‫‪2013‬‬

‫بسم هللا الرحمن الرحيم‬

‫المملكة العربية السعودية‬
‫جامعة الملك عبدالعزيز‬
‫قسم األحياء الدقيقة‬

‫‪microbiology‬‬

‫عبدالعزيز حسن عوض‬

‫الفصل الصيفي عام ‪1433-1434‬‬
 ‫الفهرس‬
‫المقدمة ‪3 ..................................................................................‬‬
‫األمن و السالمة في المختبرات‪4 ........................................................‬‬
‫مستشفى الملك فهد بجدة‪5 ...............................................................:‬‬
‫المختبر الطبي‪5 ....................................................................... :‬‬
‫أقسام المختبر‪5 ........................................................................ :‬‬
‫قسم األحياء الدقيقة )‪6 ............................................... (Microbiology‬‬
‫أوال‪ :‬إستقبال العينات ‪6 .................................. : Specimens receiving‬‬
‫أنواع العينات الخاصة بهذا القسم‪7 ................................................ :‬‬
‫ثانيا‪ :‬زراعة العينات ‪9 ........................................ specimens culture‬‬
‫البيئات الزراعية ‪9 ............................................ :Culture Media‬‬
‫أ)عينات المسحات و سوائل الجسم (‪15 )Swabs&Bodyfluid specimens‬‬
‫ب)عينات البول (‪16 ...................................... )Urine Specimens‬‬
‫ت)عينات البراز و البصاق (‪17 .......... )Stool & Sputum Specimens‬‬
‫أنواع العينات و البيئات التي تزرع بها ‪11 ........................................‬‬
‫ثالثا‪ :‬تعريف و قراءة النتائج ‪19 .........................................................‬‬
‫إختبار الحساسية لمعرفة المضاد الحيوي المناسب للميكروب ‪Antibiotics‬‬
‫‪02 .............................................................. susciptbility test‬‬
‫جهاز ‪02 .................................................................... :Vitek‬‬
‫جهاز ‪04 ................................................................:Phoenix‬‬
‫الطريقة اليدوية )‪07 ............................................. :Manual (AST‬‬
‫المضادات الحيوية ‪01 .............................................. Antibiotics‬‬
‫أ)عينات المسحات و سوائل الجسم )‪09 ........................................ (SBI‬‬
‫أنواع الميكروبات الممرضة في عينات المسحات و سوائل الجسم التي تم‬
‫التدريب عليها‪45 ................................................................... :‬‬
‫ب)عينات البول (‪51 ..........................................)Urine Specimen‬‬

‫‪1‬‬
‫أنواع الميكروبات الممرضة في عينات البول‪62 ................................ :‬‬
‫ب)عينات البراز و البصاق (‪60 .............. )Stool&Sputum Specimens‬‬
‫أهم الميكروبات الممرضة في عينات البصاق ‪64 ............................... :‬‬
‫عينات الدم (‪67 .................................. )Blood Culture Specimens‬‬
‫‪71 ...................................................................Flow charts‬‬
‫الخاتمة ‪73 ................................................................................‬‬
‫مصادر الصور ‪74 ..................................................................‬‬
‫المراجع ‪79 ..........................................................................‬‬

‫‪0‬‬
 ‫المقدمة‬
‫الحمدهلل حمدا كثيرا و الصالة و السالم على سيدنا محمد و على آله و صحبه‬
‫أجمعين ‪ ,‬قال صلى هللا عليه وسلم ((إذا مات ابن آدم انقطع عمله إال من ثالث‬
‫صدقة جارية أو علم ينتفع به أو ولد صالح يدعو له ))‪.‬‬
‫التدريب الميداني خطوة ممتازة من التعليم الجامعي حيث يساعد على ترسيخ و‬
‫ممارسة الخبرات المكتسبة خالل سنوات الدراسة من خالل المجال المهني‪.‬‬
‫فكان التدريب حافز لتطوير الذات في المهارات الميكروبيولوجية التطبيقية في‬
‫المختبر‪.‬‬
‫و كنت خالل فترة التدريب شديد الحرص على إكتساب المعلومات التي تفيدني‬
‫مستقبال في مجال مختبرات الميكروبيولوجي‪.‬‬
‫و في هذا التقرير أقوم بعرض ما قمت بممارسته و مشاهدته‪.‬‬

‫‪3‬‬
 ‫األمن و السالمة في المختبرات‬
‫‪ -1‬يمنع منعا إدخال المشروبات و المأكوالت إلى المختبر و تجنب لمس الفم و‬
‫األنف أثناء العمل‪.‬‬
‫‪ -0‬لبس حذاء غير مفتوح عند دخول المختبر‪.‬‬
‫‪ -3‬ارتداء معطف الختبر ‪ Lab Coat‬دائما داخل المختبر‪.‬‬
‫‪ -4‬ارتداء ‪ yellow Gown‬الواقي من المواد المعملية المختلفة‪.‬‬
‫‪ -5‬لبس ‪ Gloves‬و التعامل بحذر شديد مع الميكروبات الممرضة‪.‬‬
‫‪ -6‬لبس الكمامات ‪.Mask‬‬
‫‪ -7‬تنظيف الـ ‪ Bench‬قبل العمل و تطهيره بمادة مطهرة‪.‬‬
‫‪ -1‬غسل اليدين بالماء و الصابون قبل بدء العمل و بعد اإلنتهاء منه‪.‬‬
‫‪ -9‬زراعة العينات داخل ‪.Safety Cabinet‬‬
‫التخلص من العينات الطبية ‪ Specimens‬التي تم زراعتها و إبر‬ ‫‪-12‬‬
‫التلقيح ‪ Loops‬و ‪ Swabs‬المخصصة للزراعة في النفايات المخصصة لها‪.‬‬
‫الحرص على كتابة معلومات العينة المزروعة على أطباق بتري‬ ‫‪-11‬‬
‫(على الغطاء) و على أنابيب البيئات السائلة‪.‬‬

‫‪4‬‬
 ‫مستشفى الملك فهد بجدة‪:‬‬
‫افتتح المستشفى عام ‪ 0011‬هـ ضمن خمس مستشفيات تحمل نفس األسم في مناطق‬
‫أخرى من المملكة في عهد خادم الحرمين الشريفين الملك فهد بن عبد العزيز يرحمه‬
‫هللا‪.‬تعد مستشفى الملك فهد بجده معلما طبيا وأكبر مستشفيات وزارة الصحه بالمنطقة‬
‫وماحولها‪ .‬تضم المستشفى عددا من المراكز الطبيه التخصصيه مثل مركز القلب‬
‫ومركز األنف واألذن والحنجره‪,‬مركز الكلى‪ ,‬مركز األسنان‪,‬مركز األمير سلطان‬
‫بن عبد العزيز لجراحة المناظير‪.‬‬

‫المختبر الطبي‪:‬‬
‫مما الشك فيه ان للمختبرات دور مهم في مساعدة الطبيب في اختيار او تحديد‬
‫التشخيص المناسب لمرض معين من قائمة التشخيصات المطلوبه ومن ثم اعطاء‬
‫العالج المناسب للمريض الذي يسهم في تحسنه ‪ ..‬لذلك يتميز بأنه قسم من أهم أقسام‬

‫أقسام المختبر‪:‬‬
‫‪ -1‬سحب الدم ‪Phlebotomy‬‬
‫‪ -0‬إستقبال العينات ‪Reception‬‬
‫‪ -3‬األحياء الدقيقة ‪Microbiology‬‬
‫‪ -‬وحدة الطفيليات ‪Parasitology‬‬
‫‪ -‬وحدة الدرن ‪Tuberculosis‬‬
‫‪ -4‬الفيروسات الجزيئية ‪Molecular Virology‬‬
‫‪ -5‬المناعة و األمصال ‪Immunology & Serology‬‬
‫‪ -6‬الكيمياء الحيوية ‪Biochemistry‬‬
‫‪ -7‬أمراض الدم ‪Hematology‬‬
‫‪ -1‬علم األنسجة ‪Histology‬‬
‫‪ -9‬إختبار الحمض النووي ‪NAT‬‬
‫بنك الدم ‪Blood Bank‬‬ ‫‪-12‬‬

‫‪5‬‬
 ‫قسم األحياء الدقيقة )‪(Microbiology‬‬

‫يعتبر مختبر األحياء الدقيقة من أهم المختبرات الموجودة في المستشفيات حيث‬

‫يساهم بدرجة كبيرة في تشخيص العديد من األمراض التي تصيب اإلنسان و يكون‬
‫مسببها أنواع من الكائنات الحية الدقيقة الممرضة و من ثم التعرف عليها و إجراء‬
‫إختبار الحساسية للوصول إلى المضاد الحيوي المناسب لكل ميكروب‪.‬‬
‫ينقسم هذا المختبر إلى أربع أقسام ‪:‬‬

‫قسم الزراعة ‪Culture Bench‬‬ ‫‪‬‬

‫قسم عينات المسحات وسوائل الجسم )‪Swab & Body fluid bench (SB‬‬ ‫‪‬‬
‫قسم عينات البراز والبصاق )‪Stool & Sputum Bench (SS‬‬ ‫‪‬‬
‫قسم عينات البول ‪Urine Bench‬‬ ‫‪‬‬
‫قسم عينات الدم ‪Blood Bench‬‬ ‫‪‬‬

‫أوال‪ :‬إستقبال العينات ‪: Specimens receiving‬‬

‫عند إستقبال العينات و قبل فرزها و زراعتها التأكد من إرفاق نموذج الطلب مع‬
‫العينة و المطابقة بين البيانات على نموذج الطلب و الرقم الذي تم الصاقه من قبل‬
‫قسم اإلستقبال و من ثم تسجيل رقم العينة و تاريخ اليوم في ملف خاص بالقسم‪.‬‬

‫‪6‬‬
 ‫أنواع العينات الخاصة بهذا القسم‪:‬‬
‫‪ -1‬عينات الدم (‪)Blood Culture Specimens‬‬

‫شكل (‪)1-1‬‬
‫‪ -0‬عينات البول (‪)Urine Specimens‬‬

‫شكل (‪)1-2‬‬
‫‪ -3‬عينات البراز (‪)Stool Specimens‬‬

‫شكل (‪)1-3‬‬

‫‪7‬‬
 )Swab Specimens( ‫ عينات المسحات‬-4

)Wound Swabs( ‫مسحات الجروح‬ 

)Vaginal Swabs( ‫مسحات المهبل‬ 
)Eye Swabs( ‫مسحات العين‬ 
)Ear Swabs( ‫مسحات األذن‬ 
)Throat Swabs( ‫مسحات الحلق‬ 
)Respiratory Swabs( ‫مسحات من الجهاز التنفسي‬ 
)Genital Swabs( ‫مسحات من األعضاء التناسلية‬ 
)Body Fluids Swabs( ‫مسحات من سوائل الجسم‬ 
pus ‫ عينات صديد‬-5
sputum ‫ عينات بلغم‬-6
‫ سائل النخاع الشوكي‬Cerebrospinal fluid (CSF) ‫ عينات‬-7
: sterile body fluid‫ عينات‬-1
Synovial fluid -
Peritoneal fluid -
Precarditis and myocarditis fluid -
Pleural fluid -

)1-4( ‫شكل‬

1
 ‫ثانيا‪ :‬زراعة العينات ‪specimens culture‬‬
‫البيئات الزراعية ‪:Culture Media‬‬
‫هي الوسط الصناعي الذيتنمو وتتكاثر عليه البكتيريا ألنه يحتوي على المواد الغذائية‬
‫الالزمة لنمو الميكروب‪.‬‬

‫‪ ‬بيئة أجار الدم ‪)BAP( Blood Agar‬‬

‫تستخدم لنمو معظم الميكروبات خصوصا تلك التي الى تنمو إال بوجود الدم و‬
‫أهميتها في مشاهدة أنواع تحلل الدم ‪ Haemolysis‬للتتمييز بين أنواع‬
‫‪.Streptococcus‬‬

‫شكل (‪)2-1‬‬

‫‪ ‬بيئة أجار الشوكليت (‪)Chocolate Agar‬‬

‫تنمو عليها أغلب أنواع البكتيريا التي تحتوي على عوامل ‪ X‬مثل & ‪hematin‬‬
‫‪ , hymen‬و عامل ‪ V‬و هو مادة ‪Nicotineamide Adenine Dinucleotide‬‬
‫)‪ (NAD‬الناتجة من تكسير كريات الدم الحمراء )‪ (RBCs‬و التي يمكن من خاللها‬
‫نمو أنواع جنس محبات الدم ‪Haemophilus‬‬

‫شكل (‪)2-2‬‬

‫‪9‬‬
 ‫‪ ‬بيئة أجار ماكونكي ‪(MAC) Macconkey Agar‬‬

‫و هي بيئة إنتخابية (‪ )Selective Media‬تسمح بنمو البكتيريا السالبة لجرام‬

‫‪ ,(GNB) Gram Negative bacteria‬و تعمل على تثبيط نمو البكتيريا الموجبة‬
‫لجرام ‪ , (GPB) Gram Positive Bacteria‬و هي أيضا بيئة تفريقية‬
‫(‪ )Differential media‬للتفرقة بين البكتيريا المخمرة و غير المخمرة للالكتوز‬
‫(‪ ,)Lactose fermentation‬حيث تظهر المستعمرات باللون الزهري للبكتيريا‬
‫المخمرة (‪ )positive‬و الغير مخمرة شفافة (‪.)negative‬‬

‫شكل (‪)2-3‬‬

‫‪Sabouraud Dextrose Agar ‬‬

‫و هي خاصة لنمو ‪Yeast, fungus‬‬

‫شكل (‪)2-4‬‬

‫‪12‬‬
 XLD Agar 

Salmonella, Shigella ‫ لـ‬Differential Media

)2-5( ‫شكل‬

Selenite Broth Media ‫ بيئة‬

Salmonella ‫) تستخدم لتحفيز و تسريع نمو‬Enriched Media( ‫بيئة غنية‬

)2-6( ‫شكل‬

11
 ‫‪ ‬بيئة ‪)THIO( Thioglycollate broth‬‬

‫بيئة غنية (‪ )Enriched Media‬تستخدم لمعرفة درجة إحتياج أنواع البكتيريا‬

‫لألوكسيجين ‪ ,‬و هي تسمح بنمو الميكروبات الالهوائية (‪ )Anaerobic‬و هي بيئة‬
‫تفريقية بين المكيروبات (‪ )aerobic, anaerobic, microaerophilic‬اإلجبارية‬
‫(‪ )Obligate‬و اإلختيارية (‪)facultative‬‬

‫شكل (‪)2-7‬‬

‫‪ ‬بيئة ‪Mannitol Salt Agar‬‬

‫هي بيئة تفريقية و اختيارية تنمو عليها ‪ Staphylococcus aureus‬حيث أن‬

‫مستعمراتها موجبة لـ ‪ Mannitol‬فهي تحللها و تخمر سكر المالتوز فيتغير لون‬
‫المستعمرة للون األصفر في هذه الحالة تسمى ‪ MRSA‬بسبب طفرة جينية معينة‬
‫للبكتيريا أصبحت مقاومة لعدد من المضادات الحيوية و سميت بإسم‬
‫(‪Methicillin Resistant Staph.aureus )MRSA‬‬

‫شكل (‪)2-8‬‬

‫‪10‬‬
 ‫‪ ‬بيئة ‪Moueller hinton Agar‬‬

‫تحتوي على خالصة اللحم و الببتون و تستخدم في معرفة حساسية البكتيريا بوضع‬
‫أقراص المضادات الحيوية ‪.‬‬

‫شكل (‪)2-9‬‬

‫‪ ‬بيئة ‪)TM( Thayer Martin media‬‬

‫خاصة لنمو ‪ Nisseria‬حيث تضاف في البيئة مضادات حيوية تمنع باقي األحياء‬
‫الدقيقة من النمو‪.‬‬

‫شكل (‪)2-10‬‬

‫‪: Bile Esculin Agar (BEA) ‬‬

‫بيئة تفريقية بين األنواع المختلفة من الـ ‪ Streptococcus‬والـ ‪Enterococcus‬‬

‫التي تفرز عند نموها على هذه البيئة إنزيما ً ويتكون مركب اسود يدل على وجودها‪.‬‬

‫شكل (‪)4-14‬‬
‫‪13‬‬
 ‫‪ ‬بيئة ‪Todd Hewitt Broth media‬‬

‫تستخدم لتحفيز نمو ‪Streptococci Group B‬‬

‫شكل (‪)2-11‬‬

‫‪ ‬بيئة ‪Campy agar‬‬

‫تستخدم لزراعة بكتيريا ‪ Campylobacter‬و هي بيئة إختيارية ‪Selective‬‬

‫‪ media‬شكل (‪ )2-12‬ثم توضع في جهاز ‪ Anaerobic jar‬التي توفر غاز ‪Co2‬‬
‫لتوفير الظروف الالهوائية شكل (‪ )2-13‬و بداخله عبوه التي توفر غاز ‪ Co2‬شكل‬
‫(‪)2-14‬‬

‫شكل (‪)2-13‬‬ ‫شكل (‪)2-12‬‬

‫شكل (‪)2-14‬‬

‫‪14‬‬
 ‫أ)عينات المسحات و سوائل الجسم ( ‪Swabs&Bodyfluid‬‬
‫‪)specimens‬‬
‫جميع عينات المسحات يتم زراعتها كما يلي‪:‬‬

‫يتم عمل غشاء كثيف في بداية الطبق بإستخدام المسحة ذاتها التي أخذت بها‬ ‫‪‬‬
‫العينة مع مراعاة لف المسحة بالكامل في جميع اإلتجاهات‪ .‬شكل (‪)2-15‬‬
‫ثم إستعمال نفس المسحة لعمل شريحة للفحص المجهري إذا كانت ‪.Fluid‬‬ ‫‪‬‬
‫يتم فرد األطباق ‪ Streaking‬بواسطة ‪ .Loop‬شكل (‪)2-16‬‬ ‫‪‬‬
‫تحضين لمدة ‪ 04‬ساعة في درجة ‪37‬م‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫شكل (‪)2-16‬‬ ‫شكل (‪)2-15‬‬

‫‪ ‬مسحات الصديد (‪ )Pus swab‬يتم زراعتها في بيئات ‪ B.A, MAC, CBA‬و‬

‫إذا كان الصديد على شكل ‪ Fluid‬في كونتينر نزرع في ‪ THIO‬و بـ ‪Swab‬‬
‫نزرع في البيئات السابقة‪.‬‬
‫‪ ‬سوائل الجسم يجب إدخالها في ‪ Centrifuge‬قبل زراعتها‪.‬‬
‫‪ ‬يتم زراعة السوائل بغمس ‪ swab‬معقم فيها ثم عمل غشاء في بداية الطبق‬
‫ثم فردها بالـ ‪.Loop‬‬

‫‪15‬‬
 ‫ب)عينات البول (‪)Urine Specimens‬‬
‫طريقة زراعة الـ ‪:Urine‬‬

‫زراعة على طبق (‪ )B.A/CLED‬شكل (‪)2-17‬‬ ‫‪‬‬

‫غمس الـ ‪ Loop‬شكل (‪ )2-18‬في العينة ثم خلط العينة جيدا ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫عمل ‪ Streaking‬شكل (‪.)2-19‬‬ ‫‪‬‬
‫ثم تحضن االطباق في حضان ‪37‬م لمدة ‪ 04‬ساعة‬ ‫‪‬‬

‫شكل (‪)2-19‬‬ ‫شكل (‪)2-18‬‬ ‫شكل (‪)2-17‬‬

‫‪16‬‬
 ‫ت)عينات البراز و البصاق (‪)Stool & Sputum Specimens‬‬
‫‪ ‬تزرع عينات البراز على بيئات‪:‬‬
‫‪XLD Agar , Selenite Broth‬‬

‫نأخذ مسحة بـ ‪ Swab‬معقم و نعمل غشاء كثيف في بداية طبق ‪XLD‬‬ ‫‪‬‬
‫و نقلب الـ ‪ swab‬في جميع اإلتجاهات ثم عمل ‪ Streaking‬بالـ‬
‫‪ Loop‬شكل (‪)2-20‬‬
‫يحتفظ بـ ‪ Swab‬في بيئة ‪ selenite broth‬بكسر الجزء األعلى‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ثم نحضن االطباق بدرجة ‪37‬م في الحضان لمدة ‪ 04‬ساعة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تزرع عينة البصاق ‪ Sputum‬بنفس الطريقة السابقة ولكن على‬ ‫‪‬‬
‫بيئات‪:‬‬
‫‪ B.A , CAB , MAC‬ثم نعمل ‪ Slide‬لمعرفة وجود ‪Pus cells,‬‬
‫‪epithelial cells.‬‬

‫شكل (‪)2-20‬‬

‫‪17‬‬
 ‫أنواع العينات و البيئات التي تزرع بها‬
Specimen BA BA CBA MAC SDA MSA THIO CLED XLD SELENITE BROTH GS
(O2) (AN or
O2) EMB
Bile + + + + + + + +
Cervical + + + + +
CSF + + + + + + +
Ear + + + + + +
Eye + + + +
Fluids:
Ascitic-CAPD-Drain fluid
Peritoneal-pericardial + + + + + + +
Pleural-Synovial-Cyst Fluid
Fungal Culture + + +
Mouth + + +
Nasal-MRSA Screaning + +
Prostatic discharge + + + +
Pus + + + + + +
Semen + + + +
Sinus Aspirate + + + + + +
Skin Swab + + + +
Throat +
Catheter Tip:
A– (rolling)
Arterial line – CVP- Femoral- IV Line + +
Jugular- Subclavian- Swans Gang- ventricular
B- Drain Tip:
+
Haemovac- Nephrostomy- Postoperative
Tissues + + + +
Umbilical Swab + + + + +
Urethral Swab + + + + +
Vaginal Swab + + + + +
Wound Swab + + + + +
Blood + + + + +
Bone Marrow + + + +
Sputum + + + + +
Brounchoalveolar Lavage (BAL) + + + +
Endotracheal Tube Suction Tip (ETT Suction Tip) + + + +
Gastric Lavage + + + +
Tracheostomy Secretion + + + +
Tracheostomy Tube Tip + + + +
Rectal Swab
Stool + +
Urine + +

11
 ‫ثالثا‪ :‬تعريف و قراءة النتائج‬
‫نقوم أوال بتحديد ‪ G – ve‬إذا حدث نمو في ‪ MAC‬و ‪ G +ve / B.A‬إذا‬ ‫•‬
‫وجد نمو في ‪ B.A‬فقط‪.‬‬

‫•‬
‫إجراء اإلختبارات البيوكيميائية لتعريف الميكروب (سيتم ذكرها الحقا)‬

‫• عند عدم وجود نمو نقوم بتحضين األطباق مره أخرى و عمل طبق من‬
‫بيئة ‪ THIO‬عند وجود نمو بها إذا كانت العينة سائل ‪Sub ( Fluid‬‬
‫‪. )culture‬‬
‫نقوم بتحديد النمو في األطباق و نكتب النتائج في ‪: Work Sheet‬‬ ‫•‬
‫)‪.Heavy Growth of (GNB) or (GPC‬‬ ‫‪‬‬
‫)‪.Moderate Growth of (GNB) or (GPC‬‬ ‫‪‬‬
‫‪.No Growth‬‬ ‫‪‬‬
‫إذا وجد نمو أكثر من ‪ 3‬أنواع في الطبق نكتب ‪.Mix Growth.‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ ‬إذا كانت العينة ‪ Catheter tip‬نكتب‪:‬‬
‫)‪Significant/ No Sig. Growth of (GNB) or (GPC‬‬ ‫‪‬‬
‫إذا كان عدد المستعمرات اقل من ‪ 12‬مستعمرات فإن ذلك يهمل و يكتب‬ ‫‪‬‬
‫‪No Significant Growth.‬‬

‫‪ ‬عمل إختبارات الحساسية للمضادات الحيوية )‪ (AST‬في أجهزة خاصة بذلك‬

‫و أيضا للتعرف على الميكروب )‪ (ID‬و الـ ‪ Genus‬عند تعذر ذلك بإستخدام‬
‫اإلختبارات التفريقية‪.‬‬
‫‪ )AST( ‬إختصار لـ ‪.Antimicrobial Susceptibly Testing‬‬
‫‪ )ID( ‬إختصار لـ ‪.Bacterial identification‬‬

‫‪19‬‬
 ‫إختبار الحساسية لمعرفة المضاد الحيوي المناسب للميكروب‬
‫‪Antibiotics susceptibility test‬‬
‫جهاز ‪:Vitek‬‬
‫يقوم بتحديد نوع البكتيريا عن طريق إجراء ‪ Biochemical tests 64‬بشكل آلي‬
‫في الجهاز دون الحاجة الجراء اي فحوصات خارجية يتعرف على البكتيريا‬
‫‪ Gram Positive, Gram Negative, Anaerobic, Yeast‬باالضافة لفحص‬
‫‪ Susceptibility Test‬للمضادات الحيوية‪.‬‬

‫شكل (‪)3-1‬‬

‫طريقة العمل‪:‬‬
‫‪ -‬نقوم بعمل ‪ Suspension‬في أنبوب ‪ 3‬مل‪.‬‬
‫‪ -‬بواسطة ‪ Swab‬معقم نأخذ ‪ 0-1‬مستعمرة ثم نرج في داخل األنبوب‪.‬‬
‫‪ -‬قياس نسبة التعكير في الجهاز ‪ Nephelometer‬و تكون من ‪0.50-0.60‬‬
‫شكل (‪. )3-2‬‬

‫شكل (‪)3-2‬‬

‫‪02‬‬
 ‫‪ -‬نضع األنابيب في ‪ rack‬خاص بالـ ‪ Vitek‬شكل (‪.)3-3‬‬
‫‪ -‬ثم نضع ‪ (ID) Card‬في نفس الـ ‪ rack‬خاص بكل ميكروب على حدة شكل‬
‫(‪.)3-3‬‬
‫‪ -‬نضع أنبوب آخر فارغ و به ‪ Card‬لـ )‪( (AST‬الرصاصي) شكل (‪.)3-3‬‬

‫شكل (‪)3-3‬‬

‫‪ -‬نضع الـ ‪ Rack‬في جهاز إدخال البيانات شكل (‪.)3-4‬‬

‫شكل (‪)3-5‬‬ ‫شكل (‪)3-4‬‬

‫‪ -‬ندخل ‪ LAB ID‬لكل عينة و اسم الـ ‪ Bench‬و مدخل البيانات ‪.Tech‬‬

‫‪01‬‬
‫‪ -‬ثم نقوم بمسح ‪ Card Barcode‬و أخيرا نقوم بإدخال ‪ Rack‬في الجهاز ثم‬
‫نسمع صوت عند قبول العينات‪.‬‬

‫شكل (‪)3-7‬‬ ‫شكل (‪)3-6‬‬

‫‪ -‬نقوم بإدخال بيانات المريض و رقم الدخول في الكمبيوتر الخاص بالجهاز‬

‫شكل(‪.)3-8‬‬

‫شكل (‪)3-8‬‬

‫‪00‬‬
 ‫النتائج ‪:‬‬

‫‪03‬‬
 ‫جهاز ‪:Phoenix‬‬

‫شكل (‪)3-9‬‬

‫محتويات الجهاز‪:‬‬
‫‪.Panel -‬‬
‫‪ -‬أنبوبة (‪ )ID‬إختصار لـ ‪.Bacterial identification‬‬
‫‪ -‬أنبوبة (‪ )AST‬إختصار لـ ‪.Antimicrobial susceptibly testing‬‬
‫طريقة عمل الجهاز ‪:‬‬
‫‪ -1‬نأخذ المستعمرات المراد تعريفها بكمية محددة ووضعها في أنبوبة (‪ )ID‬ثم‬
‫توضع في جهاز لقياس كثافة البكتيريا ‪.Nephelometer‬‬

‫شكل (‪)3-10‬‬

‫‪ -0‬في أنبوبة (‪ )AST‬نضع قطرة من الكاشف ‪ indicator‬ثم نأخذ ‪52‬‬

‫ميكروليتر من معلق (‪ )ID‬ونضعه في األنبوبة (‪ .)AST‬شكل (‪)3-11‬‬

‫‪04‬‬
 ‫شكل (‪)3-11‬‬

‫‪ -3‬نصب محتويات األنبوبتين في الـ ‪ Panel‬ثم ندخل البيانات في الجهاز ثم‬

‫مسح الباركود الموجود في الخلف‪ ,‬ثم نضع هذة الـ ‪ Panel‬في الجهاز‪.‬‬

‫شكل (‪)3-13‬‬ ‫شكل (‪)3-12‬‬

‫مع العلم أن البكتيريا الموجبة لها ‪ panel‬خاص بها‬

‫والسالبة لها ‪ panel‬خاص بها ‪.‬‬

‫‪05‬‬
 ‫النتائج ‪:‬‬

‫‪06‬‬
 ‫الطريقة اليدوية )‪:Manual (AST‬‬
‫نعمل معلق بأخذ مستعمرة من الطبق و نضعها في أنبوب ثم بواسطة ‪ Swab‬آخر‬
‫نقوم بالزراعة على طبق ‪ Mueller Hinton‬على كامل الطبق‪.‬‬

‫بواسطة ملقاط معقم يتم وضع ‪ Antibiotic disks‬على سطح البيئة ثم يحضن‬
‫الطبق لمدة ‪ 04‬ساعه في درجة ‪37‬م‪.‬‬

‫شكل (‪)3-14‬‬

‫‪07‬‬
 Antibiotics ‫المضادات الحيوية‬

.‫هو عبارة عن مادة أو مركب يقتل أو يثبط نمو الميكروبات‬

:Gram +ve
Rifampicin (RA),Vancomycin (VA), Gentamicin (GM) : Staph.

Cefoxitin or Oxacillin + Fusidic Acid (FA), Teicoplanin (TEC)

G+ve disk+X2 : Strept

:Gram –ve

X1, X2, X3
Urine disk X3 X2 X1 G+ve Disk
Nalidexic Colistin Imipenem Cephalaxin Pencillin g (PG)
acid (NA) (CT) (IMI) (CF)
Nitrofurantoi Ceftriaxone Ciprofloxaci Ampicillin Erythromycin
n (NI) (CRO) n (CIP) (AMP) (E)
Cephalothin Cefotaxime Ceftazidime Augmentin Ampicillin
(KF) (CTX) (CAZ) (AUG) (AMP)
Ampicillin Meropene Amikacin Cotrimoxazol Cephalothin
(AMP) m (MEM) (AK) e (SXT) (KF)
(TS) Tazobacta Azotreonam Gentamicin (TS)
Cotrimoxazol m (TAZ) (ATM) (GM) Cotrimoxazol
e e
Norfloxacin Cefuroxime Piperacillin Cefoxitin Augmentin
(NOR) (CXM) (PIP) (FOX) (AUG)
Vancomycin
(VA)

01
 ‫أ)عينات المسحات و سوائل الجسم )‪(SBI‬‬
‫‪ ‬التعريف المبدئي ‪:‬‬
‫‪ ‬نقوم بتحديد ‪ G-ve‬أو ‪.G+ve‬‬

‫أوال ‪ :‬صبغة جرام لشريحة العينة ‪: Specimen Slide‬‬

‫نغمر الشريحة بصبغة ‪ Crystal violet‬لمدة دقيقتين ثم نغسل بالماء‬ ‫‪-‬‬

‫الجاري‪.‬‬
‫نغمر بمحلول ‪ Iodine‬لمدة نصف دقيقة ثم نغسل بالماء‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫نغسل بمحلول ‪ Alchohol‬إلزالة الصبغة‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫نغسل بالماء الجاري‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫نغمر بصبغة ‪ Safranine‬لمدة نصف دقيقة ثم نغسل بالماء‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫نفحص تحت المجهر الضوئي بوضع قطرة من زيت السيدر ثم نفحص‬ ‫‪-‬‬
‫بالعدسة الزيتية‪.‬‬
‫ثانيا ‪ :‬المورفولوجي و النمو على أطباق ‪ Blood Agar‬و ‪ Macconkey‬حيث أن‬
‫بيئة ‪ Mac‬تسمح للبكتيريا السالبة لجرام بالنمو فقط‪.‬‬

‫نقوم بتحديد النمو في األطباق و نكتب النتائج في ‪ work sheet‬كالتالي ‪:‬‬ ‫•‬
‫)‪Heavy growth of (GNB) or (GPC‬‬ ‫‪‬‬
‫)‪Moderate growth of (GNB) or (GPC‬‬ ‫‪‬‬
‫‪No growth‬‬ ‫‪‬‬
‫إذا وجد نمو أكثر من ‪ 3‬أنواع في الطبق نكتب ‪Mix growth.‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ ‬إذا كانت العينة ‪ Catheter tip‬نكتب‪:‬‬
‫)‪Significant/ NO Sig. growth of (GNB) or (GPC‬‬ ‫‪‬‬

‫‪09‬‬
 ‫‪:G +ve ‬‬
‫البكتيريا الموجبة لجرام تظهر باللون البنفسجي نجري عليها اإلختبارات التالية‪:‬‬
‫‪Catalase Test -1‬‬

‫للتفريق بين ‪ Staphylococcus‬و ‪Streptococcus‬‬

‫طريقة اإلختبار‪:‬‬

‫‪ ‬نضع قطرة من ‪ Catalase‬على شريحة زجاجية‪.‬‬

‫‪ ‬نأخذ جزء من المستعمرة بواسطة ‪ Loop‬و نضعه على الشريحة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬
‫عند ظهور فقاعات فهذا دليل على أن البكتيريا ‪Staphylococcus‬‬

‫شكل (‪)4-1‬‬

‫)‪Strept. (-) Staph. (+‬‬

‫‪ Catalase Positive = Staphylococcus -‬نجري اإلختبارات التالية ‪:‬‬

‫‪Coagulase test )1‬‬

‫لتحديد ‪Staph.aureus‬‬
‫طريقة اإلختبار‪:‬‬

‫‪ ‬وضع قطرة من صبغة ‪ Staph Latex‬على كرت خاص‪.‬‬

‫‪ ‬أخذ جزء من النمو و خلطه بواسطة عود الخشب على الكرت بشكل دائري‪.‬‬

‫‪32‬‬
 ‫شكل (‪)4-2‬‬

‫‪Staph.aureus = (+) Agglutination‬‬

‫‪ )0‬إختبار ‪Dnase test‬‬
‫‪ -‬زراعة المستعمرة على طبق ‪ Dnase agar‬بخط مستقيم ثم تحضينها لمدة ‪ 04‬ساعة‪.‬‬
‫‪ -‬نقوم بصب ‪ HCL‬على الطبق ثم ننتظر ‪ 12‬دقائق‪.‬‬

‫شكل (‪)4-3‬‬
‫إذا تكون هالة حول المستعمرة )‪Staph.aureus = positive (+‬‬
‫إذا لم تتكون هالة حول المستعمرة )‪C.N.S = negative (-‬‬

‫‪Novobiocin sensitivity Disk )3‬‬

‫لتحديد ‪Staph.epidermidis , Staph.saprophyticus‬‬

‫شكل (‪)4-4‬‬

‫‪31‬‬
 ‫‪Staph.saprophyticus = Resistant‬‬

‫‪Staph.epidermidis = sensitive‬‬

‫‪ -‬نعمل ‪.Phoenix or Vitek (ID), (AST) for Gram positive‬‬

‫‪ -‬نجري إختبار حساسية المضادات الحيوية )‪ (AST‬يدويا )‪ )Manual‬على‬
‫طبق ‪ Mueller hinton‬إذا لم تتوفر بعض المضادات في األجهزة‬
‫السابقة‪.‬‬

‫‪ -‬ثم نرفع التقرير للطبيب المعالج بإسم الميكروب والمضادات الحيوية‬

‫المقاومة (‪ )R‬و الحساسة (‪.)S‬‬

‫‪30‬‬
 ‫‪ Catalase Negative = Streptococcus -‬نجري اإلختبارات التالية‪:‬‬

‫نقوم بتحديد تحلل الدم في ‪ B.A‬و تقسم إلى‪:‬‬

‫‪: α-Hemolytic -1‬‬

‫و هو تحلل جزئي يعطي اللون األخضر و تنقسم إلى نوعين ‪:‬‬

‫‪Streptococcus pneumonia, Streptococcus viridans‬‬

‫للتفرقة بينهما نعمل‪:‬‬

‫‪ )1‬اختبار الحساسية لـ (‪:Taxos p )Optochin Disk Susciptibility‬‬

‫تظهر منطقة تثبيط بوضوح حول قرص الحساسية في حالة كان اإلختبار موجب‬
‫‪ Streptococcus pneumonia‬شكل (‪ )4-6‬و عدم تكون منطقة تثبيط في حالة‬
‫اإلختبار السالب ‪ Streptococcus viridans‬شكل (‪.)4-5‬‬

‫شكل (‪)4-6‬‬ ‫شكل (‪)4-5‬‬

‫‪ )0‬إختبار ‪Bile Solubility‬‬

‫للكشف عن ‪Streptococcus pneumonia‬‬

‫طريقة اإلختبار‪:‬‬
‫نضع قطرات من ‪ Bile Solubility‬على طبق بكتيريا ‪Streptococcus‬‬

‫إذا حدث تحلل (‪ Streptococcus pneumonia = )+‬شكل (‪.)4-7‬‬

‫‪33‬‬
 )4-7( ‫شكل‬

:β-Hemolytic -0

.‫و هو تحلل كامل يعطي منطقة واضحة حول المستعمرات‬

Group A, Group B, Group C, Group F, Group G :‫تنقسم إلى‬

)4-8( ‫شكل‬

:‫لتحديد البكتيريا نجري‬

:Taxos a (Bacitracin disk Susciptibility) ‫) إختبار حساسية‬1

S.pyogenes , S.agalactiae ‫للكشف عن‬

)4-9( ‫شكل‬

34
 ‫‪Sensitive = S.pyogenes‬‬

‫‪Resistant = S.agalactiae‬‬

‫‪Camp Test )0‬‬

‫للكشف عن ‪Strep.agalactiae Group B‬‬

‫الطريقة‪:‬‬
‫‪ -1‬نزرع ‪ Staph.aureus‬بخط مستقيم على بيئة ‪. B.A‬‬
‫‪ -0‬نزرع البكتيريا المتوقع بأنها ‪ Group B‬بخطوط عرضية بحيث ال تتالصق‬
‫مع ‪.Staph.aureus‬‬
‫‪ -3‬نحضن لمدة ‪ 24‬ساعة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬
‫عند تكون أسهم عند إلتقاء الميكروبين فهو ‪Group B‬‬

‫شكل (‪)4-10‬‬

‫‪ )3‬إختبار ‪ Lancefield Grouping‬أو ‪Masta strep‬‬

‫شكل (‪)4-11‬‬
‫‪35‬‬
 ‫طريقة اإلختبار ‪:‬‬

‫نحضر معلق بكتيري‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫نضع قطرة من كل مجموعة على كل دائرة من ‪ Latex card‬ثم نضع قطرة من المعلق‬ ‫‪-‬‬
‫في كل دائرة‪.‬‬
‫نمزج القطرات بواسطة ‪ Sticks‬أو ‪. Loop‬‬ ‫‪-‬‬
‫نحرك الكرت حركة دائرية‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫نالحظ ‪ Agglutination‬و نحدد أي مجموعة مثال‪ :‬تخثر في المجموعة ‪. A‬‬ ‫‪-‬‬

‫شكل (‪)4-12‬‬

‫‪Gamma-hemolytic -3‬‬

‫ال تعمل منطقة تحلل على ‪Enterococci B.A‬‬

‫شكل (‪)4-13‬‬

‫نجري اإلختبارات البيوكيميائية‪:‬‬

‫‪ )1‬إختبار ‪bile esculin, Nacl‬‬
‫‪36‬‬
 ‫الطريقة ‪:‬‬
‫‪ -‬نأخذ مسحة من المستعمرة باللوب و نزرع في ‪Bile esculine‬‬
‫‪ -‬نحضن لمدة ‪ 04‬ساعة‬
‫إذا تحول للون األسود )‪Positive (+‬‬

‫شكل (‪)4-14‬‬

‫نأخذ مسحة من المستعمرة باللوب و نضع في ‪ 6.5% Nacl‬ثم نحضن لمدة ‪04‬‬
‫ساعة‪.‬‬

‫شكل (‪)4-15‬‬

‫تكون عكارة (‪)+‬‬

‫عدم تكون عكارة (‪)-‬‬

‫‪6.5% Nacl‬‬ ‫‪Bile esculin‬‬

‫‪+‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪Enterococci‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪Strep.Group D‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪grouping‬‬
‫‪+‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪grouping‬‬

‫‪37‬‬
 ‫‪ -‬نعمل ‪Phoenix or Vitek (ID), (AST) for Gram positive‬‬
‫‪ -‬أو نجري إختبار حساسية المضادات الحيوية )‪ (AST‬يدويا )‪ )Manual‬على‬
‫طبق ‪ )X2, GPC disk( B.A‬إذا لم تتوفر بعض المضادات في األجهزة‬
‫السابقة‪.‬‬

‫شكل (‪)4-16‬‬

‫‪ -‬ثم نرفع التقرير للطبيب المعالج بالمضادات الحيوية المقاومة (‪ )R‬و‬

‫الحساسة (‪.)S‬‬

‫‪31‬‬
 ‫‪G-ve ‬‬
‫البكتيريا السالبة لجرام تظهر باللون األحمر تحت المجهر و نجري عليها‬
‫اإلختبارات التالية‪:‬‬

‫شكل (‪)4-17‬‬

‫‪ -‬مخمرة لالكتوز ‪ = Lactose Fermentation positive‬مستعمرات‬

‫وردية على بيئة ‪MAC‬‬

‫‪ -‬غير مخمرة لالكتوز ‪ = Lactose Fermentation negative‬مستعمرات‬

‫شفافة على بيئة ‪MAC‬‬

‫اإلختبارات البيوكيميائية ‪:‬‬

‫‪Oxidase Test )1‬‬

‫نضع قطرة من ‪ Oxidase‬على ‪ Swab‬أو ورق ترشيح ثم نأخذ مسحة من النمو‪.‬‬

‫شكل (‪)4-18‬‬

‫= )‪Oxidase positive (+‬‬ ‫لون بنفسجي‬

‫ال يحدث تغير في اللون = )‪Oxidase negative (-‬‬

‫‪39‬‬
 ‫‪ )0‬إختبار ‪API 20E‬‬

‫هو إختبار بيوكيميائي يستخدم في الكشف عن البكتيريا المعوية ‪ Enterococci‬و‬

‫البكتيريا العصوية السالبة لجرام ‪ G –ve bacilli‬و هو عبارة عن شريط يحتوي‬
‫‪ 02‬أنبوبة صغيرة (‪ )Micro tube‬كل أنبوبة بها مادة تفاعل و تحتوي على كاشف‬
‫لوني معين‪.‬‬

‫نكتب على طرف الشريط رقم العينة ثم تضاف ‪ 5‬مل من الماء في قاعدة‬ ‫‪‬‬
‫الشريط لتوفير الرطوبة الالزمة في فترة التحضين‪.‬‬
‫تحضير معلق بكتيري بأخذ (‪ )3-0‬مستعمرات منفردة من البكتيريا النامية‬ ‫‪‬‬
‫في االطباق بواسطة اللوب المعقم و وضعها في أنبوبه إختبار تحتوي على‬
‫‪ 5‬مل ماء مقطر معقم مع الخلط الجيد للحصول على معلق متجانس‬
‫للبكتيريا‪.‬‬
‫يتم سحب المعلق البكتيري بواسطة سرنجات معقمة لسهولة حقن األنابيب‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫مراعاة عدم تكون فقاعات هواء داخل األنابيب أثناء الحقن‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تنقسم األنابيب إلى ثالثة أقسام‪:‬‬

‫‪ ‬أنابيب محاطة بمربع مثل |‪ |MAN| |CIT| |VP‬يتم ملئها بالكامل لتوفير‬
‫الظروف الهوائية‪.‬‬

‫شكل(‪)4-19‬‬
‫‪ ‬أنابيب تحتها خط يتم ملئها حتى فوهة األنبوب ثم بعد ذلك يتم مأل فوهة‬
‫األنبوب بواسطة زيت معدني لتوفير الظروف الالهوائية ‪ADH, URE‬‬

‫‪42‬‬
 ‫شكل (‪)4-20‬‬

‫‪ ‬وضع الغطاء المرفق على الطبق الموجود بداخله الشريط‬

‫‪ ‬التحضين بدرجة ‪37‬م لمدة ‪ 04‬ساعة‪.‬‬
‫‪ ‬تضاف كواشف خاصة حسب نوع التفاعل التي تتطلب كواشف و يتم قراءة‬
‫النتيجة عن طريق برنامج خاص في الكمبيوتر‪.‬‬

‫شكل (‪)4-21‬‬

‫‪41‬‬
 - RESULTS + RESULTS
TESTS SUBSTRATE REACTION TESTED
*negative* *positive*
ONPG ONPG beta-galactosidase colorless Yellow
ADH arginine arginine dihydrolase Yellow red/orange
LDC lysine lysine decarboxylase Yellow red/orange
ornithine
ODC ornithine Yellow red/orange
decarboxylase
pale blue-
CIT citrate citrate utilization
green/yellow green/blue
Na
H2S H2S production colorless/gray black deposit
thiosulfate
URE urea urea hydrolysis Yellow red/orange
TDA tryptophan deaminase Yellow brown-red
IND tryptophan indole production Yellow red (2 min.)
pink/red (10
VP Na pyruvate acetoin production colorless
min.)
charcoal no diffusion of
GEL gelatinase black diffuse
gelatin black
GLU glucose fermentation/oxidation blue/blue-green yellow
MAN mannitol fermentation/oxidation blue/blue-green yellow
INO inositol fermentation/oxidation blue/blue-green yellow
SOR sorbitol fermentation/oxidation blue/blue-green yellow
RHA rhamnose fermentation/oxidatio blue/blue-green yellow
fermentation/oxid
SAC sucrose blue/blue-green yellow
ation
MEL melibiose fermentation/oxidation blue/blue-green yellow
AMY amygdalin fermentation/oxidation blue/blue-green Yellow
ARA arabinose fermentation/oxidation blue/blue-green Yellow

)4-22( ‫شكل‬

Species and subspecies identification of Enterobacteriacae and groups and

API 20E
species identification of non-fermenting
API 20NE Identification of gram-negative non-Enterobacteriaceae
API Rapid
Identification of Enterobacteriaceae
20E
API NH Identification of Branhamella catarrhalis and Neisseria haemophillus
RAPIDEC
Identification of the commonly occurring staphylococci
Staph
API 20 Strep Identification of streptococci and enterococcs
API Staph Identification of clinical staphylococci and micrococci
API Coryne Identification of Corynebacteria and coryne-like organisms
API 20A Identification of anaerobes

)4-23( ‫شكل‬

40
 ‫‪ -‬نعمل ‪Phoenix or Vitek (ID), (AST) for Gram negative‬‬

‫‪ -‬أو نجري إختبار حساسية المضادات الحيوية )‪ (AST‬يدويا )‪ )Manual‬على‬

‫طبق ‪ Mueller Hinton‬لمجموعة المضادات (‪ )X1, X2, X3‬إذا لم تتوفر‬
‫بعض المضادات في األجهزة السابقة‪.‬‬

‫شكل (‪)4-24‬‬

‫‪ -‬و نقوم بعمل طبق ‪ Purity Plate‬للمستعمرة على بيئة ‪.CBA‬‬

‫‪ -‬في حالة ‪ Pseudomonas spp‬نستخدم (‪ )X2, X3‬فقط ألنها مقاومة لـ ‪X1‬‬

‫‪ -‬ثم نرفع التقرير للطبيب المعالج بإسم الميكروب و المضادات الحيوية‬

‫المقاومة (‪ )R‬و الحساسة (‪.)S‬‬

‫‪43‬‬
44
‫أنواع الميكروبات الممرضة في عينات المسحات و سوائل الجسم التي تم‬
:‫التدريب عليها‬
Staphylococcus aureus -1
Staphylococcus saprophyticus -0
Enterococcus -3
Clostridium spp. -4
Pseudomonas spp. -5
Proteus spp. -6
Klebsiella -7
E.coli -1
Acinetobacter baumannii -9
Morganella morgannii -12
Neisseria spp. -11
Haemophillus spp. -10
Cnadida spp. -13

:‫إختبارات التفرقة‬

Staphylococcus aureus -1
‫ و تفرز إنزيم الكتاليز‬B.A ‫) تنمو على بيئة‬Cocci( ‫موجبة لصبغة جرام كروية‬
(Beta-hemolytic) ‫( تحلل الدم تحلل كامل‬Catalase)

)4-25( ‫شكل‬

:Diagnosis ‫التشخيص‬
"‫ "سبق شرحها‬Catalase test ‫) إختبار‬1
45
 Positive (+) = Staphylococci

"‫ "سبق شرحها‬Coagulase test ‫) إختبار‬0

)4-26( ‫شكل‬

Positive (+) = Staphylococcus aureus

"‫ "سبق شرحها‬Dnase test ‫) إختبار‬3

Staph.aureus = positive (+)

‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram positive )4

.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus
.MRSA ‫ فهي‬Oxacillin or cefoxictin, methicillin ‫ إذا كانت الساللة مقاومة ل‬-

Staphylococcus saprophyticus -0
.‫ تفرز إنزيم الكتاليز‬, B.A ‫( تنمو على بيئة‬Cocci) ‫موجبة لصبغة جرام كروية‬

:Diagnosis ‫التشخيص‬
"‫ "سبق شرحها‬Catalase test ‫) إختبار‬1
Positive (+)
"‫ "سبق شرحها‬Coagulase test ‫) إختبار‬0
Negative (-)
"‫ "سبق شرحها‬Novobiocin disk sensitivity ‫) إختبار‬3
Novobiocin disk = Resistant = Staph.saprophyticus

‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram positive )4

.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus
46
 ‫‪Enterococcus -3‬‬
‫موجبة لجرام كروية )‪ (Cocci‬ال تفرز إنزيم )‪ (Catalase‬ال تحلل الدم‬
‫)‪ (Gamma-hemolytic‬تنمو على بيئة ‪ B.A‬هوائية إختيارية‪.‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪ )1‬إختبار تحلل ‪ Bile esculine‬و ‪" 6.5% Nacl‬سبق شرحها"‬

‫‪Bile esculine (+) 6.5% Nacl (+) = Enterococcus‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram positive )0‬لتحديد الـ‬

‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪Clostridium spp. -4‬‬

‫موجبة لجرام عصوية )‪ (Bacilli‬متجرثمة )‪ (Sporulating‬ال هوائية متحركة‬
‫)‪ (Motile‬و متجرثمة سالبة إلختبار الكتاليز ‪.Catalase Negative‬‬

‫شكل (‪)4-28‬‬ ‫شكل (‪)4-27‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪ )1‬صبغة جرام ‪:‬‬
‫تظهر ‪ C.tetani‬عصويات فيها جراثيم طرفية تشبه عصا الطبل‬
‫‪ )0‬إختبار ‪" Catalase test‬سبق شرحها"‬
‫‪Negatve (-) = Clostridium‬‬
‫‪: Morphology )3‬‬

‫‪47‬‬
 ‫تظهر المستعمرات منتشرة على الطبق ألنها متحركة‬
"‫ "سبق شرحه‬Camp test )4

Camp test = positive = Clostridium sp.

)4-29( ‫شكل‬

API 20A )5
‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram positive )6
.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus

Pseudomonas spp -5
Beta- ‫ بعضها تحلل الدم‬Oxidase Positive /Negative ‫عصوية سالبة لجرام‬
.)‫) تتميز برائحة مستعمراتها (رائحة العنب‬P.aeroginosa( hemolytic

)4-30( ‫شكل‬

:Diagnosis ‫التشخيص‬
:Oxidase test ‫) إختبار‬1

Pseudomonas = Oxidase Positive

41
 ‫‪:Morphology )0‬‬

‫لون رمادي و رائحة المستعمرة (رائحة العنب)‪.‬‬

‫‪API 20NE )3‬‬
‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram Negative )4‬لتحديد الـ‬
‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪Proteus spp. -6‬‬

‫بكتيريا سالبة لجرام عصوية (‪ )Bacilli‬تزرع على )‪ (MAC), (B.A‬و تظهر‬
‫مستعمراتها زاحفة )‪ (Swarming‬بسبب حركتها السريعة‪.‬‬

‫شكل (‪)4-31‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪ )1‬إختبار ‪Oxidase test‬‬

‫‪Negative (-) = Proteus sp.‬‬

‫‪:Morphology )0‬‬

‫لون و رائحة المستعمرة (رائحة السمك) و النمو الزاحف على الطبق ‪.‬‬
‫‪ )3‬إختبار اإلندول ‪Indole test‬‬

‫‪49‬‬
 ‫شكل (‪)4-32‬‬

‫)‪Proteus vulgaris = Positive (+‬‬

‫)‪Proteus mirabilis = Negative (-‬‬

‫‪API 20E )4‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram Negative )5‬لتحديد‬
‫الـ ‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬
‫‪Klebsiella -7‬‬
‫بكتيريا سالبة لجرام عصوية (‪ )Bacilli‬تظهر مستعمراتها مرتفعة كبيرة ومخاطية‬
‫)‪ (Mucoid‬بسبب وجود المحفظة )‪ (Capsule‬و تخمر الالكتوز‪.‬‬

‫شكل (‪)4-33‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪:Morphology )1‬‬

‫مستعمرات مخاطية كبيرة مخمره للالكتوز تظهر باللون الزهري‪.‬‬

‫‪Oxidase test )0‬‬
‫‪52‬‬
 Negative (-) = Klebsiella

API 20E )3
‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram Negative )4
.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus

E.coli -1
(B.A), ‫( مخمرة لالكتوز تزرع على‬Bacilli( ‫بكتيريا سالبة لجرام عصوية‬
.MAC ‫ باللون الزهري في طبق‬Flat ‫( و تظهر المستعمرات مسطحة‬MAC)

)4-34( ‫شكل‬

:Diagnosis ‫التشخيص‬
Indole test )1

)4-35( ‫شكل‬

Positive (+) = E.coli

Oxidase test ‫) إختبار‬0

Negative (-) = E.coli

51
 ‫‪:Morphology )3‬‬

‫مستعمرات متوسطة الحجم مسطحة و جافة تظهر بلون مميز في طبق‬

‫‪( Macconkey‬زهري) تستطيع النمو عند ‪42‬م‬

‫‪API 20E )4‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram Negative )5‬لتحديد الـ‬
‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪Acinetobacter bumannii -9‬‬

‫عصويات قصيرة ‪ Coccobacillus‬سالبة لجرام هوائية إجباريا غير متحركة ‪.‬‬

‫شكل (‪)4-36‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪ )1‬صبغة جرام‬
‫‪ )0‬النمو في طبق ‪MAC‬‬
‫‪Indole, Oxidase tests )3‬‬

‫)‪Negative (-‬‬

‫‪Catalase test )4‬‬

‫)‪Positive (+‬‬

‫‪API 20NE )5‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative )6‬لتحديد الـ‬
‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪50‬‬
 ‫‪Morganella morgannii -12‬‬
‫عصويات سالبة لجرام الهوائية إختيارية مستعمرات غير شفافة لونها أبيض فاتح‬
‫متحركة و لكن ال تكون ‪.Swarming‬‬

‫شكل (‪)4-37‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪ )1‬صبغة جرام‬
‫‪Oxidase test )0‬‬

‫‪Negative‬‬

‫‪Catalase, Indole tests )3‬‬

‫‪Positive‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative )4‬لتحديد الـ‬

‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪Neisseria spp. -11‬‬

‫كرويات سالبة لجرام تظهر في شكل مزدوج ‪ Diplococci‬تشبه الفاصوليا‪ ,‬تنمو‬
‫على ‪ B.A, CBA, MAC‬تظهر المستعمرات دائرية محدبة‪ ,‬المعة و رطبة‪.‬‬

‫‪53‬‬
 )4-38( ‫شكل‬

:Diagnosis ‫التشخيص‬

.‫) صبغة جرام‬1

)4-39( ‫شكل‬
‫ ألنها‬Thayer Martin Agar, New York Agar ‫) الزراعة على بيئة‬0
Neisseria spp. ‫ لـ‬Selective

)4-40(‫شكل‬
Oxidase Test )3
Positive
Catalase Test )4
Positive
54
 ‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative )5‬لتحديد الـ‬
‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬
‫‪ -‬يتم التفريق بين ‪ N.gonorhoeae‬و ‪ N.meningitidis‬عن طريق إختبار‬
‫‪ Acid production from Glucose, Lactose, Maltose‬شكل ()‬

‫شكل (‪)4-41‬‬

‫‪Haemophillus spp. -10‬‬

‫عصويات سالبة لجرام صغيرة الحجم مختلفة األشكال ‪ Pleomorphic‬وغالبا تكون‬
‫عصويات كروية ‪ Coccobacilli‬و يتطلب النمو وجود )‪ (X,V factors‬و هي‬
‫موجودة في بيئة ‪ , CBA‬و يمكن زراعتها على بيئة ‪ B.A‬بطريقة ‪(Staph‬‬
‫)‪ .streak‬تظهر المستعمرات كبيرة دائرية ملساء و محدبة ‪ ,‬شفافة اللون إلى‬
‫رمادية‪.‬‬

‫شكل (‪)4-42‬‬

‫‪55‬‬
 :Diagnosis ‫التشخيص‬

‫) صبغة جرام‬1

)4-43( ‫شكل‬

X,V growth factors ‫) إختبار‬0

Mueller ‫ في طبق‬X, V disks ‫و هو إختبار للنمو و التفريق بين أنواعها بإضافة‬

.‫ ساعة‬04 ‫ ثم تحضينها لمدة‬, Hinton

)4-44( ‫شكل‬

Haemophilus species Growth Around Disk

X V XV
Haemophilus aegyptius - - +
Haemophilus aphrophilus v/- - +
Haemophilus ducreyi + - +
Haemophilus haemolyticus - - +
Haemophilus influenza - - +
Haemophilus parahaemolyticus - + +
Haemophilus parainfluenzae - + +
)4-45( ‫شكل‬

56
 ‫‪Oxidase test )3‬‬
‫‪Positive‬‬
‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative )4‬لتحديد‬
‫الـ ‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪Candida albicans. -13‬‬

‫شكل (‪)4-46‬‬
‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬
‫‪ )1‬إختبار ‪Germ Tube Test‬‬
‫‪ -‬نضع ‪ 0.5‬مل من السيرم في أنبوبة إختبار‬
‫‪ -‬بواسطة عود نأخذ ‪ 0-1‬مستعمرة و نعمل ‪ Suspension‬لل ‪ Yeast‬ثم‬
‫نضعها في األنبوبة ثم نحضن لمدة ‪ 3-0‬ساعة‬
‫‪ -‬نسحب قطرة من المعلق بواسطة ‪ Pasteur pipette‬و نضع على شريحة‬
‫و نغطيها بـ ‪ Cover slide‬ثم نفحص تحت المجهر‪.‬‬

‫شكل (‪)4-47‬‬

‫‪Vitek (ID) for Yeast )0‬‬

‫‪57‬‬
 ‫ب)عينات البول (‪)Urine Specimen‬‬
‫يعتبر البول العادي من سوائل الجسم (أي التي تكون خالية من الميكروبات) مهما‬
‫كان و خاصة عندما تجمع العينة كما ينبغي و لم يكن عند اإلنسان أي إصابة أو‬
‫إلتهاب‪ ,‬و يمكن أن تكون العينة ملوثة بالميكروبات إذا جمعت بطريقة غير صحيحة‬
‫من المهم في رصد نتائج زراعة البول معرفة عدد المستعمرات‬

‫‪Colony count‬‬ ‫‪Report‬‬

‫‪0 cfu‬‬ ‫‪No Growth‬‬
‫‪1-10 cfu‬‬ ‫‪No significant Growth‬‬
‫‪ID (Identification) & sens if‬‬
‫‪pure‬‬
‫‪11-100 cuf‬‬ ‫‪If 2 or more types, mixed‬‬
‫‪bacterial flora.‬‬
‫‪Culture is contamination‬‬
‫‪ID & sens if pure‬‬
‫‪>100‬‬
‫‪If 2 or more types, mixed‬‬
‫‪bacterial flora.‬‬
‫‪Culture is contamination‬‬

‫تكون عينات البول إما ‪ Catheter‬من القسطرة أو ‪ Voided‬البول العادي‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تزرع عينات البول على طبق واحد ‪.Blood Agar, C.L.E.D‬‬ ‫‪-‬‬
‫نكتب في الـ ‪ Work sheet‬عدد المستعمرات التقريبي ‪ 103‬أو ‪ 10‬أو‬
‫‪4‬‬
‫‪-‬‬
‫‪.105‬‬
‫إذا كانت العينة ‪ Catheter‬نكتب ‪, Significant growth of .. :‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪ No.sig.g‬إذا كان عدد المستعمرات أقل من ‪.9‬‬
‫و إذا كانت ‪ Voided‬نكتب‪ :‬عدد المستعمرات التقريبي ثم النوع مثال‪:‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪.105 GNB‬‬
‫نكتب عدد الـ ‪.Pus cells‬‬ ‫‪-‬‬
‫نقوم بعمل ‪:‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative or positive‬‬ ‫‪-‬‬
‫لتحديد الـ ‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬
‫نجري إختبار حساسية المضادات الحيوية )‪ (AST‬يدويا )‪ )Manual‬على‬ ‫‪-‬‬
‫طبق ‪X2, ( )GPC( B.A / )U, X2, X3( )GNB( Mueller hinton‬‬
‫‪ )GPC‬إذا لم تتوفر بعض المضادات في األجهزة السابقة‪.‬‬

‫‪51‬‬
‫‪ -‬ثم نرفع التقرير للطبيب المعالج بإسم الميكروب و المضادات الحيوية‬
‫المقاومة (‪ )R‬و الحساسة (‪.)S‬‬

‫‪59‬‬
 ‫أنواع الميكروبات الممرضة في عينات البول‪:‬‬
‫‪E.coli -‬‬

‫تظهر مستعمراتها باللون األصفر على بيئة ‪C.L.E.D‬‬

‫شكل (‪)5-1‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative -‬لتحديد الـ‬

‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬
‫‪Klebsiella -‬‬

‫مستعمرات كبيره و مخاطية تظهر باللون األصفر الفاتح‪.‬‬

‫شكل (‪)5-2‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative -‬لتحديد الـ‬

‫‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪62‬‬
 Proteus spp. -
C.L.E.D ‫ على بيئة‬Swarming ‫تظهر المستعمرات شفافة و ال تكون‬

)5-3( ‫شكل‬

‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative -

.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus
Pseudomonas spp. -
C.L.E.D ‫تظهر المستعمرات شفافة على بيئة‬

)5-4( ‫شكل‬

‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative -

.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus

Staphylococcus saprophyticus (female) -

Acinetobacter bumannii -
Enterococci -
Staphylococcus aureus -

61
 ‫ب)عينات البراز و البصاق (‪)Stool & Sputum Specimens‬‬
‫يوجد العديد من الميكروبات في البراز ‪ Normal Flora‬و أهم البكتيريا الممرضة‬
‫في عينات البراز هي )‪.(Salmonella & Shigella‬‬

‫‪ -‬تزرع عينات ‪ Stool‬في طبق ‪ XLD‬و ‪.Selenite Broth‬‬

‫‪ -‬إذا لم تعزل ‪ Salmonella‬أو ‪ Shigella‬نكتب في ‪No : Work sheet‬‬
‫‪ Salmonella or Shigella isolated‬و نقوم بعمل ‪ Sub culture‬من‬
‫بيئة ‪.Selenite broth‬‬

‫‪Salmonella spp. -1‬‬

‫وهي عصويات سالبة لصبغة جرام هوائية غير متجرثمة ومتحركة بواسطة أسواط‬
‫طولية محيطية‪.‬‬

‫شكل (‪)6-1‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬

‫‪:Morphology )1‬‬

‫تظهر مستعمراتها على بيئة ‪ XLD‬بنقطة مركزية سوداء إلفرازها ‪.H2S‬‬

‫‪ )0‬إختبار ‪API 20E‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative )3‬لتحديد‬
‫الـ ‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪60‬‬
 ‫‪Shigella spp. -0‬‬
‫عصويات سالبة لجرام غير متحركة هوائية ال تتجرثم ‪.‬‬

‫شكل (‪)6-2‬‬

‫عصويات سالبة لجرام غير متحركة هوائية ال تتجرثم ‪.‬‬

‫التشخيص ‪:Diagnosis‬‬

‫‪: Morphology )1‬‬

‫مستعمرات حمراء على بيئة ‪ XLD‬بدون نقطة مركزية سوداء‪.‬‬

‫‪API 20E )0‬‬

‫‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram negative )3‬لتحديد‬
‫الـ ‪ Genus‬و اختبار حساسية المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪63‬‬
 :Sputum ‫عينات الـ‬
.‫ فقط لمدة دقيقة ثم نغسلها‬Crystal violet ‫ نصبغها بـ‬Slides ‫نقوم بفحص‬ -
.Epithelial cells ‫ و‬Pus cells ‫نقوم بعد‬ -
.CBA ‫ و‬B.A ‫ و‬MAC ‫نقوم بفحص األطباق‬ -
‫ و‬Heavy,Moderate,Low Growth of… Work sheet ‫نكتب في الـ‬ -
.Normal Flora ‫إذا لم تنمو أي بكتيريا ممرضة نكتب‬
Neisseria : )6-3(‫ شكل‬sputum ‫الميكروبات الطبيعية في عينات‬ -
catarrhalis, Candida albicans,diphtheroids, alpha-
hemolytic streptococci, and some staphylococci

)6-3( ‫شكل‬

: ‫أهم الميكروبات الممرضة في عينات البصاق‬

Streptococcus pyogenes -1
Beta-hemolytic streptococci -0
Haemophillus influenzae -3
Staphylococcus aureus -4
Klebsiella -5
Pseudomonas -6
Candida spp -7
Proteus -1

64
 Streptococcus pyogenes -
Beta-hemolytic ‫ موجبة لجرام تحلل الدم‬Strept ‫كروية في سالسل‬

)6-4( ‫شكل‬

: Diagnosis ‫التشخيص‬

Catalase test )1

Negative = no bubbles

:Taxos a (Bacitracin disk Susciptibility) ‫) إختبار حساسية‬0

"‫"سبق شرحه‬
Sensitive = S.pyogenes

Lancefield grouping ‫) إختبار‬3

‫ لتحديد الـ‬Vitek or Phoenix (ID), (AST) for Gram positive )4

.‫ و اختبار حساسية المضادات الحيوية‬Genus

‫) على‬Manual) ‫( يدويا‬AST) ‫ أو نجري إختبار حساسية المضادات الحيوية‬-

‫) إذا لم تتوفر بعض المضادات في األجهزة‬X2, GPC disk( B.A ‫طبق‬
.‫السابقة‬

65
‫‪ -‬ثم نرفع التقرير للطبيب المعالج بإسم الميكروب و المضادات الحيوية‬
‫المقاومة (‪ )R‬و الحساسة (‪.)S‬‬

‫‪-‬‬

‫‪66‬‬
 ‫عينات الدم (‪)Blood Culture Specimens‬‬
‫قوارير ‪ blood culture bottles‬تحتوي بداخلها مادة فلورسنتية الهدف منها‬
‫تنمية البكتيريا إذا كانت موجودة في العينة مما يؤدي إلى تكاثرها بشكل سريع‪ ,‬و‬
‫يكشف جهاز ‪ Bactec alert‬شكل (‪ )7-1‬الزيادات في ثاني أكسيد الكربون نتيجة‬
‫إتحادها بالصبغة الفلورسنتية التي تنتجها نمو البكتيريا فيصدر الجهاز ضوء و‬
‫صوت إذا وجدت نتيجة ‪.Positive‬‬

‫طريقة إدخال العينات‪:‬‬

‫‪ ‬تسجيل البيانات الخاصة بالعينة على الكمبيوتر الخاص بـ ‪Bactec‬‬
‫شكل (‪)7-2‬‬
‫و هي‪:‬‬
‫رقم ملف المريض (‪)Patient ID‬‬ ‫‪‬‬
‫اسم المريض (‪)Patient name‬‬ ‫‪‬‬
‫رقم دخول العينة (‪)Accession‬‬ ‫‪‬‬
‫تاريخ دخول العينة (‪F11 )Collection Date‬‬ ‫‪‬‬
‫الرقم التسلسلي للزجاجة (‪ )Bar code‬بواسطة الماسح الضوئي‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫مالحظة‪ :‬بعد تسجيل البيانات نقوم بحفظها بالضغط على ‪ F10‬من لوحة المفاتيح‬

‫شكل (‪)7-2‬‬ ‫شكل (‪)7-1‬‬

‫ثم توضع على حامل خاص بها لنقلها إلى الجهاز ثم يتم فتح الجهاز و عمل مسح لـ‬
‫‪ Bar code‬لكل عينة و وضعها في الفتحة المخصصة لها حيث يضيء لون أحمر‬
‫عند الفتحة الخاصة بها (‪ )slot‬شكل (‪)7-3‬‬

‫‪67‬‬
 ‫إذا كانت العينة سالبة (عدم وجود أي ميكروب) يظهر على الشاشة عدد العينات‬
‫السالبة إلزالتها من الجهاز و يظهر ضوء أصفر على مواقع العينات السالبة و تكون‬
‫هذه النتيجة عادة بعد مرور (‪ )7-5‬أيام‬
‫إذا كانت عينة موجبة (وجود ميكروب) يظهر في أعلى الشاشة شريط أحمر و‬
‫يصدر الجهاز صوت إنذار فيظهر ضوء أحمر على موقع العينة الموجبة‪ ,‬ثم نقوم‬
‫بقراءة باركود إزالة العينات ثم إخراج الـ ‪ Bottle‬ثم قراءة ‪.bottle barcode‬‬

‫شكل (‪)7-3‬‬

‫العينات السالبة يتم التخلص منها في حاويات خاصة ‪ ,‬أما العينات الموجبة فيتم‬
‫زراعتها على بيئات مختلفة‪.‬‬
‫وهي‪)Macconkey Agar( , )Chocolate Agar( , )Blood Agar( :‬‬

‫و عمل ‪ Slide‬لمعرفة الميكروب (‪)G +ve( )G –ve‬‬

‫زراعة العينات الموجبة‪:‬‬

‫نقوم بسحب كمية من الدم بواسطة سرنجة معقمه‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫نضع قطره في كل طبق من البيئات السابقة ثم نعمل ‪ ,Streaking‬ثم‬ ‫‪-‬‬
‫نحضنها لمدة ‪ 04‬ساعة‬
‫نضع قطره على ‪ slide‬و نضع كنتروالت ‪ G –ve, G+ve‬ثم نصبغها‬ ‫‪-‬‬
‫بصبغة جرام‪.‬‬
‫نقوم بتعريف العينات‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫)‪ Vitek or Phoenix (ID), (AST‬لتحديد الـ ‪ Genus‬و اختبار حساسية‬ ‫‪-‬‬
‫المضادات الحيوية‪.‬‬

‫‪61‬‬
 ‫‪ -‬أو نقوم بعمل إختبارات الحساسية للمضادات الحيوية ‪Manual‬‬
‫‪ -‬في حالة غزل ميكروب موجب لصبغة جرام ‪ Gram +ve‬فيجب عمل‬
‫اختبارات خاصة لــ ‪ staph‬و ‪ strept‬على النحو التالي ‪:‬‬

‫‪BILE‬‬ ‫‪+ve‬‬ ‫‪+ve‬‬ ‫‪ve‬ــ‬

‫‪NACL‬‬ ‫‪+ve‬‬ ‫‪ve‬ــ‬ ‫‪+or‬‬

‫‪Organism‬‬ ‫‪Enterococcus‬‬ ‫‪Streptococcus‬‬ ‫‪Group latex‬‬

‫‪sp.p‬‬ ‫‪Group D‬‬ ‫‪A.B.C.D.F.G‬‬

‫‪DNAS‬‬ ‫‪+ve‬‬ ‫‪+ve‬‬ ‫‪Ve‬ــ‬

‫‪FOX‬‬ ‫‪R‬‬ ‫‪S‬‬ ‫‪S or R‬‬

‫‪Organism‬‬ ‫‪MRSA‬‬ ‫‪Staphylococcus‬‬ ‫‪C.N.staph‬‬

‫‪Aureus‬‬ ‫‪Normal flora‬‬

‫‪ -‬ثم نرفع التقرير للطبيب المعالج بإسم الميكروب و المضادات الحيوية‬

‫المقاومة (‪ )R‬و الحساسة (‪.)S‬‬

‫‪69‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫‪72‬‬
Flow charts

)8-1( ‫شكل‬

)8-2( ‫شكل‬

71
‫شكل (‪)8-3‬‬

‫‪70‬‬
 ‫الخاتمة‬
‫أحمد هللا حمداً كثيرا على التجربة التطبيقية بمختبر المستشفى حيث ازددت علما و‬
‫فائدة ‪ ,‬و أسأل هللا أن يمنحني التوفيق و السداد إلى طريق خدمة ديني أوال و وطني‬
‫ثانيا ‪...‬‬
‫فقد جنيت من هذه التجربة فوائد كثيرة حيث مارست العمل الجماعي و طبقت ما‬
‫تعلمته مما زاد الحماسة لدي للعمل‪.‬‬

‫‪73‬‬
 ‫مصادر الصور‬
‫المصدر‬ ‫رقم‬
‫الصورة‬
http://ascendreferencemanual.com/ref/images/stories/large/bactec- (1-1)
culture-bottles.jpg
http://www.syl.ru/misc/i/ai/66830/60155.jpg (1-2)
http://t1.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcSu6FpOFUqFbHxfVzEhybV3VqEdfoiwcTdKn1XKcv_OmtDKCb6P&
t=1
(1-3)
http://loudoun.nvcc.edu/vetonline/vet132/micro/swab_set_open.jpg )1-4(
https://sphotos-a.xx.fbcdn.net/hphotos- )2-1(
ash4/p480x480/284176_516746881718537_2119709094_n.jpg
http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/differential/images/chocolate_nogrowth. )2-2(
jpg
http://farm4.staticflickr.com/3204/2439287109_85dc8e7731_z.jpg )2-3(
http://www.mlt.eu.com/img_prod_800/sabouraud-dextroza-agar-- )2-4(
cloramfenicol-cfn-1341322801.jpg
http://cit.vfu.cz/alimentarni-onemocneni/xsal/xsal05.jpg )2-5(
http://3.bp.blogspot.com/_Oex4VuFCuUU/S0_xSShwBBI/AAAAAAAA )2-6(
AtA/jevDWPH8vXE/s400/P1030297.JPG
http://www.anaerobesystems.com/_/rsrc/1295293852770/Home/pr )2-7(
as-tubed-media/campylobacter-thioglycollate/as-
807%20campylobacter-
thioglycollate%20broth.jpg?height=320&width=298
http://files.quorux.com/system_preview_200000186- )2-8(
ea670eaac8/Agar%20Manitol.jpg
http://www.gobizkorea.com/att/cat/dcskorea/tp_html/img/dcskorea )2-9(
_cat_2_small_img_2.jpg
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/refphot )2-10(
o/e30_thayermartinmod_sepidermidis_12228_hugo.jpg
https://static.fishersci.com/images/F103814~wl.jpg )2-11(
http://cpl.yonsei.ac.kr/micro/atlashtml/media/CAJ_campyBAP.jpg )2-12(
https://encrypted- )2-13(
tbn1.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRyR_TcSoajwKwTg5Inbgb0M
T-g4GzHmsEU6gud5mQNBZVoEbb1rg
https://encrypted- )2-14(
tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQo9fv8_nvif5dC1_ajy4ciYQcI
kO-dM_FICSPPHc4dotd7c52DGw

http://images.wellcome.ac.uk/indexplus/obf_images/f6/01/22736f94 )2-15(
2b25f0c2a97259039c78.jpg
74
 ‫رسم‬ )2-16(
http://www.spml.com.sa/images/product/88.jpg )2-17(
http://images10.newegg.com/NeweggImage/ProductImageCompress )2-18(
All300/A0CD_1_20120208_1526358.jpg
http://2.bp.blogspot.com/_nqZHj7Cjuyk/SlIZKtKfm1I/AAAAAAAAAAM )2-19(
/jBQ6yHfKoxg/s320/untitled.JPG
http://www.madsci.org/~lynn/micro/techniques/streaking/quarterna )2-20(
ry.JPG
http://www.mcharts.be/artsen/images/Image/foto's%20Britt/VITEK.J )3-1(
PG
http://thumbs4.ebaystatic.com/d/l225/m/mUtebYY_mYCfnVfogmLj8L )3-2(
w.jpg
‫تصوير‬ )3-3(
‫تصوير‬ )3-4(
‫تصوير‬ )3-5(
https://store.pda.org/TableOfContents/ERMM_V2_Ch01.pdf )3-6(
https://store.pda.org/TableOfContents/ERMM_V2_Ch01.pdf )3-7(
‫تصوير‬ )3-8(
http://www.bd.com/ds/images/spotlights/spotlight_phoenix_200px.j )3-9(
pg
http://i.ebayimg.com/00/s/MTIwMFgxNjAw/$(KGrHqZ,!rQE-ZKL,- )3-10(
eGBPy8lF!0Nw~~60_1.JPG?set_id=880000500F
‫تصوير‬ )3-11(
https://www.bdj.co.jp/micro/support/phoenixsquare/hkdqj200000clg )3-12(
14-img/hkdqj200000clg77.jpg
http://www.bd.com/ds/images/productcenter/img_phoenix-hand.gif )3-13(
https://encrypted- )3-14(
tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcSImd0ss_CoHRuwPW_bCdl_0
L7gcEZ-k1Xz9vBxOPUMnaMBm0ML
http://dc445.4shared.com/doc/i3EBnEfm/preview_html_m77d5f621. )4-1(
gif
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/images/catalog/MRSA )4-2(
-Latex-DR900A-WEB.jpg

https://encrypted- )4-3(
tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRBgywqyOZES25TrU4VAmNA
N5tJlOjbNlbiO3OtJbFCpvGSrh5Q8Q
http://wikiimages.qwika.com/thumb/en/0/0a/Staph_sapro_blood.jpg )4-4(
/128px-Staph_sapro_blood.jpg
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/refphot )4-5(

75
 o/z7011_hardydiskoptochin_spyogenes_19615_hugo.jpg
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/refphot )4-6(
o/z7011_hardydiskoptochin_spneumoniae_6305_hugo.jpg
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/refphot )4-7(
o/bilespotreagent_z61__after_spneumoniae_6305_hugo.jpg
http://cueflash.com/cardimages/questions/thumbnails/6/9/7696868. )4-8(
jpg
http://lib.jiangnan.edu.cn/ASM/468- )4-9(
Bacitracin%20Sensitivity%20Using%20Group%20A%20and%20B%20B
eta-Hemolytic%20Streptococci-
Introduce.files/Streptococcus%20pyogenes%20Streptoccocus%20agal
actiae%20fig1.jpg
http://classconnection.s3.amazonaws.com/395/flashcards/737395/jp )4-10(
g/positive_camp_test1322932929446.jpg
http://images1.hellotrade.com/data2/AF/AG/HELLOTD-1884434/cat- )4-11(
strep2-250x250.jpg
http://www.haloarchaea.com/teaching/molec_prac_course/images/S )4-12(
treptex2_L.jpg
https://www.landbrugsinfo.dk/Kvaeg/Maelkekvalitet/Konverterede% )4-13(
20billeder/Description-of-the-12-bacterial-genes-identified-by-the-
PCR-
test.docx/_w/9f8c964867eaf5471dedfffaa516f6123254f823_jpeg.jpg
https://encrypted- )4-14(
tbn1.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQXLikaJRp6J8MA4N2W4yte
mcEKdO5iHCuTl9u8BJ43MfZ5NExD9g
https://encrypted- )4-15(
tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcSuA73ZiFF5FzF8EXu20_9TikH
hAatkBDFxuZ5Mse35mUxHgUCP
https://encrypted- )4-16(
tbn1.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcTiIjrSypZCemz5qWc_gzkXQTt
sC1vAa_IfV5OfrV4CYkt2I-Sl
http://www.mesacc.edu/~johnson/labtools/Dbiochem/3mac.jpg )4-17(

http://users.stlcc.edu/kkiser/oxp.jpg )4-18(
http://www.biotech.univ.gda.pl/odl/biochem/api.html )4-19(
http://www.biotech.univ.gda.pl/odl/biochem/api.html )4-20(
http://www.biotech.univ.gda.pl/odl/biochem/api.html )4-21(
http://www.biotech.univ.gda.pl/odl/biochem/api.html )4-22(
http://www.biotech.univ.gda.pl/odl/biochem/api.html )4-23(

76
 https://encrypted- )4-24(
tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcSEzkYXU8BhWhCkdIy_TjmdM
2oyXUvGvX586WfnKIKr-iNHuWTKJg
http://lib.jiangnan.edu.cn/ASM/121-1.jpg )4-25(
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/images/catalog/MRSA )4-26(
-Latex-DR900A-WEB.jpg

http://www.vetnext.com/fotos/M_BI_CL_23.jpg )4-27(
https://encrypted- )4-28(
tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQJVqu7rpnEJ3VeCcP0ZdygJm
hS66HHqX4Mzv_R6bPGFrL4ep6b
http://lib.jiangnan.edu.cn/ASM/093-3.jpg )4-29(
http://pictures.life.ku.dk/atlas/microatlas/veterinary/bacteria/Pseudo )4-30(
monas_aeruginosa/pseudomonasaeruginosa.jpg
http://www.flickr.com/photos/nathanreading/6860368342/in/photos )4-31(
tream/
http://www.mc.maricopa.edu/~johnson/labtools/Dbiochem/indole.jp )4-32(
g
http://microbitos.files.wordpress.com/2010/06/klebsiella20pneumon )4-33(
iae20fig32.jpg?w=605
http://inst.bact.wisc.edu/inst/images/book_3/chapter_16/16-1.jpg )4-34(
https://encrypted- )4-35(
tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcT7latgge8pFpcZC1YGasBrxuX
c5iSKMcwO4A4z3ciFNKEcdYRjDg
http://i895.photobucket.com/albums/ac160/Jessie146/Micro%20org )4-36(
anism/acinetobacter.jpg
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/8/85/Morg )4-37(
anella_morganii_on_blood_agar.jpg/600px-
Morganella_morganii_on_blood_agar.jpg
http://farm8.static.flickr.com/7185/6964966535_92982a8b71.jpg )4-38(
http://textbookofbacteriology.net/themicrobialworld/meningococcus )4-39(
.jpg
http://www.bacteriainphotos.com/photo%20gallery/meningitidis.jpg )4-40(
http://ih.constantcontact.com/fs086/1101496155327/img/84.jpg?a= )4-41(
1101930352251
http://www.microbiologyinpictures.com/bacteria%20photos/haemop )4-42(
hilus%20influenzae%20photos/haemophilus%20influenzae%2003.jpg
http://www.cdc.gov/hi-disease/images/PHIL_1947.jpg )4-43(
https://encrypted- )4-44(
tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQL_qtj3WybFllPGcFQ6Sdiwol

77
 hXWf_Flngnhqd43QL1TSQY7nhMQ
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/XVFact )4-45(
orDisks.htm
https://encrypted- )4-46(
tbn1.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQGFxbilpRTtHjNPbveIjiE2e3T
dq75FzL5jk-6O75Yfm7nYZAjuA
http://webserver.pa- )4-47(
ucl.com/wwwdocs/micro/Germ%20Tube%20Test-4.gif
http://farm7.static.flickr.com/6188/6141285541_a34cff3f26.jpg )5-1(
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/a8/Klebsi )5-2(
ella_pneumoniae_on_CLED_agar_-_Detail.jpg/800px-
Klebsiella_pneumoniae_on_CLED_agar_-_Detail.jpg
http://microblog.me.uk/wp- )5-3(
content/uploads/Proteus%282%29w_rt.jpg
http://www.flickr.com/photos/asrulwahab/2527939780/ )5-4(
http://parasites.czu.cz/food/_data/174.jpg )6-1(
http://www.jlindquist.net/generalmicro/EPimages/xldshig.jpg )6-2(
http://lib.jiangnan.edu.cn/ASM/114-24.jpg )6-3(
http://www.microbiologyinpictures.com/bacteria%20photos/streptoc )6-4(
occus%20pyogenes%20photos/streptococcus%20pyogenes%2004.jpg
‫تصوير‬ )7-1(
‫تصوير‬ )7-2(
‫تصوير‬ (7-3)
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/0/0d/Gram_Positiv (8-1)
e_Classification.png
http://drqumber.files.wordpress.com/2013/02/gram-ve-spore- (8-2)
forming-rods.jpg
http://o.quizlet.com/i/NFGOy-Rfh8P9ZFQHnw_xPw_m.jpg (8-3)

71
 ‫المراجع‬

http://www.tbeeb.net/ask/showthread.php?t=41750 -1
http://drqumber.wordpress.com/category/medical- -0
microbiology
http://www.s-qu.com/forum/showthread.php?t=42822 -3
http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt09-id- -4
characterization-hi.html
http://ar.scribd.com/doc/10644/API20Strep -5
http://www.biotech.univ.gda.pl/odl/biochem/api.html -6
http://www.uwyo.edu/molb2210_lab/info/biochemical_t -7
ests.htm#Mannitol
http://www.life.umd.edu/classroom/bsci424/pathogende -1
scriptions/Clostridium.htm
http://medicalanalysis.wordpress.com/2012/06/16/bacte -9
/rial-cultures
www.arabslab.com -12
.‫محمد العفيف‬.‫مذكرة األحياء الدقيقة الطبية العملي أ‬ -11
‫ شركة‬-‫) أسس علم البكتيريا الطبي‬1999( ‫ رجاء محمود‬,‫ملياني‬ -10
.‫المكتبات للنشر و التوزيع المحدودة – جدة – المملكة العربية السعودية‬

79