Professional Documents
Culture Documents
1
جلنة التدقيق العلمي:
)1األستاذ الدكتور عزام الكردي – جامعة محاه – كلية الطب البيطري – قسم األحياء
الدقيقة.
)2األستاذ الدكتور شريف شاهني ـ جامعة محاه ـ كلية الطب البيطري ـ قسم وظائف
األعضاء.
)3األستاذ املساعد الدكتور سامر ابراهيم – جامعة محاه – كلية الطب البيطري -قسم
األحياء الدقيقة.
2
منشورات جامعة البعث
املعهد التقاين للطب البيطري
الدكتور
ناجح هربة
أستاذ مساعد يف قسم األحياء الدقيقة -كلية الطب البيطري – جامعة محاه
الدكتور
حممد أمحد قباوي
مدرس يف قسم األمراض الباطنة – كلية الطب البيطري – جامعة الفرات
3
ال بد من الرتكيز عند تشخيص أي حالة مرضية على ثالث نقاط رئيسة هي
تاريخ احلالة املرضية واألعراض السريرية والتشخيص املخربي ويعد أي تشخيص ال يعتمد
على النتائج املخربية إمنا هوتشخيص ناقص ومبتور حىت ولوكان صحيحا ,وقد تطور علم
التشخيص املخربي يف االونة األخرية وأصبح جزءا مكمال جلميع العلوم الطبية البيطرية.
وقد راعينا يف هذا الكتاب الرتكيز على حتليل املعطيات املخربية ومناقشتها
وربطها باألمراض ذات العالقة .هذا وقد مت ذكر آلية حدوث هذه االضطرابات وذلك
كمفهوم عام وليس كأمراض حمددة.
وأضيف يف هذا املؤلف العديد من املوضوعات اليت ك انت قد أغفلت يف الطبعات
السابقة مثل فيزيولوجيا اجلهاز البويل وفيزيولوجيا التناسل والضرع وغريها .باإلضافة إىل
ذلك عدلنا الفصول األخرى تعديال موافقا للتطور الذي حصل يف علم التشخيص
املخربي وكلنا أمل أن نكون قد قدمنا إفادة للطالب الفين البيطري مبا حيقق محاية الثروة
احليوانية وحتسينها يف هذا الوطن احلبيب ونأمل أن نكون قد أضفنا مرجعا هاما للمكتبة
العربية.
وهللا ويل التوفيق
املؤلفان
2
الفهرس
اجلزء النظري
الصفحة املؤلف العنوان
الفصل االول
7 د .ناجح هبرة تقييم وظائف الجهاز البولي
8 د .ناجح هبرة الكلية
13 د .ناجح هبرة تحليل البول
12 د .ناجح هبرة جمع وحفظ العينات البولية
17 د .ناجح هبرة التقييم الفيزيائي أو اإلجمالي للبول
23 د .ناجح هبرة الفحص الكيميائي للبول
43 د .ناجح هبرة الفحص المجهري لراسب البول
55 د .ناجح هبرة اختبارات تقييم وظائف الكلية
الفصل الثاني
96 د .محمد قباوي فحص السائل المنوي
96 د .محمد قباوي الجهاز التناسلي الذكري
الفصل الثالث
17 د .محمد قباوي فحص الحليب
17 د .محمد قباوي لمحة تشريحية وفيزيولوجية عن الضرع
69 د .محمد قباوي الحليب
61 د .محمد قباوي االختبارات الحقلية لتشخيص التهاب الضرع
701 د .محمد قباوي الفحص الفيزيائي للحليب
701 د .محمد قباوي الفحص الكيميائي للحليب
777 د .محمد قباوي الفحص الجرثومي للحليب
2
717 د .محمد قباوي غش الحليب
الجزء العملي
الفصل االول
715 د .ناجح هبرة الفحص الفيزيائي للبول
716 د .ناجح هبرة الفحص الكيميائي للبول
737 د .ناجح هبرة الفحص المجهري لراسب البول
الفصل الثاني
756 د .محمد قباوي فحص السائل المنوي
الفصل الثالث
791 د .محمد قباوي فحص الحليب
791 د .محمد قباوي طرائق الفحوص الفيزيائية للحليب
714 د .محمد قباوي طرائق الفحوص الكيميائية للحليب
716 د .محمد قباوي طرائق الفحوص الجرثومية للحليب
761 د .محمد قباوي طرائق الكشف عن غش الحليب
766 د .ناجح هبرة المصطلحات
105 المراجع العربية
109 المراجع األجنبية
6
تقييم وظائف الجهاز البولي
Evaluation of Urinary system function
تعريف الجهاز البولي :
هو الجهاز المسؤول عن تصنيع واطراح البول والفضالت االستقالبية خارج الجسم
أجزاء الجهاز البولي :
يتكون الجهاز البولي من الكليتين والحالب والمثانة واإلحليل .
الشكل ()1
صورة ترسيمية للحهاز البولي
7
الكليــة
Kidney
البنية التشريحية للكلية:
حت ى ندرك معنى النتائج الحقيقية لتحليل البول ،من الضروري تفهم القواعد األساسية
آللية عمل الكلية .والكلية هي من األعضاء الرئيسة في الجسم التي تساهم بتنظيم
الوسط الداخلي للجسم .والبول هو النتيجة الثانوية للنشاطات التي تقوم بها الكلية .
الكليتان عضوان لونهما بني محمر مائل للزرقة ،في الجزء الخلفي للتجويف البطني
ناحية الظهر وعلى جانبي العمود الفقري أعلى البريتون ،والكليتان غير متناظرتين ،
ال من الكلية اليسرى ( .عند الخنازير تكون في مستوى
فالكلية اليمنى تقع إلى األمام قلي ً
واحد ) .ويحيط بكل كلية كتلة شحمية تسمى المحفظة الشحمية ،وفي كل الحيوانات
المستأنسة تأخذ الكلية تقريبًا شكل حبة الفاصولياء .ولكل كلية سطحان ظهري وبطني ،
8
وطرف الكلية الداخلي أو البطني مقعر يسمى السرة وعندها تدخل االوعية الدموية.
وتحاط كل كلية بنسيج ليفي رقيق يحتوي على القليل من األلياف المرنة والعضلية يسمى
بالمحفظة الليفية للكلية وهذه المحفظة تغور عند السرة ليكون النسيج الخارجي لحوض
الكلية ،وتتركب الكلية من جزئين رئيسين هما القشرة واللب ويعتبر النفرون الوحدة
الوظيفية للكلية ،وتحوي كل كلية مليون نفرون تقريبًا .ويظهر مقطع الكلية ثالث
طبقات هي :
-1قشرة ليفية خارجية
-2قشرة مخية
-3المنطقة النخاعية التي تغلفها القشرة المخية من كل جوانبها
وتتكون المنطقة النخاعية من عدد من التشكيالت المثلثية (الهرمية) تسمى أه رامات
مالبيكي التي قد تبقى منفصلة أو تلتحم جزئيًا أو كليًا حسب نوع الحيوان ،وتعرف قم ة
األهرامات بالحلمة الكلوية ،فإ ذا التحمت هذه الحلمات لتكون حلمة كلوية واحدة تسمى
الحلمة الكلوية العامة أو العرف الكلوي ومثل هذه الكلية تسمى بالكلية وحيدة الحلمة كما
هو الحال عند األغنام والجمال والكالب ،أما إذا بقيت الحلمات منفصلة فتسمى الكلية
بالكلية عد يدة الحلمات كما هي الحال عند األبقار والخنازير .أما القشرة فرخوة حبيبية
ل ونها بني محمر وتقع على قواعد األه رامات وتتميز بعروات صغيرة ه ي الكبيبات وهي
تمثل وحدة التصفية أو النفرون .
النفرونات :
وهو الجزء المكون لمعظم بنية الكلية وان معظم وظائف الكلية الحيوية تتم وتلتئم في
النفرونات( الكلية تحوي الماليين من النفرونات ) .ولذلك يطلق عليها وحدة الترشيح
الكلوية .
9
أقسام النفرون :
يتألف النفرون من جزيئين :
الجزء الكبيبي Glomerula :
هي كت ـلة مكونة من جـزيئين الجزء
بـومان، ومحـفظة الوعائـي الدموي
كال الجزئيين يطلـق عليه كبـة مالبـيكي
وفيهما يتـم ترشيح الدم ،والرشيح هنا
يطلق عليه الرشيح الكبيبي.
الجزء األنبوبي Tubular :
بع ض تقوم بدور إعادة امـتصا ص
المواد من الرشـيح البولي التي يكون
الجسم بحاجتـها ولهذا يتم الحفـاظ على
االتزان البدني والرشيح الكبيبي يعتمد
على غ ازرة واتـساع جريان الدم إلى
الكلية أي إن عملـية الترش ـيح تتم بين
ومحفظ الكبة الوعائية (الجزءالدموي)
بـومان وهي عملـية تـبادل أسموزي
بحتة
الشكل()3
11
ألية تكوين الرشيح البولي:
وتتم على النحو اآلتي :
بعد دخول الشريان الكلوي إلى الكلية ينقسم على التوالي إلى فرعين :
-1الشريان بين الفصي المقوس ( يحيط بقشرة الكلية ) .
-2الشريان بين الفصي المتفرع .هو يشكل الشريان الوارد إلى محفظة بومان ،يتفرع
بدوره إلى شريينات كثيرة ودقيقة فيشكل شبكة من االوعية الشعرية داخل كبة مالبيكي ،
وان التصاق أو تماس جدران كل من الشريينات الدموية والطبقة الحشوية لمحفظة بومان
جدار نصف نفوذ تعبر من خالله مكونات البالزما إلى التجويف األنبوبي بعملية
اً يشكل
ترشيح بسيطة .ثم بعد ذلك تتحد هذه االوعية الشعرية من جديد لتشكل الشرينات الكبيبية
الصادرة ،وهذه يكون قطرها أصغر من قطر الشرينات الكبيبية الورادة وهذا االختالف في
قطر الشرينات الدموية يساعد على حفظ الترشيح .والشرينات الصادرة هذه تمر بعد ذلك
إلى النبيبات الكلوية وتشكل شبكة من الشرينات تحيط ب النبيبات الكلوية وتعمل على إعادة
امتصاص المواد المفيدة للجسم من الرشيح الكبيبي وبنهاية المطاف تتحد الشرينات
الصادرة لتشكل الضفيرة الوريدية وفيها تتحد لتشكل الوريد الكلوي
هذا الطريق المتعرج لتيار الدم داخل الكلية له أهميته من أجل كفاءة الكلية الوظيفية ولهذا
فإن أي تغير حيوي للكلية أو مرض الكلية يحدث بسبب ضعف جريان الدم خالل الكلية
الطبيعية .
يمكن تلخيص وظيفة االنبيبات الكلوية بما يلي :
تكون مسؤولة عن إعادة امتصاص المركبات أو المواد المفيدة للجسم مثل الغلوكوز –
الحموض األمينية – الصوديوم – البوتاسيوم .....الخ .
تعمل على ضبط الماء والكهارل ،ولكن هذه الوظيفة تتم بشكل أوضح في النبيبات
البعيدة distal tubulesواالنابيب المجمعة للبول collecting tubulesكما أن التوازن
11
البدني لألحماض واألسس يتم في النبيبات البعيدة وذلك باستبدال الهيدروجين بالبوتاسيوم
وتخليق األمونيا .
12
تحليل البول
Urinalysis
يتضمن التحليل البولي من بعد جمع العينة البولية وحفظها الخطوات اآلتية :
وبإجراء هذه االختبارات يمكن التوصل لتشخيص صحيح ألمراض الجهاز البولي .وهذه
التحاليل تحدد من قبل الطبيب الفاحص وذلك على حسب الحالة المرضية ال راهنة التي تم
تشخيصها سريريًا .ومن أجل أن تكون النتائج ال مخبرية والتحاليل صحيحة ال بد من
التعرض لكيفية جمع عينات البول وحفظها وارسالها إلى المختبر .
13
جمع وحفظ العينات البولية:
Collection and preservation of urine
-اعتبارات عامة :
-1عند جمع العينات البولية من الحيوان يجب تنظيف الغلغة ) ) Prepuceأو الفرج
ألن تلوث العينة سوف يغير من النتيجة.
-2عند استخدام القسطرة المبالية . Catheterization
يجب أن يؤخذ باالعتبار أ نه ممكن مشاهدة التالي في عينة البول :
كريات حمراء في العينة بسبب جرح في مجرى القناة البولية التناسلية.
وجود مواد دهنية في عينة البول نتيجة الستخدام المواد المساعدة والمزلقة
إلدخال القثطرة وهذا يفرض على جامع عينة البول أن يقوم بما يلي.
تعقيم القثطرة وغسل الغلغة وتعقيم االواني الخاصة لجمع البول إذا كان الغرض -3
من العينة الفحص الجرثومي .
-2استبعاد الدفقات االولى من خروج البول
12
كمية البول المراد جمعها :
من أجل التحليل اإل جمالي للبول يلزم بصورة عامة أخذ عينة البول باألحجام التالية :
211 – 111سم 3من الحيوانات الكبيرة .
21 – 21سم 3من الحيوانات المتوسطة الحجم .
11 – 2سم 3عند الحيوانات الصغيرة .
طرق حفظ عينات البول Preservation :
بعد الحصول على عينة البول يجب فحص العينة مباشرة حتى ال يحدث أي تغير في
مكونات البول األساسية واعطاء نتائج مغلوطة وفي حال احتمال التأخير في إجراء
الفحوص مباشرة يجب اتخاذ اال حتياطات الالزمة لحفظ عينات البول بإضافة بعض المواد
الحافظة ( البول يعتبر وسط مالئم لنمو الجراثيم ) :
12
الفحص الفيزيائي أو اإلجمالي للبول
Physical examination
ويتضمن الفحص الفيزيائي للبول الكشف عن بعض التغيرات التي تحدث في الخواص
الطبيعية للبول منها
16
- 1التهاب النفرونات بين خاللي المزمن
-2الزرب السكري
-3الداء السكري التفه ( ) diabetes insipidus
-2االستحالة النشوية المتقدمة للكلية .
17
وجود مثل هذه الحاالت يترتب علية حدوث تبولن للدم ( ، ) Urimiaوالنفوق هو
النتيجة الحتمية للحاالت .
-21اللونColor :
توضع عينة البول في أنبوب اختبار زجاجي وبالنظر اليها يسجل اللون اآلتي :
Yellow -بول أصفر
Colorless -بول عديم اللون
Pale yellow -بول أصفر شاحب
dark yellow -بول أصفر غامق
greenish – yellow -بول أصفر مخضر
Red -أحمر
yellow – brown -بول بني مصفر
Redish - brown -بني محمر
Brown to brownish black -بني إلى بني مسود
Green -أخضر
blue -أزرق
milky -حليبي
لون البول الطبيعي يتراوح ما بين األصفر الشاحب إلى البني المصفر ،واللون األصفر
في البول يعود لوجود األصباغ الصفراوية urobilinogen urochromففي حالة زيادة
نسبة هذه األصباغ في البول يبدو بلون أغمق من الطبيعي ،أما نقصها فيظهر البول
بلون شاحب .فيما يلي سنذكر دالئل كل لون يأخذه البول .
18
-2الداء السكري التفه .
-3الزرب السكري
-2شرب كميات كبيرة من الماء والسوائل .
-2التهاب الرحم الصديدي .
-3الشفافية : Transperancy
وتقدر شفافية البول بالنظر إلى عينة البول في أنبوب االختبار وتسحيل اآلتي :
Clear -1واضح
19
-2غير رائق Cloudy
floculet -3شمعي
-1واضح :
بول كل الحيوانات المستأنسة والسليمة يكون رائقًا ما عدا بول الخيول فإنه غير رائق
بسبب وجود بللورات كربونات الكالسيوم مع مخاط ( الميوسين )
-2غير رائق (عكر)Cloudy :
يكون بسبب وجود أحد المكونات العضوية مثل الخاليا البيض والظهارية (إجراء فحص
الراسب للتأكد من ذلك )
-3شمعي : floculet
وجود الدهن في البول يعطيه اللون األكمد الشمعي إذا وجد بكمية كبيرة
-6الرغوة : Foam
عند رج عينة البول في أنبوبة االختبار نجد اآلتي :
أ -البول الطبيعي يشكل رغوة بيضاء محددة ( تزول بسرعة ) .
ب -وجود األصباغ الصفراوية يتشكل رغوة خض راء مصفرة
ج -وجود الهيموغلوبين ب البول يتشكل رغوة لونها أحمر إلى بني
21
قياس الكثافة النوعية للبول يعني قياس نسبة المواد الصلبة المنحلة بالبول أي أنها مؤشر
على درجة إعادة امتصاصها من النبيبات الكلوية وتقاس الكثافة إما بواسطة مقياس
االنكسار refractometerأو بمقياس الكثافة البولية . urinometerوتختلف الكثافة
حسب نوع الحيوان فهي تتراوح عند الخيول من ،1.161 –1.121ومجالهاعنداألبقار من
1.122 – 1.122وعند األغنام والماعز تترواح من ( . 1.171 – 1.112دالئل
الكثافة النوعية المرضية سواء الزيادة أو النقصان سوف تشرح الحقًا ) .
21
الفحص الكيميائي للبول
Chemical Examination of urine
يحتوي البول على عدد كبير من المواد لعضوية .ولكن البعض من هذه المواد فقط هي
التي له ا دالئل تشخيصية عند تحليل البول .مثل البروتين– الغلوكوز– تفاعل – PH
الدم– األنديكان.
-1تفاعل PH
االختالفات في درجة تركيز أيون الهيدروجين أو درجة تفاعل Phيعكس في معظم
األحوال أم راضاً داخلية أكثر منها أم راضًا تتعلق بالجهاز البولي وتفاعل PHله عالقة
بنوعية الغذاء الذي يتناوله الحيوان ،فهو قل وي عند الحيوانات العاشبة وحامضي عند
الحيوانات الالحمة .
ودرجة تفاعل pHالطبيعية هي :
عند األبقار واألغنام والماعز 4.0 – 7.0
7– 6 وعند القطط والكالب
4 وعند الخيول
8, 4 - 5, 5 وعند الخنازير
تحليل النتائج : Interpretation
22
-21البروتين : Protein uria
بول كل الحيوانات الطبيعي خال من البروتين أل ن معظم البروتينات التي تعبر من خالل
الرشيح الكبيبي يعاد امتصاصها بواسطة األنيبيبات الكلوية .
ويمكن تقسيم أسباب وجود البروتين في البول إلى األسباب اآلتية
-1أسباب مؤقتة
وتكون بسبب :
أ -احتقان الشعيرات الدموية األمر الذي يترتب عليه زيادة في نفاذية مرشحات الكبيبات
للبروتين لألسباب اآلتية :
-اإلجهاد العضلي والجنسي ،أو التوتر واالضطراب أو التشنجات .
-زيادة تناول المواد البروتينية .
23
-1أمراض واضطرابات الجهاز الدوري كقصور القلب والتغيرات المورفولوجية لالوعية
الدموية مما يزيد شدة نفاذية االوعية للبروتينات فتختلط بالبول .
-2فقر الدم االنحاللي ينتج عنه زيادة تحرر الهيموغلوبين وظهوره في البول وكذلك
وجود الميوغلوبين myoglobineفي البول أثر مجهود عضلي عنيف ( البيلة اآلزوتية
عند الخيل ) وهذه تعطي تفاعل إيجابي للبروتين بالبول .
22
الخضاب في البول مع الحاالت اآلتية - 1 :البيلة الخضابية بعد الوالدة عند األبقار
والجاموس وتكون مصاحبة لنقص الفوسفور بالدم وللتأكد من ذلك يجب
22
يكون البول الطبيعي والمفرز من مرشحات الكبب خاليًا من سكر الغلوكوز ،ولكن عند
تطبيق االختبارات الروتينية إلثبات وجود الغلوكوز في البول ال تظهر النتيجة في الحقيقة
فقط سكر الغلوكوز بل تظهر عدداً من المواد الشائعة الموجودة في البول والقادرة على
اختزال النحاس في المحلول القلوي الساخن ،وألن الغلوكوز هو السكر الوحيد الموجود في
الدم والمهم من الناحية اإلكلينيكية .لهذا يجب التفريق بين الغلوكوز والمواد األخرى
باستخدام شريط كروما توغرافي chromatography stripأو بالطرق األنزيمية للتأكد
من وجود الغلوكوز من عدمه ،ومن المواد التي تعطي تفاعالً إيجابياً كاذباً للغلوكوز والتي
تختزل النحاس المواد التالية :
-المضادات الحيوية مثل الستربتوميسين ،أريوماسين ،تراميسين – بنسلين .
-الالكتور - .حمض اللبن - .المورفين - .الساليسيالت ( عند الماعز ألكلها لشجر
الصفصاف ) أو العالج باألسبرين .
26
-دالئل وجود األجسام الكيتونية بالبول :
-1الزرب السكري المترافق باستخدام ناقص لمواد الكربوهيدرات .
-2تناول وجبات غذائية غنية بالدهن .
-3تلف كفاءة الكبد (الفشل الكلوي) .
-0بعد التخدير بالكلورفورم واألثير .
-5الجوع والصيام اللذان يحصل بسببهما استنزاف لمواد الكربوهيدرات
المخزونه ويسود استقالب الدهن .
-6اضطراب الغدد الصم مثل فرط الهرمون الذكري (األندروجينات) ،فرط نشاط الفص
األمامي للغدة النخامية .
-7حمض اللبن في األبقار ،تخلون الدم عند المجترات ،التسمم الحملي عند النعاج
(حمل التوائم )
-7الكلور في البول urin chloride :
يحوي البول على كميات معينة من كلور الصوديوم ويشكل هذا الملح النسبة العظمى
بالنسبة لألمال ح المعدنية الموجودة في البول إذ يحوي البول على كلوريد البوتاسيوم
وكلوري األمونيوم ،الكالسيوم ،المغنيزيوم .
-دالئل وجود الكلوريد بالبول ( :موجودة بشكل طبيعي بالبول) .
-1نقص مستوى الكلوريد بالبول :
ويحدث ألحد األسباب :
-الصيام والجوع .
-التقيؤ الشديد.
-اإلسهال الشديد أو المستمر .
-االلتهابات الحادة والمترافقة بحدوث ارتشاحات أو وذمات .
-قصور القلب االحتقاني .
-2زيادة مستوى الكلوريد بالبول :
لألسباب اآلتية :
-تناول كميات عالية من الكلوريدات ( .ملح الطعام ) .
27
-مرض أديسون .
-أخذ المد رات البولية .
-التهاب الكلية الخاللي المزمن .
-4كالسيوم البول Calcium in urin:
يوجد الكالسيوم طبيعياً في البول بكميات تختلف من كائن إلى آخر كما هو مبين في
الجدول التالي :
جدول رقم ( ) 1يوضح كمية الكالسيوم
الطبيعي في البول
اإلفراز mEq / day النوع
7.4 - 4.1 الكالب
4.11 القطط
7.3 -0.5 األبقار
14 -2 اإلنسان
28
فرط نشاط الدرق
-9اليوروبيلينوجن Urobilinogen :
اليوروبيلينوجن هو صباغ يتشكل في األمعاء بفعل الج راثيم المرجعة للبيلروبين ،إذ يفرز
قسم منه في األمعاء والقسم اآلخر يمتص في الدورة البابية ويعود لينقل بواسطة الكبد
إلى الدورة الدموية العامة ،وكمية قليلة منه تفرز في البول .
ملحوظة :
ارتفاع اليوروبيلينوجن في البول بكمية كبيرة يمكن اعتماده في التفريق بين اليرقان
االنسدادي واليرقان بسبب المرض الكبدي أو بسبب تحلل الدم.أما إذا كان االنسداد في
القنوات الصفراوية كامال فال يمكن للبيلروبين الوصول إلى القناة المعوية وبالتالي ال
يتشكل اليوروب يلينوجن فغيابه من البول والبراز يعطي ب ار از شاحبا ألن نواتج أكسدته
اليوروبيلين هي التي تعطي اللون البني للبراز .
دالئل وجود اليوروبيلينوجن في البول
نقص أوغياب اليوروبيلينوجن في البول
يعود لألسباب اآلتية:
نقص هدم الكريات الحمر
اإلخفاق في االمتصاص المعوي كما في حالة اإلسهال
بعض المضادات الحيوية خاصة االورومايسين تمنع الجراثيم المعوية من التدخل في
تشكيل اليوروبيلينوجن .
ارتفاع كمية اليوروبيلينوجن في البول :
ويكون لألسباب اآلتية
االلتهاب الكبدي فتخريب الخاليا الكبدية يجعلها غير فعالة في نقل اليوروبيلينوجن من
الدورة البابية .
تشمع الكبد .
اليرقان التحللي ( زيادة تحلل الكريات الحمر تؤدي إلى زيادة إنتاج اليوروبيلينوجن في
األمعاء ثم إلى ارتفاعه في البول
29
جدول( ) 2يظهر نسبة اليوروبيلينوجن والبيليروبين في البول تحت تأثير اإلصابة
بحاالت مرضية مختلفة
31
الفحص المجهري لراسب البول
Microscopic examination of urine
الفحص المجهري لراسب البول له من األهمية ما يجعل ضرورة إج ارئه أم ًار ال بد منه عند
كل تحليل للبول ،كما ينصح بإجرائة بسرعة وبعد الحصول على العينة مباشرة ألن
كبير ،واذا تعذر ذلك يجب حفظه
ًا احتمال فساد العينة وتغير مكوناتها الخلوية يكون
بالمواد الحافظة اآلنفة الذكر ويمكن تقسيم عناصر راسب البول إلى
-1مكونات عضوية :
-2مكونات العضوية
...
.
31
-3التهاب الكلية وحوضها .
-2التهاب الفرج والمهبل أو التهاب الرحم الصديدي وهذا يؤدي إلى تلوث البول أثناء
مروره في هذه االماكن.
-21الكريات الحمر Erythrocytes
وقد يلتبس شكلها بشكل حبيبات الدهن أو الخمائر .وحتى تبعد الشك نضيف نقطة من
حمض الخل المخفف أو محلول الصابونين تحت الساترة فتذوب الكريات الحمر أو تصبغ
بصبغة سودان IIللدهن .
دالئل وجودها :
32
من الممكن تواجد بضع كريات 2 – 1كرية في األحوال الطبيعية آتية من القناة البولية
التناسلية أو نتيجة الستخدام القسطرة المبالية ووجودها بأعداد كبيرة مؤشر على :
احتشاء الكلية
التهاب المثانة
وجود حصوات في القناة البولية التناسلية
اورام المثانة .
33
الشكل ( ) 14رسم توضيحي للخاليا الظهارية االنتفالية
32
أنواع األسطوانات : Types of casts
\
الشكل ( )12رسم توضيحي لألسطوانة الزجاجية
32
دالئل وجودها :يشير
-1إلى التهاب الكلية ولكن بشكل أشد من وجود األسطوانةالزجاجية
-1تشاهد في راسب البول لوجود التهاب الكلية بين الخاللي الحاد
-31األسطوانة الظهارية epithelial Cast :
الخاليا ضمن األسطوانة ممكن أن تكون بيضاوية متطاولة أو مسطحة .أما األسطوانة
فتكون قصيرة وعريضة أحدى نهايتيها مدورة و األخرى مقطوعة بشكل مائل.الشكل ()12
36
الشكل ( ) 15رسم توضيحي لألسطوانة الشمعية
دالئل وجودها :
في حالة التهاب النفرونات الشديد والمتقدم. -2
استحالة الكلية النشواني . Amyloidosis -3
هي أسطوانات تحوي بداخلها حبيبات دهنية متعددة عديمة اللون وتصبغ بلون أحمر أو
برتقالي عند صبغها بصبغة سودان . 3الشكل ()16
37
الشكل ( ) 17رسم توضيحي لألسطوانة الدموية
دالئل وجودها :يشير إلى وجود نزيف في النبيبات الكلوية أو الكبب
ووجودها يشير إلى وجود تتميز بوجود العديد من الخاليا القيحية المندمجة معًا ،
خراجات في الكلية أو الكلية وحوضها .الشكل ()18
38
الشكل ( ) 19رسم توضيحي لألسطوانة الكاذبة
-2المخاط أو الخيوط الزاللية أو المخاطية :
تظهر بشكل خيوط طويلة ورفيعة وملتوية تشبه الشريط و تشاهد عادة وبشكل طبيعي في
بول الخيول ووجودها في بول بقية الحيوانات المستأنسة دليل تهيج المبال أو التهاب
المثانة وحوض الكلية وقد توجد في البول نتيجة تلوث العينة بواسطة اإلفرازات التناسلية .
الشكل ()21
39
الشكل ( ) 21رسم توضيحي للجراثيم
وهي تتميز بكونها مقسمة ،ووجودها ليس له دالئل إكلينيكية هامة وغالباَ ًً ما يكون
وجودها بسبب التلوث .
تكون نادرة ،وتوجد نتيجة التلوث بالبراز ولكن وجود الحيوانات المنوية في راسب البول
يكون بسبب إفراز طبيعي من البربخ .الشكل ()23
21
الشكل ( )23رسم توضيحي للحيوانات المنوية
-5الطفيليات : Parasites
Dia يمكن مشاهدة بيوض بعض الطفيليات في راسب البول وهذا يتضمن :
etophyma renalتصيب الكلية في الكالب والقطط و Cappilaria aplicaتصيب
المثانة في الكالب والقطط .
21
الرواسب غير العضوية
unorganized sediments
وجود البلورات براسب البول يعتمد على تفاعل البول ( ) pHوعلى تركيز وكمية هذه
البلورات وأشباهها .ووجودها يمثل دالئل تشخيصية بسيطة.
22
-1بلورات حمض البول Uric Acid ِ:
بلورات تتواجد طبيعيًا في البول الحامضي( بول اللواحم) صفراء تذوب بماءات الصوديوم
والتذوب بحمض الخل أو التعرض للح اررة تاخذ شكالً معينًا أو على شكل صفائح منتظمة
أو هرمية أو على شكل وردة .الشكل()22
23
بللورات شفافه ال لون لها تتواجد في البول وهي ذات التفاعل الحامضي أو المعتدل أو
القلوي وتأخذ البللورات شكل مربع يغطيها خطان ،وتذوب بحمض كلور الماء واآلزوت وال
تذوب في حمض الخل ،ووجودها مؤشر على الزرب السكري والتهاب الكلية المزمن .
الشكل ()26
22
الشكل ( ) 24رسم توضيحي لبللورات كربونات الكالسيوم
22
الشكل ( )34رسم توضيحي لبللورات الفوسفات غير البللورية
26
الشكل ( ) 32رسم توضيحي لبللورات
-11التيروزينTyrisine :
تواجدها في البول الحامضي غير طبيعي وراسبها عديم اللون وهي على هيئة خيوط أو
إ بر رقيقة تجتمع في المنتصف على شكل الصليب ،تذوب في ماءات الصوديوم
والتذ وب بحمض الخل ،وجودها مؤشر على إصابة الجهاز العصبي أو التهاب الكبد .
الشكل ()32
27
الشكل ( ) 30رسم توضيحي لبللورات التيروزين
28
الشكل ( )36رسم توضيحي لبللورات السيستين
29
اختبارات تقييم وظائف الكلية
Kedney function tests
هي اختبارات تجرى لال ستدالل على كفاءة الكلية الوظيفية من أجل التعرف على طبيعة
اإلصابة في الجهاز البولي على الرغم من أن الفحوص الفيزيائية والكيميائية والفحص المجهري
لراسب البول قد يكفي في بعض األحيان من أجل تشخيص المرض ،إال أنه يجب إجراء هذه
االختبارات وخاصة عندما تكون األمور متعلقة بالكلية بشكل خاص .وهذه االختبارات يمكن
تقسيمها على حسب اآلتي :
-1اختبارات تجرى على البول وأهمها اختبار الكثافة النوعية .
-3اختبارات تجري على الدم والبول (اختبارات التصفية) Clearance test :
21
-1الجفاف الناتج عن اإلسهال والتقيؤ المستمرين .
-2االوديما المترافقة بقصور الدورة الدموية .
-3الحروق المصحوبة بفقد السوائل .
-2األمراض الحموية ( زيادة مؤقتة ) .
-2التهاب الكلية بين الخاللي الحاد
-6الزرب السكري.
-7زيادة البروتين في البول
21
معرفته بشكل دقيق .كما تظهر إلى جانب ذلك عالمات الجفاف على الحيوان مع وجود
بعض النتائج المخبرية قبل زيادة مكداس الدم ( )P.C.Vمع زيادة البروتين الكلي بالبول
بسبب عجز الجسم عن حفظ سوائل أو ماء الجسم الضط راب الكلية وعدم استجابتها
لهرمون . ADH
ومن االختبارات الهامة لتقيم عمل الكلية ودرجة تركيزها للمواد مايلي :
22
الرشاحة الكبيبية ما بين 1.116 – 1.111ف ال تستطيع الكلية تركيز البول لوجود ماء
كثير ( كثافة رشيح الكبب ما بين . ) 1.112 – 1.118
-2مقدرة الكلية على تركيز البول تكون ضعيفة لسبب وجود مرض عام بالكلية .
-3الهرمون المانع للتبول ADHيفرز وال تستجيب له النفرونات وهذا ما يسمى أيضًا
بمرض السكر الكاذب ،فإذا ما اشتبه بهذا المرض فالبد من إج راء اختبار آخر للكشف
عنه وذلك باستخدام اختبار الفاسوبروسين
23
البروتينية وتتكون وتتشكل في الكبد وتمثل الناتج النهائي لهدم البروتين ويمكن تلخيص
تشكل اليوريا على النحو اآلتي :
االورنثيين +أمونيا +غاز ثاني أوكسيد الكربون ستيرولين .
سيترولين +أمونيا حمض أميني +أرغونين .
أنزيم تحليل اليوريا
االورنيثين األرغونين
الكرياتين
%21 األمونيا
األحماض األمينية
حمض البول
( BUNيوريا نتروجين الدم ) تساوي نصف اليوريا على حسب المعادلة اآلتية :
22
جدول ( )0القيم الطبيعية لليوريا ويوريا نتروجين الدم ( )BUNفي الدم
يوريا نتروجين()BUN اليوريا مغ % نوع الحيوان
أ -زيادة المواد البروتينية في العليقة يزيد نسبة اليوريا فقد لوحظ أن اليوريا تزداد بمعدل
11ملغ /د.ل إذا كانت تغذية الحيوان غنية بالمواد بالبروتينات بينما على العكس ينقص
مستوى اليوريا بالدم بانخفاض التغذية على المواد البروتينية .وإلثبات هذا لوحظ أنه إذا
حرم الحيوان ( الكلب ) من الطعام 22ساعة فإن مستوى اليوريا ويوريا نتروجين الدم
( )BUNيكون نصف المستوى الذي كان عندما يتغذى الحيوان على البروتين .ولوحظ
أيضًا بان النسبة العظمى لمستوى اليوريا نتروجين بالد م تحدث بعد 6 – 2ساعات من
تناول الوجبة الغذائية ويدوم هذا المستوى في الدم 9ساعات في دم الحيوانات المعتمدة
على نسبة معتدلة من المواد البروتينية بينما يدوم هذا المستوى 21ساعة إذا كانت
الوجبة الغذائية غنية بالمواد البروتينية ،ومثل هذه المالحظات يجب مناقشتها عندما يراد
قياس مستوى اليوريا نتروجين بالدم .ولذا ينصح بتصويم الحيوان 18 – 12ساعة قبل
تقدير مستوى اليوريا .وهناك بعض العوامل مثل التخريب الهدمي لالنسجة نتيجة الحمى
22
(االرتفاع بدرجة الح اررة) أو الكدمات أو التسمم الدموي يمكنها أ ن تسبب زيادة في تركيز
مستوى اليوريا نتروجين بالدم .
– IIزيادة اليوريا ألسباب كلوية ومنها :
-1التهاب النفرونات سواء كان االلتهاب حاداً أو تحت حاد أو مزمناً إلى جانب التهاب
الكلية بين الخاللي .فقد لوحظ أن الهدم المتوسط لألنسجة الكلوية بسبب رفع مستوى
اليوريا وهذا يتناسب مع شدة الهدم فمثالً :
-ارتفاع مستوى اليوريا فوق 211ملغ /دل دم دليل تلف الكلية الشديد .
-ارتفاع مستوى اليوريا فوق 311ملغ /دل دم دليل موت الكلية وسوف ينتهي الحيوان
بالموت .
لهذا يجب فحص النسبة كل يوم أو يومين لمعرفتها ولمعرفة كفاءة العالج ولهذا يعتبر
مؤشر هامًا .
اً
-22اإلصابة بالليبتوسيب ار يزيد نسبة اليوريا بشكل متوسط وهذا يتوقف على نوع ومرحلة
اإلصابة .
وأيضاً اإلصابة باليرقان يالحظ زيادة خفيفة لمستوى اليوريا في المرحلة االولى لإلصابة
ولكن الم راحل األخيرة للمرض تكون الزيادة فيها ملحوظة لنسبة اليوريا .
أ -عوامل قبل كلوية :ويكون بسبب اختزال عملية الترشيح من خالل الكبب وضعف
ا نسياب الدم خالل الكلية ويحدث هذا نتيجة :
-1الصدمة ،الجفاف ،قصور القلب اإلحتقاني – قصور نشاط الكظر (االدرينالين)
( يحدث اضطراب بوظيفة الكلية بسبب نقص جريان الدم خالل الكلية )
-2نزف في القناة المعدية المعوية .
-3تناول بعض األدوية التي تزيد هدم البروتين مثل خالصة الدرق – الكورتيزون
-2التغيرات في توازن السوائل يؤثر على مستوى تركيز BUNفيزداد مستوى اليوريا
(زيادة خفيفية ) بنقص أمالح البالزما بسبب اإلسهال والتقيؤ والتعرق الشديد – زيادة
التبول .
26
ملحوظة :
في حال نترجة الدم Azotemiaبسبب الحاالت اآلنفة الذكر تكون الكلية سليمة ولكن
جريان الدم خالل الكلية إما بطيء أو معدوم إلى حد ما فيترتب على ذلك قصور في
عمل الكلية فإذا عولجت مثل هذه الحاالت بسرعة فإن الكلية تعود إلى وظيفتها الطبيعية
.
27
-1الكرياتينين ال يتأثر بالغذاء ( البروتين واستقالبه ) .
-2اإلنتاج اليومي للكرياتينين من استقالب العضالت ثابت نسبياً .
-3إنتاج الكرياتينين ال يتأثر بسهولة بعملية الهدم المتسببة عن الحمى ،التسمم الدموي
،إعطاء العقاقير .
-2العمر ،الجنس ،التمارين الرياضية .
عمومًا الكرياتينين هو سريع االطراح من الكلية أكثر من اليوريا فربما تكون الكلية مريضة
وال يحدث ارتفاع شديد لمستوى الكرياتينين بالدم ولكن من الطبيعي أن يحدث هذا
االرتفاع إذا ما تقدم المرض بالكلية وأصبحت كفاءة الكلية الوظيفية غير متوازنة .أي أن
زيادة مستوى الكرياتينين مؤشر هام ألمراض الكلية وكفاءتها .
والمستوى الطبيعي للكرياتينين في مصل الدم هو :
الخيل 1.9 – 1.2 :ملغ /د.ل
القطط 2 – 1 :ملغ /د.ل
الكالب 1.2 – 1 :ملغ /د.ل
األبقار 2.1 – 1 :ملغ /د.ل
األغنام 1.9 – 1.. :ملغ /د.ل
الماعز 1.8 – 1.9ملغ/د.ل
ملحوظة :زيادة الكرياتينين في مصل الدم إلى 18 – 2ملغ 111 /مل دم دليل تلف
خطير في الكلية .
28
طريقة االختبار :
-1نف رغ المثانة من البول بواسطة القسطرة المبالية أو تسمح للكلب بالتبول ( المقصود
هنا هو تفريغ المثانة من الجزء األكبر من البول ) .
-2نحقن 6ملغ من الصبغة P. S. Pداخل الوريد مع تسجيل وقت الحقن بالضبط .
-3نسحب محتويات المثانة من البول بعد 11دقائق بواسطة القسطرة ( يمكن تثبيت
القسطرة بحيث تصل بين عنق المثانة إلى خارج المبال ) .
-2نغسل المثانة بـ 12 – 11مل من محلول فسيولوجي معقم ونكرر ذلك 3م رات أو
أكثر ثم نضع كل البول المجموع من السحب في دورق ( حساب الوقت هام بالنسبة لهذه
التجربة ويجب إنهاء التجربة بعد 21دقيقة من الحقن ) .
-2حساب كمية الصبغة التي طرحت يكون على الشكل اآلتي :
أ -نضع كل البول والصبغة المجموعة من المثانة في حوجلة زجاجية سعة 1لتر ثم
نخفف حتى 211مل بالماء الفسيولوجي .
ب -نضيف 11مل ماءات الصوديوم تركيز %11ثم نمزج جيداً فيتكون لون قرنفلي
فإذا كان اللون القرنفلي غامقًا نضيف كمية كافية من الماء حتى يصبح الحجم الكلي
211مل .
وحساب كمية الصبغة يكون بالقراءة على جهاز السبكتروفتومتر على طول موجة 261
نانومتر بالمقارنة مع ألوان قياسية أخرى معروفة كمية الصبغة بها .
( أجمع كثير من الباحثين أن %22 – 33من الصبغة تطرح خالل 21دقيقة فإذا نقص
اطراح الصبغة فذلك بسبب قصور كفاءة الكلية نتيجة بعض األمراض مثل أمراض الكلية
العامة – الجفاف – قصور القلب– اضط راب في النبيبات الكلوية) .
الحصاة البولية Urine Stone :
تتواجد الحصى البولية في كل أج زاء أعضاء الجهاز البولي تقريبًا من الكليتين والحالبين
والمثانة ،وه ي تتكون بشكل دائم من المواد المفرزة طبيعيًا في البول مع كمية معينة من
مادة بروتينية وتكون الحصاة بأحجام مختلفة من ذرات الرمل وحجم العدس إلى حجم
بيضة الدجاج وهي كثيرة األشكال .وسطحها أملس وقد يكون محببًا ومشرش ًار وهي ذوات
نتوءات كثمرة التوت .وهي بألوان مختلفة إما بيضاء أو صفراء محمرة أو مسمرة وتكون
29
قاسية أو هشة .ومكسرها إما أن يكون بال شكل غالبًا وقليل منها بلوري .واذا قطعت
بالمنشار يظهر فيها طبقات متعاقبة ولها مركز .والمركز أو النواة مؤلفة من خثرة دموية
أو من كتلة من الجراثيم أو غير ذلك .أما تركيبها فيختلف باختالف االوصاف المتقدمة
آنفًا إما أن تكون الحصاة البولية مكونة بلورات حمض البول والبوالت ومن فوسفات
الكلس أومن فوسفات األمونيوم والمغنزيوم أومن حماضات الكالسيوم .وعموماً يندر أن
تكون الحصاة نقية من ن وع واحد ولكن تكون مختلطة ولكن تتغلب إحدى المواد على
األخرى .فمثالً نجد حصاة مؤلفة من حمض البول وهو الغالب ومن قليل من
الحماضات وأثار من الفوسفات .
تحليل الحصاة البولية Analysis of urinary stone :
قبل أن نحل ل الحصاة البد من ذكر الصفات العامة التي تتميز بها أنواع الحصاة البولية
المختلفة .
-حصاة حمض البول واليوريت تحترق احتراقاً كامالً إذا تعرضت للح اررة .
-حصاة يوريت األمونيوم تحترق احتراقًا كامالً واذا عولجت بالصودا تعطي النشادر
الحر الذي يعرف بكواشفه الخاصة .
-حصاة الفوسفات ال تحترق ولكن تنحل بحمض كلور الماء بدون فوران .
-حصاة كربونات الكلس ال تحترق ولكنها تنحل بحمض كلور الماء مع حدوث فوران.
عملية التحليل :
تطحن الحصاة لتصبح على شكل بودرة في جفنه ثم يؤخذ قسم من البودرة بحجم حبة
الحمص وتوضع في أنبوب اختبار مع 11 – 2قطرات من حمض اآلزوت وقليل من
الماء وتغلى ( يالحظ الفوران إلثبات وجود الكربونات ) ثم يضاف إليها 3 – 2مل ماء
ويعاد غليها ثم ترشح بورق الترشيح ثم تقسم الرشاحة على عدة أنابيب وجفنه بحيث
يوضع في كل وعاء 2مل من الرشاحة ثم :
-1يضاف إلى األنبوب االول 1مل من محلول مولبيدات األمونيوم وحمض اآلزوت
ويسخن .حصول راسب أصفر دليل وجود الفوسفات .
61
-2يضاف إلى األنبوب الثاني 2مل من خالت الصوديوم المشبع بالبرودة .حدوث
راسب أبيض دليل وجود حمض الحماض .وعدم حدوث راسب يضاف إليه قليل من
محلول حماضات األمونيوم فحصول راسب أبيض يدل على وجود الكلس .
-3ن ضع الجفنة ومحتوياتها على حمام مائي حار ويبخر محتوياتها حتى الجفاف .
ظهور لون أحمر أجري ( كاشف موركسيد ) دليل وجود حمض البول وعدم تلوينه ينفيه
واذا ثبت وجوده يضاف إلى ناحية من اللون قطره من الصودا فتقلب إلى أحمر بنفسجي
.وبإضافة قطره من األمونيا يظهر اللون األحمر الليلكي .
-2نضع جزء من بودرة الحصاة في أنبوب اختبار مع محلول البوتاس الكاوي ثم نغلي
األنبوب فنشم رائحة األمونيا ثم نضع ورقة ترشيح مبللة بمحلول نسلر فوق فتحة األنبوب
تلونها باللون األصفر مؤشر على وجود أمالح األمونيوم ثم يبرد المحلول ويرشح ثم يقسم
إلى أج زاء الختبارات أخرى :
-1يعالج قسمًا من الرشاحة بكاشف فولن لحمض البول وكمية من سيانيد الصوديوم
والبولة .حصول لون أزرق مؤشر على وجود البوالت
( عشر -2نمزج قسمًا من الرشاحة بحجم مساو لمحلول الصودا الكاوي N11
خال ت الرصاص ثم يغلي المزيج .
نظامي ) N/11ثم تضاف عدة قطرات من محلول N
61
الفصل الثاين
فحص السائل المنوي
Semen Examination
تتوضع الخصيتان عند معظم ذكور الحيوانات األهلية خارج التجويف البطنـي ضـمن كـيس
الص ــفن ،وان وج ــود ك ــيس الص ــفن خ ــارج التجوي ــف البطن ــي آلي ــة مهم ــة ج ــداً ف ــي عملي ــة
اإلن ط ــاف م ــن خ ــالل ت ــأمين الحـ ـ اررة المناس ــبة ل ــذلك .والخص ــيتان غ ــدد مختلط ــة ( داخليـ ـة
اإلفراز – صماء – وخارجية اإلفراز ) ،وهي تختلف شكالً وحجماً وموقعـاً بـاختالف النـوع
ولكنها تتشابه جميعها من حيث التركيب.
الوظيفه:
-1إنتاج الحيوانات المنوية.
62
-2إفراز الهرمونات الذكريه.
63
Seminal Epitheliumيغطــى الغشــاء القاعــدي فــي هــذه الظهــارة بنســيج ضــام ليفــي،
تحتوي طبقته الداخلية على خاليا مسطحة هي خاليـا شـبه عضـلية Myoidcellsتسـمح
بتقلصات ضعيفة للنبيب المنوي.
تتركب النبيبات من نوعين من الخاليا هي :
)2خاليا غير منقسمة داعمة هي خاليا سيرتولي Sertoli cells
)2خاليــا متك ــاثرة ت ــدعى سلس ــلة الخالي ــا المول ــدة للنط ــاف ،فتن ــتج خالي ــا تص ــبح ف ــي
المستقبل خاليا نطفية ويتم إنتاج النطاف من خالل عمليتين :
Spermatogenesisوتشــمل االنقســام الفتيلــي والمنص ــف االولــى هــي :اإلنطــاف
للخاليا.
والثانية :تكون النطاف Spermiogenesisوتشـمل التمـايز النهـائي للخاليـا المنتشـة
أحادية الصيغة الصبغية.
)6اإل نطاف : Spermatogenesis
تبـ ــدأ عمليـ ــة اإلن طـ ــاف بعـ ــد البلـ ــوغ بخليـ ــة منتشـ ــة بدائيـ ــة تـ ــدعى بـ ــذرة النطفـ ــة
Spermatogoniumوه ــي خالي ــا دائري ــة ص ــغيرة نس ــبيًا قطره ــا 12ميكرونـ ـًا
تتوضـع بـالقرب مــن الغشـاء القاعـدي للخاليــا ،تعـد خاليـا بــذرة النطفـة ذات النــوى
البيضـاوية الداكنـة خاليـا جذعيـة تنقسـم بشـكل غيـر متماثـل لتعطـي خاليـا جذعيـة
جديدة وبذرات نطفية شاحبة ذات نـوى بيضـاوية تنقسـم بسـرعة لتعطـي خاليـا بـذرة
النطفـة نمـط Spermatogonia Type A- Aوالتـي تخضـع ألنقسـامات نسـيلية
B - عدي ــدة نوعي ــة .تبق ــى مجتمع ــة لتش ــكل خالي ــا ب ــذرة النطف ــة نم ــط
.Spermatogonia Type Bيط ـ أر علــى خاليــا بــذرة النطفــة نمــط Bانقســام
فتيلــي نهــائي لتنم ـو وتصــبح خاليــا نطفيــة أوليــة Primary Spermatocyte
يتضاعف الـ DNAفـي الخاليـا النطفيـة االوليـة للـنمط - Type B- Bوتـدخل
مرحلة االنقسام المنصف الذي ينتج عنه خاليا ذات صيغة صبغية مفردة.
تستغرق األحداث الخلوية التي تحـدث بـين االنقسـام المنصـف النهـائي لخاليـا بـذرة
النطفة وأرومة النطفة مدة 72 – 61يوماً.
)7تكون النطاف : Spermiogenesis
62
تتحول في هذه المرحلـة أرومـات النطـاف إلـى نطـاف عاليـة التخصـص وال تحـدث
أية انقسامات خلوية في هذه المرحلة.
تتوضع األرومات النطفية بالقرب مـن لمعـة النبيبـات المنويـة وتشـمل عمليـة تكـون
النطاف تشـكل جسـيم طرفـي وتكثـف وتطـاول النـواة وتطـور السـوط وفقـدان كميـات
كبيرة من الهيولى.
62
أ -الغاللـة الغمديـة : Tunica Vaginalisوهـي الطبقـة الغمديــة للخصـية وهـي امتــداد
للبريتوان والتحيط بالخصية إحاطة كاملة.
ب -الغاللـة البيضـاء : Tunica Albugineaطبقـة مـن نسـيج ضـام كثيـف يحـوي أليافـاً
بيضـاء وأليافـًا عضــلية ناعمـة وعديــدًا مـن االوعيـه الدمويــة ،وتمتـد هــذه الطبقـه داخــل
الخصــية مكونــة ح ـواجز تقســم الخصــية إلــى فصــوص كــل منهــا يحــوي مجموعــة مــن
األنابي ــب المنوي ــة وتتجم ــع األنابي ــب اآلتيـ ـ ة م ــن الفص ــوص مكون ــة الش ــبكة الخص ــوية
،Rete Testisوتخــرج مــن منطقــة هــذه الشــبكة عــدد مــن القن ـوات ( )12-6تعــرف
Ductuliتتحــد مكونــة قنــاة الب ـربخ Duct of بــالقنوات الخارجــة Efferent
Epididymisالمؤدية إلى رأس البربخ.
ثانياً :البربخ :Epididymis
متر في الثور -يتكون من ثالث مناطق هي :
الشكل :يبلغ طوله ً 32-33ا
الذيل Cauda الجسم Corpus الرأس Caput
التركيب :تبطن معظم قناة البربخ خاليا إف ارزية -وفي منطقة الرأس توجد خاليا مهدبة.
الوظائف:
-1نقل الحيوانات المنوية من مؤخرة الخصية إلى الوعاء الناقل.
-2تركيز الحيوانات المنويـة وذلـك بامتصـاص المـاء مـن إفـ ارزات الخصـية المصـاحبه
للحيوانات المنوية.
-3إنضاج الحيوانات المنوية نتيجة إلف ارزات خاليا البربخ.
-2تخزين الحيوانات المنوية في منطقة الذيل قبل قذفها ،عنـد ربـط البـربخ فـى الثـور
تبق ــى الحيوان ــات المنوي ــة ف ــي البـ ـربخ ق ــادرة عل ــى اإلخص ــاب 61يومـ ـاً ،وبع ــد ذل ــك
تضمحل وتمتص.
يتصــل ال ـرأس بنهايــة الخصــية عنــد الجــزء الــذي يــدخل منــه االتصــال الــدموي واللمف ـاوي
والعصبي للخصية.
يمتد الذيل مكونًا أنبوبه تمتد بجانب جسم البربخ موصل ًة إلى الوعاء الناقل.
66
أنبوبـة عضـليه تكــون سـميكه عنــد ال تصـالها بالقنـاة البوليــة التناسـلية مكونــة غـدة األمب ـوال
.Ampulla
ينقل الحيوانات المنوية من ذيل البربخ إلى القناة البولية التناسلية.
م ــبطن بنس ــيج طالئ ــي عم ــودي مه ــدب ،Ciliatedكم ــا يوج ــد ف ــى الج ــدار عض ــالت
ملســاء تســاهم بإنقباض ــها فــي عمليـ ـة القــذف ( تنقــل الحيوان ــات المنويــة م ــن الب ـربخ إل ــى
مجرى البول).
الحبل المنوي Spermatic Cord
ينضــم الوعــاء الناقــل مــع الش ـرايين واالوردة واألعصــاب والعضــلة الداخليــة المعلقــة للخصــيه
Internal Cremaster Muscleوتغل ــف بالطبق ــة الغمدي ــة Tunica Vaginalis
مكونة الحبل المنوي الذى يمر خالل القناة اإلربية Inguinal Canalإلى قناة الحوض.
67
وهو عضو الجماع في الذكر ويمكن تقسيمه إلى ثالث مناطق هي :
)1جذر :Rootوهو الج زء المتصل بالحوض بالعضله الوركية .Ischiocavernosus
)2جسم :Corpusوهو الجزء األساسي للقضيب ،يمتد من الجذر إلى أرس القضيب.
)3رأس Glans Penisوهو الطرف الحر للقضيب .ويختلف أرس القضيب بدرجه
كبيره من نوع آلخر ،ففي نهاية قضيب الكبش توجد زائده تسمى "شاخصة مجرى
البول" ويبدو أنها تدخل إلى عنق الرحم لألنثى عند التلقيح بينما يتميز أرس القضيب
فى الثور بالشكل المخروطي.
سادساً :كيس الصفن : Scrotum
هوامتداد جلدي لجدار تجويف البطن ينشأ من منطقة العانة ويهبط ويتدلى بين الفخذين
على شكل كيس جلدي يأخذ شكل وحجم الخصيتين ويحيط بهما ويتكون من الطبقات
التاليه من الخارج للداخل:
أ) جلد قابل للتمدد واالنكماش وتكثر فيه الغدد العرقيه والدهنيه.
ب) الغاللة السلخية Tunica dartosبها ألياف عضليه ناعمه ونسيج ضام مرن ومن
هذه الطبقه يتكون حاجز يقسم كيس الصفن إلى قسمين كل منهما يحوى خصيه.
وهي مؤلفة من Tunica Vaginalisوهي امتداد للبريتوان، ج) الغاللة الغمدية
طبقتين :الطبقة الداخلية تحيط بالخصية ،والخارجية مبطنة لكيس الصفن وبينهما إف ارزات
مصلية تسهل حركة الخصية داخل كيس الصفن.
68
سابعاً :الغدد اإلضافية : Accessory Glands
البروتينات، وظيفتها :إف ارزاتها تمثل معظم البالزما المنوية وهي غنيه بالسكريات،
األحماض األمينية ،األنزيمات ،الفيتامينات الذائبة فى الماء ،أمالح حمض الليمون،
وتتميز البالزما بصفات تنظيميه عاليه .وهذه الغدد هي:
)1األنبورة ) (Ampullaتعمل كمخزن للحيوانات المنوية.
)2الحويصالت المنوية Seminal Vesicleتغذية الحيوانات المنوية وامدادها
بالطاقه أل نها تفرز الفركتوز ،وأمالح حمض الليمون والفوسفات.
)3غدة الموثة Prostate Glandتفرز شوارد غير عضويه كالصوديوم والكلوريد
والكالسيوم وتفرز سائالً لزجاً يساهم فى تفريغ قناة البول ويساهم فى تكوين
البالزما كما تفرز بروتينًا يمنع إلتصاق رؤوس الحيوانات المنوية
تسهمان بإنتاج السكريات، Bulb Urethral )2غدتي كوبر Gland
البروتينات ،األحماض األمينية ،األنزيمات ،الفيتامينات التي تدخل في تركيب
البالزما المنوية كما تنظف مجرى البول قبل القذف.
تركيب الحيوان المنوي : Sperms
ميكرومتر وعند الحصان
ًا النطفة عبارة عن خلية خيطية الشكل يبلغ طولها عند الثور 71
ميكرومتر ،تتكون النطفة من رأس وعنق وذيل ،الرأس بيضوي مفلطح ( مضغوط
ًا 61
من الطرفين ) ويتميز بوجود نواة تأخذ معظم فراغ ال رأس -الشكل رقم .- 39وتحتوي
النواة على الـ DNAالمفرد والموجود بالصبغيات على شكل 1ن ( أحادي الصيغة
الصبغية ) ،يغطي ال رأس من األمام القلنسوة التي تتألف من غشاء خارجي وداخلي
يغطي معظم الجزء األمامي من ال رأس.
69
نواة Nucleus : جسيم طرفي Acrosome :
المتقدرات Mitochondria : مريكزات Centrioles :
القطعة المتوسطة Midpiece : رأس Head :
خلية نطفية Sperm cell
الشكل رقم - 39 -
تشوهات الحيوانات المنوية :
وجود نسبة مرتفعة من الحيوانات المنوية الشاذة في السائل المنوي المقذوف يؤدي إلى
انخفاض واضح في نسبة اإل خصاب فكلما كان عدد أونسبة الحيوانات المنوية الشاذة في
السائل المنوي أقل كانت نسبة اإل خصاب مرتفعة أكثر ،هذا إلى جانب عدد وحيوية
الحيوانات المنوية في كل 1ملل من السائل المنوي المقذوف.
فنسبة %21فما دون للحيوانات المنوية الشاذة هي نسبة مقبولة وكلما ارتفعت هذه النسبة
انخفضت نسبة اإلخصاب وبالعكس.
71
الشكل رقم - 21 -
تنتج التشوهات في الحيوانات المنوية عن أسباب مختلفة منها وراثية أوأسباب مرضية
تخص الجهاز التناسلي والخصية أوأسباب عامة مرضية أوكيميائية أوفيزيائية كالرضوض
والح اررة المرتفعة واألشعة والتسممات وغيرها.
وتظهر التشوهات في منطقة الرأس أوالعنق أوالذيل ،وتبدوالتشوهات في الرأس على شكل
صغر أوكبر في حجم الرأس أوتغير في شكله ،أما في منطقة العنق فتظهر التشوهات
على شكل قصر أوطول مفرط في العنق أوانعدامه أوازدواجيته .أما في منطقة الذيل
فتبدوالتشوهات على شكل طول شديد أوقصر شديد في الذيل أوانعدام الذيل أوازدواجية
الذيل.
71
الشكل رقم - 21 -
72
الفصل الثالث
فحص الحليب
Milk test
73
الجزء الخلفي Rear : الجزء األمامي Fore :
الشكل رقم - 23 -
يغطى الضرع عند الماشية بجلد قليل الشعر والحلمات خالية من الشعر ،ينقسم الضرع
عند األبقار طولياً إلى نصفين وذلك بوساطة حاجز طولي من النسيج الضام ،وينقسم
كذلك كل نصف إلى ربعين أمامي وخلفي ،ويحت وي كل ربع من األرباع على غدة
منفصلة عن الغدد األخرى وتتصل به حلمة خاصة به.
ويكون الربعان الخلفيان للضرع أكبر من الربعين األماميين ،ويتكون فيهما حوالي % 61
من كمية الحليب المنتجة.
في الضرع نوعان من األربطة :الرباط الدعامي الوسطي والرباط الدعامي الخلفي
(الجانبي) مع وضوح حاجز الضرع من الخارج.
72
الغشاء الرقيق بين األرباع Fine Membrane Between Quarters :
الجدار الخارجي Outer Wall :
الشكل - 22 -
يتكون نسيج الضرع عمومًا من نسيج غدي ظهاري مفرز للحليب ومن نسيج ضام يشكل
اللحمة الضامة وهيكل الضرع ويتخلل هذه األنسجة نسيج شحمي واوعية دموية ولمفية
وأعصاب.
72
العقدة اللمفاوية فوق الضرع Supramammary Lymph Node :
الشريان الضرعي Mammary Artery :
الوريد الضرعي Mammary Vein :
االوعية اللمفية الضرعية Mammary Lymph Vessels :
الوريد البطني تحت الجلدي – وريد الحليب Subcutaneous Abdominal – Milk
– Vein
النسيج الغدي Glandular Tissue : المتن Parenchyma :
صهريج الغدة Gland Cistern :صهريج الحلمة Teat Cistern :
الربع األمامي Front Quarter :الربع الخلفي Hind Quarter :
الشكل رقم - 26 -
أما من الخارج فتحاط الحويصالت اللبنية بشبكة من االوعية الدموية الشعرية لسد حاجة
الخاليا الظهارية اإلفرازية من المواد الغذائية ولتزويدها بالعناصر الغذائية الالزمة لتصنيع
الحليب ولتخليصها من المواد االطراحية الناتجة عن عملية االستقالب.
76
كما تحاط الحويصلة بمجموعة من الخاليا العضلية الملساء التي تنقبض بفعل هرمون
االوكسيتوسين فتسبب إخراج الحليب من الخاليا الظهارية المفرزة إلى فراغ الحويصلة
اللبنية.
تتجمع أعداد من الحويصالت وتغلف بطبقة من النسيج الضام مكونة ما يعرف
بالفصيصات التي تتجمع وتغلف هذه المجاميع بطبقة من نسيج ضام مكونة الفصوص،
تتصل هذه الفصوص بعضها ببعضها اآلخر عن طريق قنوات صغيرة تجتمع بعد ذلك
لتصب في قناة عامة تقوم بتوصيل الحليب الناتج إلى الصهريج الضرعي.
يتم إخراج الحليب من الصهريج عن طريق قناة الحلمة إلى خارج الضرع.
77
الحليب
الحليب سائل أبيض تفرزه إناث الثدييات من الغدد اللبنية المتواجدة في الضرع ،لونه
أبيض مائل إلى االصف رار أحياناً لوجود نسبة كبيرة من مادة الكاروتين المعلقة على
حبيبات الدهن ،والحليب مادة غذائية هامة جدًا وال سيما للمواليد وصغار الحيوانات
واإلنسان ،وهوذوطعم مقبول ،وليس له رائحة ويتكون من الماء والبروتين والدسم والسكر
ومواد معدنية ومواد أخرى كالفيتامينات واألصبغة وغيرها.
يتكون حليب جميع الحيوانات اللبونة من نفس المكونات ،مع اختالف نسبها فقط من
حليب آلخر ،فالحيوانات التي تحتاج مواليدها إلى قدر كبير من الطاقة كالتي تعيش في
المياه كالحيتان أوالمناطق الباردة كالفقمة وغيرها ترتفع نسبة الدهن في حليبها لتصل إلى
%21أوأكثر ،أما الحيوانات التي تنمومواليدها بسرعة كالحيوانات الالحمة فترتفع نسبة
البروتينات في حليبها لتصل إلى أكثر من ،%7ولهذا فإن الحليب الذي تفرزه األمهات
يجب أن يتالءم مع احتياجات المواليد ،واضافة إلى المكونات الرئيسة المذكورة قد تتواجد
في الحليب مركبات أخرى بكميات ضئيلة جدًا كالفيتامينات واألنزيمات وثماالت من
مبيدات األعشاب والحشرات والصادات الحيوية وبعض العناصر المشعة.
ألن حليب األبقار هوالحليب المتداول رئيسيًا في العالم ،سنتحدث عنه بشكل عام.
إن العوامل التي تؤثر على تركيب الحليب وبشكل خاص الدسم مختلفة ومتعددة وأهمها
العرق والساللة والقطيع والحالة الصحية والعمر والتغذية والجوالمحيط ،وفيما إذا كان
الحليب في المساء أوالصباح ،أومن أول الحالبة أوآخرها ،أوبعد الوالدة مباشرة ( اللبأ
أوالسرسوب ) أوحليب طبيعي.
78
جمع عينات الحليب
Collection of milk samples
79
التجميد وتخضع إلى التحليل بأسرع ما يمكن ( حالة التحليل الجرثومي ) أقل من 22
ساعة بحيث يتم حفظ العينة على درجة ح اررة منخفضة من 1إلى 2م °أما الحليب
المبستر فيحفظ على درجة ح اررة أقل من 11م.°
شروط استخدام األدوات :
يجب أ ن تكون األدوات المستخدمة في أخذ العينات مغسولة أوال بالماء النظافة،
للتخلص من القطع الكبيرة المتبقية من عملية أخذ العينات السابقة ثم التنظيف باستخدام
الفرشاة وتغسل بالماء الحار الحاوي على أحد المحاليل القلوية ثم تغسل بالماء وتترك لكي
تجف.
في حالة أخذ العينة للتحليل الجرثومي يجب أن تعقم األدوات وفق الطرق التالية:
-1إبقاء األدوات خالل مدة ساعة على درجة ح اررة 171م.°
-2إبقاء األدوات 21دقيقة ضمن البخار على درجة ح اررة 121م.°
وفي بعض الحاالت يمكن استخدام إحدى طرق التعقيم التالية مباشرة قبل االستخدام.
-3ترك األدوات ساعة في البخار على درجة 111م.°
-2ترك األدوات دقيقة في الماء المغلي.
-2غمر األدوات في اإليثانول % 71ثم تجفيف اإليثانول باللهب.
-6غمر األدوات دقيقتين ضمن محلول ماء جافيل 111مغ /كغ من الكلور الفعال
أومحلول ماء جافيل تجاري 12يوضع ضمن 11ليترات من الماء.
في حالة الحليب الخام يجب أن تكون األدوات المستخدمة معقمة.
أخذ العينات :
أ .أخذ العينات من االوعية الصغيرة :
-1األدوات الالزمة :
محرك من المعدن غير قابل لألكسدة ( الكروم ) 316له قرص مثقب قطره أقل بقليل
-ا
من قطر فتحة ال وعاء المحتوي على الحليب ويثبت ساق عمودي في منتصف القرص
بحيث يكون طول الساق أعلى من طول الوعاء وينتهي بالنهاية األخرى بمقبض يمكن أن
يكون على شكل حلقة ،يجب أن يلتحم القرص في النهاية األخرى للساق.
81
ويمكن أيضًا استخدام محرك ميكانيكي للخلط ويجب أن يعقم المحرك وفق الطرق
المذكورة سابقًا.
المغرفة المستخدم ة في أخذ العينات مصنعة من المعدن غير القابل للتأكسد .ويجب أن
تكون معقمة.
العبوات الزجاجية المستخدمة لجمع العينات يجب أن تعقم ،أوتستخدم عبوات بالستيكية
مناسبة سعتها 122مل لها رقبة عريضة ومحكمة اإلغالق.
-2التحريك :
ي دخل المحرك بهدوء بعد تعقيمه ضمن الوعاء المملوء مع تجنب قذف قسم من الطبقة
العلوية الغنية بالمادة الدسمة.
التحريك الناتج بفعل الحركة العمودية المترددة يجب أن يتم على نفس الطول في الوعاء
وان مجال الحركة يجب أن يكون أقل من االرتفاع الكلي المأخوذ بالحليب بمعنى آخر
يبرز ،ومن جهة أخرى من الضروري أن تتم الحركة
أن القسم المحرك والخالط يجب أ ال ا
وأ ن تتم العملية ببطء في الهبوط على طول جدار الوعاء وليس فقط في المحور
وبسرعة في الصعود بغية تحريض دوران حقيقي للحليب ويجب أن تتابع عملية التحريك
خالل عشر ثوان على األ قل بمعدل حركة واحدة مترددة كل ثانية ،أي أن ال يقل عدد
الحركات عن عشر م رات.
-3أخذ العينة :
عندما تنتهي عملية التح ريك بدون انتظار يجب أن تؤخذ عينة الحليب باستخدام
المغرفة المعقمة والجافة ،ويمكن أخذ العينة وا رجاعها عدة م رات لضمان عدم دخول
أي شيء للعينة فيما إذا كانت المغرفة رطبة على سبيل المثال ،نضع الحليب في
عبـوة العينة مع ا الن تباه الشديد .نم أل العبوة إلى ثالثة أرباعها كحد أقصى بغية السماح
لعملية خلط وتحريك الحق عند االختبار.
نقوم بنفس العملية عدة مرات بما يتناسب وعدد العينات الالزمة للمخابر ،بعد أن يتم
نغسل الخالط والمغرفة بالماء وعند استخدامها مرة أخرى من المفضل أخذ العينة،
تعقيمها بإحدى الطرق المشار إليها خاصة إذا كانت العينة موجهة للتحليل الجرثومي.
ب -أخذ عينة من الحليب من عدة أوان :
81
محتويات االوعية المكونة لحصة ما يجب أن تقدم خصائص متشابهة بحي ث يمكن
اعتبارها تمثل حصة متجانسة من وجهة النظر الفيزيائية والكيميائية والجرثومية وبالتالي
نأخذ عينات متباينة بشكل طردي ثم نأخذ عينة تتناسب وحجم الحليب الموجود وجمع
العينات المأخوذة ضمن وعاء معقم بعد جعل الحليب متجانسًا يمكن أخذ عينة للمخبر
ووضعها في العبوات المخصصة للعينات.
إذا كان ت األدوات تسمح في أخذ 11مل من الحليب فمن الممكن عمل عينات بعد
تحريك االوعية المأخوذة بحيث يجمع 11مل من كل وعاء وتوضع الكمية المأخوذة
ضمن عبوة العينة.
ج -أخذ العينة من الحوض أوالخزان :
- 1األدوات :
خالط مكون من لوح دائري مثقب ،يثبت اللوح على نهاية ساق من المعدن وطول الساق
أعلى من عمق الحوض وتنتهي الساق عند الجهة األخرى بمقبض قوي يجب أن يكون
محرك ميكانيكي مناسب.
المحرك من المعدن غير قابل لألكسدة .ويمكن أيضًا استخدام ا
عند تحضير عينة للتحليل الجرثومي يعقم الخالط.
مغرفة خاصة. -
عبوات للعينات مناسبة. -
- 2التحريك
يجب أن يتم التحريك أفقيًا بشكل متردد ولكن الحركة الناتجة في الحليب يجب أال
تنتج حركة بسيطة لعمق الحوض فقط ،ويجب البحث في الحصول على حركة
دورانية بين السطح والعمق تؤدي إلى حدوث تجانس بين الطبقات العلوية والسفلية
للخزان.
نعيد هذه العملية عدة مرات ( حوالي 21مرة ) بغية خلق حركة دورانية للحليب
إذا كان الحوض صغير األبعاد يمكن التوصل بسهولة بهذه ضمن الحوض،
النتيجة.
82
أما إذا كان الحوض كبير األبعاد ف يجب متابعة التحريك خالل وقت أطول بحيث يتم
التأكد منه بالحركة الكاملة للكتلة الكلية للحليب.
أخذ العينات من خزان السيارة الناقلة المجهز بمحرك ميكانيكي:
- 1األدوات الالزمة :
عبوات من الزجاج سعتها 715مل تغلق بسدادة لها لولب مع حلقة من مادة -
مطاطية ومجهزة بسلسلة معدنية ذات طول مناسب تلف على رقبة العبوة،
يجب أن يغلف المجموع ضمن ورقة خاصة معقمة في جهاز التعقيم ( خاصة
عند أخذ عينة للتحليل الجرثومي ).
- 2التحريك :
ن حرك السائل قبل أخذ العينة خالل وقت مناسب يتراوح من 5إلى 40دقيقة وفقاً ألبعاد
الخزان وخصائص المحرك وكمية السائل الم راد تحريكه.
- 3أخذ العينة :
نخرج العبوة من غالفها وننزع السدادة ون غمرها في السائل مع االحتفاظ بالسدادة ثم
نسحبها .نتخلص من قسم من ها بحيث تكون الكمية المتبقية تسمح في إحكام السد (
خاصة التحليل الجرثومي ).
عند أخذ عينة للتحليل الكيميائي -الفيزيائي يجب توخي الحذر والدقة بحيث تكون
العينة متجانسة تمامًا إلعطاء صورة صحيحة عن نسبة الدسم والمادة الجافة في الحليب.
أخذ العينة من خزان س يارة غير مجهز بنظام تحريك وخلط :
من غير الممكن تطبيق عملية تحريك صحيحة ضمن الخ زانات الحاوية على عدة آالف
من الليترات من الحليب وغير المجهزة بخالطات آلية.
إذا أردنا الحصول على عينات مختلفة لمجموع الحليب في الخزان يجب أن نأخذ العينات
من نقاط مختلفة في الخزان ،لذلك يمكن تحريك الحليب في الخزان باستخدام الخالط
المستخدم في تحريك الحليب في الحوض لمدة معينة ومن ثم نأخذ عينة كما هو الحال
في أخذ العينة من الخزان المجهز بخالط آلي.
-5أخذ العينات من العبوات المغلفة الفردية :
83
يجب أن تكون العينة من عبوة واحدة أو عدة عبوات فردية مغلفة وفق المستوى المطلوب
والتأكد من سالمة العبوة مهما يكن النموذج
( عبوة زجاجية – أومادة بالستيكية ،عبوات مغلفة من الكرتون )
عينات المخبر : -
-وضع المعلومات ،يجب أن تقفل العينة وتجهز ببطاقة يكتب عليها البيانات الالزمة
ونشير بشكل خاص إلى طبيعة المادة وأصلها.
-أرقام وعدد الحصص.
-تاريخ وساعة ومكان أخذ العينة.
-االسم وعنوان وكفاءة الشخص الذي جمع العينة.
إذا كان ضروريًا تحديد كتلة العينة أوكتلة وحدة الحص ة التي تأتي منها العينة يجب أن
يشار إليها أيضًا.
-نقل وحفظ العينة
إذا كانت العينة موجهة للتحليل الجرثومي يجب عدم إضافة مواد حافظة ولذلك يجب
تبريد العينات بسرعة بغمرها بالماء والمحافظة عليها في درجة ح اررة منخفضة من 1إلى
2+م °بالنسبة للحلي ب المبستر الموجود ضمن عبوات مغلقة في األصل يمكن تركها
على درجة ح اررة أقل من 2 +م .°أما الحليب المعقم الموجود ضمن عبواته األصلية
فيمكن تركه على درجة الح اررة العادية.
يجب أن يبدأ االختبار الجرثومي بأسرع وقت ممكن بعد أخذ العينة وفي كافة الحاالت
هي أقل من 22ساعة بعد أخذ العينة.
أما إذا كانت العينة موجهة للتحليل الكيميائي – الفيزيائي ويمكن إضافة إحدى المواد
الحافظة بحيث ال يؤدي ذلك إلى إعطاء نتائج مغلوطة .ويجب أن يشار إلى طبيعة
ونوعية المادة الحافظة المستخدمة على البطاقة.
بعد أخذ العينة يجب ايصالها بسرعة إلى المخبر ويمكن أخذ بعض االحتياطات بعدم
تعرض العينات إلى أشعة الشمس المباشر
82
الحررة أقل من نقطة التجمد أو درجة ح اررة مرتفعة وفي كافة األحوال
ا وأن ال تكون درجة
يجب أن ال تكون أكثر من 2م °في حالة المنتجات اللبنية غير المضاف إليها المواد
الحافظة.
محضر العينة :
يجب أن يشير المحضر بدقة إلى :
-مكان وتاريخ وساعة أخذ العينة.
-اسم وكفاءة الشخص الذي جمع العينة.
-طريقة أخذ العينة.
-طبيعة وعدد الوحدات المكونة.
-عدد العينات المجمعة بالنسبة إلى الحصص.
-القصد من العينة وتوجيهها للتحليل الكيميائي – الفيزيائي أوللتحليل الجرثومي.
أخذ العينات وحفظها بغية تحديد ال محتوى من المادة الدسمة والمادة الجافة الكلية
والالدسمة :
معدل أخذ العينات :
يجب أن يتم أخذ العينات بمعدل ثالث مرات على األقل /شهرياً لتقدير المادة الدسمة
ومرتين بالشهر لتقدير محتوى الحليب من البروتينات.
يجب أن يتم أخذ العينة من حليب ا لحالبة المسائية والحليب الناتج عن الحالبة
الصباحية.
وفي معامل تصنيع األلبان واألجبان يجب أن تؤخذ العينة يوميًا من كل الموردين خوفًا
من الغش
مكان أخذ العينات :
بشكل عام يتم أخذ العينات في المعمل عند وصول السيا رات المجمعة للحليب وهذا ما
يتطلب القيام فرديا ف ي جلب الحليب من المزرعة حتى المعمل .واذا تعذر أخذ العينة في
المعمل فيتم ذلك في المزرعة.
تكوين العينة :
82
عند أخذ العينة يجب أن تكون ممثلة وشاملة لكل الحليب .يتم في المعمل أو في المزرعة
تكوين عينة واحدة ومتناسبة اعتبا اًر من الكميات المأخوذة من كل أوعية حليب
المساء والصباح.
حالة تجميع مضاعف للحليب يتم تطبيق عملية أخذ العينة الواحدة على حليب الصباح
واألخرى على حليب المساء ويتم تكوين عينة واحدة مكونة من خليط من أقسام متساوية
للعينات الممثلة لحالبة المساء ولحالبة الصباح.
بشكل عام يجب أن تتم المعايرة على كل عينة ويمكن أن تستخدم نفس العينة لتقدير
المحتوى من المادة الدسمة والمحتوى من المادة اآلزوتية على أن ال تؤثر المادة الحافظة
على نتيجة االختبار.
حفظ ونقل عينات الحليب :
عينة الحليب المأخوذة يجب أن توضع في العبوة المحتوية من قبل على مادة الحفظ
وتخلط بحيث يتم الحصول على إذابة كاملة لهذه المواد.
إن المواد المستخدمة لعملية الحفظ إ ما ثنائي كرومات البوتاسيوم بحيث يكون التركيز
النهائي .% 1.1
يستخدم كلور الزئبق HgC²على شكل محلول كحولي ملون محضر حسب الطريقة
التالية :
كلور الزئبق 221غ
الفوكسين القاعدي 611 Faschinebasiqueمغ ( مادة ملونة )
الكحول اإليثيلي يكمل إلى 1111مل.
حرك خالل مدة ساعتين في وجود خالط مغناطيسي.
يجب أن يوضع محلول كلور الزئبق في العبوات الموجهة ألخذ العينات بشكل إجباري
تستخدم العبوات بعد تبخر المحلول بحيث يشكل كلور الزئبق طبقة ملونة تلتصق إلى
جدران العبوات .إ ن التركيز النهائي لكلور الزئبق في الحليب يجب أن يكون % 1.17
بعد أخذ العينة يجب أن ترسل العينة مباشرة إلى المخبر ويجب أن تحفظ على درجة
ح اررة 2 +م .°
86
يجب أن تصل العينات إلى المخبر خالل 22ساعة على األكثر ويجب أن تكون
العبوات معبأة بشكل كامل .ويجب وضعها عند وصولها إلى المخبر على درجة ح اررة +
2م. °
87
االختبارات الحقلية لتشخيص التهاب الضرع
Field tests for diagnosis of mastitis
مقدمة :
يمكن أن تسبب مرض التهاب الضرع بشكل أساسي أنواع أجناس العنقوديات
،Streptococcusالعقديات Staphylococcusوبشكل ثانوي اإلشريكية القولونية
والوتديات ، proteus والمتقلبة ،Klebsiella ,والكلبسيلة E.coli
corynebacteriumولهذا المرض تأثير سيئ على إنتاج الحليب من جهة وامكانية
استخدامه في صناعة المنتوجات اللبنية من جهة أخرى.
ويمكن اللجوء إلى العديد من االختبا ارت لكشف التهاب الضرع.
-1فحص الضرع من الخارج :
يتصف الضرع السليم بنعوم ة ملمسه أما الضرع المصاب فيصبح أ شد صالبة وأقل
مرونة.
-2اختبار الحموضة :
من المعروف أن التهاب الضرع يؤدي إلى اضطراب إفراز مكونات الحليب فتزداد بعض
المكونات في الحليب مثل البروتينات الذائ بة وكلور الصوديوم بالمقابل تنخفض كمية
الكازئين والكالسيوم وهذه تؤثر بدورها على درجة الحموضة ولذلك يالحظ أن درجة
الحموضة في الحليب الناتج عن التهاب الضرع تنخفض إلى D° 12أوأقل وبالمقابل
يرتفع رقم PHإلى 7تقريبًا.
ويمكن اللجوء إلى الطريقة اللونية باستخدا م أزرق بروم تيمول الذي يؤدي إلى تشكل
ألوان وفقًا لرقم الحموضة.
اختبار أزرق الميثيلين :
-1نضع في أنبوب اختبار 2مل من الحليب المراد اختباره.
88
-2نض يف 1مل من محلول أزرق البروم تيمول ( .يحضر بإذابة 1غ من أزرق بروم
تيمول ضمن 221مل من الكحول اإليثيلي % 92ثم 1.2مل من ماءات الصوديوم
النظامية ويكمل الحجم إلى 721مل من الماء المقطر.
- 3نمزج جيدًا ونقارن اللون الناتج.
يتدرج اللون في الحليب الطبيعي من األخضر المصفر إلى األخضر المزرق أما الحليب
الحامضي فيصبح أكثر اصف ار ًار وفي الحليب القلوي يصبح الحليب مخض ُار مع ميالن
للزرقة.
- 3اختبار الكأس :
تؤخذ القط رات االولى من الحليب الم راد اختباره من كل ربع وتمرر على مرشح من القطن
أومصفاة معدنية .واذا احتفظت المرشحات بقطع رقيقة متخثرة أومواد متقيحة فذلك دليل
على وجود التهاب الضرع.
- 0اختبار الكلور :
يعتمد اختبار الكلور على التفاعل بين كرومات البوتاسيوم ونترات الفضة حيث يتشكل
اللون األحمر الناتج عن تشكل كرومات الفضة وعند إضافة الحليب تتحد أمالح الكلور
الموجودة مع كرومات الفضة مشكلة راسب كلور الفضة.
المواد واألدوات الالزمة :
1.32غ /ليتر نترات الفضة
% 11 كرومات البوتاسيوم
طريقة العمل :
-نضع في أنبوب االختبار 2مل نترات الفضة.
-نضيف إليها نقطتين من محلول كرومات البوتاسيوم فنالحظ تشكل اللون األحمر
-نضيف 1مل من الحليب الم راد اختباره ونالحظ استم رار أوزوال اللون وتحوله
نحواألصفر.
ليتر من الحليب يحتوي على كمية زائدة من الكلور أكثر من
إن زوال اللون يدل على أن ًا
1.2غ /ليتر أو أكثر من 2.3غ من كلور الصوديوم.
إذا تجاوز معدل الكلور 2.3غ في الليتر فذلك دليل على حدوث التهاب الضرع.
89
- 5اختبار المنفحة :
ينتج عن التهاب الضرع انخفاض الكازئين والكالسيوم وارتفاع الـ PHوهذا يؤثر بدوره
على تخثر الحليب بالمنفحة ،فيزداد الزمن الالزم للتخثر أوال يتخثر الحليب وبذلك يمكن
مقارنة الزمن الالزم للتخثر للحليب المتخثر مع نظيره الحليب الطبيعي بإضافة حجم من
المنفحة إلى حجم من الحليب على درجة ح اررة ثابتة ثم تقدير الزمن الالزم للتخثر.
- 6اختبار هوتس :
ضع في أنبوب اختبار 2مل من محلول مشعر بروم كريزول القرمزي ثم أضف إليها
9.2مل من الحليب المراد اختباره .امزج جيدًا وضع األنبوب في الحمام المائي في درجة
ح اررة 37م °خالل 22ساعة.
الحظ اللون المتشكل إذا كان رقم الحموضة 6.8يكون قرمزياً أما إذا كان 2.2فيصبح
مصفر.
ًا أخضر
تشكل خثرة موضعية مع Str. agalactiae يالحظ عند وجود العقدية األجلكتية
صفيحات رقيقة صف راء ناتجة عن نشاطها وعن تخمر سكر الالكتوز الموجود في
الحليب.
White side - 7اختبار
والخاليا الجسمية Leucocytes يعتمد هذا ا الختبار على وجود الكريات البيضاء
والتي تعمل على تشكل خثرات في الحليب عندما يضاف إليه ماءات الصوديوم.
طريقة العمل :
-1نضع 2نقاط من الحليب المراد اختباره ضمن بوتقه.
-2نضي ف إليها نقطة من ماءات الصوديوم النظامية.
-3نحرك لمدة 31ثانية.
ثم نالحظ تشكل حبيبات أو سائل لزج ،وذلك بتتطابق درجة اللزوجة مع درجة وجود
الخاليا الجسمية ،واذا لم يتشكل خثرات يكون الحليب طبيعياً.
(Calfornia Mastitis test) CMT – 4اختبار كاليفورنيا
يعتمد اختبار CMTعلى كشف DNAالموجود في خاليا كريات الدم البيضاء و
الخاليا الجسمية وذلك بتشكيل كتلة لزجة أو هالمية.
91
طريقة العمل :
-1يوضع 2مل من الحليب ضمن كأس.
( CMTمركب كيميائي يحتوي على جذر ألكيل أريل -2يضاف 2مل من محلول
سلفونات ).
-3يمزج الخليط ويترك لعدة ثوان .تحتوي المادة على مشعر للحموضة ( PHالتأين
الهيدروجيني ) وهو بروموكريزول األرجواني ويالحظ تشكل الهالم.
يبقى الخليط متجانسًا أقل من 311.111خلية جسمية تفاعل –
قطع صغيرة متخثرة ملتصقة بالجدران أقل من 211.111خلية جسمية تفاعل +
قطع متخثرة لزجة أقل من مليون خلية جسمية. تفاعل ++
ه ــالم والعدد كبير جدًا. تفاعل +++
-9كريات الدم البيضاء عديدة النوىPolynucliaires Leucocytes :
تعتمد هذه الطريقة على تحضير فيلم مجهري من الحليب الناتج عن التهاب الضرع
وتثبيت الغشاء بإحدى الصبغات كالفوكسين أوأزرق المثيلين ،ثم إجراء عد لكريات الدم
البيضاء عديدة النوى باستخدام العدسة الغاطسة للمجهر.
األدوات والمواد الالزمة :
-1كحول إيثيلي نقي.
-2كحول إيثيلي .% 61
-3صبغة أزرق الميثيلين.
– 2ازيلول .Xylol
- 2شريحة زجاجية لها مربعات معروفة المساحة (عداد نيوباور).
- 6ماصة شعرية 1.11مل.
طريقة العمل :
-1ضع 1.11مل من الحليب على الشريحة ووزعها بشكل منتظم.
-2جفف الشريحة بتركها في الحاضنة عدة دقائق على درجة ح اررة 37م.°
-3ثبت المحضر بغمر الشريحة في الكحول لمدة 2 - 3دقائق ثم أعد الشريحة
للحاضنة مرة أخرى واتركها 2دقائق.
91
-2اغمر الشريحة في الازيلول خمس دقائق واغسلها بالكحول % 61وجفف جيدًا.
-2اصبغ المحضر بأزرق المثيلين 2دقائق.
-6اغسل الصبغة بالكحول % 61ثم بالماء وجفف وافحص بالعدسة الغاطسة.
-7عد الكريات وخذ العدد المتوسط الموجود في الحقل ثم في 1مل /من الحليب.
يحتوي الحليب الطبيعي على أقل من 111.111خلية جسمية في 1مل من الحليب،
أما في الحاالت المرضية فيزيد هذا العدد عن .211.111
92
الفحص الفيزيائي للحليب
Physical test of milk
الصفات الفيزيائية للحليب مهمة الختيار الحليب الجيد في مصانع األجبان واأللبان
وتعطي فكرة ال بأس بها عن جودة الحليب وهي :
-1اللون Color :
الحليب سائل معتم وكامد ،ويبد و أبيض ،هذا المظهر المميز يعود بشكل أساسي إلى
بعثرة جسيمات فوسفوكازيئينات الكالسيوم لألشعة والى تشتيت حبيبات المادة الدسمة
ال في المظهر الكامد األبيض ألن أحجامها أكبر من طول
لألشعة لكنها تتدخل قلي ً
الموج ة المتوسطة لألشعة الشمسية.
يخدم الحليب في الغالب من وجهة نظر المقارنة مع األلوان األخرى ،فيقال مظهر لبني،
أوسائل حليبي ،يحتوي الحليب على اثنين من الصبغات.
-الكاروتين :مادة ملونة صفراء توجد تحت أشكال عديدة ،إن الحليب الغني
بالمادة الدسمة يكون أصفر عند ما يتغذى الحيوان بأعالف خض راء غنية
بالكاروتين وخاصة في فصل الربيع ولذلك تكون الزبدة المصنعة من هذا الحليب
صفراء بوضوح ،وغياب هذه المادة في حليب الفرز يعمل على اظهار اللون
األبيض المائل للزرقة.
-الريبوفالفين :مادة لها لون أصفر مخضر وال توجد إال في المصل.
إن المظهر الخاص للحليب يعود إلى الكازئين الموجود على شكل جسيمات ،وعندما
تنخفض نسبة الكازيئين يالحظ أن السائل يأخذ مظه ًار مائالً للون الرمادي ،وهذا ه و
حال حليب السرسوب أو الحليب الناتج عن التهاب الضرع.
يمكن أن نالحظ بعض األلوان في الحليب خاصة الوردي الناتج عن وجود الدم
والمكونات المتنوعة الناتجة عن التلوث الجرثومي مثل اللون األزرق الناتج عن الزوائف
Pseudomonaseواألصفر الناتج عن P. syaxanthaواألحمر الناتج عن السيراتية
الذابلة .Serratia margesens
93
وبشكل عام فإن لون الحليب أبيض بسبب المواد المتعلقة به ( البروتينات الغروية
وحبيبات الدهن ) وحليب األبقار مائل للصفرة بسبب وجود مادة الكاروتين الذائب في
الدهن وأبيض عند الجاموس والغنم ومائل للزرقة عند الماعز
-2الرائحة : Odor
يتميز الحليب برائحة مقبولة .وله قابلية كبيرة المتصاص الروائح من الوسط الداخلي أي
تأثير التغذية على ظهور بعض الروائح مثل البصل والثوم .والوسط الخارجي وبشكل
خاص الوسط الذي تتم فيه الحالبة .وعندما يتحمض الحليب تظهر عليه الرائحة
الحامضية ويعود امتصاص الرائحة من الوسط الخارجي لوجود المادة الدسمة وال سيما
األحماض الدهنية غير المشبعة.
-3الطعم :Taste
من المعروف أن طعم الحليب مقبول ومستساغ وقليل الحالوة ألنخفاض القدرة المحلية
لسكر الالكتوز ويعطي الحليب المتحمض الطعم الحامضي ويتميز حليب السرسوب
بارتفاع نسبة الملوحة فيه.
وقد يظهر الطعم المطبوخ عند معاملة الحليب بالمعاملة الح اررية المرتفعة .وقد تسبب
بعض األحياء المجهرية تغيرات في الطعم مثل خميرة Torula amaraالتي تجعل
الحليب ذا طعم مر ويمكن لبعض الج راثيم أن تنشر طعم الجوز أو اللفت أو الصابون.
وبعض أنواع العقديات المنتجة لحمض الالكتيك تكون مسؤولة عن طعم الكراميل.
-0اللزوجة :
هي قدرة السائل على مقاومة االختالط عند مزجه بسائل آخر وهي مقياس لالحتكاك بين
جزيئات السائل عند انسيابه وألن الحليب يحتوي على مواد صلبة ذائبة وغير ذائبة تكون
لزوجته أكبر من لزوجة الماء.
من المعروف أن لزوجة الحليب الطبيعي ضعيفة 2.2-1.1ولكن يالحظ تغيرات في
اللزوجة تعود إلى نشاط بعض الجراثيم وتشير بشكل خاص إلى وجود الكليبسيال
المكيرة
و ّ Alcaligenes والمقّلية Bacillus Klebsiellaوالعصيات
Micrococcusويمكن لبعض الجراثيم أن تنتج مواد لزجة ذات طبيعة سكرية ،تزداد
92
في الحليب عند ارتفاع حموضته ويالحظ تشكل بعض القطع المتخثرة الناتجة عن حدوث
التهاب الضرع.
-5كثافة الحليب Milk Density
إن كثافة الحليب إلى حد ما ليست قيمة ثابتة ،وذلك لتأثرها بعاملين متضادين هما :
-تركيز العناصر الذائبة – الصلبة الالدهنية والموجودة بشكل معلق بحيث تتأثر
الكثافة طرديًا مع تركيزها - .محتوى الحليب من المادة الدسمة.
-ولل مادة الدسمة كثافة أقل من الواحد.
تختلف الكثافة بشكل معكوس مع محتوى الحليب من المادة الدسمة وبالنتيجة إن حليب
الفرز أكثر كثافة من الحليب كامل الدسم.
إن كثافة الحليب كامل الدسم تتراوح بين 1.128إلى 1.132أما كثافة حليب الفرز فهي
.1.139 -1.136
إن إضافة الماء إلى الحليب كامل الدسم تنقص الكثافة ويمكن أن يتم سحب جزء من
المادة الدسمة واضافة الماء والحصول على نفس الكثافة الطبيعية لذلك ال يمكن للكثافة
وحدها أن تلغي غش الحليب
-6التوتر السطحي :
هي القوة التي تعمل على سطح السائل وتؤدي إلى جعل سطحه الخارجي محدبًا وبسبب
احتواء الحليب على مواد تقلل من التوتر السطحي كالليسيثين والدهن والبروتين فإن توتره
السطحي أقل من التوتر السطحي للماء.
-7الثوابت الفيزيائية للحليب :
-نقطة التجمد :يتجمد الحليب في درجة ح اررة أقل من الصفر وذلك ألن المواد
الذائبة تخفض من نقطة التجمد للمذيب النقي.
إن نقطة تجمد حليب األبقار هي 1.222-درجة مئوية وهذه القيمة مساوية
لقيمة نقطة تجمد مصل الدم وتعتبر نقطة التجمد من أكثر الخصائص الثابتة
ويتم قياسها لكشف الغش .علمًا أن إضافة الماء تؤدي إلى رفع نقطة التجمد
باتجاه الصفر.
92
-نقطة الغليان :يغلي الحلي ب على درجة ح اررة أعلى من 111درجة مئوية (
111.17 – 111.12درجة مئوية ) ولكن يحدث تحوالً في التوازن الملحي.
-الناقلية الكهربائية :من المعروف أن الماء يبرز مقاومة عند مرور التيار
الكهربائي وأن ناقليته ضعيفة.
إن وجود المنحالت الكهربائية المعروفة ( كلور ،فوسفات ،سترات ) بشكل
أساسي والشوارد الغروية بشكل ثانوي في الحليب يؤدي إلى انخفاض مقاومة
مرور التيار.
تختلف الناقلية الكهربائية مع درجة الح اررة ولذلك يتم قياسها غالباً على درجة
22درجة مئوية.
إن إضافة الماء تؤدي إلى انخفاض الناقلية .أما تحمض الحليب فيرفعها وكذلك
إن الحليب الناتج عن التهاب الضرع يظهر ناقلية كهربائية أعلى نظ ًار الرتفاع
محتوى الحليب من أمالح الكلور.
توجد عالقة إيجابية بين عدد الخاليا الجسمية الموجودة في الحليب والناقلية
وذلك فقط عندما يتجاوز عدد الخاليا الجسمية / 211111ملل.
إن إضافة المواد الحافظة والقلوية والمواد المعقمة ترفع أيضاً الناقلية الكهربائية.
تقاس الناقلية الكهربائية ب جهاز خاص يعين الناقلية الكهربائية بعد معايرته
بمحلول معياري.
96
الفحص الكيميائي للحليب
Chemical test of milk
97
ج -أحماض أمينية حامضية تحتوي على مجموعتي كاربوكسيل ومجموعة أمين
واحدة.
أهم بروتينات الحليب :
-1الكازئين :وهوالبروتين الرئيس في الحليب ألنه يشكل %82-78من بروتينات
الحليب يترسب هذا البروتين بالمنفحة والحموضة.
-2بروتينات الشرش :تنفصل هذه البروتينات مع مصل الحليب وأهمها
ال غلوبولينات المناعية وألبومين مصل دم األبقار وبيتا الكتوغلوبيولين.
-3سكر الحليب :في الحليب سكر ثنائي هوسكر الالكتوز C12H22O11الذي
يتكون من اتحاد جزيء من سكر الجلوكوز مع جزيء من سكر الجاالكتوز ،يتخمر
بسرعة بفعل العديد من األحياء الدقيقة وينتج عن ذلك حمض اللبن.
-0أمالح الحليب :يحتوي الحليب على أمالح معدنية متأينة يطلق عليها اسم العناصر
المعدنية لها أهمية غذائية كبيرة بالنسبة لإلنسان خاصة في سن ما قبل البلوغ والشيخوخة
وتقسم الشوارد المعدنية التي توجد في الحليب حسب تركيزها إلى مجموعتين :
-1شوارد توجد بتراكيز عالية نسبيًا وهي التي يزيد تركيزها على 11ملغ /ليتر،
وتشمل شوارد موجبة هي الكالسيوم والصوديوم والبوتاسيوم والمغنزيوم وشوارد سالبة تضم
الكلور والفوسفات والكبريتات والبيكربونات والسترات
-2شوارد توجد بتركيز منخفض أو على شكل ثماالت وتشمل جميع الشوارد التي يقل
تركيزها عن 11ملغ /ليتر وال يتجاوز تركيزها عادة 1ملغ /ليتر وهي المنغنيز
والنحاس والمولبيدينيوم والسيليكون والباريوم
-5أنزيمات الحليب :هي مجموعة من المركبات العضوية ذات الطبيعة البروتينية
تتواجد بكميات ضئيلة في الحليب وهي مركبات معقدة تعمل كعوامل مساعدة حيوية في
التفاعالت التي تحدث ضمن الخاليا الحية .واألن زيمات المتواجدة في الحليب إما أن تنتج
من الخاليا المفرزة للحليب في الضرع أوتكون ناتجة عن إفراز األحياء الدقيقة المتواجدة
في الحليب أومن المصدرين معًا .وأهم أنزيمات الحليب هي :
أ -أنزيم الليبيز : Lipaseويقوم بتحليل الدهون إلى غليسيرين وأحماض دهنية.
98
: Proteaseتقوم بتحليل السالسل الببتيدية في ب -األنزيمات المحللة للبروتين
البروتينات.
ج -الالكتيز : Lactaseيقوم بتحليل سكر الالكتوز إلى غلوكوز وغاالكتوز.
د -البيروكسيداز : Peroxidaseيقوم بفصل االوكسيجين على حالة ذرية من بعض
المركبات ونقلها إلى مركبات أخرى ويمكن االستفادة منه للبرهان على حدوث تسخين
للحليب حتى الدرجة 82مئوية لمدة 11ثوان.
: Alkaline phosphataseيحلل الروابط اإلستيرية و -أنزيمات الفوسفاتيز القلوية
بين حمض الفوسفوريك والكحوالت المرتبطة به ويستفاد منه في التأكد من إتمام بسترة
الحليب على الدرجة 72-71مئوية لمدة 22- 21ثانية.
-6فيتامينات الحليب :الفيتامينات مركبات عضوية يحتاجها الجسم بكميات بسيطة،
لذلك يجب تواجدها باستمرار في غذاء الكائن الحي ليتمكن من النموبشكل طبيعي ويحوي
الحليب على الفيتامينات التالية :
-1الفيتامينات الذوابة في الماء :حمض األ سكوربيك Vit. Cوالتيامين Vit. B1
والريبوفالفين Vit. B12والبيريدوكسين Vit. B6والكوبال أمين Vit. B12
-2الفيتامينات الذوابة في الدهون وتشمل Vit. A. E. D3. K.
مواد الحليب األخرى :يحوي الحليب على آثار زهيدة من مواد أخرى كالعناصر المشعة
وآثار من بعض المبيدات الحشرية والعشبية ،آثار األدوية البيطرية والمستخدمة في
المعالجة ،وهذه المواد سامة أوضارة بالصحة أوبتصنيع الحليب.
99
الفحص الجرثومي للحليب
Bacterial test of milk
مقدمة :
حليب الحيوانات السليمة يبقى معقمًا خالل إف ارزه من خاليا الضرع وتجمعه في
الحويصالت اللبنية .ولكن يبدأ تل وثه باألحياء الدقيقة أثناء مسيره في األقنية اللبنية ،وعند
وصوله إلى مجمع الضرع ومجمع الحلمة .لذلك يحتوي الحليب لحظة خروجه من الحلمة
على عدد من األحياء الدقيقة مهما بذل في إنتاجه من عناية ،ألن أنواعًا من الجراثيم
التابعة ألجناس المكيرات ) (Micrococcusوالعقديات ) (Streptococcusوالوتديات
تستوطن ضرع الحيوانات السليمة وتفرز باستمرار مع )،(Corynebacterium
الحليب .وتزداد الج راثيم الموجودة في الحليب لحظة خروجه من الضرع عددًا وتنوعاً إذا
كان ضرع الحيوان مصاباً بااللتهاب .يصل إلى الحليب أعداد متنوعة من األحياء الدقيقة
أثناء الحالبة وبعدها ،ومن الجوالمحيط واألدوات واألشخاص وغيرها ،ويتوقف ذلك على
مدى العناية المبذولة ،ونظافة اإلنتاج والنقل والتداول .وألن الحليب بيئة مثالية لتكاثر
األحياء الدقيقة ،فإ ن الكثير من أنواعها يبدأ بالتكاثر فور وصوله إلى الحليب ،إذا توفرت
له الح اررة المناسبة .لهذا فإن لدرجة الح اررة التي يحفظ عليها الحليب بعد الحالبة ،أثر
كبير على عدد األحياء الدقيقة الموجودة فيه ،وعلى نسبة أعدادها.
تعتبر الجراثيم أكثر األحياء الدقيقة تلويثًا للحليب ،كما أنها أخطرها صحة على اإلنسان
وتصنيع الحليب .ويتلوث الحليب أيضاً بأنواع من الفطور Moldsوالخمائر Yaests
والريكتسيا Rickettsiaوالمفطورات Mycoplastma
111
-ترجع أهمية األحياء الدقيقة في الحليب ومنتجاته بالنسبة لإلنسان إلى مايلي :
-2إذا أتيحت الفرصة ،فإن كثي اًر من األحياء الدقيقة غير الممرضة ينشط في الحليب،
مما يؤدي إلى خفض جودته وصالحيته ويرفع حموضته أويغير طعمه ونكهته،
ال.
للتصنيع ،وقد يؤدي إلى إفساده كام ً
-3اليمكن تصنيع كثير من المنتجات اللبنية إال باستخدام أنواع معينة من األحياء
الدقيقة .لذلك فإن معرفة هذه األحياء وخصائصها والظروف المن اسبة لنموها وتكاثرها
ذات أهمية كبرى لضمان نجاح عملية وقيامها بعملها إلحداث التغيرات المطلوبة،
التصنيع.
-2نوع وعمل األحياء الدقيقة الموجودة في الحليب ،مرآة للعناية المبذولة في إنتاجه،
ولدرجات ح اررة حفظ الحليب بعد الحالبة وبالتالي لمستوى الوعي ونظافة التداول،
الصحي بين منتجي الحليب ومتداوليه.
ويجب أن نشير إلى أن موضوع علم األحياء المجهرية المتعلق بالحليب من المواضيع
الواسعة الشاملة ،التي تضم نواحي مختلفة.
الجراثيم أكثر أنواع األحياء الدقيقة تلويثاً للحليب وتواجداً فيه ،وأشدها ضر اًر له .هذا
ويتواجد منها في الحليب دائمًا أنواع تستطيع النموفيه ومهاجمة مكوناته ،في أية درجة
ح اررة ما بين الصفر و 22درجة مئوية.
111
ال وحجمًا وفي
وتضم جراثيم الحليب المهمة اقتصاديًا ،أنواعًا وأجناسًا عديدة تختلف شك ً
طريقة انتظامها .كما تختلف في احتياجاتها الح اررية في حاجتها لالوكسجين ،وفي
نوعية المركبات التي تهاجمها في الحليب ،أو التي تنتجها أثناء نشاطها وفي طريقة
تفاعلها مع صبغة غرام .لذلك يمكن تقسيم الجراثيم أن يتم وفق عدد كبير من األسس،
Bergeyعام 1986وهي الصفات إال أننا سنتبع األسس التي اعتمدها برجي
Morphologyواالحتياجات من االوكسجين وتفاعلها مع صبغة غرام الشكليائية
.Gram Reaction
إن أكثر أنواع الجراثيم المتواجدة في الحليب أهمية تصنف حسب المجموعات التالية:
اوالً :الجراثيم سالبة الغرام الالهوائية المخيرة :تخمر ج راثيم هذه المجموعة السكريات
لذلك وتعطي أحماضًا وغازات ،ومعظمها يسكن القناة الهضمية لإلنسان والحيوان،
وجودها في األغذية دليل مؤكد على تلوثها بمياه المجاري ،و هذا يدل على أنها ملوثة
حتماً باألحياء المجهرية الممرضة .وأهم أجناس هذه المجموعة :
112
ت -جنس الكلبسيلة ) : (Klebsiellaتسبب بعض أنواعه التهاب الضرع ،ويصل
K. أهم أنواعه جرثوم الكلبسيال الرئوية إلى الحليب من مواد الفرشة،
.pneumonia
ث -األجناس الثالثة السابقة يطلق عليها اسم مجموعة القولون ،Colon Group
ألنها تتواجد مع بعضها في القناة الهضمية للحيوانات ال راقية.
ج -جنس السلمونيلة ) : (Salmonellaأهم أنواعه جرثوم السلمونيلة التيفية S.
ويشكل الحليب ومنتجاته أحد typhiالذي يسبب الحمى التيفية لإلنسان،
مصادر العدوى به.
ح -جنس اليرسينية ) : (Yersiniaعرف سابقًا بالبستوريلة )،)Pasturella
وبعض أنواعه ممرضة لإلنسان.
) : (Hafniaوأنواعه تسبب أمراضًا لإلنسان مثل جرثوم خ -جنس الهافينية
الهافينية النخروبية ).(Hafnia alvei
د -جنس الشيغيلة ) :(Shigellaبعض أنواعه يسبب إسهاالت شديدة لإلنسان مثل
جرثوم الشيغلة الشيغائية Shigella shigaاوالزحارية من النمط االول.
ثانيا :مجموعة الجراثيم موجبة الغرام :تضم هذه المجموعة أنواعًا هوائية أو الهوائية
مخيرة ،ذات أهمية بالغة في صناعات األلبان ،ألنها تستخدم كبادئات لصناعة كثير من
المنتجات اللبنية ،إال أنها تضم أيضًا أنواعًا تسبب التهاب الضرع وممرضة لإلنسان ،أهم
أجناسها :
أـ جنس المكيرات ( :(Micrococcusوهو واسع االنتشار وبعض أنواعه يفسد الحليب
في ظروف التبريد.
ب ـ جنس العنقوديات ) :(Staphylococcusخالياه تتجمع بشكل غير منتظم ،يشبه
في الشكل جنس المكيرات ) ،(Micrococcusأهم أنواعه جرثوم العنقودية الذهبية
S.aureusالذي يحلل الدم على منبت اآلجار المدمم ويسبب اضطرابات شديدة في
) (S.epidermidisلكنه يسبب وجرثوم العنقودية البشروية الجهاز الهضمي،
اضطرابات أقل حدة.
113
العقديات ) :(Streptococcusوهو كثير التواجد في الحليب وأهم أنواعه
ّ ت ـ جنس
العقدية المقيحة ) ،(S.pyogenesالذي يسبب الحمى القرمزية fever Scarlet
وجرثوم العقدية اللعابية )) (S.salvariusكانت تدعى سابقًا العقدية أليفة لإلنسان،
الح اررة ،)S.thermophilusيستخدم هذا الجرثوم كبادئ في صناعة اللبن وتسوية
( (S.agalactiaeالذي يسبب التهاب وجرثوم العقدية األجلكتية بعض األجبان،
الضرع.
ث ـ جنس المكورة اللبنية ) :(Lactococcusوأهم أنواعه جرثوم ( L.lactisسابقًا
L.lactis ،)S.lactisويستخدم كبادئ لصناعة وانضاج بعض األجبان ،وجرثوم
subsp.diacetyiactisذواألهمية في صناعة الزبدة ألنه ينتج مادة الداي أسيتيل ،ذات
النكهة المرغوبة.
ج ـ جنس النستق :Leuconostocوبعض أنواعه تسبب لزوجة الحليب وبعضها اآلخر
تستخدم كبادئات ألنتاج األلبان المتخمرة والزبدة.
ثالثاً :الجراثيم العصوية المكورة المكونة لألبواغ :يتبع هذه المجموعة أنواع تكون أبواغاً
Sporesمقاومة جدًا للح اررة ،فهي التموت بالبسترة حتى في طريقة الح اررة فوق العالية
تعود للنشاط (Ultra Heat Temperature) UHTقد يتبقى البعض منها حياً،
عندما تتوفر لها الظروف المناسبة وتفسد الحليب المعقم بهذه الطريقة ،أهم أجناسها:
أ -جنس العصويات :Bacillusهوائي مجبر ،تعيش أنواعه على درجات ما بين
ـ 2درجة مئوية إلى 22درجة مئوية أو أكثر وتكون أبواغا شديدة المقاومة للح اررة .
أهم أنواعه جرثوم العصوية الشمعية ) (B.cereusالذي يسبب تسممات واسهاالت
كثير من العيوب لمنتجات األلبان ،جرثوم
اً ويحلل البروتين فيسبب لإلنسان،
الذي يحلل العصوية الشحمية أليفة الح اررة )،(B.stearothermophilus
البروتين ،ويشكل عيوبًا في قوام وطعم األجبان ،وينمو في درجات ما بين -22
° 72م وجرثوم العصوية الح اززية ) (B. Lichenoformisالذي تقاوم أبواغه
الح اررة بشدة ،مما يفس د الحليب المعقم بالح اررة فوق العالية Ultra heat
) temperature (UHTوالحليب المكثف.
112
) : (Clostridiumال هوائي مجبر ،يعيش في التربة ب-جنس المطثية
والروث والقناة الهضمية لإلنسان والحيوان .أهم أنواعه جرثوم المطثية الوشيقية
الذ ي يقاوم الح اررة ويسبب التسمم الوشيقي النقانقي )،)Cl.botulinum
لإلنسان ،وجرثوم المطثية الحاطمة ) (Cl. Perifringsالذي يسبب تسممات
شديدة لإلنسان.
رابعاً :الجراثيم العصوية غير المكونة لألبواغ موجبة الغرام وأهم أجناسها:
المستوحدة الليستيرية أنواعه وأهم ( :(Listeria الليستيرية أ -جنس
ويلوث الذي يسبب التهاب الضرع ويمرض اإلنسان، ،L.monocytogenes
الحليب عن طريق مياه المجاري.
ب-جنس الملبنات ) :(Lactobacillusوهومن أكثر أجناس الجراثيم أهمية في
L.delbrueckii subsp صناعة األلبان ،أهم أنواعه جرثوم
lactisو L.d.subsp bulgaricusو ،L.helveticusوهي جراثيم تحب الح اررة
وتستخدم كبادئات لصناعة اللبن ،وانضاج بعض األجبان
اإليطالية والسويسرية.
خامساً :الجراثيم سالبة الغرام الهوائية المجبرة المكورة والعصوية:
أهم األجناس التابعة لهذه المجموعة:
أ -جنس المقلية ): (Alcaligenesكثير من أنواعه محب ة للح اررة المنخفضة وأهمها
جرثوم المقلية اللزجة اللبنية ) (A.viscolactisالذي يسبب لزوجة الحليب،
وهومن النوع العصوي.
ب -جنس الـ ): (Alteromonasأهم أنواعه جرثوم التفسخ )(A.putrifaciens
عصوي الشكل يفسد الحليب وكثير من منتجاته ،ويكون بقع ملونة على سطح
الزبدة.
ت -الجنس الصيفرية ): (Flavobacteriumعصوي الشكل،أنواعه تحب الح اررة
المنخفضة وتكون صبغات لونها ما بين البرتقالي واألصفر وتحلل الكازئين
فتفسد الحليب ومنتجاته في ظروف التبريد.
112
ث -جنس البروسيال ) :(Brucellaعصوي الشكل ،خاليا أنواعه تنتج أنزيمي
الكاتاليز والبيروكسيديز وأهم أنواعه جرثوم البروسيلة المجهضة )،(B.abortus
يسبب اإلجهاض المعدي لألبقار والحمى المالطية لإلنسان ،وجرثوم البروسيلة
الخنزيرية ( (B.suisالذي يصيب الخنازير وجرثوم البروسيلة المالطية
) (B.melitensisالذي يسبب اإلجهاض المعدي عند الماعز إال أن األنواع
الثالثة تقتل بالبسترة الصحيحة.
أنواعه تنتج أنزيمات محللة ج -جنس الزائفة ): (pseudomonasعصوي،
مما يسبب مختلف العيوب للبروتينات proteasesوأخرى محللة للدهون،
للحليب ومنتجاته ،أهمها :جرثوم الزائفة المتألقة ) (p.flourescensوجرثوم
( (p.fragiاللذان يفسدان الحليب ومنتجاته تحت ظروف التبريد.
ح -جنس المستصفرة ) : (Xanthomonasعصوي ،تنتج أنواعه صبغات صفراء.
خ -جنس الراكدة ) :(Acinetobacterعصوي ،تسبب أنواعه زيادة لزوجة الحليب
سادساً :الجراثيم موجبة الغرام غير المكونة لألبواغ :أهم األجناس التي تتبع هذه
المجموعة:
أ -جنس البربيونية ) :(propionibacteriumال هوائي ،ينتج عن تخمير
الالكتوز حمض البروبيونيك وحمض الخليك و Co2والبرولين ،proline
وهوالمسؤول عن الثقوب الملساء والطعم والنكهة الخاصة بجبن االمنتال
السويسرية .Emental Swiss cheese
ب -جنس ) (Brevibacteriumوأهم أنواعه ) (B. linensالذي يستخدم في
إنضاج جبن Limbarger
ت -جنس ) (Aureobacterوأهم أنواعه ) (A. liquifaciensالذي يكون
صبغة صفراء فاتحة ويساهم في إ نضاج بعض أنواع الجبن.
ث -جنس الفصالء ) (Arthrobacterتتشابه أنواعه مع جنس الوتدية
)(Corynebacterium
ج -جنس الوتدية ) (Corynbacteriumبعض من أنواعه ممرض لإلنسان،
وأهمها جرثوم الوتدية البقرية ) (C. bovisالذي يسبب التهاب الضرع
116
وجرثوم الوتدية الكلوية ) (C. renalالذي يسبب التهاب المجاري البولية
التناسلية عند األبقار.
) : (Actinomycetesوأهم أنواعه جرثوم الشعيات ح -جنس الشعيات
المقيحة ) (A. pyogenesالذي يسبب التهاب الضرع.
) : (Mycobacteriumوأهم أنواعه المتفطرة السلية خ -جنس المتفطرات
) (M. tubercolosisالذي يسبب داء السل عند اإلنسان والمتفطرة البقرية
) (M. bovisالذي يسبب داء السل البقري والسل عند بعض الحيوانات
األخرى وكذلك اإلنسان.
سابعاً :الجراثيم الحلزونية سالبة الغرام ،المتحركة الهوائية ،أوالتي تحتاج لتركيز
: O2أهم جرثوم هذه المجموعة ه و جرثوم العطيفة الصائمية ضئيل من الـ
(Campylobacter) jejuniالذي يبقى حيًا في الحليب الخام أو غير المبستر جيدًا،
ويسبب له مشاكل مرضية.
ثامناً :الجراثيم الحلزونية :أهم أجناسها جنس البريمية ) (Leptospiraذو المظهر
العصوي الطويل الدقيق المرن ،وأهم أنواعه البيمية االستفهامية ) (L.interrogansالذي
يصيب الكليتين ويطرح مع البول ل يصل إلى الحليب عن طريق األيدي ومياه الغسيل
الملوثة وغيرها.
-3الفطور : Moldsتسبب كثي اًر من المشاكل للحليب ومنتجاته وتفسدها إال أن بعضها
يستخدم في تسوية بعض األجبان ،وانتاج بعض األنزيمات والمضادات الحيوية .وأهم
األنواع ذات األهمية ومنتجاته هي :
أ -جنس الرشاشية ) (Aspergillusوينتج األفالتوكسينات ومن أنواعه الرشاشية
(Aspergillus (Aspergillusوالرشاشية الزاحفة السوداء )niger
) repensويسببان ما يسمى باألزرار على الحليب المكثف المحلى.
ب -جنس المكنسية ) (Penicilliumومن أنواعه )(Penicillium camemberti
(Penicillium وكذلك التي تساهم في إنتاج جبن الكاممبرت،
والجورجونزوال االروكفورت جبن إنضاج في تساهم )roqueforti
117
،Gorgonzolaوكذلك ) (Penicillium caseiتساهم في إنضاج بعض
األجبان السويسرية.
ت -العفنة Mucor mucedoتسبب تبقع الزبدة باأللوان الغامقة والرائحة الزنخة.
ث -المبيضة Geotricum candidumتسبب فطر الحليب األبيض وينموعلى
سطح القشدة .ويالحظ أن كل أنواع الفطريات تقريياً يقضى عليها بالبسترة.
-2الخمائر :Yeastsوأهم أنواعها :
أ -الفطرية السكرية الجعوية ) (Saccharomyces cervisiaeوقد عزلت من
بعض األجبان واأللبان المتخمرة.
(Candidaتحلل الدهون وتسبب ب -المبيضة الحالة للدهون )lipolytica
تزنخها إال أنها تشترك في إنضاج جبن الروكفورد .ه ذا ويقضى على جميع أنواع
الخمائر بالبسترة الصحيحة.
-2األحياء الدقيقة األخرى:
-1الحمات : Virusesوأهمها عاثيات الج راثيم المعروفة بـ Bacteriophageالتي
والحمة المسببة لجدري األبقار Cow poxوحمة التهاب تتطفل على البادئات،
سنجابية النخاع المسببة للشلل عند األطفال ) ،(Poliomyelitis virusيقضى عليها
بالبسترة الصحيحة عادة.
-2الريكتسية ): (Rickettsiaوأهمها R.burnetiiالذي يتطفل إجباريا .ينتقل إلى
الماشية عن طريق القراد وم ن ثم إلى اإلنسان عن طريق الحليب مسبباً حمى .Q
-3المفطورة : Mycoplasmaتشبه الج راثيم إال أنها ال تحاط بجدار خلوي وانما تحاط
بغشاء ،وهي تسبب التهاب الضرع عند األبقار.
-6مضادات األحياء المجهرية التي توجد في الحليب :
يحتوي الحليب على مركبات مضادة لألحياء المجهرية ،سميت عام 1931الالكتينات،
ثم اتضح بعد ذلك أن الحليب يحتوي على:
أ -الالكتوبيروكسيداز Lactoperoxidaseالذي ينشط التفاعالت التي تؤدي إلى
ربط مجموعات SHلبعض األنزيمات المهمة ،مما يؤدي إلى تخريب آلية
االمتصاص في الخلية.
118
ب -الالكتوفرين : Lactoferrinالذي يربط الحديد ويمنع الجراثيم المحتاجة إليه
من استخدامه.
ت -الليزوزيم : Lysozymeالذي يقتل بعض الجراثيم اإليجابية الغرام عبر تحليل
جدارها الخلوي.
ث -كزانتين أوكسيداز : Xanthine Oxidaseالذي يشجع تكوين الماء
االوكسجيني H2O2المضاد للج راثيم.
119
غش الحليب
Milk deception
إضافة الماء :
يشكل إضافة الماء للحليب نوع من الغش ولذلك تنخفض قيمته الغذائية ،ويزيد تلوثه
خاصة إذا كان الماء المضاف للحليب ملوثًا ،إن إضافة الماء إلى الحليب وسيلة غش
تحاسب عليها القوانين المرعية.
إثبات إضافة الماء يتم بمقارنة قيم العناصر المتنوعة في الحليب المختبر كالكثافة
النوعية ونسبة الدسم والمادة الصلبة الالدسمة مع القيم الموجودة في الحليب الطبيعي،
ويمكن اعتبار الحليب مغشوشًا إذا كانت قيم هذه المكونات أقل من مثيالتها في الحليب
الطبيعي ،مع األخذ بعين االعتبار نوع الحيوان والتغذية والعمر وفترة الحالبة وموسم
الحالبة...
فرز الحليب :
عملية فرز الحليب نوع من أنواع الغش وتعتمد على نزع الدسم منه كليًا أو جزئياً،
ويمكن ذلك إما بعملية الفرز (بالف ارزات) أو بقش الدسم من السطح العلوي للحليب
المتروك راكدًا لفترة من الزمن ( حليب مقشوش ) أوبإضافة حليب الفرز الكامل إلى
الحليب الطبيعي.
نتأكد من غش الحليب بعملية الفرز وذلك بمقارنة نتائج تحليل الحليب المختبر مع
الحليب الطبيعي.
وتبدوالتبدالت التالية عند غش الحليب بسحب الدسم منه وهي :
تزداد الكثافة -
ينخفض محتوى الحليب من المادة الدسمة -
ال يتغير محتوى الحليب من الم ادة الجافة الالدسمة. -
الغش بإضافة الماء وفرز الحليب :
قد يحدث غش مضاعف للحليب وذلك بإضافة الماء وفرز الحليب في آن معًا وهنا
تحدث تغيرات مختلفة في الحليب أهمها :
111
تبقى الكثافة طبيعية وقد تنخفض أو ترتفع لذلك ال تعتمد الكثافة وحدها كاختبار -
هام في كشف غش الحليب
انخفاض نسبة الدسم -
انخفاض المادة الجافة الالدسمة -
انخفاض المادة الجافة الكلية -
الغش بإضافة النشاء :
يضاف النشاء إلى الحليب لزيادة اللزوجة ورفع الكثافة وتحسين مردود التصنيع في
الحليب المعد للصناعة وكذلك إلخفاء الغش بإضافة الماء نظ ًار لربط جزيئات الماء
بالنشاء.
الغش بإضافة حليب قليل الثمن إلى الحليب األغلى ثمناً :
وذلك بإضافة حليب األبقار إلى حليب األغنام والى حليب الجاموس أواضافة حليب
الماعز إلى حليب األغنام ،ويعتبر الكشف عن هذا النوع من الغش ضروري في مصانع
األجبان واأللبان من أجل منع الغش االقتصادي ألن الفارق بين سعر حليب األغنام
وحليب األبقار كبير جدًا وقد يصل إلى الضعف.
111
الجزءالعملي
112
الخطوات والشروط الواجب توفرها في العينة حتى نضمن نتائج مخبرية صحيحة ؟
كل عينة بول يراد تحليلها تمر بالم راحل التالية أو على حسب طلب الطبيب بتحديد نوع
االختبار
Samples Collection جمع العينة وارسالها للمختبر:
113
الفحص الفيزيائي للبول :
112
جدول ( ) 5كمية البول عند مختلف الحيوانات /يوم
الكمية اليومية /ليتر النوع
11-2 الخيول
-2لون البول
طريقة تحديد لون عينة البول :
توضع عينة البول المرسلة إلى المختبر في أنبوب اختبار زجاجي شفاف وبالنظر إلى
أنبوب االخت بار بالعين المجردة يسجل اللون المشاهد وكما ذكر في الجزء النظري.
-3الشفافية :
تحدد شفافية عينة البول أيضًا بالعين المجردة وكما ذكر آ نفاً ويسجل (شفافه أو عكرة أو
غمامية ) .
-0الكثافة النوعية :
الطريقة :
من عينة البول المرسلة إلى المختبر يمأل أنبوب اختبار ذو قطر واسع من عينة بالبول
ثم يوضع مقياس االنكسار البولي Urinemterلقياس الكثافة النوعية ضمن األنبوب ،
112
وتق أر النتيجة بتسجيل الرقم المحاذ ي للحافة العليا لسطح عينة البول على مقياس الكثافة
المدرج وهي عادة تتراوح ما بين 1.121 -1.112عند مختلف الحيوانات .
الجدول ()6
الجدول ( ) 6معدل الكثافة النوعية عند مختلف الحيوانات
القراءة النوع
116
الفحص الكيميائي للبول
chemical examination of urine
-1تفاعل ال PH
تختلف القيم الطبيعية لدرجة أيونات الهيدروجين حسب نوع الغذاء الذي يتناولة الحيوان
وكما هو مبين بالجدول () 7
جدول ( ) 7يوضح درجة ال PHعند مختلف الحيوانات
نوع التفاعل درجة الحيوان
8
قلوي الخيول
الشكل ()74
117
والستخدام هذا الجهاز يجب أوال التأكد من سالمته وذلك باجراء عملية معايرة لدرجة
الحموضة
-أدخل طرف مجموعة األلكترود في مكبس الكهرباء ثم شغل الجهاز
-اغمس األلكترود في ماء مقطر لبضع ثواني ثم انقله إلى محلول منظم ()Ph=7
-انقل األلكترود من المحلول وغمسة في ماء مقطر لبضع ثوان ثم اغمسة في محلول
منظم ( ) Ph=4وهكذا نحصل على قراءة صحيحة ، Ph=4ثم بعد ذلك يوضع
األلكترود في المحلول المراد قياس درجة حموضتة .
او استخدام أحد الشرائط التالية
-1ورق النترازين
-2شرائط ورق الهايدرون PH
-3الشرائط متعددة االختبارات
ويتم بغمر أحد هذه الشرائط في العينة الموجودة في أنبوب االختبار وتبقى دقيقة ثم ترفع
وتنشف بالهواء وتق أر النتيجة من على العبوة مباشرة بمقارنة تغير اللون
-2البروتين Protein
يمكن االستدالل على وجود البروتين بالبول بتطبيق إحدى الطرق اآلتية التي تعتمد على
ترسيب مادة البروتين إما بالح اررة أو الحمض ،ولكن يجب أوال اتباع الشروط التالية
-1تفاعل عينة البول المراد اختبارها للبروتين يجب أ ن يكون حامضيًا
-2عينة البول يجب ان تكون شفافة ولهذا اذا كانت عكرة ترشح بورق الترشيح
-3عينة بول الحصان تترك فترة من الزمن حتى يترسب الميوسين واالمالح ثم يؤخذ
الطافي ويوضع في أنبوب اختبار وتثفل ويطبق االختبار على الطافي .
طرق الكشف عن البروتين :
-122الكشف عن البروتين بالح اررة :
يمأل أنبوب اختبار من عينة البول حتى ثلثيه ويمسك بواسطة ملقط خشبي ويعرض من
أعاله للح اررة حتى ظهور الغليان وبعدها تق أر النتيجة.
النتيجة :
118
إما امالح الفوسفات أو بروتين ظهور عكارة واضحة دليل وجود
وللتفريق بنهما يضاف قطرتان من حمض الخل العشر نظامي( )N/10بقاء العكارة دليل
وجود البروتين
-21طريقة بانغ Bang method :
وتتم بتطبيق الخطوات التالية :
يوضع في أنبوب اختبار1سم من عينة البول
يضاف إليه 1سم من كاشف مركب من ( 1ليتر ماء
2 ،26سم 3حمض خل 118غ خالت صوديوم ) مقطر
يسخن األنبوب على مصدر حراري لمدة 31دقيقة
راسب بقاع األنبوب دليل وجود البروتين، النتيجة :تشكل سحب بيضاء
طريقة لندنير Lindner metheod :
وهي طريقة حساسة جداً للكشف عن البروتين وتتم
-1بوضع 11سم من الماء المقطر في أنبوب اختبار
-2يسخن األنبوب بوضعة أ مام اللهب
-3نضيف نقطة أو نقطتين من عينة البول في األنبوب ثم نضعة أمام مصدر ضوئي
شديد
النتيجة :ظهور سحب أو ندف بيضاء دليل وجود البروتين
119
-2اختبار حمض السلفوساليسيليك Sulfosalicylic acid test
المبدأ :
ترسيب بروتين البول بحمض السلفوساليسيليك .
االختبار :تحضير محلول من % 2من حمض السلفوساليسيليك ويبقى الكاشف ثابتا في
الظروف الطبيعية ،ضع كميتين متماثلتين من الحمض والبول في األنبوب ألن العكارة
الظاه رة على كمية البروتين في البول
-3شرائط الكاشف ألباستكس Albustix reagent strip
المبدأ :
تترابروموفينول ،سترات ،شرائط السللوز .
االختبار :
اغمس الشريط في البول ،في الحالة اإليجابية يتغير لون الشريط من األصفر إلى
األخضر ثم األزرق حسب كمية البروتين ،ويقارن البول مع األلوان الموجودة على علبة
الشرائط
السكر glucose :
يمكن التعرف على وجود السكر بالبول بتطبيق إحدى الطرق اآلتية .
ملحوظة :وجود السكر بالبول مؤشر غير دقيق على وجود الزرب السكري،
121
الطريقة :
يوضع 1سم من فهلنغ 1وفهلنغ 2في أنبوب اختبار
نضيف كمية متساوية من عينة البول إلى األنبوب
يسخن المزيج حتى درجة الغليان
النتيجة :ظهور لون آجري أو قرميدي وذلك دليل وجود السكر
اختبار بندكت bendect's test
المبدأ :
هو الفعل اإلرجاعي للغلوكوز على محلول سلفات النحاس القلوية بإرجاع شوارد النحاس
إلى نحاسوز والتي تترسب على شكل أوكسيد النحاسوز
االختبار :ضع في أنبوب اختبار 2مل كاشف بندكت ثم أضف 2 ،1مل بول .بعد
التسخين خمس دقائق يتم التبريد .فالنتيجة سلبية إذا كان اللون أزرق وايجابية إذا كان
اللون أخضر أو أحمر.
االختبار :ضع نهاية الشريط في البول 11ثوان ثم قارن اللون مع الدليل إذا لم يتغير
اللون فالنتيجة سلبية ،واذا تغير اللون إلى القرمزي فالنتيجة إيجابية .
مالحظة :ال يستخدم هذا االختبار في الكالب ألنه يعطي نتائج خاطئة ،وفي حال
النتائج اإليجابية يجب أن يؤكد باختبار آخر .
121
وهو اختبار حساس لوجود األسيتون ويتم باضافة هيدروكسيد الصوديوم إلى عينة البول
.°
مع عدة نقاط من ا لدهيد ساليسيليكد ثم تسخين المزيج حتى الدرجة 71م
النتيجة :تلون طبقة البول باللون األحمر دليل وجود االسيتون
يتألف الكاشف من مزيج البودرة التالي 1 :جزء من صوديوم نتروبروسيد و 111ج ــزء
من أمونيوم سولفيت .ضع 1/2غ من البودرة في أنبوب اختبار ثم أضف 2مل من
البول لألنبوب مع الرج ،وأضــف 2-1مل من هيدروكسيد األمونيوم المركز ليشكل طبقة
فوق المزيج إذا تغير اللون إلى القرمزي يعني أن النتيجة إيجابية .
122
المبدأ :
يعتمد االختبارعلى نزع األوكسيجين من حامله ( خضاب الدم ) وتحريرة وأكسدتة للبنزيدين
االختبار :ويتم
النتيجة :تغير اللون بعد 12دقيقة إلى األزرق المخضر دليل وجود الدم
123
الحمر تترسب في قاع األنبوب والطافي رائق ،أما إذا كانت بيلة خضابية تبقى عينة
البول متجانسة
البيلة الميوغلوبينيةMyoglobin urea :
ال لون البول
يمكن أن يدخل بروتين العضالت في التفاعل اإليجابي الختبارات الدم محو ً
إلى البني وللتشخيص التفريقي ال يوجد في راسب البول كريات حمراء .
البيليروبين Bilirubin
االختبارات
اختبار الرغوة Foam test
رج بضع مليمترات من البول بقوة في أنبوب اختبار فيظهر لون أخضر مصفر أو بني ثم
يتحول هذا اللون إلى رغوة دليل وجود األصبغة الصفراوية.
122
ضع في أنبوب اختبار 2مل من حمض النتريك ثم خذ مسحة منه وضعها في أنبوب
اختبار يحوي على 2مل بول تجد تشكل لون بنفسجي مخضر في الحالة اإليجابية .
اليوروبيلينوجن Urobilinogen :
وهي صبغة صفراوية مشتقة من البيلوروبين يمكن الكشف عنها بعدة طرق منها :
اختبار واالس– دياموند Wallace Diamond test :
المبدأ :
يعتمد على تفاعل اليوروبيلينوجن واألصبغة األخرى مع كاشف إيرلش بنز ألدهيد ليعطي
اللون األحمر
يتألف كاشف إيرلش بنز ألدهيد من 2 :غ با ار داي ميثيل أمين بنز ألدهيد 111 +مل
حمض كلور الماء الممدد %21
االختبار :
أضف 1.2مل كاشف إيرلش بنز ألدهيد إلى 2مل بول طازج في أنبوب اختبار .دع
األنبوب 2دقائق والحظ اللون الوردي إلى األحمر الكرزي في الحالة اإليجابية وغياب
األلوان في الحالة السلبية .
االختبار مع التمديد
يمكن تمديد البول وقراءة النتائج في حال كان تركيز اليوروبيلينوجن عاليًا وذلك بتطبيق
الخطوات التالية :
ضع 8-6أنابيب اختبار على الحامل والحاوية على 2مل ماء في كل واحد
أضف 2مل بول طازج لألنبوب االول ثم خذ مل من االول إلى الثاني وهكذا .
أضف 1/2مل من كاشف إيرلش لكل أنبوب وامزج ثم انتظر 2دقائق .
ظهور اللون الوردي في أي أنبوب يعني نهاية التجربة .
-عند استخدام كلوريد الباريوم إلزالة البيليروبين يجب جعل التمديد 1/8 - 1/2
-يجب عدم تعري ض البول للنور والهواء ألن اليوروبيلينوجن يتحول إلى يوروبيلين
الذي ال يتفاعل مع الكاشف .
122
-إذا وجدت الصفراء بكميات كبيرة فيجب مزج كمية متعادلة من البول وكلوريد
الباريوم المحلول في الماء بنسبة % 11ثم ترشح إلزالة كل الراسب حتى ال
يحدث تدخل للبليروبين في قراءة النتائج
يوروبيلي ستكس
المبدأ :
يشبع الشريط البالستيكي في المربع النهائي ب %2.9من با ار داي مثيل أمين بنز
ألدهيد و %97.1كاشف دارئ جاف وتعتمد الطريقة على كاشف إيرلش مع
اليوروبيلينوجن في وسط حمض قوي ليشكل اللون األحمر .
االختبار :
ضع الشريط في أنبوب اختبار يحوي على بول طازج وامزج ( عدم استخدام مواد حافظة
للبول ) ثم أخرج الشريط من األنبوب واتركه 61ثانية
القراءة :
قارن اللون على الشريط مع األلوان الموجودة على العلبة حيث يتراوح اللون بين األصفر
المخضر إلى األحمر البني في الحالة اإليجابية .
126
دع الكلوروفورم ليستقر في قاع األنبوب
النتيجة
تشكل لون أزرق في طبقة الكلوروفورم دليل وجود األنديكان .
الكالسيوم Calcium :
اختبار سلكوويتش Sulkowitch test
المبدأ:
يترسب الكالسيوم على شكل أوك ازالت الكالسيوم غير المنحلة
االختبار :
لألنبوب االول أضف 2مل من الماء المقطر مع كمية مساوية من البول وامزج جيدا
ثم امزج في أنبوب ثان كمية مماثلة ومعادلة من البول مع كاشف سلكوويتش ،
بعدها قارن بين األنبوبين خالل دقيقتين فتالحظ راسبًا أبيض كثيفًا في الحالة اإليجابية
وراسب أبيض خفيف في الحالة السلبية .
مالحظة :
يتألف كاشف سلكوويتش من 2.2غ حمض أوكزاالت األمنيوم 2 +مل حمض الخل
الثلجي 121 +مل ماء
السلفوناميد Sulfonamides
اختبار لجنين Lignin's test
المبدأ :
تتفاعل مجموعة األريالمين في السلفوناميد مع السللوز الموجود في الحمض إلنتاج لون
أصفر إلى برتقالي .
الطريقة :
ضع 2-1قطرة من البول على جريدة وال تستخدم ورق الترشيح
ثم أضف قطرة من حمض كلور الماء % 22إلى مركز المنطقة الرطبة
وجود السلفوناميد يعطي لون برتقالي.
127
الفحص المجهري لراسب البول
Microscopic examination of urine sediment
اعتبارات عامة
-لفحص البول المجهري أهمية سريرية تدفع الطبيب إلى إج رائه عند كل تحليل
للبول
-يجب أن يفحص من قبل أخصائي خبير
-يجب أن يجرى الفحص على البول الطازج .
-يحوي البول الطبيعي على القليل من ال راسب .
طريقة إجراء اختبار الترسيب للبول :
من بعد جمع عينة البول من الحيوانات وارسالها إلى المختبر ينفذ اآلتي :
-1ترج عينة البول حتى تتجانس .
-2توضع عينة البول في أنبوب مثفلة ثم تثفل 3دقائق على بمعدل سرعة منخفض
1111دورة /د
-3يخرج األنبوب من المثفلة ويتم التحلص من الطافي مع بقاء بضع نقاط منه
-2رج األنبوب يدويًا لمجانسة راسب البول
-2ضع نقطة منه على شريحة وغطها بالساترة .
-6افحص تحت المجهر بالعدسة الصغيرة ثم الكبيرة .
-7اكتب مشاهداتك في عدة حقول
-8يمكن أن نصبغ بأزرق المثلين إن لزم األمر لتوضيح بعض المكونات .
وتحت المجهر يمكن مشاهدة نوعين من الرواسب هما :
اوالً -الرواسب العضوية Organized sediment :
ثانياً -الرواسب غير العضوية Unorganized sediment :
وقد سبق الحديث عنهم في الجزء النظري ،وهنا سوف نعرض االشكال العضوية
وغير العضوية كما يتم مشاهدتها تحت المجهر .
128
اوالً -الرواسب العضوية :وهي
-1الخاليا الظهارية الرصفية Epethelia Squamus :الشكل ( ) 04
48
29
129
الكريات البيض الكريات الحمر
51
52
50
األسطوانيات Casts
أنواع األسطوانيات Types of casts
55
56
57
54
59
64
61
62
63
60
64
عندما يكون الغرض من عينة البول التحليل الجرثومي فيجب توفير الشروط
التالية :أوعية جم ع عينة البول تكون معقمة بما فيها القساطر البولية
يطلب من صاحب الحالة غسل وتطهير المنطقة المحيطة بمكان جمع العينة
وأيضاً غسل وتطهير الغلفة
تؤخذ عينة البول في الصباح مع استبعاد الشخابات األولى من نزول البول
وتفادي تلوث وعاء جمع العينة وعينة البول
ترسل إلى المختبر بالسعة الممكنة في ظروف التبريد ،ويجب أن تختبر بعد
وصولها مباشرة
تنقل عينة البول إلى أنبوب اختبار خاص بالتثفيل وتثفل 12دقيقة على الدورة
/3111د
يزرع من الطافي والراسب على األوساط الجرثومية وخاصة األوساط المعوية
والدموية ،وتحضن في الدرجة 37م 22 °ساعة ثم تفحص بالمجهر باستخدام
الصبغة المناسبة
إ جراء اختبار الحساسية للغزوالت الجرثومية لتحديد الصاد الحيوي الفعال على
العزولة
-14الخمائر ، Yeastالشكل ( ) 69
69
-11الطفيليات Parasites
-12بيوض الطفيليات Parasites ova
-13االوليات Protozoa
Spermatozoa -10الحيوانات المنوية
ثانياً -الرواسب غير العضوية Unorganized sediment :
74
71
72
73
70
75
76
77
74
79
44
81
42
43
40
45
46
47
44
49
الفصل الثاني
فحص السائل المنوي
-شـروط أخذ عينة السائل المنوي :
-1االمتناع عن الجماع أوالحصول على السائل المنوي 5-3أيام قبل أخذ
العينة
-2يجب أخذ العينة مباشرة إلى المخبر ويفضل أن تؤخذ داخل المخبر.
-3يجب أن ال يمر على الحصول على العينة فيما إذا كانت من خارج المخبر
أكثر من 22دقيقة.
-4يمنع استعمال الماء والصابون ألن الوسط يقتل الحيوان المنوي.
-3نضع نقطة من محتويات األنبوب على شريحة نظيفة وتحضر لطاخة على شكل
التي تجرى في صباغة الج راثيم
-4تترك اللطاخة لتجف وبعد جفافها جيدًا توضع نقطة من زيت األرز ثم تفحص
الشريحة بالعدسة الزيتية الغاطسة.
-5يعد مائة حيوان منوي مصبوغ باللون البنفسجي سواء كان طبيعيًا أوغير ذلك كما
في طريقة العد التمييزي للكريات البيض.
-النتيجة :
-1يسجل عدد األشكال الطبيعية للحيوانات المنوية
-2يسجل عدد األشكال غير الطبيعية للحيوانات المنوية
-3تسجل المالحظات األخرى مثل وجود خاليا بيضاء أوخاليا قيحية أوخاليا جرثومية
أوغيرها
الفحص المباشر للسائل المنوي لتقدير حيوية الحيوانات المنوية :
تؤخذ قطرة من السائل المنوي وتوضع على شريحة نظيفة وتغطى بساترة وتوضع تحت
المجهر وتفحص الحيوانات المنوية المتحركة حركة طبيعية وهي الحركة اإلهليلجية
األمامية المستقيمة وتق أر النتائج كنسبة مئوية للحيوانات المنوية النشطة والتي يجب أن
تكون فوق الـ ،% 02ومتوسطة النشاط والتي تبلغ %13تقريبًا ومعدومة النشاط والتي
يجب أن ال تزيد عن %13
يجرى هذا االختبار بعد الجمع مباشرة ويعاد بعد ساعة شرط وضعه في الحمام المائي
بدرجة 33مئوية.
الفصل الثالث
فحص الحليب
طرائق الفحوص الفيزيائية للحليب
Methods of milk physical examination
مقدمة :االختبارات التي تجرى على الحليب ذات أهمية كبرى لمنتجي الحليب والمصنعين
واإلنسان .فاالختبارات التي تجرى على الحليب الخام تفيد في إعطاء أسعار جيدة للمنتجين
الجيدين مما يشجعهم على بذل عناية أكبر للحصول على أسعار أعلى ويزيد عناية
المنتجين المهملين ،فيبذلون جهودًا أكبر لتحسين قطعانهم والتخلص من األبقار غير جيدة
اإلنتاج.
هذا وتفيد تلك االختبارات المشرفين عل ى تصنيع الحليب ،في معرفة مواصفاته وتركيبه
الكيميائي ،خاصة نسبة الدسم ونسبة الحموضة .مما يسهل عليهم توحيد مواصفات الناتج
المصنع واستخدام الحليب لصناعة المنتج المناسب لمواصفات الحليب وتالفي المعامالت
التي تؤثر سلبًا على جودة المنتج النهائي واجراء المعامالت الصناعية التي تفيد في رفع
جودة هذا المنتج .أما االختبارات التي تجرى على المنتجات المصنعة ،فتفيد المصانع في
تحديد درجة جودتها ،واالطمئنان على مطابقتها للمواصفات التي تضعها الدولة ،كما تفيد
في تحديد األخطاء المرتكبة في التصنيع وأثرها على الجودة ،مما يمكن من تالفيها
مستقبالً.
أما المستهلك ،فإن االختبارات التي تجري توضح له تركيب المنتج الكيميائي ،وجودته
كما تجعله يطمئن على مما يسمح له باالختيار المناسب لذوقه وحالته االقتصادية،
صحته ،باستهالكه مواد خالية من األحياء المجهرية الضارة أوالممرضة ،وخالية من أية
مواد كيميائية تؤثر على الصحة .هذا وتقسم االختبارات التي تجري على الحليب السائل
(خامًا أومبست اًر) ،إلى األنواع التالية :
ثانياً :االختبارات الحسية. اوالً :االختبارات الطبيعية أوالفيزيائية.
رابعًا :االختبارات الجرثومية. ثالثًا :االختبارات الكيميائية.
_ تقدير درجة تجمد الحليب :لدرجة تجمد الحليب أهمية كبيرة في الكشف عن
الغش بإضافة الماء ،وتحديد نسبة هذا الغش بدقة تامة .درجة تجمد الحليب هي
درجة الح اررة التي يتحول عندها الحليب من الحالة السائلة إلى الصلبة.
وتوجد عدة طرائق لتقدير درجة تجمد الحليب ،جميعها صعبة االستخدام بطريقة
عملية في االختبارات الروتينية ،كما أنها تحتاج إلى دقة زائدة والى أجهزة خاصة
أوالى أدوات ذات كالجهاز المسمى ( Hortvet Cryoscopeالطريقة اآللية)،
مواصفات معينة وخبرة كبيرة إلجراء عملية القياس (الطريقة القديمة) ونظ اًر لعدم توفر
األجهزة واألدوات الالزمة إلجراء هذا االختبار في معظم المخابر ،ووجود طرائق
أسهل للكشف عن غش الحليب بإضافة الماء ،فلن نشرح هذا االختبار.
-اختبار لزوجة الحليب :وهواختبار اليجرى على الحليب السائل إال ناد اًر ،إال
أنه يجرى بكثرة على الحليب المعقم والمكثف وعلى أنواع القشدة ،فزيادة لزوجة
هذه المنتجات ،تدل على زيادة جودتها .والحليب الطبيعي ذ ولزوجة تعادل 2
سنتي بواز تقريبًا على درجة 21درجة مئوية ،وهي أعلى لزوجة من الماء.
وتختبر لزوجة منتجات الحليب السائلة بطرق عديدة أسهلها طريقة الماصة
Pipette Methodالتي سنشرحها فيما يلي :
او ًال :األجهزة الالزمة :
-ماصات قياسية سعة 111مل ،متشابهة تماماً.
-موازين ح اررة.
-حمامات مائية لضبط درجة ح اررة العينات على الدرجة المطلوبة.
ثانياً :طريقة العمل :
-تضبط درجة ح اررة العينات على الدرجة 12.6درجة مئوية.
-تغسل الماصة الم راد استخدامها 3-2مرات بالعينة وتفرغ .ثم تمأل الماصة حتى
العالمة 111مل.
-يحسب عدد الثواني التي يستغرق تفريغها وهي شاقولية تمامًا.
-كلما زاد الزمن الالزم لتفريغ العينة كانت أكثر لزوجة.
بهذه الطريقة يمكن مقارنة لزوجة العينات المختلفة للمنتجات المختلفة (خاصة
القشدة)،كما يمكن تحويل اللزوجة إلى لزوجة نسبية ،بتقدير زمن تفريغ 111مل ماء
ثم تقسيم زمن تفريغ القشدة ،على زمن تفريغ الماء على نفس درجة الح اررة،
(باستخدام نفس الماصات ).
-3بعض االختبارات الكيميائية للحليب :
: 1اختبار حموضة الحليب :للحكم على حموضة الحليب عدة طرق ،منها الكيفي
ومنها الكمي ،وهي :
: 1الطرق الكيفية لقياس حموضة الحليب :تسمح هذه الطرق بمعرفة صالحية الحليب
لالستالم أولتصنيع منتج معين من عدم صالحيته ،ولكنها ال تمكن من معرفة الحموضة
الحقيقية له ،وأهمها :
: 1- 1-3اختبار الثبات الكحولي :الحليب الطبيعي الطازج ال يتجبن بالكحول ،إال بعد
ارتفاع حموضته عن حد معين ،ولهذا االختبار نوعان :
اوالً:اختبار الكحول البسيط :
يمزج حجم واحد من الكحول %68حجمًا،مع حجم واحد من الحليب ،ثم يخض المزيج
جيدًا ويترك ليهدأ،فإذا لم يتشكل أي راسب ،يمكن اعتبار االختبار سلبيًا.ويالحظ أن زيادة
حموضة الحليب عن ( )9=SHيؤدي إلى جعل اختبار الكحول البسيط إيجابيًا ،كما
يالحظ وجود أجهزة يمكن بواسطتها إج راء هذا االختبار بسرعة على رصيف االستالم
الثاني:اختبار الكحول المضاعف :
يمزج حجمان من الكحول %68مع حجم واحد من الحليب ،فإذا حدث تجبن (أية
رواسب ) ،كان االختبار موجبًا .وال يكون االختبار موجبًا في الحليب الطبيعي إال إال إذا
كانت درجة الـ SHللحليب أكبر من 8غير أن حدوث ترسبات في الحليب ال يدل
دائماًعلى ارتفاع حموضته ،بل قد يدل على أنه حليب غير طبيعي ،ألن الحليب يتجبن
في الحاالت التالية :
أ -اختالل توازن األمالح المعدنية فيه ،كأن ترتفع نسبة الكالسيوم والمغنسيوم.
ب -إذا كان الحليب لبأ أوسرسوبًا.
ت -في حالة إصابة األبقار بالتهاب الضرع.
ث -في حالة احتوائه على عدد مرتفع من الج راثيم المفرزة ألنزيم الرينين.
ج -إذا كان الحليب من أواخر فصل الحالبة.
: 2- 1-3اختبار األ ليزارين :وهو اختبار مركب من اختبار الكحول واختبار األلي ازرين.
واأللي ازرين ( Alizarinاالسم العلمي ) Dioxyantrachinoneمشعر ذو لون بني،
يعطي ألواناً مختلفة ،حسب حموضة الحليب ،مما يساعد على معرفة النسبة المئوية
التقريبية لحموضته.
اوال :المواد الالزمة :
أ -أنابيب اختبار 19×121ملم ،يفضل أن تكون ذات حلقات عند 2و 11مل.
ب -محلول األلي ازرين في الكحول ،ويحضر بوضع 1.2جم من األلي ازرين في دورق
ثم يعبأ الدورق بالكحول األثيلي % 68وزناً ،أو% 72 معياري 111مل،
حجماً ،حتى العالمة ،ويرج حتى تمام الذوبان.
ثانياً :طريقة العمل :
أ -يوضع 2مل من العينة في أنبوبة اختبار ،ويضاف إليها حجم مماثل من
محلول األلي ازرين.
ب -يمزج الخليط جيدًا بقلب األنبوبة عدة مرات.
ت -يالحظ اللون ووجود تجبن أوقطع من الخثرة ،وحجم هذه القطع إن وجدت.
ثالثاً :التقييم :يقارن لون الخليط ،ووجود قطع متخثرة فيه ،بالجدول التالي :
واذا تجبنت للعينة ،وكانت حموضتها منخفضة ،فإن ذلك يعود إلى اآلتي :
أ -احتواء العينة على جراثيم تنتج أنزيمات الرنين (المنفحة ).
ب -العينة من أبقار مصابة بالتهاب الضرع ،ألن تفاعل الحليب في هذه الحالة يكون
قلويًا ،ويعطي بهذا االختبار لونًا بنفسجيًا أو أرجوانيًا.
109 التشخيص المخبري -2-
د .هبرة – د .قباوي
ويالحظ أن الحليب الذي يحصل له تجبين (سواء أكانت قطع الخثرة كبيرة أم صغيرة
) في هذا االختبار ،اليتحمل المعامالت الح اررية.
:2اختبار التجبن بالغليان :Clot on Boilingيؤخذ 2مل من عينة الحليب في
أنبوبة اختبار ،وتسخن في حمام مائي لدرجة الغليان ،ثم تختبر لمالحظة حدوث
تجبين بها .ويالحظ أن الحليب الذي تصل درجة الـ SHله إلى 12فما فوق يتجبن
بالغليان ،وبالتالي فهو ال يصلح لصناعة منتجات الحليب التي ستعامل بشدة بالح اررة
كالحليب المعقم والمكثف والمجفف وأحياناً المبستر.
:2أهم الطرق الكمية لتقدير حموضة الحليب:
: 1تقدير رقم الحموضة ( )SHأوما يسمى Soxhelt-Henkel Number
اوالً :رقم الحموضة : SHهوعدد السنتيمترات المكعبة من الصودا الكاوية ربع
عيارية والالزمة إلرجاع لون 111ملل من الحليب على اللون الزهري بوجود الفينول
فتاليئين.
األدوات الالزمة :
أ -جهاز معايرة لتقدير درجة الـ ،SHتبين تدريجاته 1.2سم ،3ويفضل الجهاز
األصلي الذي صممه الدكتور Gerberوقد تستخدم سحاحة عادية لذلك تبين
تداريجها 1.12سم .3
ب -جفنة من البورسالن سعة 111- 21مل.
ت -دوارق آرلنماير واسعة الفوهة سعة 221مل.
ث -ماصات سعة ( ) 1.2 1 ،2،22,2مل.
الكيميائيات الالزمة :
أ -محلول صودا كاوية ربع نظامي ( 1.22ن).
ب -محلول الفينول فتالين % 2ويحضر بإذابة 2جم من دليل الفينول في دورق
معياري 111مل ثم يعبأ الدورق بالكحول اإلثيلي % 98إلى العالمة .111
ويحضر بإذابة 2جم من كبريتات ت -محلول كبريتات الكوبالت النقي ،% 2
الكوبالت البللورية CoSO4. 7H2Oبالماء المقطر حتى 111مل.
طريقة إجراء االختبار :
تعدل ح اررة العينة إلى الدرجة 21درجة مئوية ،وتمزج جيدًا مع تجنب تكوين رغوة أثناء
ذلك ،كما يحضر لون الشاهد أوالمقارنة ،بإضافة 1.2مل من محلول الكوبالت إلى 22
مل من عينة الحليب في جفنة من البورسالن .ويجب أن يجدد اللون كل 3ساعات.
يؤخذ 22مل من العينة ،ويضاف له 1مل من دليل الفينول فتالين ،ثم تعاير بالصودا
الكاوية 22 ،1نظامي ،مع الرج المستمر ،حتى يصير لون العينة هو لون الشاهد،
ويجب أال تزيد المعايرة عن نصف دقيقة .وفي العادة تجرى تجربة أولية ،يعرف منها
عدد الميلليمترات الالزمة ل لمعايير من الصودا الكاوية بصورة تقريبيية ،ثم تعاد التجربة،
فتضاف معظم الكمية بسرعة في البداية ،ثم يضاف الباقي على شكل نقط حتى الوصول
إلى اللون المطلوب.
ويالحظ أنه في حال استخدام الجهاز األصلي يمكن قراءة درجة الـ ـ SHمن سحاحة
المعايرة مباشرة .أما إذا لم يستخدم الجهاز األصلي ،فيضرب عدد السنتيمترات من
الصودا الكاوية 1.22نظامي ،التي لزمت لمعايرة حموضة الـ 22مل من عينة الحليب في
أربعة ،ويكون الناتج هورقم الـ SHللعينة.
: 2تقدير نسبة الحموضة :
تقدر نسبة الحموضة في الحليب ومنتجاته السائلة ،حسب المواصفات السورية لعام
1981و 1993بالطريقة التالية :
أساس الطريقة :
تعتمد الطريقة على معايرة الحموضة الموجودة في الحليب ،بواسطة قلوي معروف
النظامية ،ويعبر عن النتيجة بنسبة مئوية للحمض مقد ًار كحمض لبن (حمض الكتيك ).
خطوات العمل :
أ -يوضع محلول الصودا 1.1ن في السحاحة.
ب -يوضع في دورق أرلنماير 21مل من عينة الحليب.
ت -يضاف إلى الحليب في الدورق 2-3نقاط من دليل الفينول فيتالين وتمزج.
ث -يعاير الحليب بالصودا الكاوية 1.1ن مع التحريك المستمر حتى ظهور اللون
الزهري وثباته 11ثوان على األقل.
ج -تسجل كمية القلوي 1.1ن التي استهلكت في المعايرة.
ح -تكرر العملية ثانية لنفس العينة ،ويحسب متوسط الصوداالتي استهلكت.
س = عدد ميلليمت رات القلوي 1 ،1نظامي ،الذي لزم لمعايرة حموضة العينة.
ح = حجم عينة الحليب بالميلليمترات.
ويالحظ أنه في هذه الحال اعتبر أن وزن 1مل من الحليب في كل مرة يعادل 1غ،
وهذا غير دقيق ألن كثافة الحليب أشد من كثافة الماء .لذلك تكون النتيجة أكثر دقة عند
استخدام المعادلة التالية :
س × 111 × 119 ،1
نسبة الحموضة = -----------------
و
و= وزن العينة ،ويمكن حسابه بضرب الحجم المعاير ( 21هنا ) في كثافة الحليب،
التي يمكن حسابها باستخدام الالكتومتر.
تقدير حموضة الحليب بالدرجات الدورنيكية :
تقدر حموضة الحليب في بعض بلدان أوربا ،بما يسمى بالدرجات الدورنيكية Dornic
.Progressوالدرجة الدورنيكية = 1 ،1جم حمض اللبن في اللتر ،فالحليب الذي تبلغ
نسبة الحموضة فيه %2 ،1يحتوي على حوالي 2غ حمض اللبن في الليتر ،وتكون
حموضته بالدرجات الدورنيكية 21= 1 ،1 ÷ 2درجة .كما أن كل درجة SHواحدة
تعادل 22 ،2درجة دورنيكية.
تقدير كثافة الحليب النوعية باستخدام الكتومتر كويفين :
الهدف تقدير كثافة الحليب لكشف غشه بإضافة الماء
تقدير نسبة الدسم :يوجد عدة طرق لتقدير نسبة الدسم في الحليب ومنتجاته السائلة،
أسهلها وأسرعها طريقة جربر ،Geberوهي الطريقة المعتمدة في المواصفات السورية.
األجهزة واألدوات الالزمة :
أ -أنابيب جربر الخاصة المدرجة بالتدريج المناسب (حتى .) %11الشكل رقم -
- 92
خ -حمام مائي ،توضع به أنابيب جربر بحيث تكون سداداتها إلى األسفل ،تضبط
ح اررته على 62درجة مئوية.
المحاليل الالزمة :
أ -حمض الكبريتيك كثافة .1.822ب-كحول االيمايل ،كثافة .1.811
خطوات العمل :
أ -توضع 11مل من حمض الكبريتيك في أنبوبة جربر.
ب -تخلط عينة الحليب جيدًا حتى تصبح متجانسة ،وتضبط ح اررتها على 27درجة
مئوية ثم يؤخذ منها 11مل بالضبط بواسطة الماصة وتفرغ في أنبوبة جربر فوق
حمض الكبريتيك بهدوء ،على أن يوضع الطرف السفلي للماصة داخل عنق
األنبوبة مالمساً للجدار ( وليس للعنق ) ،ويترك الحليب لينزلق ببطء على هذا
الجدار .ويجب عدم حدوث اختالط بين الحليب والحمض ،وعد م ترطيب عنق
أنبوبة جربر بالحليب.
ت -يضاف 1مل من الكحول اإلميلي إلى محتويات أنبوبة جربر ،مع مالحظة
عدم ترطيب عنق األنبوبة بالكحول.
ث -تقفل النبيبات بالسدادات المطاطية بعد التأكد من جفاف أعناقها من الداخل.
ج -ترج أنابيب جربر ،مع مراعاة مسكها بمنشفة ،ألن ح اررتها ترتفع أثناء ذلك،
ويستمر في الرج حتى تذوب قطع الخثرة تمامًا .ويستحسن أن يتم رج النبيبات
بالجهاز الخاص اليدوي أواآللي.
ح -توضع أنابيب جربر متقابلة في التجاويف الخاصة في صينية الطرد المركزي
(المثفلة ) ،بحيث يكون القسم المدرج نحومركز الدوران ،وأن يكون عدد النبيبات
ال في المثفلة للمحافظة على توازنها أثناء الدوران.
زوجيًا ومتقاب ً
خ -تدار المثفلة 12-11دقيقة ،ثم يقطع التيار لتقف تدريجيًا.
د -ترفع النبيبات على أن تبقى ساقها المدرجة إلى األعلى دائمًا ،وتوضع في الحمام
المائي ( 62درجة مئوية ) 2- 3دقائق ،مع مراعاة عدم رجها أوقلبها ،وأن يكون
سطح الماء في الحمام المائي أعلى من سطح الدسم داخل النبيبات.
ال لصفر التدرج،
ذ -يعدل موقع عمود الدسم ،بحيث يكون أسفل تقعر االنفصال مقاب ً
وذلك بدفع السدادة للداخل أوسحبها للخارج.
ر -عند القراءة يجب أن يكون الجزء المدرج بوضع شاقولي ،وخط القراءة بمستوى
النظر.
ز -تعاد أنابيب جربر إلى المثفلة بعد ضبط السدادات ،وتعود عملية التثفيل كما
ورد سابقاً ،تنتقل النبيبات إلى حمام مائي لمدة 2-3دقائق .فإذا لوحظ زيادة في
قراءة الدهن بعد العملية الثانية عن االولى تعاد النبيبات إلى المثفلة ،وتكرر
العمليات كما سبق ،حتى ثبات قرائتين متتاليتين.
مالحظة :اعتمدت المواصفات السورية أيضًا طريقة قياس الدسم بواسطة االستخالص
،Rose Gotlibوفق االتحاد الرسمي للمحللين الكيميائيين بطريقة روز جوتليب
األمريكيين ( ،) AOACالطبعة الثالثة عشر لعام 1981
: 0تقدير نسبة المواد الصلبة الكلية :تقدر في الحليب السائل بعدة طرق :
: 1طريقة التجفيف بالفرن تحت الضغط الجوي العادي :
المواد واألجهزة الال زمة :
أ -فرن تجفيف عادي يمكن ضبط ح اررته على 2 ± 113درجة مئوية.
ب -أطباق أو جفا ن لتقدير الرطوبة ،تصنع من الزجاج أواأللمنيوم ذات أغطية.
ت -مجفف زجاجي عادي Desiccatorمناسب الحجم.
ث -ماصات ألخذ العينة.
ج -رمل معامل بحمض كلور الماء HClالمركز والمغسول بعدها بالماء جيداً ،ثم
المحروق في الفرن على درجات ح اررة عالية.
طريقة العمل :
أ -توضع كمية من الرمل المعامل في أطباق التجفيف (بمعدل 32-31غ للطبق
الواحد).
ب -ثم توضع األطباق في فرن التجفيف ،على أن تكون األطباق مفتوحة ،وعلى
درجة ح اررة 2 ± 113درجة مئوية ،ساعتين على األقل ،حتى تجف جيدًا.
ت -تنقل األطباق بعدهاإلى المجفف الزجاجي ،لتبرد إلى درجة الح اررة العادية.
ث -توزن األطباق مع الرمل والغطاء ،ويسجل الوزن وليكن الوزن (و) غ.
ج -يوضع في كل طبق 11مل حليب ويغطى ويوزن وليكن الوزن (و )1غ.
ح -تغطى األطباق وتوضع في المجفف الزجاجي الصغير ،لكي تبرد إلى درجة
الح اررة العادية ،ثم توزن.
ثم التبريد بالمجفف الزجاجي ،ثم خ -تكرر عملية التجفيف في الفرن ساعة،
الوزن ،حتى يصبح وزن األطباق ثابتاً ،أوحتى يبدأ الوزن بالزيادة ،ويسجل أقل
وزن لألطباق ،وليكن الوزن الثابت هو(و )2غ.
ثالثاً :طريقة الحساب :
وزن العينة قبل التجفيف = (و – 1و) غ
وزن العينة بعد التجفيف ( وزن المواد الصلبة في العينة) = (و-2و) غ ،إذن :
كل و – 1و حليب تحتوي على و – 2و مواد صلبة كلية
كل 111غ حليب تحتوي على س مواد صلبة كلية
(و – 2و) × 111
س = ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ــ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ
و – 1و
: 2- 2-3طريقة المعادالت :الطريقة السابقة دقيقة ،وتصلح لجميع منتجات األلبان
ولكنها مجهدة وتحتاج إلى وقت طويل ،كما أنها غير عملية في مصانع األلبان ،خاصة
عند وجود عدد كبير من العينات.
ولقد أدت جهود الباحثين إلى ظهور عدد كبير من المعادالت التي يمكن بواسطتها تقدير
كل من نسبة المواد الصلبة الكلية والمواد الصلبة الالدهنية .وذلك عن طريق قراءة
الالكتومتر ونسبة الدهن في الحليب.
ويجب أن يكون واضحًا أن هذه المعادالت ليست دقيقة تمامًا إال أنها طريقة سهلة
وسريعة وذات دقة كافية لالختبارات الروتينية .وهذه بعضها :
اوالً :المعادالت األلمانية :
د ل2.
أ -نسبة المواد الصلبة الالدهنية = 1.22+ ------ + ---------
2 2
ل2.
ب -نسبة المواد الصلبة الكلية = 1.2 + --------د 1.22+
2
154 التشخيص المخبري -2-
د .هبرة – د .قباوي
يسخن الحليب على درجة ح اررة 82م 11 °دقائق ضمن أنبوب معقم يحتوي على قطعة
من البارفين .تتلف الجراثيم وتبقى األبواغ ،بهذه الطريقة تشكل قطعة البرافين سدادة على
السطح تتم حضانة النبيبات في درجة ح اررة 37م.°
إن وجود األبواغ يظهر في إنتاج الغاز الذي يعمل على انتفاخ طبقة البارافين.
إن البحث عن أنواع هذه العائلة أهمية خاصة في مجال علم األحياء المجهرية الغذائية.
علمًا أن الجراثيم المنتجة لهذه العائلة هي ب شكل عام مضيف طبيعي أوممرض للجهاز
الهضمي لإلنسان والحيوان ( وفقا لألنواع )
Entrobacteriaceaما يلي: من الخصائص الهامة ألنواع هذه العائلة
-عصوية الشكل
-متحركة أوغير متحركة.
-سالبة لصبغة غ رام.
-هوائية أوال هوائية مخيرة.
-تخمر الجلوكوز مع أو بدون الغاز.
-تحول النترات إلى نتريت.
الكشف عن القولونيات
ينطوي تحت هذا االسم األنواع التالية :
،Klebsiellaاألمعائيات .Enterobacter اإلشريكية ،Escherichiaالكليبسيال
وتعتمد الطرق المستخدمة عادة في البحث عن األنواع القادرة على تخمير الالكتوز
بسرعة.
عملياً تستخدم البيئات التالية :
- 1الوسط السائل المحتوي على الالكتوز وأمالح الصفراء واألخضر الالمع
تكشف عملية التخمر بانطالق الغاز الذي يمكن مالحظته و تغير لون المشعر.
-2البيئة الصلبة والمكونة من دي أوكسي كوالت الالكتوز آجار.
تحرض عملية التخمر تحول لون الدليل ( األحمر المتعادل ).
ان المستعمرات المتشكلة من جراثيم القولونيات تكون ملونة باألحمر الغامق.
تحضير البيئة السائلة :
1111مل ماء مقطر
11غ ببتون
11غ الكتوز نقي
من محلول أو 211مل 21 – 16غ أمالح الصفراء
أمالح الصفراء % 11
-أذب هذه المكونات في الماء مع التسخين بلطف
-نظم رقم الحموضة PHعلى 7باستخدام بروم تيمول األزرق كدليل (تحول
إلى أزرق مخضر) ثم رشح.
-أضف 11مل من محلول كحولي لألخضر الالمع % 1.133
-وزع 11مل من البيئة في أنابيب 161 x 16مم مع إدخال أنابيب درهم
Durhamضمن كل أنبوب.
-عقم على درجة ح اررة 118م 21 °دقيقة.
وسط مضاعف التركيز :
111مل من الماء ضاعف كمية الببتون والالكتوز واألمالح ومحلول األخضر الالمع
ووزع الوسط بمعدل 2مل في األنبوب.
بالنسبة لتحضير البيئة تابع بقية المراحل مثل وسط بسيط التركيب.
تحضير البيئة السائلة :
النموذج االول :
11غ ببتون
11غ الكتوز
1.2غ دي أكسي كوالت الصوديوم
2غ كلور الصوديوم
2غ ليمونات الصوديوم
12غ آج ــار
1.13غ األحمر المتعادل
11غ ببتون
11غ الكتوز
1غ دي أوكسي كوالت الصوديوم
2غ كلور الصوديوم
2غ فوسفات ثنائية البوتاسيوم
1غ ليمونات المعدن
1غ ليمونات الصوديوم
12غ آج ــار
1.13غ األحمر المتعادل
بالنسبة لـ 111مل من الوسط نستخدم 2.2غ من االول و 2.2.غ من الثاني عند
استخدام أحد النموذجين إن كمية الوسط أوالبيئة المستخدمة ستدخل ضمن 211مل من
الماء المقطر وترتفع درجة الح اررة حتى الغليان وتوزع ضمن أنابيب بمعدل 12مل
ضمن أنابيب
181x 18ملم وبمعدل 2مل ضمن أنابيب 161x 16مم.
طريقة العمل بالنسبة للبيئة السائلة :
-1نض يف مباشرة المادة المراد تحليلها في األنابيب وفق التمديد المناسب.
-2يجب أن يلقح كل حجم بشكل مضاعف وتوضع األنابيب في حاضنة بدرجة ح اررة
1 + 31م 28 / °ساعة.
بالنسبة للبيئة الصلبة :
-1نحضر العينة المراد تحليلها وفق التمديد المطلوب.
-2نضع محتويات كل أنبوب ضمن طبق بتري.
-3نضيف الوسط قبل تصلبه (° 28-22م) و نمزجه مع العينة و نتركه ليتصلب.
-2نضع أطباق البتري في الحاضنة على درجة ح اررة 37م °خالل 22 – 22ساعة.
النتائج :بالنسبة للبيئة السائلة :
نسجل وجود أوغياب انطالق الغاز في الكأس القصير.
يدل وجود األندول على قدرة بعض الج راثيم على تمثيل الحمض األميني تربتوفان.
بالنسبة للبيئة الصلبة :
تكون مستعمرات القولونيات المشكلة على شكل مستعمرات حم راء غامقة ذات قطر أعلى
مم يتم تعدادها باستخدام عداد المستعمرات وتحمل النتيجة إلى 1مل من من
المادة أومستحلبها.
البحث عن اإلشريكية القولونية E.coli
يدل وجود اإلشريكية القولونية E.coliفي الحليب ومنتجاته على التلوث وتسبب هذه
الجراثيم العديد من المشكالت الصناعية إذ تؤدي إلى استخدام األجبان نتيجة تخمر
الالكتوز وانتاج الغا زات.
Maekenizeيعتمد هذا المعدل من قبل Ei jkman لقد استخدم اختبار
االختبار على الخاصية التي تملكها اإلشريكية القولونية E.coliبشكل عام في إنتاج
األن دول وتخمر الالكتوز بعد تطبيق عملية الحضانة على درجة ح اررة 22م 2 ± °م °
خالل 28ساعة.
تحضير البيئة :
آ -ماء يحتوي على الببتون :
11غ من ببتون خال من األندول.
2غ من كلور الصوديوم.
1111مل من الماء المقطر.
-تذاب هذه المكونات في الماء مع التسخين اللطيف.
-اضبط رقم الحموضة باستخدام بروم وثيمول األزرق كدليل ( ازرق أخضر ) ثم
رشح.
-وزع المحلول الناتج في أنابيب 16x 161مم بمعدل 2مل في األنبوب.
-عقم في المعقم على درجة ح اررة 121م °خالل 21دقيقة.
Coliformes ب -البيئة السائلة المستخدمة في الكشف عن القولونيات
طريقة العمل :يتم البحث عن اإلشريكية القولونية E. coliاعتبا اًر من األنابيب التي
انطلق منها الغاز (تخمر الكتوز ايجابي ) على البيئة السائلة على درجة ح اررة 1 ± 31
م °عند البحث عن جراثيم القولونيات.
من كل واحد من األنابيب اإليجابية للالكتوز يلقح بشكل متالزم على أنبوب البيئة السائلة
في الالكتوز مع أمالح الصفراوية واألخضر الالمع .ومن جهة أخرى على أنبوب من
الماء المحتوي على الببتون.
توضع األنابيب في حاضنة على درجة ح اررة 2 ± 22م °خالل 28ساعة.
النتائـــج :
يبحث عن وجود أوعدم وجود انطالق غاز co ²في البيئة المحتوية على الالكتوز
واألمالح الصفراوية واألخضر الالمع.
يختبر وجود األندول في األنابيب المحتوية عل ى الببتون وفي حال كون االختبار إيجابيا
.E. coli فإنه يحكم على وجود اإلشريكية القولونية
تعداد الفطور والخمائر
تحضير البيئة :جيالتين مع تيراميسين أو جيالتين OGA
2غ مستخلص الخميرة
21غ جلوكوز
21غ آج ــار
1111مل ماء مقطر
أذب هذه المواد مع التسخين في حمام مائي مغلي ثم وزع الخليط ضمن أنابيب بمعدل
12مل أوضمن دورق بمعدل 111مل.
عقم في المعقم على درجة ح اررة 121م °خالل 21 – 12دقيقة .تتم إضافة التيراميسين
قبل صب األطباق.
طريقة العمل :
نضع 1مل من العينة المراد تحليلها وفق التمديد المختار ضمن طبق بتري معقم ثم
نضيف محتويات األنبوب ضمن طبق البتري
نحضر محلول تيراميسين 1مغ 1مل
نضيف 9مل من بيئة جيلوز ونبرد حتى 22م °ثم نضيف 1مل من تيراميسين.
نضع األطباق في الحاضنة على درجة ح اررة 22 – 21م 2 °أيام.
النتائج :
نعد مستعمرات الفطور والخمائر الموجودة في األطباق ونسجل النتائج في 1مل من
المادة.
الخمائر موجودة على شكل مستعمرات كبيرة الحجم.
الفطور موجودة على شكل مستعمرات معزولة.
البحث عن المضادات الحيوية :
وجود المضادات الحيوية في الحليب ومنتجاته ناتج عن استخدام هذه المواد في معالجة
الحيوانات.
لوجود المضادات الحيوية تأثير ع لى تكنولوجيا األلبان إلعاقتها عملية التخمر بتثبيطها
فعالية بعض األنواع الجرثومية
يمنع وفق التشريعات واألن ظمة وجود المضادات الحيوية في الحليب المعروض أوالمقدم
من قبل المنتج.
يعتمد البحث عن المضادات الحيوية على الطرق البيولوجية ومن أكثر الطرق استخدامًا
الطريقة المستخدمة والمعتمدة على تغي ارت استقالب الجراثيم اللبنية.
و هناك أجهزة حديثة يمكنها الكشف عن ثماالت بعض أنواع الصادات الحيوية في
الحليب خالل دقائق.
تغيرات استقالب الجراثيم اللبنية :
المبدأ :يقارن نمو ونشاط الجراثيم اللبنية في حليب شاهد مع العينة المراد اختبارها
وضمن عينة أضيف إليها البنسليناز مع تلقيح أواضافة نوع من الجراثيم اللبنية الحساس ة
للبنسلين.
إن االنتشار السريع يسمح ب الحصول على النتيجة المطلوبة خالل زمن قصير،
نمواوتثبيط الجراثيم اللبنية المستخدمة يصبح بشكل محسوس عند استخدام دليل ملون
يكشف في حالة زوال اللون بفعل الجراثيم وبشكل عام يستخدم جراثيم العقدية أليفة الح اررة
Str. Thermophilus
تحضير العينة :
-1محلول بنسليناز أذب مع التحريك البسيط حبة واحدة من بنسلينازفي 11مل ماء
مقطر.
-2محلول ريزازورين أذب مع التحريك قطعة ضمن 21مل من ماء مقطر أو 1.2غ
من بودرة ري اززورين ضمن 111مل من ماء مقطر.
-3حليب فرز شاهد ،أوأذب مع التحريك 12-11غ من حليب الفرز المجفف من
النوعية الجيدة خال من الجراثيم في 111مل من الماء المقطر.
سخن إلى الدرجة 22م °وتأكد من الذوبان الكامل لبودرة الحليب.
-2مزرعة الجراثيم اللبنية ساللة من الج راثيم اللبنية الحساسة للبنسلين.
-2أنابيب معقمة 18 X 181
-6حليب فرز معقم ( 121م 21 / °دقيقة )
عند االستخدام ضع 7.2مل من الحليب ضمن األنابيب .18 X 181
طريقة العمل :
-1أدخل 11مل من الحليب المراد اختباره في اثنين من األنابيب المعقمة A¹ .A²
وأيضاً 11مل من الحليب الفرز الشاهد ضمن اثنين من األنابيب المعقمة المرقمة T¹.
.T²
-2ضع األنابيب األربعة في حمام مائي مغلي خالل 2دقائق وبرد.
-3أضف 3نقاط من محلول البنسليناز في األنابيب .A². T²
-2اترك األنابيب 31دقيقة في درجة ح اررة :
22م °للملبنات Lactobacillus
37م °للعقديات Streptococcus
-2لقح األنابيب األربعة بالساللة الحساسة بمعدل % 2.2وللوصول إلى ذلك أضف
2.2مل من بادئ بكتريا الالكتيك الحساس إلى 7.2مل من الحليب الموجود في األنبوب
المعقم .حرك جيدًا أوأضف 1مل من الخليط الناتج الحاصل من األنابيب األربعة.
-6أضف 1مل من محلول ريزازوين ضمن كل واحد من األنابيب األربعة.
-7ضع األنابيب في حمام مائي منتظم على درجة ح اررة 22م °أو 37م °ومن النوع
المستخدم حتى تحول لون الريزازورين ضمن أحد األنابيب.
تفسير النتائج :
تحول اللون يدل على إرجاع الريزازورين فإذا حدث ف ي نفس الوقت على األنابيب .A²
T¹. T²فيدل على غياب البنسلين ( الحليب الخال من المضادات A¹وكذلك
الحيوية).
تحول اللون في T¹. T²واألنبوب A²فقط يدل على ( وجود البنسلين ).
تحول اللون ال يتم في A¹ .A²أي ال تحدث عملية إرجاع الريزازورين ولكنه يتم فقط
في األنابيب T²و ( T ¹وجود كمية مرتفعة من البنسلين أكثر من عشر وحدات /مل.
املصطلحات العلمية
Acid-base balance التوازن حمض -أساس
Amyloidosis استحالة الكلية النشوية
Anabolic metabolism االستقالب االبتنائي
Anemia فقـــر الـدم
Azoturia البيلة اآلزوتية
B
Biliverdin بيلفردين
C
Cascade شالل
Casts األسطوانات
Cholestasis ركود الصفراء
Clearance test اختبارات التنقية
Clinical Microbiology علم الجراثيم السريري
Crisis نوبات
D
Degeneration االستحالة
Destruction تحطم
Diabetes insipidus الداء السكري الكاذب
Diabetes mellitus الداء السكري
Disorders اضطرابات
E
epithelial Cast األسطوانة الظهارية
Epithelial cells الخاليا الظهارية
Extrinsic خارجي
Primer المشرع
Promyelocyte الكريات طليعة النقوية.
Proteolytic activity النشاط المحلل للبروتين
Proximal tubules األنيبيبات القريبة
Pure culture المنابت النقية
Pyuria التقيح البولي
R
Refractometer مقياس اال نكسار
S
Schistocyte الخاليا المتقسمة
Scurvy البثع
Specific gravity الكثافة النوعية :
Squamous cells الخاليا الظهارية الرصفية
Stress اإلجهاد
T
Trypsin التربسين
U
Uremia يوريمية
Uremic acids األحماض اليوريمية
Urinalysis تحليل البول
Urinometer مقياس كثافة البول
Urobilinogen يوروبلينوجين
W
Waxy cast األسطوانة الشمعية
املراجع العربية
املراجع األجنبية