‫‪ .

3‬المواد وطرق العمل‬

‫‪ .1.3‬العينات‪:‬‬
‫أجريت هده الدراسة على عدد عينة من المرضي المترددين على مركز عزل مستشفى براك‬
‫العام في منطقة براك الشاطئ‪،‬وذلك خالل فترة من ‪ 2021-8-1‬إلي ‪ 2021-8-25‬حيت ثم‬
‫الحصول على عينات مصل مع تعبئة االستبيان لكل مريض (الملحق)‪.‬‬
‫تم ُأخدت عينة دم كامل من هؤالء االشخاص بواسطة حقن بالستيكية مزودة بإبرة ‪G23‬‬

‫ووضعت في أنابيب‪ 2‬مل ال تحتوي على مانع التجلط إلجراء اختبار عياريه األجسام المضادة‬
‫وبعد ذلك ثم وضعها في جهاز الطرد المركزي لغرض الحصول على مصل مفصول عن خاليا‬
‫الدم إلجراء االختبار‪ ،‬كما جمعت البيانات حول حالة المريض الصحية من المسئولين عن‬
‫المرضي‪.‬‬
‫األدوات المستخدمة‪. 2.3:‬‬
‫‪ -1‬حقن بحجم ‪ 5‬مل مزودة بإبرة قياس ‪.23G‬‬
‫‪ -2‬رباط ضاغط‪.‬‬
‫‪ -3‬كحول طبي للتعقيم‪.‬‬
‫‪ -4‬أنابيب اختبار ال تحتوي على مانع تجلط‪.‬‬
‫‪ -5‬أنابيب تحتوي على مانع تجلط‪. Sodium Citrate‬‬
‫‪ -6‬ماصة نصف أوتوماتيكية بحجم ‪ 1000 ،100، 75 ،10 , 5‬ميكرولتر‪.‬‬
‫‪.Tips -7‬‬
‫‪.Selectra Cuvette -8‬‬

‫‪ 3.3‬األجهزة المستخدمة‪:‬‬

‫‪ -1‬جهاز الطرد المركزي لفصل عينات السيرم و البالزما‬

 ‫ يوضح جهاز الطرد المركزي‬1.3 ‫شكل‬

CRP D.dimer‫ لتحليل اختبارات‬.LS- 1100 fluorescence immunoassay analyzer ‫ جهاز‬-2

.LS- 1100 fluorescence immunoassay analyser ‫ يوضح جهاز‬1.4 ‫شكل‬

Selecrta Pro M ‫جهاز السليكترا‬-3

 ‫شكل يوضح جهاز السليكترا ‪Selecrta Pro M‬‬

‫‪-4‬جهاز ‪DRI CHEMISTRY‬‬

‫شكل يوضح جهاز ‪DRI CHEMISTRY NX500‬‬

‫‪ 4.3‬الطرق المستخدمة‪:‬‬
‫‪ 1.4.3‬بيانات المصابين‪:‬‬
‫تم جمع بيانات المرضى من السجالت الطبية بمركز عزل مستشفى براك الشاطئ‪ ،‬حيث تم‬
‫تأكيد إصابة المرضي بفيروس ‪ 2SARS-CoV‬مخبريًا عن طريق تقنية ‪RT-PCR‬ومن قبل مركز‬
‫مكافحة األمراض السارية فرع براك الشاطئ‪ ،‬كما تم التواصل مع االختصاصين واألطباء‬
‫المشرفين بأقسام العزل المسئولين عن المرضى للحصول على عينات مصل من المرضي‬
‫المستهدفين للمرضي وملئ االستبيان الخاص بالدراسة (الملحق)‪.‬‬
‫‪ .2.4.3‬تصنيف شدة اإلصابة‪:‬‬
‫صنفت الحاالت حسب شدتها اعتمادا على الحالة السريرية للمريض كما يلي‪-:‬‬
‫● الحاالت الخفيفة‪ :‬بأعراض بسيطة او بدون أعراض‪ ،‬مع تشخيص طبي حسب التحاليل‬
‫الروتينية وصور أشعة توضح الحالة السريرية المعتدلة للرئتين و التاريخ الطبي للمريض الذي‬
‫يوضح قدرة المريض على مجابهة أعراض و مضاعفات المرض من الناحية الصحية باإلضافة‬
‫إلى المرحلة العمرية للمريض وتخوف األطباء تجاه الحالة من عدمه في حاجة المريض إلي‬
‫عزل طبي‪.‬‬
‫●الحاالت المتوسطة‪ :‬تم إيواءها في المستشفى بأعراض معتدلة مع تشخيص طبي حسب‬
‫التحاليل الروتينية و صور أشعة توضح الحالة السريرية للرئتين بتغير واضح و كبير لطبيعة‬
‫الرئة مع تخوف األطباء تجاه قابلية جسم المريض على ازدياد التغيرات و تطور المرض‬
‫ومضاعفاته عند المريض بغض النظر عن المرحلة العمرية الطبي والتاريخ الطبي للمريض‬
‫الذي يوضح خلو الحالة من اي مشاكل صحية أخرى‪.‬‬
‫● الحاالت الشديدة‪ :‬تم عزلها في مراكز العزل‪ ،‬بسبب شدة األعراض و التغيرات الواضحة في‬
‫التحاليل الروتينية و صور األشعة للرئتين باإلضافة للحالة الصحية حسب التاريخ المرضي‬
‫للمريض و عمره و شدة ظهور مضاعفات المرض و تخوف األطباء منها (‪.)Das et al, 2020‬‬

‫‪ 5.3‬االختبارات المستخدمة‪:‬‬
‫تم قياس هذه االختبارات بواسطة محاليل محضرة من قبل شركات مختلفة كالتالي الكتروليت‬
‫من شركة (‪ ،)Fijifilm‬وكذلك الجهاز (‪ )DRI chemistry‬من شركة ‪ ،Fujifilm‬و محلول الكرياتينين‬
‫من شركة(‪ ,)Biomaghreb‬السكر من شركة ‪ ، ))Erba‬ليوريا ‪ ،‬حمض اليوريك من‬
‫شركة‪ ، ))Delma‬ومحلول السكر التراكمي ‪ HbA1c، CRP‬و ‪ D.dimer‬من شركة ‪).)Lansionbio‬‬

‫‪.‬‬
 ‫‪ 5.3 .1‬اختبار البروتين الحاد ‪:CRP‬‬
‫هو اختبار للكشف عن التراكيز العالية جدا من بروتين الطور الحاد في الدم‪ ،‬بروتين الطور‬
‫الحاد بروتين تنتجه الكبد بشكل طبيعي في الدم‪،‬ويزداد إنتاجه من قبل الكبد عند تعرض الجسم‬
‫لبعض أنواع اإللتهابات المختلفة وهو اختبار غير متخصص أي ال يحدد مكان وال سبب‬
‫االلتهاب الحادث لكن يعطي فكرة عن شدة االلتهاب حيث انه يتناسب بشكل طردي مع شدة‬
‫االلتهاب يتم إجراء اختبار ‪ CRP‬على عينة من المصل المريض المشتبه في انه يعاني التهاب ما‬
‫بالجسم‪.‬‬
‫❖ مبدأ العمل‪:‬‬
‫يستخدم االختبار طريقة شطيرة للكشف المناعي‪ ،‬يرتبط الجسم المضاد للكاشف الموجود في‬
‫المخزن المؤقت بمولد الضد في العينة‪ ،‬ويشكل مجمعات األجسام المضادة للمستضد‪ ،‬وينتقل إلى‬
‫مصفوفة النيتروسليلوز ليتم التقاطه بواسطة الجسم المضاد المثبت على شريط االختبار‪.‬‬
‫كلما زاد عدد المستضد في العينة‪ ،‬زاد معقد األجسام المضادة للمستضد ويؤدي إلى كثافة أقوى‬
‫لإلشارة على الجسم المضاد للكاشف‪.‬‬
‫❖ طريقة العمل‪:‬‬

‫نأخذ ‪ µl5‬من عينة المصل باستخدام الماصة إلي األنبوب المحتوي على محلول‪.‬‬
‫● نقوم بإغالق األنبوبة التي تحتوي على المحلول والعينة ونرج حوالي ‪ 10‬مرات‪.‬‬
‫● نأخذ‪ µl 75‬من خليط العينة ونضعه في المكان المخصص له على الكارتريدج‪.‬‬
‫● نقوم بإدخال الكارتريدج في الجهاز‪.‬‬
‫نقوم بالضغط على زر ابدأ في الجهاز ثم مباشرة يبدأ الجهاز بفحص العينة ثم بعد ‪ 3‬دقائق ونقوم‬
‫بقراءة النتيجة‪.‬‬
‫‪5.3 .2 .‬اختبار ‪:D.dimer‬‬

‫اختبار ‪D.dimer‬هو اختبار للكشف عن التراكيز العالية جدا من شظايا بروتين الفيبرين في الدم‬
‫‪ ،‬بروتين الفيبرين هو عبارة عن بروتين له دور في عملية التجلط‪ ،‬و يزداد انتاجه من قبل الكبد‬
‫عند تعرض الجسم لبعض أنواع التجلطات المختلفة و هو اختبار غير متخصص أي ال يحدد‬
‫مكان و ال سبب التجلط الحادث لكن يعطي فكرة عن حدوث جلطات بالجسم يتم إجراء اختبار‬
‫‪ D.dimer‬على عينة من المصل المريض المشتبه في انه يعاني تجلطات ما بالجسم ‪.‬‬
 ‫❖ مبدأ العمل‪:‬‬

‫❖ يستخدم االختبار طريقة شطيرة للكشف المناعي‪ ،‬يرتبط الجسم المضاد للكاشف الموجود في‬
‫المخزن المؤقت بمولد الضد في العينة‪ ،‬ويشكل مجمعات األجسام المضادة للمستضد‪ ،‬وينتقل إلى‬
‫مصفوفة النيتروسليلوز ليتم التقاطه بواسطة الجسم المضاد المثبت على شريط االختبار‪.‬‬

‫كلما زاد عدد المستضد في العينة‪ ،‬زاد معقد األجسام المضادة للمستضد ويؤدي إلى كثافة أقوى‬
‫لإلشارة على الجسم المضاد للكاشف‪.‬‬
‫❖ طريقة العمل‪:‬‬

‫نأخذ ‪ µl100‬من بالزما المريض باستخدام الماصة إلي األنبوب يحتوي على محلول‪.‬‬ ‫●‬
‫نقوم بإغالق األنبوبة التي تحتوي على المحلول والعينة ونرج حوالي ‪ 10‬مرات‪.‬‬ ‫●‬
‫نأخذ ‪µl100‬من خليط العينة ونضعه في المكان المخصص له على الكارتريدج‪.‬‬ ‫●‬
‫نقوم بإدخال الكارتريدج في الجهاز‪.‬‬ ‫●‬
‫نقوم بالضغط على زر ابدأ في الجهاز ثم مباشرة يبدأ الجهاز بفحص العينة ثم بعد ‪3‬‬ ‫●‬
‫دقائق ونقوم بقراءة النتيجة‪.‬‬
‫‪ 3 .5 .3‬اختبار الكرياتينين‪-:‬‬
‫اختبار الكرياتينين هو قياس لمدى كفاءة الكلية في أداء وظيفتهما في ترشيح الفضالت من الدم‪.‬‬

‫والكرياتنين هو مركب كيميائي منبثق من عمليات إنتاج الطاقة في العضالت‪ ،‬حيث تر ِّشح الكلى‬
‫السليمة الكرياتينين خارج الدم‪ ،‬ويخرج الكرياتينين من الجسم ضمن الفضالت الخارجة مع‬
‫البول‪.‬‬

‫❖ مبدأ العمل‪-:‬‬

‫تعتمد الطريقة على تفاعل جاف‪ ,‬يتفاعل الكرياتينين مع أيون البكرات المتكونة في وسط قلوي‬
‫لتكوين لون أحمر برتقالي‪ ،‬ثم تتم مقارنة اللون الناتج من العينة في مقياس األلوان بطول موجي‬
‫يبلغ ‪ )492nm (490-510 nm‬مع اللون الناتج عن كمية معروفة من الكرياتينين في نفس الحالة‪.‬‬

‫❖ طريقة العمل‪:‬‬
‫نقوم ببرمجة جهاز ‪ Selectra‬إلختبار الكرياتينين أليا ً كما هو مبين بالورقة المخصصة‬ ‫●‬
‫لشركة ‪ Biomaghreb‬المرفقة بالملحق ‪.‬‬

‫نقوم بالتأكد من معايرة جهاز ‪ Selectra‬الختبار الكرياتينين و قبول قراءته في منحنى‬ ‫●‬
‫المعيارية‪.‬‬
‫نأخذ ‪ µl1000‬من سيرم المريض باستخدام الماصة إلي ‪ Cuvette‬الخاصة بجهاز‬ ‫●‬
‫‪.Selectra‬‬
‫نقوم بإدخال بيانات العينة بالجهاز ثم نقوم بوضع ‪ Cuvette‬التي تحتوي على عينة‬ ‫●‬
‫السيرم فالمكان المخصص لها بالجهاز ‪.‬‬
‫نقوم بالضغط على خيار الكرياتينين في الجهاز ثم مباشرة يبدأ الجهاز بفحص العينة و‬ ‫●‬
‫بعد ظهور النتيجة ونقوم بتدوينها‪.‬‬
‫‪ 3 .5 .4‬اختبار ليوريا ‪:-‬‬

‫يتم إجراء تحليل ليوريا لتقييم صحة الكلى وتعد ليوريا احد المخلفات التي تنتج في الكبد نتيجة‬
‫إستقالب البروتينات و إستقالب األحماض األمينية‪ ,‬تفرز ليوريا من الكبد للدم الذي ينقلها للكلى‬
‫حيث يتم تصفيتها خارج الدم وطرحها بالبول‪.‬‬

‫تم قياس ليوريا في المصل بواسطة المحاليل الجاهزة المحضرة من شركة ‪ Biomaghreb‬و‬
‫التي تعتمد على الطريقة اإلنزيمية اللونية ‪.‬‬

‫❖ مبدأ التفاعل‪-:‬‬

‫يتفاعل ‪ salicylate‬و ‪ hypochlorite‬في محلول العمل مع ايونات األمونيوم لتكوين ‪ 2.2‬تنائي‬

‫كربوكسي‪-‬اندوفينول كمية هذا المركب األخضر تتناسب مع تركيز ليوريا في العينة وتقاس شدة‬
‫االمتصاص بواسطة جهاز قياس الطيف الضوئي (‪ )4040‬عند طول موجي ‪.nm 578‬‬

‫طريقة العمل‪:‬‬ ‫❖‬

‫نقوم ببرمجة جهاز ‪ Selectra‬إلختبار اليوريا أليا ً كما هو مبين بالورقة المخصصة‬ ‫●‬
‫لشركة ‪ Delma‬المرفقة بالملحق ‪.‬‬
‫نقوم بالتأكد من معايرة جهاز ‪ Selectra‬الختبار اليوريا و قبول قراءته في منحنى‬ ‫●‬
‫المعيارية‪.‬‬
‫نأخذ ‪ µl1000‬من سيرم المريض باستخدام الماصة إلي ‪ Cuvette‬الخاصة بجهاز‬ ‫●‬
‫‪.Selectra‬‬
‫نقوم بإدخال بيانات العينة بالجهاز ثم نقوم بوضع ‪ Cuvette‬التي تحتوي على عينة‬ ‫●‬
‫السيرم فالمكان المخصص لها بالجهاز ‪.‬‬
‫نقوم بالضغط على خيار اليوريا في الجهاز ثم مباشرة يبدأ الجهاز بفحص العينة و بعد‬ ‫●‬
‫ظهور النتيجة ونقوم بتدوينها‪.‬‬
‫‪ 3 .5 .5‬قياس تركيز حمض البوليك في المصل ‪-:‬‬

‫يقيس هذا االختبار كمية حمض البوليك في الدم او البول‪ ،‬وحمض البوليك هو منتج طبيعي‬
‫يصنع عندما يكسر الجسم مواد كيميائية تسمى البيورينات‪ ,‬وهي مواد موجودة في خاليا الجسم‬
‫وفي بعض األطعمة‪ .‬يذوب معظم حمض البوليك في الدم ثم يذهب الي الكليتين من هناك يترك‬
‫الجسم من خالل البول ‪ ,‬لكن إذا كان جسمك ينتج الكثير من حمض البوليك او ال ينفصل بما‬
‫يكفي في البول‪ ,‬فيمكن ان يصنع بلورات تتشكل في المفاصل وهذا ما يسمى بداء النقرس‪ ،‬كما‬
‫يمكن ان تؤدي مستويات عالية من حمض البوليك إلي اضطرابات أخرى بما في ذلك حصى‬
‫الكلى والفشل الكلوي (‪.)Marshall and Day 2017‬‬

‫❖ مبدأ التفاعل‪-:‬‬

‫يتأكسد حمض اليوريك بواسطة اليوريكاز إلى االنتوين وبيروكسيد الهيدروجن حسب المعادلة‬
‫التالية‪-:‬‬

‫‪Uric acid+ O2+2H2O‬‬ ‫‪Uricase Allantoine +CO2 +H2O2‬‬

‫‪2H2O2+ 4 Aminophenazone +2-4 Dichloro-phenol-sulfonate‬‬ ‫‪peroxidase‬‬

‫‪Quinoneimine+4H2O‬‬

‫طريقة العمل‪:‬‬ ‫❖‬

‫نقوم ببرمجة جهاز ‪ Selectra‬إلختبار حمض اليوريك أليا ً كما هو مبين بالورقة‬ ‫●‬
‫المخصصة لشركة ‪ Delma‬المرفقة بالملحق ‪.‬‬

‫نقوم بالتأكد من معايرة جهاز ‪ Selectra‬الختبار حمض اليوريك و قبول قراءته في‬ ‫●‬
‫منحنى المعيارية‪.‬‬

‫نقوم بالتأكد من معايرة جهاز ‪ Selectra‬الختبار حمض اليوريك و قبول قراءته في‬ ‫●‬
‫منحنى المعيارية‪.‬‬
‫نأخذ ‪ µl1000‬من سيرم المريض باستخدام الماصة إلي ‪ Cuvette‬الخاصة بجهاز‬ ‫●‬
‫‪.Selectra‬‬
‫نقوم بإدخال بيانات العينة بالجهاز ثم نقوم بوضع ‪ Cuvette‬التي تحتوي على عينة‬ ‫●‬
‫السيرم فالمكان المخصص لها بالجهاز ‪.‬‬
‫نقوم بالضغط على خيار حمض اليوريك في الجهاز ثم مباشرة يبدأ الجهاز بفحص‬ ‫●‬
‫العينة و بعد ظهور النتيجة ونقوم بتدوينها‪.‬‬

‫‪ 3 .5 .6‬قياس تركيز سكر الجلكوز في المصل ‪-: )) FBS/RBS‬‬

‫تم قياس الجلوكوز في المصل بواسطة المحاليل الجاهزة المحضرة من شركة ‪ , ))Erba‬والتي‬
‫تعتمد على الطريقة اللونية‪.‬‬

‫❖ مبدأ التفاعل‪-:‬‬

‫الجلوكوز يؤكسد بواسطة إنزيم الجلوكوز اوكسيديز الي ‪ gloconate‬و ‪ H2O2‬فوق أكسيد‬
‫الهيدروجين الذي يتفاعل تحث تأثير أنزيم البيروكسيديز في وجود الفينول حيث تتكون صبغة‬
‫حمراء بنفسجية تسمى ‪ Quineimine‬تتناسب شدة لونها مع تركيز الجلوكوز في العينة وتقاس‬
‫شدة االمتصاص بواسطة جهاز قياس الطيف الضوئي عند طول موجي ‪. nm 505‬‬

‫❖ خطوات العمل ‪-:‬‬

‫❖ طريقة العمل‪:‬‬
‫نقوم ببرمجة جهاز ‪ Selectra‬إلختبار الجلوكوز أليا ً كما هو مبين بالورقة المخصصة‬ ‫●‬
‫لشركة ‪ Erba‬المرفقة بالملحق ‪.‬‬

‫نقوم بالتأكد من معايرة جهاز ‪ Selectra‬الختبار الجلوكوز و قبول قراءته في منحنى‬ ‫●‬
‫المعيارية‪.‬‬
‫نأخذ ‪ µl1000‬من سيرم المريض باستخدام الماصة إلي ‪ Cuvette‬الخاصة بجهاز‬ ‫●‬
‫‪.Selectra‬‬
‫نقوم بإدخال بيانات العينة بالجهاز ثم نقوم بوضع ‪ Cuvette‬التي تحتوي على عينة‬ ‫●‬
‫السيرم فالمكان المخصص لها بالجهاز ‪.‬‬
‫نقوم بالضغط على خيار الجلوكوز في الجهاز ثم مباشرة يبدأ الجهاز بفحص العينة و‬ ‫●‬
‫بعد ظهور النتيجة ونقوم بتدوينها‪.‬‬
‫‪ .6.3‬التحليل اإلحصائي‪:‬‬
‫تم استخدام البرنامج اإلحصائي ‪Mini tab 16‬لتحليل ومقارنة الفئات والعوامل المختلفة‪ ،‬تم إجراء‬
‫اختبار مربع كاي عند مستوى الداللة ‪ ،P-value 0.05‬و ذلك لمعرفة ما أذا كانت هناك فروق‬
‫معنوية ذات داللة إحصائية‪ ،‬كما تم إجراء اختبار االرتباط لمعرفة ما إذا كان هناك ارتباطات‬
‫طردية أو عكسية قوية ذات داللة إحصائية‪.‬‬