซึ่งเป็
กำจัดโรคพืชที่เกิดจากเชื้อรา เเบคทีเรีย นเชื้ อโรคที่ใช้ผลินิคพีซีอาร์เพื่ อ
และไวรัสหรือเชื้อสาเหตุของโรคอื่ นๆ ตอาวุ ธชีวภาพ

จัดทำโดย กลุ่มที่2 (4/12)