‫المحاضرة السابعة‬

‫الطرق الكروماتوجرافية‬
 ‫مقدمة‬

‫إن أول استخدام لطرق الفصل الكروماتوجرافية يعود للعالم النباتي الروسي ‪Michael Tswett‬‬

‫الذي نشر في العام ‪ 1906‬وصف لفصل مواد اليخضور ومواد أخرى في عصارة النبات باستخدام‬
‫عمود كروماتوجرافي مملوء بكربونات الكالسيوم‪ ،‬حيث مرر على هذا العمود محلولا من اإليثر‬
‫البترولي المحتوي على مواد النبات ولحظ أن المواد انفصلت إلى نطاقات لونية مختلفة ولهذا‬
‫أطلق على هذه الطريقة اسم طريقة الفصل اللونية ‪0 chromatography‬وقد استمرت هذه التسمية‬
‫إلى يومنا هذا على الرغم من أغلب استخدامات الكروماتوجرافي ل تتضمن تكون ألوان بل‬
‫تتضمن الطرق الكروماتوجرافية اآلن العديد من العمليات التي تعتمد على اختالف توزيع مكونات‬
‫المادة المراد فصلها بين طورين‪ )1( :‬إحداهما يظل ثابت ويسمى بالطور الثابت وهو إما أن يكون‬
‫صلب أو سائل مثبت على دعامة صلبة ويوضع عادة في عمود (سحاحة مثالا) أو يفرد على لوح‬
‫من البالستيك أو قطعة من الورق‪ )2( ،‬والثاني يسمى بالطور المتحرك وهو إما سائل أو غاز‬
‫ويمر من خالل السطح الخارجي للطور الثابت ويسمى أحيانا ا بالحامل ‪ Carrier‬ألنه ينقل مكونات‬
‫المادة عبر العمود كما يسمى أحيانا ا أخرى بالمخرج ‪ Eluent‬ألنه يخرج المواد من العمود كما‬
‫تسمى عملية تحريك المواد عبر العمود بالتخريج ‪ Elution‬وتوضع العينة عادة في أعلى العمود‬
‫الكروماتوجرافى وتتحرك محتوياتها خالل العمود نتيجة لمرور الطور المتحرك ولكن بسرعات‬
‫مختلفة تعتمد على ميل المادة للبقاء في الطور الثابت أو في الطور المتحرك كما نرى في الشكل‬
‫التالي‪:‬‬

‫فصل مخلوط مكون من مادتين باستخدام عمود كروماتوجرافى بسيط‪0‬‬

‫(أ) بعد إضافة العينة (ب) بعد فترة قصيرة من تمرير المذيب (جـ) بعد فترة أطول من تمرير المذيب‪0‬‬
‫وتعتبر قدرة الطرق الكروماتوجرافية على الفصل جيدة جدا ا حيث في بعض الحالت يمكن‬
‫فصل محتويات عينة تحتوى على ‪ 10‬إلى ‪ 20‬مادة بشكل تام وفى خالل دقائق‪ 0‬ويمكن بواسطة‬
‫تلك الطرق فصل المركبات العضوية المتشابهة في التركيب وكذلك المركبات غير العضوية‬
‫المتشابهة في الخواص الكيميائية فمثالا يمكن فصل النتروجين ‪ 14‬عن النتروجين ‪ 15‬في األمونيا‪0‬‬
‫ومن هذا يتضح لنا أهمية طرق الفصل الكروماتوجرافية‪0‬‬

‫أنواع الطرق الكروماتوجرافية‬

‫هناك العديد من الوسائل التي تستخدم لتصنيف الطرق الكروماتوجرافية إل أن أغلبها يعتمد‬
‫على نوع الطور المتحرك ونوع الطور الثابت ‪ ،‬فمثالا مسمى الكروماتوجرافى السائلة – الصلبة‬
‫يعنى أن الطور المتحرك هو السائل وهو الذى يسمى أولا ثم يليه الطور الصلب الثابت وهكذا‪0‬‬
‫كما يمكن تقسيم الطرق الكروماتوجرافية بناء على ميكانيكية أو كيفية توزيع المواد المراد فصلها‬
‫بين الطورين‪0‬‬

‫‪ -1‬الكروماتوجرافى السائلة – الصلبة ‪0Liquid-solid chromatography‬‬

‫‪ -2‬الكروماتوجرافى السائلة – السائلة ‪0Liquid-liquid chromatography‬‬

‫‪ -3‬الكروماتوجرافى الغازية – السائلة ‪0Gas-liquid chromatography‬‬

‫‪ -4‬الكروماتوجرافى التبادلية ‪0Ion-exchange chromatography‬‬

‫‪ -5‬الكروماتوجرافى المستوية ‪0Plane chromatography‬‬

‫‪ -6‬الكروماتوجرافى المنخلية ‪0Gel chromatography‬‬

‫‪ -7‬اإللكتروفوريسيس ذات النظام المستمر ‪0Continuous-zone electrophoresis‬‬

‫‪ - -1‬الكروماتوجرافى السائلة – الصلبة‬

‫(كروماتوجرافيا العمود )‪)Column chromatography (C.C‬‬

‫يعتمد كروماتوجرافى العمود على اإلمتزاز حيث توضع مادة صلبة (الماز أو الطور الثابت)‬
‫في أنبوب زجاجي ووضعه عمودي‪ ،‬ويوضع الخليط المراد فصله فوق الماز في أعلى العمود ثم‬
‫يصب المذيب (الطور المتحرك) لينزل خالل العمود‪0‬‬
‫تختلف مكونات المخلوط في قابليتها لإلمتزاز على العمود وكذلك ذائبيتها في المذيب لذلك‬
‫تنساب خالل العمود بسرعات مختلفة فكلما كان امتزاز الماز أضعف كلما أسرعت في النزول‬
‫أولا والعكس إذا كان امتزاز المواد أقوى تأخرت في الوصول إلى أسفل العمود وبهذا تتم عملية‬
‫الفصل‪0‬‬

‫وتأخذ أعمدة الفصل أشكالا مختلفة وعادة ما تكون مصنوعة من الزجاج بأطوال مختلفة وأقطار‬
‫مختلفة‪ ،‬تحدد كمية الخليط المراد فصله حجم العمود المستخدم‪ ،‬فكلما كانت كمية الصنف الثابت‬
‫كبيرة كلما أصبحت عملية الفصل أفضل ويجب عدم مليء العمود بأكثر من ثلثيه بالصنف الثابت‪0‬‬

‫الطور الثابت‬

‫هناك مواد كثيرة يمكن استخدامها كطور ثابت في العمود وأهمها وأكثرها استخداماا‪:‬‬

‫‪ -2‬األلومينا )‪0(Al2O3‬‬ ‫‪ -1‬السيليكاجل )‪0(SiO2.nH2O‬‬

‫الطور المتحرك (المذيب)‬

‫تختلف قدرة المذيبات على التمليص (التخريج) بسبب اختالف قطبيتها‪ ،‬فعند اختيار المذيب‬
‫المناسب نبدأ بتجريب المذيبات القليلة القطبية ثم نتسلسل بزيادة القطبية‪0‬‬

‫‪Hexane < cyclohexane < Toluene < benzene < CHCl3‬‬

‫‪ -2‬الكروماتوجرافى المستوية‬

‫في الطرق الكروماتوجرافية المستوية يتم إجراء عمليات الفصل الكروماتوجرافية على سطح‬
‫مستوى بدل من استخدام عمود معبأ‪0‬‬

‫(أ) كروماتوجرافيا الورق ‪0Paper chromatography‬‬

‫في هذه الطريقة يكون الطور الثابت السائل وهو الماء المحيط بالسليلوز مثبت أساسا ا على ورقة‬
‫الترشيح وورقة الترشيح نفسها تعمل فقط كدعامة‪ 0‬توضع كميات صغيرة من العينات المختلفة‬
‫على خط مرسوم في بداية الورقة (أنظري الشكل التالي) بحيث تبدو العينات على هيئة بقع على‬
‫هذا الخط وبعد ذلك تغمس بداية الورقة هذه في المذيب المتحرك في جو مغلق (في كأس مثالا)‬
‫وذلك حتى يصبح محيط الكأس مشبع ببخار المذيب المتحرك‪0‬‬
‫يتحرك المذيب إلى أعلى الورقة بفعل الخاصية الشعرية (الشكل‪-‬أ) أو يتحرك إلى أسفل بفعل‬
‫الجاذبية إذا كان وضع المذيب أصالا في أعلى الورقة (الشكل‪-‬ب) أو يتحرك أفقيا ا بفعل النتشار‬
‫(الشكل‪-‬ج)‪ 0‬وأثناء تحرك المذيب تتوزع مكونات العينة بين المذيب المتحرك والطور الثابت‬
‫ولهذا فهي تسير في سرعات مختلفة عبر الورقة تبعا ا لذلك التوزيع‪0‬‬

‫بعض الطرق المستخدمة لتطبيق الكروماتوجرافى الورقية‪0‬‬

 ‫(ب) كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة ‪Thin-layer chromatography‬‬

‫في هذه الطريقة يستعمل لوح زجاجي أو صفيحة صغيرة من البالستيك تغطى بطبقة رقيقة‬
‫)‪ (0.2-0.3mm‬من مادة مازة قطبيه مثل األلومينا أو هالم السيليكا كطور ثابت ويمكن استخدام‬
‫أي مذيب مناسب كطور متحرك‪ 0‬نستنتج من ذلك أن ميكانيكية التوزيع قد تعتمد على اإلمتزاز‬
‫(أنظري الشكل أسفل)‪0‬‬

‫‪ -3‬الكروماتوجرافيا الغازية – السائلة ‪Gas-liquid chromatography‬‬

‫وتتكون كغيرها من أنواع الكروماتوجرافيا من طورين هما‪:‬‬

‫(أ) الطور الثابت وهو عبارة عن مادة سائلة ذات درجة غليان عالية وتكون مثبته على مادة صلبة‬
‫تعرف بالدعامة‪ ،‬حيث تعبأ مادة الدعامة بعد تغليفها بمادة الصنف الثابت داخل عمود فصل بقطر‬
‫وطول معينين يمكن تسخينه عند درجات حرارة عالية‪0‬‬

‫(ب) الطور المتحرك وهو عبارة عن غاز خامل له درجة توصيل حرارية عالية مثل النيتروجين‬
‫والهيليوم ويعرف بالغاز الحامل‪0‬‬

‫مبدأ الجهاز‪ :‬عند إجراء التحليل تحقن كمية ضئيلة جدا ا )‪ (1ml‬من العينة وهى في الحالة السائلة‬
‫أو على شكل محلول بواسطة محقنه خاصة (إبرة حقن) في فتحة الحقن )‪ (3‬أو بواسطة صمام‬
‫خاص إذا كانت العينة غازية‪ ،‬حيث تتبخر العينة ومن ثم يندفع البخار بواسطة الغاز الحامل إلى‬
‫عمود الفصل الحلزوني الشكل الموجود داخل الفرن )‪ ،(4‬حيث يتم فصل مكوناتها بنا اء على‬
‫اختالف معامالت توزيعها بين الغاز الحامل والطور الثابت‪ 0‬ويكشف عن المكونات المفصولة‬
‫بواسطة مقدر )‪ (5‬إليكتروني حيث يستجيب لكل مكون حسب تركيزه ويتولد عنه إشارة كهربائية‬
‫تسجل على مسجل خاص على هيئه إشارات أو مناقير ‪0Peaks‬‬