‫كروماتوغرافيا الغاز ‪ GPC‬او ‪GC‬‬

‫مقدمة ‪:‬‬
‫نشأت بواسطة العالمان مارتن وجيمس في عام ‪ 1952‬ومع بداية ‪ 1955‬تم تصنيع الجهاز تجاريا بحيث يستخدم غاز خامل مثل ‪Ar‬‬
‫‪ / He / N2‬كطور متحرك أما الطور الساكن يكون إما مادة مازة و صلبة و تسمى في هذه الحالة كروماتوغرافيا غاز_ صلب و‬
‫إما ان تكون المادة السائلة و غير متطايرة و مطلية على سند صلب و تسمى كروماتوغرافيا غاز _ سائل ‪.‬‬

‫و لمحدودية كروماتوغرافيا" غاز _صلب "‪ ,‬اذا سنركز على كروماتوغرافيا "غاز _ سائل "‬

‫كروماتوغرافيا " غاز _ سائل " تتمتع بتطبيقات واسعة جدا و التي يستخدم فيها الغاز كطور متحرك تفصل المواد بخاصية‬
‫االختالف في معامل التوزيع بين الطور الساكن و المتحرك ‪.‬‬

‫زمن مكوث المادة يعتمد على مدى قابليتها للتطاير ومدى تفاعلها مع الطور الساكن‬

‫ويمكن زيادة قابلية التطاير و التقليل من مكوثها ( الطور الساكن ) بواسطة تسخين العمود الى درجات حرارة بحيث تكون متفاوتة‬
‫من (‪) C – 50°C°350‬‬

‫‪ 1-8-‬المواد التي يمكن فصلها بسهولة في ‪:GC‬‬

‫عندما يكون لها ‪:‬‬

‫‪-‬ضغط بخاري ملحوظ‬

‫‪-‬ثبات المادة في درجة حرارة الفصل‬

‫‪ -‬ان يكون لها وزن جزئي اقل من ‪g /¿lom ¿ 1000‬عموما تستخدم ‪ CG‬في فصل ‪.‬‬

‫‪ -‬الغازات‬

‫‪ -‬السوائل الغير متأينة‬

‫‪ -‬المواد العضوية الصلبة‬

‫‪ -‬كثير من المواد عضوي معدني ( مبيدات الحشرية )‬

‫وال تستخدم في فصل‬

‫‪-‬المواد التي لها جزيئات كبيرة‬

‫‪ -‬االمالح و المواد العضوية أو غير العضوية‬

‫كروماتوغرافيا الغاز تتميز بـ‬

‫‪-‬الكفاءة العالية‪.‬‬

‫‪ -‬السرعة‬

‫‪ -‬االنتقائية ‪.‬‬

‫كما ال يتم فيها التفكك ( عدم فقدان طبيعة المادة) و تتطلب كميات قليلة جدا للتحليل ( عدة ميكروليترات )‬
 ‫‪ 8_2‬مبدأ كروماتوغرافيا الغاز ‪:‬‬
‫عند مرور الطور المتحرك من االسطوانة المضغوطة خالل محطة الحقن و التي تحقن فيه كميات قليلة من العينة خالل قطعة مطاطية‬
‫بواسطة ابرة اذا كانت سائلة أو صمام خاص اذا كانت العينة غازية ‪.‬‬

‫تتحرك مكونات المادة عبر العمود حيث يتم فصل بناء على اختالف معامل توزيع بين الطور المتحرك و الطور الساكن علما بأن الطور‬
‫الساكن ليس له دور ملحوظ في عملية الفصل ‪.‬‬

‫عند خروج العينة من العمود ( حوالي ‪ ) 100m‬تمر خالل كاشف الذي يستجيب بدوره لكل مكون على هيئة سائل‬

‫‪ 8_3‬المكونات األساسية لنظام كروماتوغرافيا الغاز ‪:‬‬

‫يتكون جهاز ‪ GC‬ممايلي ‪.‬‬

‫‪_1‬غاز حامل ( طور المتحرك ) مع منظم السريان ‪:‬‬

‫لغرض من الغاز الحامل هو نشر المواد خالل العمود دون ان يكون له تأثير مباشر على عملية الفصل و يجب ان يكون الغاز الحامل له‬
‫شروط ‪:‬‬

‫_غير قابل لالشتعال‬ ‫_غير نشط كيميائيا‬ ‫_غير سام‬ ‫_خالي من االوكسجين‬ ‫_عالي نقاوة‬

‫اكثر الغازات استخداما هي غاز اآلزوت ‪ N2‬و الهليوم ‪ He‬و الهيدروجين ‪ , H2‬و يعتمدـ اختيار الغاز الحامل على طبيعة المادة‬
‫المراد فصلها و على طبيعة الكاشف المستخدم فمثال ‪ :‬يستخدم ‪ He‬و ‪ H2‬مع كاشف توصيل الحرارة ‪ TCD‬وذلك بسبب توصيله‬
‫الحراري العالي‬

‫وحيث يتم السيطرة على سريان الغاز الناقل بواسطة صمام خاص وتقاس سرعة السريان بواسطة مقياس السريان و لمحاولة تفادي‬
‫التسرب نقوم باختبار فقاعات الصابون ‪.‬‬

‫_‪2‬محطة الحقن ‪:‬‬

‫الغرض االساسي من حقن العينة هو ادخال العينة في مسار الطور المتحرك ( غاز ) قد تكون العينة سائلة او صلبة او غاز عموما‬
‫العينات الصلبة و السائلة (ان لم تكن متطايرة ) يتم تحويلها الى محلول وذلك باستخدام مذيب متطاير ثم حقنه بواسطة محقن‬
‫ميكروليترية حيث تتميز بإبرة مدببة ( حادة ) على سدادة مطاطية رقيقة تلتم تلقائيا عند سحب االبرة (و يجب تغيير هذه القطعة‬
‫المطاطية عند ‪ 100‬حقنة )‬

‫أما العينات الغازية تحقن بواسطة صمام خاص للغازات بدال من الحقنة‬

‫*الحقن خالل االعمدة المعبأ‪:‬‬

‫في االعمدة المعبأة تحقن العينة بكميات تتراوح ما بين ‪ ))10ul_0.1‬للعينة المخففة خالل سدادة مطاطية بطريقتان ‪:‬‬

‫‪ _ 1‬يتم الحقن في منطقة مفرغة فوق رأس العمود الساخن حراريا لضمان تحول المادة الى الحالة الغازية ‪.‬‬

‫‪ _ 2‬يتم حقن العينة داخل سطح الطور الساكن و تكون درجة حرارة هذه المنطقة مساوية لدرجة حرارة العمود ( اقل درجة من الحالة‬
‫االولى ) و بهذا نضمن عدم تحلل المادة باستخدام درجات حرارة عالية و تعتبر الحالة الثانية أفضل من الحالة األولى ‪.‬‬

‫*الحقن خالل االعمدة الشعرية ‪:‬‬

‫االعمدة الشعرية طويلة جدا إال ان مساحةـ طورها الساكن فيها أقل لذا يجب حقن كمياتـ قليلة جدا من العينة و التي تتراوح ما بين‬
‫(‪ ) ul 2 _ 0.1‬حتى ال يتشبع العمود ‪ ,‬وهناك اربعة تقنيات مختلفة للحقن ‪:‬‬
 ‫_ الحقن المجزأ ‪split‬‬

‫_ الحقن الغير مجزأ (‪) split lit‬‬

‫_ الحقن التبخيري الحراري المبرمج‬

‫_ الحقن على العمود مباشرة‬

‫فمثال في الحقن المجزأ يتم حقن العينة ما بين ( (‪ ul 2 _ 0.1‬خالل سدادة مطاطية الى منطقة التبخير و هنا الجزء يكون مبطن‬
‫بالزجاج أو الكوارتز لحماية العينة من التفاعل مع سطح المعدن الساخن به قطعة من الصوف الزجاجي ‪.‬‬

‫لضمان تحول المادة كليا الى حالة تطاير‬

‫بمجرد تحول العينة الى الحالة متطايرة يتم اختالطها مع الطور المتحرك ‪ ,‬معظم العينة تخرج من خالل فتحة التجزئة للخارج بينما‬
‫الجزء المتبقي (‪ )%10_0.1‬من العينة تدخل العمود الشعري مع الطور المتحرك ‪.‬‬

‫‪_3‬عمود الفصل ‪:‬‬

‫يصنع عمود الفصل من حديد عديم الصدأ (‪ )inox‬أو من الزجاج يتم حفظ العمود في فرن ترموستاتي الن الفصل يتم في درجات حرارة‬
‫عالية و بوجود نوعان من االعمدة ‪:‬‬

‫أ _ االعمدة المعبأة ‪ :‬طولها يتراوح بين (‪ )5m_1‬و القطر الداخلي ما بين (‪ ,)m 3_2‬يتم تعبأتها بالطور الساكن الصلب أو‬
‫بالطور الساكن السائل المطلي على حبيبات من الزجاج ‪.‬‬

‫ب _ األعمدة الشعرية ‪ :‬في هذا النوع يتم طالء الجدار الداخلي بواسطة الطور الساكن سائل و اليمكن تعبأتها ال ن القطر الداخلي يكون‬
‫حد (‪ )mm 0.6_0.1‬و بطول (‪ ) 60m _15‬علما بأن سمك الطبقة المطلية على الجدران الداخلية للعمود في حدود (‪)5µm_ 0.25‬‬

‫* التحكم في درجات حرارة الجهاز ‪:‬‬

‫يتم التحكم في درجات حرارة الجهاز محطة الحقن للكاشف بدرجة حرارة العمود فمثال درجة حرارة محطة الحقن تكون في حدود‬
‫غليان المادة ( أكثر من ‪ C°50‬تقريبا ) ويتم ضبط درجة حرارة الكاشف في حدود ‪ C°250‬و ذلك لمنع تكثف المواد المفصولة من العمود‬
‫عند الكاشف ‪ .‬أما درجات حرارة العمود يمكن ان تتقارب من (‪ )C°350_ 100‬وعادة ما يتم ضبط درجة حرارة العمود في درجات‬
‫حرارة ثابتة لفصل مواد الخليط متقارب في درجة تطايرها ‪.‬‬

‫مالحظة ‪:‬‬

‫درجة حرارة الفصل ثابتة لما تكون العينة في حالة فصل مواد بسيطة و تستخدم هذه الطريقة أيضا عندما نريد تحديدـ زمن االحتباس بدقة‬
‫التحليل نوعي و التعرف على وجود مركبات معينة من عدمها‬

‫_ وفي حالة تفاوت في درجات التطاير بين مكونات العينة المعقدة ( يحدث تداخل في قمم (‪ )pic‬و تفاوت كبير في زمن المكوث‬
‫المكونات المختلفة )‬

‫ولتوضيح أهمية درجة الحرارة المبرمجة ‪.‬‬

‫مثال ‪ :‬خليط يحتوي على ‪ 6‬مكونات مختلفة في درجة حرارة تطايرها‬

‫_ عند درجة حرارة ‪C°60‬‬

‫‪T‬‬ ‫‪1 2‬‬ ‫‪3‬‬ ‫‪4‬‬

‫‪140‬‬

‫‪60‬‬

‫‪t‬‬

‫‪t‬‬

‫عند درجة حرارة ‪C°140‬‬

‫‪6‬‬ ‫‪5‬‬ ‫‪4‬‬ ‫‪3‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪1‬‬

‫عند درجة حرارة مبرمجة ‪:‬‬

‫مرحلة التبريد‬

‫‪t‬‬

‫رسم تخطيطي لجهاز كروماتوغرافيا الغاز‬

 ‫‪ _4‬الكاشف ‪:‬‬

‫الغرض من الكاشف هو اعطاء استجابة تتناسب طردا مع تركيب المادة المفصولة الخارجة من العمود والتي تمر من خاللها هذه‬
‫االستجابة و التي تكون بصورة اشارة كهربائية تسجل مقابل ( بداللة ) الزمن في شكل كروماتوغرام‬

‫الشروط التي يجب توفرها في الكاشف ‪:‬‬

‫االنتقالية العالية‬

‫االستجابة و الثبوتية العالية‬

‫غير حساس للتغيرات ( ظروف تجربة )‬

‫‪ -‬هناك عديدـ من الكواشف و التي تختلف عن بعضها البعض في طريقة العمل ‪:‬‬

‫‪ _1‬كاشف التوصيل الحراري ‪TCD‬‬

‫_ ‪ 2‬كاشف التأين باللهب ‪FID‬‬

‫‪ _3‬كاشف األسر االلكتروني ‪ECD‬‬

‫‪ _4‬كاشف مطيافية الكتلة ‪SM‬‬

‫التحليل النوعي ‪ :‬بعد فصل مكونات الخليط يمكن التعرف عليها بمقارنة زمن التأخر ( االستبقاء) ‪ tr‬لكل مكون مع المواد القياسية‬
‫كما في الشكل التالي حيث تتم مقارنة تحت نفس الشروط التجربة ‪:‬‬

‫‪ 0‬لحظة الحقن‬ ‫‪T‬‬

‫‪Tr‬‬

‫التحليل الكمي ‪ :‬في هذه الحالة يقوم جهاز الكمبيوتر بحسابـ مساحةـ القمم لحظة رسم الكروماتو غرام ‪ ,‬وبعد إيجاد المساحة يمكن تعيين‬
‫التركيز المجهول بإحدى الطرق التالية ‪:‬‬

‫_ طريقة المنحنى القياسي ‪:‬‬

‫في هذه الطريقة بعد إيجاد مساحاتـ المحاليل القياسية يمكننا تحديد تركيز المادة المجهولة و ذلك بمعرفة مساحةـ المادة المجهولة‬
‫‪ A‬المساحةـ‬
 ‫_ طريقة االضافة الداخلية ‪:‬‬

‫يمكن اجراء طريقة االضافة الداخلية و ذلك باستخدام عدة محاليل قياسية للمادة ‪ X‬ثم تضاف اليها تركيز معين من مادة أخرى‬

‫كروماتوغرافيا السائلة ذات الكفاءة العالية ‪:‬‬

‫كان تطور الكروماتوغرافيا السائلة الى ما يعرف اآلن يكون السائلة ذو الكفاءة العالية (‪ )HPLC‬من اهم و أحدث تقنيات‬
‫الكروماتوغرافيا و ذلك في سنة ‪ 1966‬بعدـ ‪ CG‬حيث كان تستغرق عملية الفصل و الكشف و التحليل بواسطة كروماتوغرافيا‬
‫السائلة التقليدية عدة ساعات ‪ ,‬و لذا فكر الباحثون في إلى ان توصلوا الى طريقة التي تسمى بالكروماتوغرافيا السائلة ذات‬
‫الضغوط العالية حيث تم التطوير بإدخال نظام جديد للحقن ( حقن بواسطة صمام ) و إدخال كواشف حديثة للكشف عن المواد‬
‫لحظة خروجها من العمود و عليه يتم الفصل و الكشف في دقائق معدودة ‪.‬‬

‫وفي هذا النوع يستخدم عمود من الحديدـ عديم الصدأ أو من الزجاج المقاوم و الذي يعبأ بحبيبات صغيرة يتراوح قطرها من ‪50‬‬
‫‪um_5‬‬

‫(حبيبات من السيليكا أو األلومينيا ) أو تكون هذه الحبيبات مغطاة أو مرتبطة كيميائيا بطبقة رقيقة من السائل و هذه الطريقة تسمى‬
‫بالتجزئة‬

‫مبدأ التقنية ‪:‬‬

‫تحقن مكونات العينة ثم يتم فصلها عن بعضها البعض بناء على اختالف اتزان التوزع لكل مكون بين الطور الساكن ( السائل) و‬
‫الطور المتحرك ( سائل)‬

‫التركيز النسبي للمادة في الطور الساكن يرمز له بالرمز ‪ CS‬إلى الطور المتحرك ‪ Cm‬ويعبر عنها بمعامل التجزئة ‪ K‬و الذي يعبر‬
‫عنه كالتالي ‪:‬‬

‫في الطور الساكن ‪SC‬‬

‫تركيزالمادة‬
‫=‪K‬‬ ‫=‬
‫في الطور المتحرك‪mC‬‬‫تركيزالمادة‬

‫توضح المعادلة أعاله أن حركة المكون تتناسب عكسيا مع معامل التجزئة ‪ ,‬حيث أن مكون ذو معامل التجزئة األعلى يتحرك ببطء و‬
‫العكس صحيح ‪.‬‬

‫و ال يمكن للفصل ان يتم اال بوجود في االختالف الملحوظ في معامل التجزئة ويمكن الوصول الى هذا بتغيير ظروف التجربة‬
‫مثال ‪ :‬تغيير في تركيبة الطور المتحرك و تغيير الطور الساكن‬

‫_ مكونات جهاز ‪: HPLC‬‬

 ‫‪-‬مستودع الطور المتحرك‬

‫‪-‬المضخة‬

‫‪-‬محطة الحقن‬

‫‪-‬العمود‬

‫‪-‬الكاشف‬

‫‪-‬وسيلة لتسجيل الكروماتوغرام‬

‫هناك متطلبات رئيسية البد أن تتوفر في المضخات ‪:‬‬

‫‪-‬توليد الضغط‬

‫‪-‬خالية من الذبذبات‬

‫‪-‬يكون السريان ثابت‬

‫‪lm‬‬
‫‪-‬معدل السريان ما بين ‪10_0.1‬‬
‫‪nim‬‬

‫‪ -‬أن تكون مقاومة لتآكل المذيبات المختلفة‬

‫* النظام الحديث المستخدم في االجهزة الحديثةـ ذات التكلفة العالية هو استخدام مضخة ذات رأس ترددي ( مكبس لألمام و مكبس‬
‫للخلف ) لتفادي التذبذبات في الضغط بحيث إن احدى المكابس يلغي ذبذبةـ اآلخر و بالتالي يكون سريان المكبسين خالي من‬
‫التذبذب ويجب غسل المضخة دائما قبل وبعد التجربة بالميثانول و لمنع حدوث ظاهرة التآكل ‪.‬‬

‫نظام الطور المتحرك ‪:‬‬

‫في معظم التحاليل طور الواحد يكفي إلزاحة كل مكونات الخليط و يسمى النظام في هذه الحالة فصل بطور واحد متحرك بنظام‬
‫ايزوكراتيكي (‪( )isocratique‬أحادي الطور ) ولكن عندما يكون هناك اختالف كبير في زمن االستبقاء ‪ :‬يفضل استخدام‬
‫طوران متحركان يغير أحد قطبية االخر اثناء العمل الكروماتوغرافي ويسمى هذا النظام في هذه الحالة بالنظام التتابع‬
‫التدريجي (‪)gradient‬‬

‫في هذا النظام تكون نسب الطورين المتحركين متغيرة باستمرار خالل عمل الكروماتوغرافيا أو جزء منه و في بعض األجهزة‬
‫يتم استخدام برمجة مسبقة بواسطة جهاز الحاسوب‬

‫لنفرض ان خليط ما يحتوي على المكونات التالية ‪ A.B.C.D‬حيث ان ‪ D‬قطبي و ‪ A‬غير قطبي ‪ B .C‬وسطاء القطبية‬
‫عند استخدام الطور المتحرك غير قطبي مثل الهكسان نالحظ ان ‪ D‬لم يتم فصله أو يتأخر كثيرا نتيجة استخدام الطور المتحرك‬
‫غير قطبي‬

‫غير قطبي ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ قطبي‬

‫حمض االوكزاليك‬ ‫خل‬ ‫ماء‬ ‫ميثانول‬ ‫بروبانون‬ ‫اسيتات االثيل‬ ‫ثنائي كلور ايثر‬ ‫هبتان‬
‫ميثان‬
‫‪HO_CO_CO_OH CH3_CO_OH H2O CH3_OH CH3_CH2_OH‬‬ ‫‪CH3_CH2_co_o R_O_R CH2_CL2 C7H16‬‬

‫‪A‬‬

‫‪-‬وعند استخدام طور المتحرك قطبي ( ثنائي كلور ميثان )‬

‫نالحظ ان المكونات ‪ A. B‬ينفصالن بسرعة بحيث ال يكون هناك فصل و التفريق الكامل و لحل مما ذكر نلجأ الى نظام‬
‫التتابع التدريجي وذلك بان يتم الفصل بالهكسان ( غير قطبي ) أوال ثم تزداد القطبية تدريجيا بواسطة ثنائي كلور الميثان‬
‫(( ‪CH2_CL2‬‬

‫اذا كان الطور الساكن قطبي و طور المتحرك غير قطبي ومذيبات القطبية (ماء ) مع انه قليل التكلفة نجد الكروماتوغرام‬
‫بهذا الشكل‬

‫‪ _3‬نظام الحقن ‪:‬‬

 ‫له دور كبير في كفاءة عمل الكروماتوغرافيا السائلة النظام الحديث هو نظام الحقن بواسطة صمام ‪ ,‬وفي هذا النوع تتم‬
‫فوق حلقة موجودة فوق العمود مباشرة بواسطة حقنة غير مدببة ة يكون الصمام في وضع حامل ثم يحول الصمام‬
‫لوضع الحقن و بالتالي تسحب العينة المراد فصلها الى داخل العمود بواسطة الطور المتحرك كلما كان عرض السن اصغر‬
‫يكون الفصل احسن‬

‫يستلزم سرعة مناسبة لفصل المكونات ليست سريعة و ليست بطيئة كلما زاد عدد التدريجيات نقص عرض الطبقة (‪)H‬‬
‫وكان الفصل أحسن‬

‫كفاءة العمود ‪:‬‬

‫ان اختيار العمود يعتمد على نوع المادة المراد فصلها أو تحليلها وعلى خبرة وكفاءة الكيميائي وعموما هناك قاعدة هي‬
‫االعمدة القطبية تستخدم لفصل المواد القطبية و االعمدة الغير قطبية تستخدم لفصل المواد الغير قطبية‬

‫اما كفاءة التحليل تعتمدـ بدرجة كبيرة على مقدرة عمود الفصل الكفاءة الكلية يعبر عنها بعدد الطبقات النظرية وهي ‪N‬‬
‫والذي يعبر عن المراحل اتزان داخل العمود و يمكن قياس كفاءة العمود بمعرفة زمن المكوث‬

‫للطورالثابت‬ ‫حجم‪lm‬‬
‫‪lm‬‬ ‫زمن االستبقاء =‬
‫) (‬
‫تدفق الطور متحركمعدل السريان‬
‫‪s‬‬

‫ولكن عمليا يتم ايجاد زمن االستبقاء من الكروماتوغرام الناتج و المسجل من الحاسوب مباشرة‬

‫و بمعلومة "‪ "Tr‬و عرض السن "‪ " W‬نجد أن عدد الطبقات النظرية " ‪ " N‬يحسب بالمعادلة التالية ‪:‬‬
‫‪2‬‬
‫‪Rt‬‬
‫‪N=61‬‬ ‫) (‬
‫‪w‬‬

‫ويمكن استنتاج من المعادلة أعاله‬

‫كلما يصغر عرض السن (‪ ) W‬زادت كفاءة العمود (‪ )H‬و بما ان طول (‪ )L‬العمود يؤثر على عدد الطبقات النظرية الكلية‬
‫و لغرض المقارنة لكفاءة األعمدة ببعضها يستخدم مصطلح بما يعرف االرتفاع المكافئ للطبقة النظرية للطبقة النظرية‬
‫(‪)N‬‬

‫‪L‬‬
‫=‪H‬‬
‫‪N‬‬

‫وهناك معيار آخر أو مقياس الكفاءة و هو درجة الفصل (‪ )R‬بين االسنان و الذي يعرف بالتفريق و يمكن ايجاد ه من‬
‫المعادلة التالية‬
 ‫‪2∆ T‬‬
‫=‪R‬‬
‫‪W 1+W 2‬‬

‫‪R52.1‬في ‪HPLC‬‬
‫≥‬ ‫حيث تكون جيدة عندما تكون‬