‫المختبر الخامس‬ ‫نباتات طبية‬

‫‪Separating Methods‬‬ ‫طرائق الفصل‬

‫من طرائق الفصل والتي تستعمل في فصل الكثير من المركبات الفعالة هي‪:‬‬

‫‪Chromatography‬‬ ‫الطرائق الكروماتوغرافية‬

‫االستشراب (الكروماتوجرافيا) أو التفريق اللوني هي طريقة لفصل وتنقية المواد الكيميائية المختلطة‪.‬‬
‫تعتمد الطريقة على أن مكونات المخلوط توزع نفسها بنسب مختلفة بين مكوني نظام ثنائي أحدهما‬
‫متحرك واآلخر ثابت‪ .‬تعتمد التقنيات الكروموتوغرافية على طبيعة الدعامة المستعملة في الطور‬
‫الصلب‪.‬‬

‫)‪Paper Chromatography (PC‬‬ ‫الكروموتوغرافيا الورقية‬

‫وتتضمن هذة الطريقة عملية فصل مكونات المخلوط باالعتماد على الطور الثابت ‪Stationary phase‬‬
‫والطور المتحرك ‪ .Mobile phase‬وتعد واحدة من الطرائق الكروماتوغرافية التي تمتاز بسهولة‬
‫تنفيذها لعملية فصل المركبات والتي تتم على شرائح من ورق الترشيح التي تستعمل كوسط للفصل‪.‬‬
‫فائدة اخرى لهذة الطريقة انها تعطي )‪ Relative front (RF‬اومايسمى بعامل االعاقة‪ .‬بطبيعة الحال‬
‫ليست كل المواد ذات نفس سرعة الحركة على الجزء الثابت وذلك يرجع الى عاملين اثنين رئيسيين‪:‬‬
‫‪ -1‬ميل المادة الى االلتصاق بالجزء الثابت‪.‬‬
‫‪ -2‬ميل المادة الى الذوبان في الجزء المتحرك‪.‬‬

‫وتعتمد هذة الطريقة بشكل اساسي على العوامل التالية‪:‬‬

‫‪ )1‬الوزن الجزيئي للمركبات المراد فصلها‬

‫‪ )2‬نوع اوراق الترشيح المستعملة في التجربة‬
‫‪ )3‬نوع المذيبات المستعملة في التجربة‬
‫‪ )4‬الظروف المحيطة بالتجربة من درجة حرارة وضوء‬
‫‪ )5‬دقة تنفيذ التجربة والسيما عندما يراد عمل نسب مضبوطة من المذيبات للحصول على قيم‬
‫مضبوطة من الــ‪RF‬‬

‫‪1‬‬
 ‫المختبر الخامس‬ ‫نباتات طبية‬

‫كيفية حساب قيمة عامل االعاقة )‪(RF‬‬

‫يعتمد حساب قيمة عامل االعاقة على نوعية المادة المازة على نوعية المذيبات المستعملة وعلى الوزن‬
‫الجزيئي للمركبات الفعالة المراد فصلها‪ .‬وعلى العموم تحسب قيمة الـــ‪ RF‬من خالل المعادلة االتية‬

‫المسافة التي تتحركها البقعة (المركب)‬

‫عامل االعاقة )‪= (RF‬‬
‫المسافة التي يتحركها المذيب‬

‫الجزء العملي‬

‫‪ )1‬يقسم الطالب الى مجاميع وكل مجموعة تاخذ عينة من المستخلص النباتي الخام المحضر سابقا‪.‬‬
‫‪ )2‬يتم تحضير محاليل االطوار المتحركة في تقنية الـــ‪ PC‬وذلك يتم بتحضير محلولين هما‬
‫‪Water: Ethanol: n-Butanol (4: 1: 4) .a‬‬
‫‪Water: Pyridine: n-Butanol (3: 4: 6) .b‬‬
‫‪ )3‬يوضع كل محلول في اناء الفصل‪.‬‬
‫‪ )4‬يغطى االناء بلوح زجاجي حتى يتشبع جو االناء ببخار مزيج المذيبات‪.‬‬
‫‪ )5‬يتم وضع بقع صغيرة بأستخدام انبوبة شعرية ‪ Capillary tube‬من المستخلصات الخام‬
‫للنباتات المحضرة مسبقا وعلى بعد ‪2‬سم من حافة ورقة الترشيح لفصل المركبات‪.‬‬
‫‪ )6‬يتم وضع ورقة الترشيح داخل اناء الفصل ويغطى االناء بواسطة لوح زجاجي ويترك فترة من‬
‫الزمن‪.‬‬
‫‪ )7‬بعد اخراج ورقة الترشيح من اناء الفصل يتم مالحظة تحرك البقع المختلفة على الورق ومن‬
‫ثمة يتم حساب عامل االعاقة‪.‬‬

‫مالحظة مهمة‪ :‬يمكن اعتبار هذة الطريقة احدى طرق الكشف عن بعض المركبات الفعالة حيث يمكن‬
‫استخدام احدى الكواشف اللونية مثل كاشف دراجندروف وذلك بواسطة رشة على ورق الترشيح‬
‫المحتوية على البقع فعند ظهور اللون البرتقالي الحدى البقع يعني هذا وجود القلويدات‪.‬‬

‫‪2‬‬