‫طريقة تعين مجموعة الكربامات‬

‫)‪Carbamate insecticides Analysis (APHA 6610‬‬

‫‪ ‬الهدف من الطريقة‪Scope and Application:‬‬

‫تستخدم هذه الطريقة لتعين مجموعةالكربامات ‪ Methyl Carbamate‬في‬
‫المياه وذلك بإستخدام جهاز بإستخدام جهاز الكروماتوجراف السائل فائق‬
‫األداء‬
‫)‪High Performance Liquid Lquid Chromatograph (HPLC‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪1 1‬‬
 ‫ملخص الطريقة‪Summary of The Methods:‬‬

‫‪ ‬يتم ترشيح حجم من العينة وتحقن في جهاز الكروماتوجراف السائل المثبت‬

‫عليه عمود ‪HPLC with Reverse phase column‬‬
‫‪ ‬تفصل المكونات بواسطة ‪Gradient Elution Chromatograph‬‬
‫‪ ‬ثم يضاف هيدروكسيد الصوديوم وناتج التفاعل يتفاعل مع مادتي‬
‫‪Orthophthaldehyde (OPA) and 2 mercaptoethanol‬‬
‫)‪ (MERC‬لتكوين مركبات لها خاصية الوميض الضوئي والتي يتم‬
‫الكشف عنها بكاشف ‪Fluorescence detector‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪2 2‬‬
 ‫المحاليل والمذيبات‪Reagents and Solvents:‬‬
‫المحاليل والمذيبات المستخدمة يشترط أن تكون ذات نقاوة عالية ‪HPLC grade or‬‬
‫‪equivalent‬‬
‫‪ ‬ميثانول ‪Methanol HPLC Grade‬‬

‫‪ ‬مياه خالية من الملوثات العضوية ‪Free organic Water‬‬

‫‪ ‬هيدروكسيد الصوديوم ‪ NaOH 0.05N‬يحضر بإذابة ‪2‬جم في ماء خالي من الملوثات‬

‫العضوية يتم ترشيحه وينزع منه الغاز بإمرار غاز الهليوم قبل األستخدام ‪Filter and‬‬
‫‪degas by He‬‬

‫‪ ‬ميركابتو أثانول‪ Mercaptoethanol-2‬ويحضر بخلط ‪ 10‬مل منه مع ‪ 10‬مل‬

‫أسيتونتريل‪ Acetonitril‬ويغطي ويحفظ في الثالجة لحين االستخدام‪.‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪3 3‬‬
‫تابع المحاليل والمذيبات‪Reagents and Solvents:‬‬
‫‪ ‬محلول بورات الصوديوم‪ :Sodium borate solution :‬يحضر بإذابة‬
‫‪1‬و‪ 19‬جم من ‪ Na2B4O7.10 H2O‬في مياه منزوعة األيونات ويخفف‬
‫الي ‪ 1‬لتر في ‪ Measuring Flask‬يحضر عند األستخدام‪.‬‬

‫‪ ‬محلول ارثو فيثالدهيد )‪ Orthophthaldehyde (OPA‬يحضر بإذابة‬

‫‪1‬و‪ 0‬جم في ‪ 10‬مل ميثانول من المادة في ‪ 10‬مل ميثانول مضاف اليه ‪1‬‬
‫ميكرو لتر من محلول بورات الصوديوم(‪ ،)5‬يخلط جيدا ويرشح ‪ ،‬وينزع منه‬
‫الغازات بإمرار غاز الهليوم ثم يضاف ‪ 100‬ميكرولتر من محلول(‪)4‬‬
‫ميركابتو أثانول‪Mercaptoethanol-2‬‬

‫‪ ‬كلورو اسيتك أسد‪ Monochloro acetic acid 2.5M‬يحضر بإذابة‬

‫‪236‬جم في لتر ماء‪.‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪4 4‬‬
‫تابع المحاليل والمذيبات‪Reagents and Solvents:‬‬

‫‪ ‬محلول خالت البوتاسيوم‪Potassium acetate solution :‬‬

‫)‪ (2.5M‬يحضر بإذابة ‪ 245‬من المادة في لتر من المياه‬
‫المقطرة‪.‬‬

‫‪ ‬محلول أحادي كلورو حمض الخليك المثبت ‪Monochloro‬‬

‫‪ acetic acid buffer‬يحضر بخلط ‪ 156‬مل من‬
‫محلول(‪ Monochloro acetic acid 2.5M)7‬مع محلول‬
‫‪ 100‬مل من المحلول رقم (‪Potassium acetate )8‬‬
‫‪solution (2.5‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪5 5‬‬
 ‫محاليل قياسية ‪Standard solutions‬‬
‫‪ ‬محاليل قياسية مركزه ‪ Stock standard solutions‬يحضر المحلول‬
‫القياسي ا‪t‬لمركز ‪ 1‬مل = ‪1‬مل‪t‬جم بإذا‪t‬بة ‪ 10‬ملجم من المبيد في ‪ 10‬مل ميثانول‪.‬‬
‫ينقل المحلول في عبوات زجاجية ويحفظ في الثالجات بعيدا عن الضوء‪ .‬ويتم تغيره‬
‫كل ‪ 6‬أشهر‪.‬‬
‫‪ ‬محاليل فياسية داخلية‪Internal Standards :‬‬
‫يحضر بإذابة ‪ 10‬ملجم من مادة ‪bromo 3,5 dimethylphenyl N--4‬‬
‫في قنينة عيارية سعة ‪carbamate (BDMC) in methanol‬‬ ‫‪methyl‬‬
‫يضاف ‪ 5‬ميكرولتر الي ‪ 50‬مل من العينة ليعطي تركيز‬ ‫‪ 10‬مل‪.‬‬
‫‪10‬ميكرولتر ‪ /‬لتر‪.‬‬
‫‪ ‬محاليل قياسي عيارية‪Calbration Standards‬‬
‫‪ ‬محلول عياري أولي مختلط ‪Intermediate standard solution‬‬
‫‪ 1µg/ml‬يحضر من المحاليل القياسية المركزةاملجم‪1 /‬مل وذلك بنقل ‪100‬‬
‫ميكرو لتر من كل مركب تركيزه ( ‪1‬مل = ‪1‬ملجم) الي قنينة عيارية ‪ 10‬مل‬
‫ويتم التخفيف الي ‪ 10‬مل بالميثانول‪.‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪6 6‬‬
 ‫تابع محاليل قياسية ‪Standard solutions‬‬

‫تحضير محاليل قياسية عيارية‪Calibration standard solutions:‬‬

‫‪ ‬يتم تحضيره بتخفيف المحلول العياري األولي عند األس الهيدروجيني (‪)3‬‬
‫بإستخدام ‪ Monochloro acetic acid buffer‬إلعطاء تراكيز ‪،100‬‬
‫‪ 2 ‘10 ،40‬ميكروجرام‪/‬لتر يضاف المحلول العياري الداخلي بحيث يكون‬
‫التركيز النهائي ‪ 10‬ميكروجرام‪ /‬لتر‪.‬‬

‫‪ ‬تخزين المحاليل القياسية أو العيارية‪Store the Standard Solutions:‬‬

‫تحفظ في عبوات زجاجية عند درجة حرارة ‪4‬م‪ 0‬بعيدا عن الضوء‬
‫‪ Store solutions, under refrigeration, in glass vials fitted‬‬
‫‪with PTFE-lined screw caps or crimp tops. Replace every‬‬
‫‪six months or sooner if necessary‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪7 7‬‬
 ‫الطر‪I‬يقة‪Procedure:‬‬
‫‪ ‬ضبط األس الهيدروجيني للعينة والمحاليل العيارية عند ‪.3‬‬

‫‪ ‬يتم نقل حجم من العينة الي ‪ 50‬مل قارورة عيارية ‪Measuring Flask‬‬

‫‪Monochloro buffer‬‬ ‫‪ ‬ثم يتم إضافة ‪5‬و‪ 1‬مل من محلول رقم‬

‫‪ ‬يتم أضافة ‪ 5‬ميكرولتر من من المحلول القياسي الداخلي المركز ‪bromo 3,5-4‬‬

‫‪dimethylphenyl N- methyl‬‬

‫‪ ‬يتم التخفيف حتي ‪ 50‬مل وذلك بإضافة المذيد من العينة الي ‪Measuring Flask‬‬

‫‪ ‬يتم غسل الحقنة والمرشح بإستخدام مياه خالية من الملوثات العضوية‪.‬‬

‫‪ ‬يتم ترشيح ‪ 5‬أو ‪ 10‬مل من العينة المحضرة ويتم حقن ‪ 500‬ميكرو لتر في الجهاز‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪8 8‬‬
 ‫ يستخدم‬Liquid chromatography‫التحاليل الكروماتوجرافية‬
:‫ والمثبت علية‬HPLC(‫جهاز الكروماتوجراف السائل ذو الكفاءة‬

‫ كاشف الفلورسينتي‬
Fluorescence detector; exciation 230 min and emissio 418 
nm
‫ نوع العمود‬
mm long X 3.9 mm I.D. stainless steel packed with 150 
.4mm Novapak C18 (4 µm)
)Mobile phase ( ‫ الوسط الحامل‬
Linear gradient from 10:90 methanol/ water, hold 2 min, 
.then linear gradient to 80:20 methanol/ water in 25 min
. ‫ مل في الدقيقة‬1 )Flow rate( ‫ معدل التدفق‬
.‫ ميكرو ليتر‬500 ‫ حجم العينة المحقونة‬

03.06.22 Seite
Seite 9 9
 ‫معمالت المعايرة‪Calibration Factors :‬‬
‫‪ ‬في حالة تطبيق المعايرة الخارجية ‪ Extranal‬يتم حقن ‪ 500‬ميكرولتر من‬
‫محلول القياسي العياري ويحسب معامل المعايرة لكل مكون علي حده لكل‬
‫التركيزات من المعادلة التالية‪:‬‬

‫يحسب المتوسط الحسابي لمعامل المعايرة لكل مكون لجميع التركيزات كا األتي‪:‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪1010‬‬
 ‫‪ ‬يحسب (‪ )SD‬لمعامل االنحراف لكل مكون ومعدل األنحراف‬
‫النسبي‪.‬‬

‫اذا كانت النتيجة تساوي‪ %20±‬تدل علي أن التركيزات في مجال‬

‫الخط المستقيم‪.‬يتم أختبار المعايرة كل ‪ 12‬ساعة أوبعد تحليل ‪20‬‬
‫عينة وذلك بحقن محلول قياسي متوسط التركيز‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪1111‬‬
‫‪ ‬معامل المعايرة لكل مركب يجب االيزيد أو ينقص عن ‪ %15‬من‬
‫المتوسط الحسابي لمعمالت المعايرة‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪1212‬‬
‫‪ ‬في حالة استخدام المعايرة الداخلية يتم أضافة ‪ 5‬ميكرولترمن محاليل‬
‫فياسية داخلية‪ Internal Standards )10-2( :‬الي ‪ 50‬مل من‬
‫محاليل قياسية عيارية(‪ )2-11‬ليعطي تركيز ‪10‬ميكرولتر ‪ /‬لتر يتم‬
‫حساب معامل المعاير النسبي كما يلي ويشترط االيزيد أو ينقص عن‬
‫‪ .%20‬وفي حالة عدم المطابقة يتم تحضير محاليل عيارية جديدة‪.‬‬

‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪1313‬‬
‫يتم التأكد من المعايرة وذلك بإستخدام عينة مرجعية ‪Reference‬‬
‫‪ sample or control sample‬ثم يحسب معامل المعايرة‬
‫النسبي من المعادلة التالية‪:‬‬

‫‪03.06.22‬‬
‫‪03.06.22‬‬ ‫‪Seite‬‬
‫‪Seite‬‬ ‫‪1414‬‬
Where
Ax = integrated peak area of the analyte,

Ais = integrated peak area of the internal standard,

Qx = quantity of analyte injected in ng or concentration units,

Qis = quantity of internal standard injected in ng or

concentration units,

and RRF = relative response factor.

03.06.22 Seite
Seite 1515