Machine Translated by Google

J Nanopart Res (2017) 19: 235

DOI 10.1007/s11051-017-3904-9

GIẤY NGHIÊN CỨU

Một phương pháp đo màu mới dựa trên các cụm nano đồng có tính
chất giống peroxidase nội tại để phát hiện xanthine trong mẫu
huyết thanh

Zhengyu Yan & Qianqian Niu & Mingyao Mou & Yi Wu &
Tiểu Huyền Lưu & Shenghua Liao

Ngày nhận: 31 tháng 1 năm 2017 /Chấp nhận: 23 tháng 5 năm 2017 /Xuất bản trực tuyến: 29 tháng 6 năm 2017

# Springer Science+Business Media Dordrecht 2017

Tóm tắt Một chiến lược đơn giản để phát hiện xanthine (4~80°C). Cuối cùng, một phương pháp gián tiếp để cảm
trong các mẫu huyết thanh bằng cụm nano đồng (CuNC) có nhận xanthine đã được thiết lập vì xanthine oxidase có

hoạt tính nội tại giống peroxidase cao đã được báo cáo. thể xúc tác quá trình oxy hóa xanthine để tạo ra H2O2.
Đầu tiên, một phương pháp đơn giản, nhẹ nhàng và tiết Xan-thine có thể được phát hiện ở mức thấp tới 3,8 ×

kiệm thời gian để điều chế CuNC đã được phát triển, 10 7 mol L 1 với phạm vi tuyến tính từ 5,0 × 10 7 đến .
trong đó dithio-threitol (DTT) và albumin huyết thanh bò 1,0 × 10 4 mol L 1 . Những kết quả này chứng tỏ rằng
(BSA) lần lượt được sử dụng làm chất khử và chất ổn định. phương pháp đề xuất là nhạy và chính xác và có thể được
CuNC đã điều chế thể hiện sự phát huỳnh quang ở bước áp dụng thành công để xác định xanthine trong mẫu huyết
sóng 590 nm với hiệu suất lượng tử (QY) xấp xỉ 5,29%, thanh một cách hài lòng.

cường độ huỳnh quang của CuNC đã điều chế không có sự

thay đổi đáng kể khi được bảo quản trong điều kiện môi Từ khóa cụm nano đồng. Xanthin.
trường xung quanh với tuổi thọ là 1,75 μs. Hơn nữa, CuNC Giống Peroxidase. H2O2 . Dược phẩm

được điều chế có hoạt tính nội tại giống peroxidase cao
với Km thấp hơn (Km = 8,90 × 10 6 mol L 1 ) đối với
H2O2, điều này cho thấy rằng CuNC có ái lực cao hơn với
Giới thiệu
H2O2. So với enzyme tự nhiên, CuNC được tổng hợp có tính
xúc tác ổn định hơn trong khoảng pH (4,0~13,0) và nhiệt
Xanthine là một loại sản phẩm trao đổi chất của purine
độ rộng.
nucleotide và deoxynucleotide tồn tại ở động vật.
Mức độ cực kỳ bất thường của xanthine sẽ dẫn đến bệnh

gút, lắng đọng axit uric và sỏi thận, vì nó có thể bị

Tài liệu bổ sung điện tử Phiên bản trực tuyến của bài viết này
(doi:10.1007/s11051-017-3904-9) chứa tài liệu bổ sung, sẵn có cho
người dùng được ủy quyền.
Z. Yan : Q. Niu : M. Mou : Y. Wu : X. Liu : S. Liao (*)
Khoa Hóa phân tích, Đại học Dược phẩm Trung Quốc, 24 Tongjia
Lane, Quận Gulou, Nam Kinh 210009, Trung Quốc e-mail:
liaoshenghua@cpu.edu.cn
Z. Yan : Q. Niu : M. Mou : Y. Wu : X. Liu : S. Liao
Phòng thí nghiệm trọng điểm về kiểm soát chất lượng thuốc và cảnh
oxy hóa để tạo ra axit uric khi có mặt xanthine oxidase
(Wang và cộng sự 2011 ). Vì vậy, việc phát hiện xanthine
thường xuyên là điều không thể thiếu. Ngày nay, một số
phương pháp phân tích đã được phát triển để xác định
xanthine, bao gồm sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
(Baranowska và Zydroń 2002; Cooper và cộng sự 2006),
điện di mao quản (Caussé và cộng sự 2007) và hệ thống
enzyme (Shan và cộng sự 2009). Trong số các phương pháp
này, hệ thống enzym đã thu hút được sự chú ý nhiều hơn

giác dược, Bộ Giáo dục, 24 Tongjia Lane, Gulou, Nam Kinh 210009, do tính đặc hiệu và khả năng xúc tác hiệu quả của chúng
Trung Quốc
(Behera et al. 2016; Çevik 2016).
Machine Translated by Google
235 Trang 2 trên 12
Trong vài thập kỷ qua, ngày càng có nhiều sự chú ý
tập trung vào hoạt động của enzyme bắt chước của vật
liệu nano do kích thước, hình dạng, thành phần và đặc
tính phụ thuộc vào cấu trúc độc đáo của chúng (Tian và
cộng sự 2014; Wang và cộng sự 2013 , 2015b ) . Năm 2007,
Yan và cộng sự. báo cáo rằng các hạt nano từ tính Fe3O4
thể hiện hoạt động bắt chước enzyme nội tại, mở đường
cho việc sử dụng các hạt nano làm chất bắt chước en-
zyme (Gao và cộng sự 2007). Từ đó trở đi, nhiều loại vật
liệu nano bao gồm các hạt nano từ tính (Fe3O4, Fe3S4
(Ding et al. 2016)) và các cụm nano kim loại quý (AgNCs
(Chattopadhyay et al. 2014; Lu et al. 2011), AuNCs (Chen
et al. 2010; Liu và cộng sự 2014; Zhao và cộng sự 2014),
PtNC (Ke và cộng sự 2015; Zhang và cộng sự 2016)) được
báo cáo là có hoạt tính giống peroxidase. So với enzyme
tự nhiên, các cụm nano kim loại quý này có nhiều ưu
điểm, bao gồm độ ổn định cao hơn, độ nhạy thấp hơn
trước sự thay đổi của điều kiện bên ngoài, quy trình
chuẩn bị và tinh chế đơn giản hơn (Gao et al. 2007) .
Tuy nhiên, các cụm nano kim loại quý này đắt tiền, điều
này hạn chế khả năng ứng dụng thực tế của chúng ở một
mức độ nào đó.
Gần đây, cụm nano đồng (CuNC) được ứng dụng rộng rãi
trong lĩnh vực xúc tác, cảm biến và y sinh học (Li et
al. 2015b, 2016; Pergolese et al. 2006; Wang et al.
2013, 2015a) do tính dẫn điện tuyệt vời của chúng và khả
năng tương thích sinh học. Theo hiểu biết của chúng
tôi, có một số nhóm đã báo cáo rằng CuNC có hoạt tính
bắt chước enzyme (Hu và cộng sự 2013; Wang và cộng sự
2015b). Tuy nhiên, rất khó để chuẩn bị các cụm nano đồng
ổn định trong dung dịch nước vì bề mặt của các cụm nano
đồng sẽ bị oxy hóa trong thời gian ngắn khi chúng tiếp
xúc với không khí (Li et al. 2015b) . Vì vậy, việc phát
triển một phương pháp rẻ tiền và đơn giản để điều chế
CuNC huỳnh quang có độ ổn định cao và được kiểm soát
kích thước tốt với hoạt tính bắt chước en-zyme vẫn là
một thách thức.
Để khắc phục nhược điểm trên, chúng tôi đã báo cáo
phương pháp một nồi tương đối dễ dàng để điều chế CuNC
ổn định hòa tan trong nước bằng cách sử dụng DTT và BSA
làm chất khử và chất ổn định tương ứng. CuNC được điều
chế có kích thước trung bình khoảng 1,25 ± 0,03 nm và
thể hiện huỳnh quang màu cam với hiệu suất lượng tử
cao 5,29%. Hơn nữa, CuNC được điều chế cho thấy hoạt
tính xúc tác peroxi-dase vượt trội, có thể xúc tác quá
trình oxy hóa TMB cơ chất peroxidase để tạo ra màu xanh
benzidine khi có mặt H2O2 . Dựa trên thực tế là xanthine
oxidase có thể oxy hóa xanthine để tạo ra H2O2, chúng
tôi đã phát triển một phương pháp đo màu gián tiếp mới để phátđưa
J Nanopart Res (2017) 19: 235
xanthine nhờ hoạt động peroxidase nội tại của CuNC. Kết
quả đã chứng minh rằng phương pháp đề xuất có độ nhạy,
chính xác và phù hợp để xác định xanthine trong mẫu
huyết thanh (Sơ đồ 1)
(Feng và cộng sự 2015).
Nguyên liệu và phương pháp
Thuốc thử
'
Albumin huyết thanh bò (BSA), 3,3 ,5,5′-
tetramethylbenzidine (TMB), dithiothreitol (DTT) được
mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Oddfoni Nam
Kinh. Đồng sunfat (CuSO4), hydro per-oxit (30%),
xanthine và natri hydroxit được mua từ Công ty TNHH
thuốc thử hóa học Nam Kinh. Peroxidase củ cải ngựa (HRP)
và xanthine oxyase (XOD) được đặt hàng từ Công ty TNHH
Công nghệ sinh hóa Macklin Thượng Hải và Công ty TNHH
Công nghệ sinh học Jin Sui Thượng Hải, tương ứng. Các
ống ly tâm siêu lọc 15 mm 30 KD được mua từ millipore.
Tất cả các mẫu được chuẩn bị bằng nước cất hai lần
(DDW).
Thiết bị
Phổ huỳnh quang được ghi lại trên máy quang phổ huỳnh
quang (Fluoromax-4, Horiba). Sự phân rã huỳnh quang
được giải quyết theo thời gian thu được bằng kỹ thuật
đếm photon đơn tương quan thời gian (TCSPC)
(Fluoromax-3, Horiba, Hoa Kỳ). Phổ hấp thụ UV-Vis được
ghi lại bằng máy quang phổ tử ngoại (UV-2100, Shimadzu,
Nhật Bản). Hình thái của các mẫu được quan sát bằng
kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM, Tecnai G2F20 S-
TWIN, FEI, UK). Nhiễu xạ tia X (XRD) được thực hiện
bằng Máy quang phổ tia X Rigaku D/max 2550VB/PC. Quang
phổ quang điện tử tia X (XPS) được thực hiện bằng Máy
quang phổ điện tử XSAM 800 (Kratos, Vương quốc Anh) với
bức xạ MgKα đơn sắc.
Tổng hợp CuNC ổn định BSA
CuNC ổn định BSA được tổng hợp trong dung dịch nước.
Thông thường, 100 mg BSA được thêm vào 10 mL dung dịch
CuSO4 (5 × 10 3 mol L 1 ) khi khuấy mạnh, sau đó giá
trị pH của hỗn hợp được điều chỉnh thành 12,0 bằng dung
dịch NaOH (1,0 mol L 1 ). Sau 10 phút, 40 mg DTT được
hiệnvào và giá trị pH của
Machine Translated by Google
J Nanopart Res (2017) 19: 235
Sơ đồ 1 Sơ đồ của
Chuẩn bị CuNC
dung dịch hỗn hợp được điều chỉnh thành 7,0. Sau đó,
dung dịch thu được chứa CuNC được tinh chế qua ống
ly tâm siêu lọc 30 KD để loại bỏ các chất không phản
ứng. Cuối cùng, CuNC tinh khiết được pha loãng thành
50 mL bằng nước và bảo quản ở 4°C trong tủ lạnh để sử
dụng.
Đo hoạt tính giống peroxidase của CuNC
Hoạt tính giống peroxidase của CuNC đã được thử
nghiệm bằng cách sử dụng TMB làm chất nền tạo màu,
các thí nghiệm được thực hiện như sau: trong lò phản
ứng 10 mL, 0,30 mL CuNC hoặc 0,50 ng HRP đã được thêm
vào một thể tích dung dịch hỗn hợp nhất định tương
ứng chứa 0,2 mol L 1 NaAc và 2,5 × 10 4 mol L 1
TMB tương ứng. Sau đó, H2O2 (5 × 10 5 mol L 1 đối
với CuNC và 5 × 10 6 mol L 1 đối với HRP) được thêm
vào dung dịch hỗn hợp trên, kiểm soát dung dịch hỗn
hợp cuối cùng đến 3,0 mL. Dung dịch hỗn hợp được ủ ở
50 °C (đối với CuNC) hoặc 37 °C (đối với HRP) trong
10 phút, sau đó giá trị pH của dung dịch hỗn hợp nêu
trên được điều chỉnh thành 3,5 (đối với CuNC) hoặc
3,0 (đối với HRP). ). Độ hấp thụ của dung dịch hỗn
hợp được theo dõi ở bước sóng 652nm bằng máy quang
phổ UV-2100 SHIMADZU. Hoạt độ tương đối được tính theo công thức sau:
Hoạt động tương đối A1ð Þ¼ % 100%
A2
trong đó A2 là độ hấp thụ cực đại, A1 là độ hấp thụ
của mẫu được đo ở cùng điều kiện.
Trang 3 trên 12 235
Cơ chế phản ứng và phân tích động học
Động học phản ứng cho quá trình oxy hóa xúc tác TMB
đã được nghiên cứu bằng cách ghi lại phổ hấp thụ ở
bước sóng 652nm với khoảng thời gian 1 phút ở chế độ
động học quét bằng máy quang phổ SHIMADZU UV-2100.
Trừ khi được nêu thêm, các phản ứng được thực hiện ở
điều kiện phản ứng tối ưu của riêng chúng với sự có
mặt của các nồng độ TMB và H2O2 khác nhau. Các thông
số động học biểu kiến được tính toán dựa trên phương
trình Michaelis-Menten:
Vmax ½ S
υ ¼
Km þ ½ S
Trong đó υ là vận tốc ban đầu, Vmax là vận tốc phản
ứng cực đại, [S] là nồng độ cơ chất và Km là hằng số
Michaelis. Km và Vmax thu được bằng phương pháp vẽ
đồ thị Lineweaver–Burk (Gao và cộng sự 2007). Cơ chế
này cũng được thảo luận bằng cách thay đổi nồng độ
TMB ở nồng độ H2O2 cố định trong điều kiện phản ứng
tiêu chuẩn.
Xét nghiệm xanthine
Thử nghiệm xanthine được thực hiện như sau: (a) 60
μL dung dịch đệm 1 U mL-1 XOD và 300 μL dung dịch đệm
NaAc 0,2 mol L-1 (pH 7,0) chứa xanthine với các nồng
độ khác nhau (0,5, 2,0, 6,0, 10,0, 20,0, 40,0, 60,0,
80,0, 100,0, 200,0, 400,0 μM) được ủ ở 37°C trong 45
phút; (b) 300 μL dung dịch 2,5 × 10 3 mol L 1 TMB,
300 μL dung dịch CuNC và 2040 μL dung dịch
Machine Translated by Google

235 Trang 4 trên 12 J Nanopart Res (2017) 19: 235

Dung dịch đệm NaAc 0,2 mol L-1 (pH 3,5) được thêm vào Quả sung. S2C và D). Xem xét việc tiết kiệm vật liệu, chúng tôi

120 µL dung dịch phản ứng xanthine; (c) kết quả thu được chọn 100 mg làm trọng lượng tăng thêm BSA tối ưu và
dung dịch hỗn hợp được ủ ở 50°C trong 10 phút trong 5 × 10 3 mol L 1 là nồng độ bổ sung tối ưu của
cách thủy và độ hấp thụ của phản ứng cuối cùng dung dịch CuSO4 . So với sự tổng hợp của
dung dịch được đo ở bước sóng 652 nm. CuNC được báo cáo bởi nhóm Xu và nhóm Ai (Hu

et al. 2013; Vương và cộng sự. 2015b), quá trình tổng hợp của chúng tôi

thật đơn giản, nhẹ nhàng và tiết kiệm thời gian.

kết quả và thảo luận Ảnh TEM của CuNC được điều chế ở điều kiện tối ưu được

hiển thị trong Hình 1a, b, chứng minh rằng CuNC thu được có

Tổng hợp và xác định đặc tính của CuNC dạng hình cầu

không có tập hợp và đường kính trung bình của

Ban đầu, chúng tôi đã cố gắng tổng hợp CuNC bằng cách sử cụm nano là 1,25 ± 0,03 nm (n = 91), Là kim loại quý

dụng nhiều nguồn lưu huỳnh khác nhau (như cysteine, NC là một lớp con của NP có kích thước lõi <2 nm và

glutathione, N-actyl-L-cystine, thiocarbamide, axit ascorbic và DTT).thường chứa <150 nguyên tử kim loại, kết quả TEM

Kết quả cho thấy cường độ huỳnh quang của CuNC được điều đã xác nhận sự hình thành CuNC siêu nhỏ (Gu et al.

chế bằng cách sử dụng DTT làm nguồn lưu huỳnh là 2015; Xun và cộng sự. 2013; Zhang và cộng sự. 2010). Ngoài ra, không

tối đa (thể hiện trong hình S1A), cho thấy dithio-threitol các rìa mạng rõ ràng đã được quan sát thấy trong CuNC như

vượt trội hơn so với các nguồn lưu huỳnh khác trong thể hiện trong hình 1b, trong đó gợi ý pha tinh thể của

chuẩn bị CuNC. Khẳng định vai trò của BSA trong CuNC thu được là vô định hình. Kết quả được xác nhận lại

tăng cường cường độ huỳnh quang và độ ổn định của một lần nữa bằng kỹ thuật XRD, như trong Hình 2.

CuNC, chúng tôi đã tổng hợp CuNC chỉ bằng DTT hoặc BSA S3, không có đỉnh rõ ràng trong khoảng từ 10 đến 80°,

hoặc cả DTT và BSA tương ứng là tài nguyên. BẰNG chỉ ra rằng CuNC là vô định hình. CuNC được tổng hợp không

được hiển thị trong Hình S1B, cường độ huỳnh quang của CuNC có cấu trúc tinh thể, có thể

được tổng hợp bằng cách sử dụng cả DTT và BSA là là kết quả của BSA được hấp phụ trên chất rắn CuNCs

lượng tử phát quang cao nhất và tối đa bề mặt.

năng suất đạt 5,29%, cao hơn so với Hơn nữa, các thành phần nguyên tố của CuNC

thu được CuNC chỉ sử dụng DTT hoặc BSA làm tài nguyên. được nghiên cứu bằng kỹ thuật XPS. Như được trình bày lại

Những kết quả này cho thấy cường độ huỳnh quang và trong Hình 1c, sáu đỉnh chính của S(2p), C(1s),

Hiệu suất lượng tử huỳnh quang của CuNC được cải thiện N(1s), O(1s), Cu(2p) và Na(1s) rõ ràng đã xuất hiện

nhờ sự hợp tác của DTT và BSA. trong phổ khảo sát, chỉ ra rằng CuNC được điều chế chủ yếu

Để cải thiện hơn nữa tính chất phát quang bao gồm C, N,

của CuNC, ảnh hưởng của nhiều yếu tố khác nhau, bao gồm cả độ pH O, S, Cu và Na (Luo và cộng sự 2015; Yang và cộng sự 2014).

giá trị của dung dịch cuối cùng, trọng lượng tăng thêm của DTT, Để nghiên cứu sâu hơn về trạng thái oxy hóa của Cu, đỉnh

khối lượng BSA cộng thêm và nồng độ CuSO4 khuếch đại được trình bày trong Hình 1d. Các ràng buộc

dung dịch, về cường độ huỳnh quang của CuNC là vị trí năng lượng của Cu 2p 3/2 và Cu 2p 1/2 là

được điều tra một cách có hệ thống. Như được hiển thị trong Hình S2A, khi lần lượt nằm ở 932,1 và 951,9 eV và không

giá trị pH của dung dịch cuối cùng được tăng từ 1,0 các đỉnh khác biệt khoảng 942 eV đã được quan sát thấy. Những cái này

đến 7.0, cường độ huỳnh quang của CuNC thu được kết quả chứng minh CuNC thu được chủ yếu là

đã dần được củng cố. Ngược lại, cường độ phát huỳnh quang ly bao gồm Cu0 và Cu+ (Ding et al. 2016; Feng

của CuNC thu được tăng dần et al. 2015).

giảm dần khi tăng giá trị pH của dung dịch cuối cùng từ 7,0 Các nhóm chức năng bề mặt của CuNC được hoạt hóa bằng

lên 12,0. Trong hình S2B, huỳnh quang phổ FT-IR. Như được hiển thị trong Hình S4,

cường độ của CuNC đã chuẩn bị tăng dần và sau đó giảm dần đỉnh nằm ở 3299 cm-1 có thể được cho là do sự hấp thụ đặc

khi trọng lượng DTT tăng thêm tính của rung động kéo dài OH, trong khi

tăng từ 10 lên 200 mg. Cường độ huỳnh quang Đỉnh dao động kéo giãn C=O nằm ở

của CuNC đạt mức cao nhất khi được thêm vào 1666 cm 1 . Những điều này tiết lộ rằng bề mặt của thu được

trọng lượng của DTT là 40 mg. Các xu hướng tương tự về ảnh CuNC chứa các nhóm cacboxylic. Tương tự, các đỉnh

hưởng của hàm lượng BSA và CuSO4 đến cường độ huỳnh quang định vị ở 2950 và 1390 cm 1 được gán cho

của CuNC cũng được quan sát thấy (thể hiện ở Rung động kéo dài CH và rung động uốn CH,
Machine Translated by Google
J Nanopart Res (2017) 19: 235
Hình 1 Ảnh TEM của CuNC (a), hình nhỏ: phân bố kích thước hạt của CuNC; HRTEM của CuNC (b); phổ XPS (c); và phổ Cu 2p (d) của CuNC thu
được
tương ứng, và đỉnh ở vị trí 3064 cm-1 là do dao động
kéo giãn NH. Do đó, người ta kết luận rằng CuNC được
điều chế có các nhóm chức đặc trưng bao gồm –COOH,
và –NH2, có nguồn gốc từ các phối tử bảo vệ của BSA (Liao
et al. 2015a; Luo et al. 2015), và kết quả phù hợp với
kết quả mô tả đặc tính XRD. Hơn nữa, so với phổ FT-IR
của DTT thuần túy, đỉnh dao động kéo dài SH nằm ở 2553
cm-1 biến mất trong phổ của CuNC, cho thấy DTT đã được
nối thành công với bề mặt của CuNC (Hu et cộng sự 2017).
Để khám phá các tính chất quang học của CuNC, người
ta đã ghi lại phổ UV-Vis và huỳnh quang. Dung dịch CuNC
được tổng hợp có màu vàng nhạt dưới ánh nắng mặt trời
trong khi nó phát ra huỳnh quang màu cam nhạt dưới đèn
UV (Hình 2, hình nhỏ). Theo quang phổ phát xạ (Hình 2),
rõ ràng chúng ta có thể quan sát thấy đỉnh phát xạ huỳnh
quang mạnh tập trung ở bước sóng 590nm trong khi dung
dịch CuNC tổng hợp bị kích thích bởi ánh sáng cực tím
có bước sóng 380 nm. Một cách thú vị,
Trang 5 trên 12 235
các đỉnh phát xạ không có sự thay đổi khi bước sóng
kích thích thay đổi (Hình S5), khác với hầu hết các CuNC
OH (Liao và cộng sự 2015b; Luo và cộng sự 2015; Ren và cộng sự.
2015). Điều quan trọng là cường độ huỳnh quang của CuNC
đã chuẩn bị được bảo quản trong điều kiện môi trường
xung quanh trong một tháng cho thấy không có thay đổi
đáng kể (Hình 3a). Phổ huỳnh quang được phân giải theo
thời gian của CuNC cho thấy thời gian tồn tại huỳnh
quang là 1,75 μs (Hình 3b), dài hơn so với CuNC được
báo cáo trong các tài liệu khác (Đặng và cộng sự 2016).
Những điều này chứng tỏ CuNC được tổng hợp có độ ổn định
tuyệt vời. Nó chứng minh CuNC được tổng hợp có độ ổn
định tốt hơn CuNC được tổng hợp bởi Hu et al. (2017).
Phổ hấp thụ UV-Vis (Hình 2) cho thấy đỉnh hấp thụ
protein điển hình có nguồn gốc từ các gốc thơm và dị
vòng của BSA ở bước sóng 275 nm (Li et al. 2015a), Các
dải hấp thụ chuyển tiếp quang học giống phân tử này
trong sự hấp thụ UV-Vis quang phổ là do cấu trúc dải
năng lượng điện tử gần như liên tục và hiệu ứng giam
cầm lượng tử của NC,
Machine Translated by Google
235 Trang 6 trên 12
Hình 2 UV-Vis và phổ huỳnh quang của CuNC. Hình nhỏ: ảnh chụp dưới ánh sáng
ban ngày (trái) và tia UV 365nm (phải)
khác biệt đáng kể so với các hạt nano lớn, điều này cho
thấy sự hình thành CuNC (Chandirasekar và cộng sự 2016;
Rao và cộng sự 2016).
So sánh hoạt tính giống peroxidase giữa
CuNC được tổng hợp, enzyme tự nhiên và các CuNC
khác
Để xác nhận hoạt tính giống peroxidase của CuNC, TMB đã
được chọn làm chất nền cho quá trình oxy hóa xúc tác,
được sử dụng để nghiên cứu các hoạt động giống
peroxidase của các vật liệu nano khác (Ding et al. 2016; Yang et al TMB
hóa . bằng cả CuNC và HRP. Dễ dàng nhận thấy đường
2016). Như được hiển thị trong Hình 4, CuNC có thể xúc
tác quá trình oxy hóa TMB khi có mặt H2O2 để tạo ra dung
dịch màu xanh lam với độ hấp thụ tối đa ở bước sóng 652
nm, bắt nguồn từ quá trình oxy hóa TMB (Liu và cộng sự
2016). Đáng chú ý, sự thay đổi màu của dung dịch TMB là
không đáng kể khi có mặt CuNC, H2O2 hoặc
Hình 3 Sự phụ thuộc thời gian của cường độ huỳnh quang ở bước sóng 590 nm (λex = 380 nm) của CuNC (a) và phân tích tuổi thọ huỳnh quang được phân giải theo thời
gian của CuNC (b)
J Nanopart Res (2017) 19: 235
Hình 4 Phổ hấp thụ của dung dịch TMB trong các hệ phản ứng khác nhau
H2O2 và BSA. Những kết quả này chỉ ra rằng CuNC có hoạt
tính giống peroxidase đối với các chất nền peroxidase
điển hình.
Để nghiên cứu đặc tính xúc tác của CuNC, điều kiện
phản ứng tối ưu đã được khám phá ngay từ đầu. Như
được hiển thị trong Hình S6, điều kiện phản ứng tối ưu
là pH 3,5 và 50 °C đối với CuNC và pH 3,0 và 37 °C đối
với HRP. Hơn nữa, các thông số động học ở trạng thái ổn
định biểu kiến được đo ở điều kiện phản ứng tối ưu.
Như được hiển thị trong Hình 5a ~ d, các đường cong
Michaelis-Menten điển hình thu được trong quá trình oxy
cong Michaelis-Menten của CuNC tương tự như đường cong
của HRP. Tuy nhiên, nồng độ của H2O2 là 1,0 × 10 4 mol
L 1 khi tốc độ phản ứng ban đầu không còn tăng đối với
CuNC (Hình 5a), cao hơn so với HRP (2,5 × 10 5 mol L 1
hiển thị trong Hình 5b). Nó
Machine Translated by Google

J Nanopart Res (2017) 19: 235 Trang 7 trên 12 235

Hình 5 Thử nghiệm động học ở trạng thái ổn định và cơ chế xúc của CuNC với H2O2 làm chất nền (e) và TMB làm chất nền (f); và
tác của CuNC. a~h Ảnh hưởng của nồng độ H2O2 hoặc TMB đến tốc đồ thị hoạt động tương hỗ kép của CuNC với nồng độ của một chất
độ phản ứng oxy hóa TMB được xúc tác bởi CuNC hoặc HRP được thể nền (H2O2 hoặc TMB) cố định và chất nền kia thay đổi (g, h)
hiện tương ứng trong Hình 5a–d; đồ thị Lineweaver–Burk
Machine Translated by Google

235 Trang 8 trên 12 J Nanopart Res (2017) 19: 235

Bảng 1 So sánh các phương pháp dựa trên cụm nano hoặc hạt nano khác nhau để phát hiện xanthine

Phương pháp Hạt nano hoặc cụm nano Phạm vi tuyến tính (μM) Giới hạn phát hiện (μM) Độ chọn lọc Tham chiếu

Phương pháp đo màu CuNC 0,50 ~ 100 0,38 Tốt Công việc hiện tại

Se-g-C3N4 0,16 ~ 40 0,75 Tốt (Qiao và cộng sự 2015)

BSA-AuNC 1,00~200 0,50 Tốt (Wang và cộng sự 2011)

Phương pháp điện hóa GNPs–SWCNH 2,00~37 0,72 Tốt (Trương và cộng sự 2012)

PAP/RGO/GC 1,00~120 0,50 Tốt (Mu và Shi 2013)

chứng minh rằng nồng độ H2O2 cao hơn
là cần thiết để đạt được mức tối đa
tốc độ ban đầu trong quá trình oxy hóa xúc tác H2O2
bởi CuNC. Tương tự, để đạt cực đại
tốc độ ban đầu, nồng độ TMB cần thiết cho
17 lần, điều này cho thấy mối quan hệ với TMB của
CuNC cao hơn HRP. Tuy nhiên,
Km rõ ràng của CuNC thu được đối với TMB và
H2O2 thấp hơn so với báo cáo của các nhóm khác
(Hu và cộng sự 2013; Wang và cộng sự 2015b), những kết quả này

CuNC (Hình 5c) thấp hơn so với HRP (Hình 5d).
Hành vi Michaelis-Menten của CuNC trong
Phản ứng xúc tác cũng đã được xác nhận bởi
Phương pháp vẽ đồ thị Lineweaver–Burk. Có thể kết luận
nghịch đảo của lãi suất ban đầu là trực tiếp
tỉ lệ nghịch với nồng độ
của chất nền (thể hiện trong hình 5e, f). Hơn nữa,
giá trị của Km và Vmax được tính toán từ Lineweaver–
đã chứng minh rằng CuNC được tổng hợp có
khả năng xúc tác tốt hơn đối với TMB và H2O2 ,
cho thấy CuNC có độ nhạy tốt hơn trong
phát hiện H2O2.
Để nghiên cứu sâu hơn cơ chế phản ứng xúc tác của
CuNC, hiệu suất xúc tác của CuNC
về phía H2O2 được đo theo phản ứng tối ưu
điều kiện có nồng độ TMB khác nhau

Các ô Burk được liệt kê trong Bảng 1. Từ Bảng 1, và nồng độ cố định của H2O2 hoặc ngược lại.
K biểu kiến của CuNCtôiđối với H2O2 Các ô đối ứng kép thu được đã được hiển thị
(8,90 × 10 6 mol L 1 ) rõ ràng là cao hơn mức đó trong hình 5g, h. Rõ ràng là quan sát thấy rằng có
của HRP (2,72 × 10 6 mol L 1 ), có nghĩa là cao hơn là ba đường dốc song song của các đường dữ liệu trong này

nồng độ H2O2 cho CuNC là cần thiết để số liệu. Kết quả đã làm sáng tỏ rằng chất xúc tác
để có được một hoạt động tối đa. Kết quả chỉ ra cơ chế của CuNC đối với H2O2 là một cơ chế điển hình
CuNC có ái lực thấp hơn HRP khi có H2O2 cơ chế bóng bàn (Jiang và cộng sự 2015). Ở nơi khác
được sử dụng làm chất nền. Ngược lại, Km biểu kiến của nói cách khác, CuNC có thể phản ứng với chất nền đầu tiên

CuNC đối với TMB (1,38 × 10 6 mol L 1 ) là và sau đó thả nó ra trước khi phản ứng với thứ hai
thấp hơn HRP (2,48 × 10 5 mol L 1 ) khoảng cơ chất.

Hình 6 Ảnh hưởng của pH a và nhiệt độ b đến độ ổn định của BSA-CuNC và HRP
Machine Translated by Google

J Nanopart Res (2017) 19: 235 Trang 9 trên 12 235

giá trị pH khác nhau. Hình 6a cho thấy ảnh hưởng của
các giá trị pH trong môi trường đến hoạt động tương
đối của HRP và CuNC tự nhiên. Có thể dễ dàng nhận thấy
rằng hoạt tính tương đối của HRP cao hơn 70% khi giá
trị pH của dung dịch nước phản ứng thay đổi trong
khoảng từ 3,0 đến 5,0. Trong khi đó, hoạt tính tương
đối của CuNC cao hơn 70% khi giá trị pH của dung dịch
nước phản ứng thay đổi từ 4,0 thành 13,0.
Những kết quả này chứng minh CuNC được điều chế bằng
Sơ đồ 2 Sơ đồ minh họa phát hiện so màu của xanthine bằng phản
phương pháp đề xuất của chúng tôi có thể duy trì hoạt
ứng màu xúc tác XOD và CuNC
động xúc tác trong phạm vi pH rộng từ 4,0 đến 13,0,

So sánh độ bền của CuNC và enzyme tự nhiên phạm vi rộng hơn so với enzyme tự nhiên (như HRP) hoặc
các CuNC khác (Hu et al. 2013 ; Wang và cộng sự 2015b).

Độ bền của enzyme có vai trò quan trọng đối với phản Ngoài ra, ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường đến

ứng xúc tác. Là một loại vật liệu nano vô cơ sinh học, hoạt tính xúc tác của CuNC cũng được nghiên cứu. Như

CuNC được kỳ vọng sẽ ổn định hơn các enzym tự nhiên. được hiển thị trong Hình 6b, hoạt tính xúc tác của

Để xác nhận giả định này, hoạt tính tương đối của HRP CuNC rõ ràng không thay đổi khi nhiệt độ môi trường

và CuNC được đo ở nhiệt độ khác nhau trong các môi tăng từ 4 lên 80 ° C.

trường khác nhau với Tuy nhiên, hoạt tính xúc tác của HRP bị giảm

Hình 7 Phổ hấp thụ UV-Vis của hệ thống TMB/CuNCs khi bổ sung các nồng độ H2O2 (b) và xanthine (d): A0 và A lần lượt là độ hấp
nồng độ khác nhau của H2O2 (a) và xanthine (c). Mối quan hệ tuyến thụ của hệ TMB/CuNCs ở bước sóng 652 nm khi không có mặt và có
tính giữa (A-A0)/A0 và mặt H2O2 hoặc xanthine
Machine Translated by Google

235 Trang 10 trên 12 J Nanopart Res (2017) 19: 235

Bảng 2 Kết quả phát hiện xanthine trong mẫu huyết thanh trắng

Thêm Thành lập RSD Sự hồi phục (%)

(10 6 mol L 1 ) (10 6 mol L 1 ) (%, n = 3)

25.066 22.605 6,9 90,2

50.132 46.455 3.1 92,7

75.197 70.038 1.8 93,1

nồng độ xanthine, độ hấp thụ ở bước sóng 652 nm trong

hệ thống cảm biến tăng lên (Hình 7c). Ngoài ra, mối quan
Hình 8 Tỷ lệ tăng độ hấp thụ ở bước sóng 652 nm của hệ thống TMB/ hệ tuyến tính tốt giữa độ hấp thụ và nồng độ xanthine
CuNCs với sự có mặt của 5 μM các chất cản trở khác nhau và 0,5 μM
dao động từ 5,0 × 10 7 đến 1,0 × 10 4 mol L 1 (Hình
xanthine. A0 và A lần lượt là độ hấp thụ của hệ TMB/CuNCs ở bước
7d). Phương trình hồi quy tuyến tính là (A-A0)/A0 =
sóng 652 nm khi không có và có nhiễu hoặc xanthine
0,0106c + 0,0415 (R2 = 0,9928) và LOD để phát hiện
xanthine A = 0,00192c + 0,187(R2 = 0,9939) là 3,8 ×
10 7 mol L 1 các kết quả thể hiện trong phương pháp .

mạnh khi nhiệt độ môi trường cao hơn 40°C. Những kết
quả này cho thấy CuNC được điều chế bằng phương pháp
đề xuất của chúng tôi có độ bền tuyệt vời trong phạm vi
nhiệt độ và pH rộng của môi trường, khiến nó trở thành
một công cụ phù hợp hơn để ứng dụng trong lĩnh vực hóa
học môi trường và y sinh.
Xét nghiệm xanthine sử dụng CuNC
Trên cơ sở đặc tính xúc tác peroxidase nội tại của
CuNC, một phương pháp đo màu mới để phát hiện xanthine
đã được thiết kế (Sơ đồ 2). Đầu tiên, xanthine bị oxy
hóa bởi XOD để tạo ra H2O2. Sau đó, TMB bị oxy hóa thành
màu xanh benzidine nhờ sự xúc tác của CuNC với sự có mặt
của H2O2. Hình 7a thể hiện phổ hấp thụ UV-Vis của hệ TMB/
CuNCs khi có mặt H2O2 với các nồng độ khác nhau. Độ hấp
này sẽ thích hợp để phát hiện xanthine. Như được hiển
thị trong Bảng 1, phương pháp phát hiện được đề xuất
của chúng tôi dựa trên CuNC có giới hạn phát hiện thấp
hơn so với các phương pháp khác được báo cáo, trong đó
các hạt nano khác (chẳng hạn như GNPs-SWCNHs và Se-g-
C3N4, et al.) hoặc các cụm nano (chẳng hạn như AuNC và
CuNC) được sử dụng làm chất xúc tác.
Trong khi đó, các phương pháp đề xuất cho thấy tính
đặc hiệu tốt đối với xanthine. Kết quả kiểm tra nhiễu
cho thấy độ hấp thụ của hệ thống TMB/CuNCs thay đổi
không đáng kể khi có các nhiễu (như glucose, glutamate,
lactate, ascorbic, L-glutathione khử và axit uric)
(Hình 8) . Tính khả thi của phương pháp phát hiện xan-
thine trong mẫu thực được đề xuất cũng được thực hiện
bằng phương pháp thêm chuẩn. Những kết quả này đã chứng
minh sự phục hồi

thụ ở bước sóng 652 nm của hệ thống TMB/CuNCs tăng lên Tỷ lệ phương pháp phát hiện xanthine được đề xuất nằm
khi tăng nồng độ trong khoảng từ 90,2 đến 93,1% với RSD đạt yêu cầu thấp
hơn 6,9% (Bảng 2), cho thấy phương pháp này có độ chính
của H2O2, và mối quan hệ tuyến tính tốt giữa độ hấp thụ xác tốt và phù hợp để xét nghiệm xanthine trong huyết
và nồng độ của H2O2 đạt được khi nồng độ H2O2 thay đổi thanh thực. mẫu.
từ 5,0 × 10 7 đến 1,0 × 10 4 mol L 1 (Hình 7b). Phương

trình hồi quy tuyến tính là (A-A0)/A0 = 0,0136c + 0,0308

(R2 = 0,9920) và giới hạn phát hiện (LOD) đối với H2O2 Kết luận

tính toán theo phương pháp tín hiệu trên tạp âm (S/N =

3) là 2,4 × 10 7 mol L 1 (Wang và cộng sự 2011). Tóm lại, một CuNC mới đã được điều chế thông qua phương
pháp một bình đơn giản sử dụng dithiothreitol làm chất
Bởi vì xanthine có thể bị oxy hóa để tạo ra H2O2 với khử và albumin huyết thanh bo-vine làm chất ổn định.

sự có mặt của xanthine oxyase, nên một cảm biến mới để CuNC thu được thể hiện tính ổn định phát quang tuyệt
phát hiện xanthine trong các mẫu máu đã được thiết kế vời trong dung dịch nước và có hoạt tính nội tại giống
dựa trên CuNC giống peroxidase. Với sự gia tăng của peroxidase. Tận dụng hoạt động giống peroxidase của CuNC, một
Machine Translated by Google
J Nanopart Res (2017) 19: 235
cảm biến mới để phát hiện xanthine đã được thành lập. Kết quả chỉ ra rằng cảm
biến được thiết kế có độ đặc hiệu tốt và độ nhạy tuyệt vời đối với xanthine,
phù hợp để phân tích xanthine trong các mẫu huyết thanh thực.
Lời cảm ơn Công trình này được hỗ trợ bởi Quỹ Thanh niên Khoa học Tự
nhiên Quốc gia Trung Quốc (Số tài trợ 21601206), Quỹ Khoa học Tự nhiên
Quốc gia Trung Quốc (Số tài trợ 51403237), Quỹ Khoa học Quốc gia Giang
Tô (Số tài trợ BK20140658), quỹ của Dự án Đổi mới Sinh viên Đại học về
R&D Thuốc Mới được tài trợ (Số J1030830) và Chương trình Đào tạo Doanh
nhân Đổi mới dành cho Sinh viên Đại học Quốc gia (Số G15019).
Tuân thủ các tiêu chuẩn đạo đức
Xung đột lợi ích Các tác giả tuyên bố rằng họ không có xung đột lợi ích.
Người giới thiệu
Baranowska I, Zydroń M (2002) Mối quan hệ định lượng về khả năng duy
trì cấu trúc của xanthines trong hệ thống RP HPLC với các pha tĩnh
Chromolith RP-18e mới. Hóa chất sinh học hậu môn 373(8):889–892
Behera TK, Sahu SC, Satpati B, Túi B, Sanjay K, Jena BK (2016)
Cấu trúc nano bạch kim phân nhánh trên graphene khử: một bộ chuyển
đổi tuyệt vời để cảm nhận hydro peroxide không cần enzyme và cảm
biến sinh học của xanthine. Điện cực Acta 206: 238–245
Caussé E, Pradelles A, Dirat B, Negresalvayre A, Salvayre R, Couderc F
(2007) Xác định đồng thời allantoin, hypoxanthine, xanthine và
axit uric trong huyết thanh/huyết tương bằng CE. Điện di 28(3):381–
387 Çevik S (2016) Cảm biến sinh học
Xanthine dựa trên GCPE lai nanocomposite biến tính XO/AuNP/PtNP/ MWCNT.
Công nghệ sinh học Biotechnol Eng 21(2):314–320
Chandirasekar S, Chandrasekaran C, Muthukumarasamyvel T, Sudhandiran G,
Rajendiran N (2016) Các cụm nano vàng huỳnh quang kích thước
lượng tử được mạ nhiệt độ hoạt động bề mặt sinh học để tạo ảnh
sinh học in vivo trong phôi cá ngựa vằn. Giao diện sinh học Colloids
Surf B 143:472
Chattopadhyay S, Dey SK, Maiti PK, Dolai D (2014) Một công cụ mới để nắm
bắt và phát hiện bệnh thương hàn bằng cách sử dụng vật liệu
nanocomposite có nhãn Ag. JBIC Tạp chí Hóa học Vô cơ Sinh học
19(8):1377–1384 Chen L, Zeng G,
Zhang Y, Tang L, Huang D, Liu C, Pang Y, Luo J (2010) Phát hiện dấu vết
picloram bằng cảm biến miễn dịch điện hóa dựa trên cụm nano vàng
ba chiều. Hóa sinh hậu môn 407(2):172–179 Cooper N, Khosravan R,
Erdmann C, Fiene J, Lee JW (2006)
Định lượng axit uric, xanthine và hypoxanthine trong huyết thanh
người bằng HPLC cho các nghiên cứu dược lực học. J Sắc ký B 837(1–
2):1–10
Trang 11 trên 12 235
Deng HH, Wang FF, Shi XQ, Peng HP, Liu AL, Xia XH, Chen W (2016) Các cụm
nano vàng hòa tan trong nước được điều chế bằng tương tác phối
tử protein làm đầu dò huỳnh quang để xét nghiệm hoạt động
pyrophosphatase theo thời gian thực. Biosens Điện tử sinh học 83:1
Ding C, Yan Y, Xiang D, Zhang C, Xian Y (2016) Các hạt nano Fe 3 S 4 từ
tính có hoạt tính giống peroxidase và công dụng của chúng trong
xét nghiệm glucose bằng enzyme trắc quang. Microchim Acta 183(2):1–
7 Feng J,
Ju Y, Liu J, Zhang H, Chen X (2015) Các cụm nano đồng được tạo khuôn
bằng Polyethyleneimine thông qua phương pháp khử axit ascorbic làm
cảm biến ion sắt. Chim hậu môn Acta 854C:153–160
Gao L, Zhuang J, Nie L, Zhang J, Zhang Y, Gu N, Wang T, Feng J, Yang D,
Perrett S (2007) Hoạt động nội tại giống như peroxidase của các
hạt nano sắt từ. Nat Nanotechnol 2(9):577–583 Gu Y, Li N, Gao M,
Wang Z, Xiao D, Li Y, Jia H, He H (2015)
Tổng hợp các hạt nano bạc biến đổi BSA dưới sự hỗ trợ của vi sóng
như một đầu dò huỳnh quang chọn lọc để phát hiện và chụp ảnh tế
bào cadmium(II). Microchim Acta 182(7): 1255–1261 Hu L, Yuan Y,
Zhang L,
Zhao J, Majeed S, Xu G (2013) Cụm nano đồng như chất bắt chước
peroxidase và ứng dụng của chúng để phát hiện H2O2 và glucose.
Anal Chim Acta 762(1):83–86 Hu X, Mao X, Zhang X, Huang Y (2017)
Tổng hợp một bước các cụm nano đồng huỳnh quang màu cam hoặc cảm biến
nhạy và chọn lọc của các ion Al3+ trong mẫu thực phẩm. Cảm biến
Thiết bị truyền động B 247:312–318
Jiang X, Sun C, Guo Y, Nie G, Xu L (2015) Hoạt động giống peroxidase của
các cụm vàng ghép cặp apoferritin để phát hiện glucose. Biosens
Điện tử sinh học 64:165
Ke CY, Wu YT, Tseng WL (2015) Sự tổng hợp theo hướng protein liên hợp
Fluorescein-5-isothiocyanate của các cụm nano vàng để cảm nhận tỷ
lệ huỳnh quang của hệ thống enzyme-cơ chất. Biosens Bioelectron
69:46–53 Li D, Li B, Yang SI (2015a) Hệ
thống cảm biến bật huỳnh quang chọn lọc để đánh giá nước bị ô nhiễm Cu2+
dựa trên sự hình thành cực nhanh của cụm nano đồng huỳnh quang.
Phương pháp Hậu môn 7(6):2278–2282
Li R, Wang H, Chu X, Liao X, Sun X, Li Z (2015b) D-Penicilamine và
albumin huyết thanh bò đồng ổn định các cụm nano cop-per với cường
độ huỳnh quang và khả năng quang hóa được tăng cường đáng kể để
phát hiện Ag+ siêu nhạy.
New J Chem 40(1):732–739 Li GL,
Ma P, Zhang YF, Liu XL, Zhang H, Xue WM, Mi Y, Luo YE, Fan HM (2016)
Tổng hợp tinh thể trung mô dây nano Cu 2 O sử dụng PTCDA làm một
chất điều chỉnh và hoạt tính giống peroxidase vượt trội của chúng.
J Mater Sci 51(8):3979–3988 Liao X, Li R, Li Z, Sun X, Wang
Z, Liu J (2015a) Tổng hợp nhanh các cụm nano đồng thông qua việc sử dụng
chất phụ gia hydro peroxide và ứng dụng của chúng để phát hiện
huỳnh quang Hg2+ trong mẫu nước. J Chem 39(7):5240–5248 Liao X, Li
R, Long X, Li Z (2015b) Cảm biến pH siêu nhạy và phạm vi rộng
dựa trên cụm nano Cu có nắp BSA được chế tạo bằng phương pháp tổng hợp
nhanh trong quá trình sử dụng phụ gia hydro peroxide. RSC Adv
5(60):48835–48841 Liu Y, Wang C, Cai N, Long S, Yu F (2014) Các
hạt nano vàng tích điện âm như một chất
bắt chước peroxidase nội tại và các ứng dụng của chúng trong quá trình
oxy hóa dopamine. J Mater Khoa học 49(20):7143–7150
Lưu Q, Giang Y, Trương L, Châu X, Lv X, Đinh Y, Tôn L, Trần P, Âm
H (2016) Hoạt tính xúc tác của Ag2S-montmorillonites như
Machine Translated by Google

235 Trang 12 trên 12 J Nanopart Res (2017) 19: 235

peroxidase bắt chước theo hướng phát hiện so màu của H2O2. Wang C, Wang C, Xu L, Cheng H, Lin Q, Zhang C (2013) Tổng hợp đồng

Mater Sci Eng C Mater Biol Ứng dụng 65:109–115 huỳnh quang đỏ phản ứng pH theo hướng protein

Lu W, Chang G, Luo Y, Fang L, Sun X (2011) Phương pháp hiệu quả cụm nano và ứng dụng của chúng trong hình ảnh tế bào và

cố định các hạt nano Ag/hỗn hợp graphene oxit trên điện cực vàng xúc tác. Nano 6(3):1775–1781

biến đổi DNA sợi đơn để Wang L, Miao H, Zhong D, Yang X (2015a) Tổng hợp

phát hiện H 2 O 2 không dùng enzyme. J Mater Khoa học 46(15):5260–5266 các cụm nano Cu qua trung gian dopamine để cảm nhận và mã hóa

Luo Y, Hong M, Yang X (2015) Cu ổn định Glutathione huỳnh quang. Phương pháp hậu môn 8(1):40–44

cụm nano làm đầu dò huỳnh quang để cảm nhận độ pH và vitamin B 1. Wang N, Li B, Qiao F, Sun J, Fan H, Ai S (2015b) Sự tổng hợp các hạt
Talanta 144:488–495 nano đồng ổn định được hỗ trợ bởi axit humic như một chất bắt
Mu S, Shi Q (2013) Cảm biến sinh học Xanthine dựa trên phương pháp trực tiếp chước perox-idase và ứng dụng của chúng trong việc phát hiện glucose. J

quá trình oxy hóa xanthine ở màng oligome được tạo điện. Mater Chem B 3(39):7718–7723

Biosens Điện tử sinh học 47(2):429–435 Tấn Y, Luo Z, Yong Y, Yao Q, Xie J (2013) Quang quý

Pergolese B, Muniz-Miranda M, Bigotto A (2006) Nghiên cứu tán xạ Raman cụm nano kim loại làm đầu dò quang học mới nổi cho cảm biến

tăng cường bề mặt của quá trình hấp phụ phát triển. Chem, An Á J 8(5):858

của 2-mercaptobenzoxazole trên bề mặt đồng nhẵn được pha tạp Yang X, Feng Y, Zhu S, Luo Y, Zhuo Y, Dou Y (2014) Một bước

với các hạt nano keo bạc. J Phys Chem B 110(18): tổng hợp và ứng dụng cụm nano Cu huỳnh quang
9241–9245 được ổn định bởi L-cysteine trong dung dịch nước. Chim hậu môn

Qiao F, Wang J, Ai S, Li L (2015) Là một chất bắt chước peroxidase mới: Acta 847:49–54

tổng hợp cacbon nitrit pha tạp selen Yang L, Liu X, Lu Q, Na H, Liu M, Zhang Y, Yao S (2016)

tấm nano và ứng dụng trong phát hiện đo màu H Hoạt tính xúc tác và giống peroxidase của AuPd gốc carbon
2O2 và xanthine. Cảm biến & Thiết bị truyền động B Chemical 216: nanocomposite lưỡng kim được sản xuất bằng cách sử dụng các chấm carbon làm vật liệu

418–427 (Chính trị) chất khử. Chim hậu môn Acta 930:23–30

Rao H, Ge H, Lu Z, Liu W, Chen Z, Zhang Z, Wang X, Zou P, Zhang Q, Xie J, Yu Y, Lee JY (2010) Kiểm soát đơn phân tán trong

Wang Y, He H (2016) Cụm nano đồng như một giải pháp khởi động sự tổng hợp của bán cầu đơn kim và lưỡng kim

đầu dò huỳnh quang cho axit ascorbic. Microchim Acta 183(5): hạt nano vàng và bạc. Nano 2(10):1962
1651–1657 Zhang L, Lei J, Zhang J, Ding L, Ju H (2012) Đo cường độ dòng điện

Ren X, Liu J, Ren J, Tang F, Meng X (2015) Tổng hợp một nồi Phát hiện hypoxanthine và xanthine bằng cách khuếch đại enzyme

chấm carbon chứa đồng hoạt tính có hoạt tính giống laccase. Nano bằng cách sử dụng lai nanohorn nano vàng-carbon
7(46):19641–19646 với tư cách là người vận chuyển. Nhà phân tích 137(13):3126–3131

Shan D, Wang YN, Zhu MJ, Xue HG, Cosnier S, Wang CY (2009) Zhang Y, Ren W, Luo HQ, Li NB (2016) Chiến lược khuếch đại xếp tầng

Phát triển cảm biến sinh học xanthine hiệu suất phân tích cao dựa không nhãn để phát hiện trực quan nhạy cảm về trombin dựa trên

trên điện cực biến đổi hydroxit kép phân lớp và nghiên cứu tác phản ứng chuỗi lai được kích hoạt mục tiêu qua trung gian tạo ra

dụng ức chế của allopu-rinol. Biosens Điện tử sinh học 24(5):1171–

1176 DNAzyme và chuỗi nano Pt. Điện tử sinh học Biosens

Tian R, Chen X, Xu X, Cheng Y (2014) Hoạt tính xúc tác điện của 80(1):463–470

nanocompozit từ tính lõi/vỏ. Hóa sinh hậu môn 463(20): Zhao Q, Chen S, Huang H, Zhang L, Wang L, Liu F, Chen J, Zeng
45–53 Y, Chu PK (2014) Xác định sự truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh

Wang XX, Wu Q, Shan Z, Huang QM (2011) Au ổn định BSA quang bằng phương pháp đo màu và siêu nhạy của H2O2 và

nhóm lại như chất bắt chước peroxidase để sử dụng trong việc phát hiện xanthine. glucose bằng cụm nano Au đa chức năng. Nhà phân tích 139(6):
Biosens Điện tử sinh học 26(8):3614–3619 1498–1503
Machine Translated by Google

Sao chép với sự cho phép của chủ sở hữu

bản quyền. Nghiêm cấm sao chép thêm mà không

được phép.