‫‪Estimation of Reducing Sugars by Dinitrosalicylic Acid Method‬‬

‫تقدير السكريات المختزلة بطريقة حمض الداينيتروساليساليك‬

‫مقدمة ‪:‬‬

‫السكر المختزل هو أي سكر له القدرة على اإلختزال بسبب وجود مجموعة كربونيلية حرة فيه (ألدهيد‬
‫أو كيتون)‪ .‬ومن أشهر السكريات المختزلة‪ :‬الجلوكوز‪ ،‬الجالكتوز‪ ،‬الفركتوز‪ ،‬الرايبوز‪ ،‬الالكتوز‬
‫والمالتوز‪ .‬أما السكريات الغير مختزلة منها‪ :‬السكروز‪ ،‬النشا‪ ،‬الجليكوجين‪ ،‬السليلوز والدكستران‪.‬‬

‫يوجد سكر الجلوكوز في هيئة سلسلة مفتوحة بنسبة ‪ %50‬وآخر في هيئة حلقة بنسبة ‪ %50‬داخل‬
‫المحلول‪ .‬عند أكسدة مجموعة األلدهيد (‪ )CHO‬في هيئته المفتوحة تتحول إلى مجموعة كربوكسيل (‬
‫‪.)COOH‬‬

‫‪Aldehyde --------------(Ox.) ----------- Carboxyl‬‬

‫مبدأ التجربة‪:‬‬

‫هناك العديد من الكواشف المستخدمة لتقدير السكر المختزل مثل محلول بندكت ومحلول فهلنج وكاشف‬
‫تولنز ومن هذه الكواشف أيضا ً (‪ )Dinitrosalicylic Acid-3,5‬وهو (أصفر برتقالي اللون)‪ ،‬بحيث‬
‫يعمل السكر ذو السلسلة المفتوحة على اختزاله تحت تأثير حرارة الغليان (‪°100‬م) وتحويله إلى (‪-3‬‬
‫‪ )amino-5-nitrosalicylic Acid‬وهو (أحمر أو بني اللون) ‪ ،‬ولون هذا المركب يمكن قراءة‬
‫امتصاصه عند الطول الموجي ‪ 540‬نانومتر كما هو موضح في المعادلة التالية‪:‬‬
 ‫الهدف من التجربة‪:‬‬

‫عمل منحنى قياسي بواسطة تراكيز مختلفة من عينة جلوكوز قياسية ومن خاللها يمكن معرفة تركيز‬
‫عينة مجهولة‪.‬‬

‫العينة القياسية والكاشف المستخدم‪:‬‬

‫‪ -‬العينة القياسية‪ :‬محلول سكر الجلوكوز (‪.)mg / dL 100‬‬

‫‪ -‬الكاشف المستخدم‪.)Dinitrosalicylic Acid Reagent-3,5( :‬‬

‫األدوات وطريقة العمل‪:‬‬

‫‪ - 1‬تشغيل جهاز قراءة االمتصاص (‪ )Spectrophotometer‬والحمام المائي ليتم إحمائهما‪.‬‬

‫‪ - 2‬تجهيز العينة القياسية بإذابة ‪ 1‬جم من ( ‪ )Glucose anhydride‬في ‪ 100‬مل ماء مقطر‪.‬‬

‫‪ - 3‬نعمل تراكيز مختلفة من العينة القياسية بتخفيفها في الماء المقطر مع األخذ في االعتبار إضافة‬
‫الماء أوالً‪ ،‬ثم محلول الجلوكوز ثم الكاشف‪.‬‬

‫يكون المحتوى الكلي لألنبوبة الواحدة ‪ 1‬مل اعتمادا على اإلضافات في الجدول التالي‪:‬‬

‫)‪T2 (Serum‬‬ ‫‪T1‬‬ ‫‪ST8‬‬ ‫‪ST7‬‬ ‫‪ST6‬‬‫‪ST5‬‬ ‫‪ST4‬‬ ‫‪ST3‬‬ ‫‪ST2‬‬ ‫‪ST1‬‬ ‫‪Blank‬‬ ‫‪Pipette \ Tubes‬‬
‫‪400‬‬ ‫‪40‬‬ ‫‪10‬‬ ‫‪15‬‬ ‫‪20‬‬ ‫‪25‬‬ ‫‪30‬‬ ‫‪35‬‬ ‫‪40‬‬ ‫‪45‬‬
‫‪500‬‬ ‫)‪D.H2O (µl‬‬
‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬
‫‪100‬‬ ‫‪10‬‬ ‫‪40‬‬ ‫‪35‬‬ ‫‪30‬‬ ‫‪25‬‬ ‫‪20‬‬ ‫‪15‬‬ ‫‪10‬‬
‫‪50‬‬ ‫‪-‬‬ ‫)‪Glucose | Test (µl‬‬
‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬
‫‪500‬‬ ‫)‪DNS (µl‬‬
‫‪40‬‬ ‫‪35‬‬ ‫‪30 25‬‬ ‫‪20‬‬ ‫‪15‬‬ ‫‪10‬‬ ‫‪Concentration‬‬
‫?‬ ‫?‬ ‫‪50‬‬ ‫‪0‬‬
‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪0‬‬ ‫)‪(mg / dL‬‬

‫‪ – 4‬بعد إضافة الكاشف (‪ )DNS‬نضع األنابيب في الحمام المائي عند ‪°100‬م لمدة خمس دقائق‪ ،‬ثم‬
‫نبرد األنابيب‪.‬‬

‫‪ - 5‬نقيس االمتصاص عند (‪ )nm 540‬بجهاز الـ(‪.)Spectrophotometer‬‬

‫‪Tubes‬‬ ‫‪Blank‬‬ ‫‪ST1‬‬ ‫‪ST2‬‬ ‫‪ST3‬‬ ‫‪ST4‬‬ ‫‪ST5‬‬ ‫‪ST6‬‬ ‫‪ST7‬‬ ‫‪ST8‬‬ ‫‪T1‬‬ ‫)‪T2 (Serum‬‬
‫)‪Absorbance (nm‬‬

‫‪ - 6‬نرسم المنحنى القياسي للجلوكوز في ورقة في رسم بياني ونحسب التركيز المجهول من عالقة‬
‫بير‪-‬المبيرت‪.‬‬