‫الفحوصات باستخدام مرايا األسنان ومستكشف األسنان‪ .

‬وفقًا لمعايير تشخيص تسوس األسنان لمنظمة الصحة العالمية ‪ ،‬تم تقييم‬
‫حالة صحة الفم السريرية ‪ ،‬ولوحظ تسوس (‪ ، )D‬وفقدان بسبب تسوس األسنان (‪ )M‬واألسنان المملوءة (‪.)DMFT( )T‬‬
‫أجرى أحد الفاحصين الفحص السريري باستخدام معيار ‪ .DMFT‬تم الحصول على صورة شعاعية لجناح لدغة لكل موضوع‬
‫لتأكيد‪ I‬عمق اآلفة‪.‬‬

‫بعد الفحص السريري ‪ ،‬تم إجراء مقابالت مع جميع األشخاص حول عاداتهم اليومية لصحة الفم‪ .‬استخدمت هذه الدراسة‬
‫استبيان استبيان مقتبس من دراسات سابقة‪ .‬تم سؤال المفحوصين عن ممارسة نظافة الفم وتكرار استهالك السكر‪.‬‬

‫جمع العينات واستخراج الحمض النووي الجيني‬

‫تم استخراج عشرين عينة من أسنان نخرية ألفراد ‪ CA‬باستخدام حفارة ملعقة أسنان حادة ومعقمة‪ .‬تم حفر اآلفة في كل سن ‪،‬‬
‫وتعليقها في الكحول ‪ ،‬وحفظها عند ‪ 20-‬درجة مئوية حتى االستخدام‪ .‬تم وزن جرام واحد من قطعة العاج المسوسة وتم تفريقها‬
‫يدويًا في البداية عن طريق التدوير لمدة ‪ 20‬ثانية قبل استخراج الحمض النووي البكتيري‪.‬‬

‫تم جمع أربعين عينة من اللعاب لهذه الدراسة ‪ 20 ،‬عينة من أفراد التليف الكيسي و ‪ 20‬عينة من موضوعات ‪ .CA‬كان من‬
‫المقرر جمع اللعاب في الصباح الباكر في بداية اليوم السابق لتناول اإلفطار للمرضى‪ .‬طُلب من كل مريض ابتالع لعاب موجود‬
‫مسبقًا ثم مضغ قطعة قياسية من شمع البارافين ‪ ،‬وتم جمع ‪ 5‬مل من اللعاب المحفز في أنبوب معقم سعة ‪ 50‬مل ‪ ،‬والذي تم نقله‬
‫بعد ذلك مباشرةً إلى المختبر وحفظه عند درجة ‪ 20‬درجة مئوية‪ C .‬حتى تم استخدامه‪ .‬ثم تم استخراج الحمض النووي الجيني‬
‫البكتيري الكلي من كل عينة لعاب باستخدام تعديل بنا ًء على تعليمات دراسة منشورة‪.‬‬

‫السالالت بكتيرية‬

‫لوحظ في هذه الدراسة عدد السالالت البكتيرية الفموية من نوعين من أنواع الضوابط الداخلية إلنشاء منحنى معياري كمي‪ .‬تم‬
‫عزل ‪ SM‬و ‪ LBs‬وتحديدهما وتأكيدهما عن طريق اختبار ‪ PCR‬التقليدي‪.‬‬

‫فحوصات ‪ PCR‬الكمية في الوقت الحقيقي‬

‫في ‪ PCR‬المستهدف على أداة ‪S rRNA‬للجين ‪ qPCR 16‬لتقدير المستوى اإلجمالي للعينات البكتيرية ‪ ،‬تم الحصول على‬
‫في حجم تفاعل إجمالي قدره ‪) 20‬كاليفورنيا ‪ ،‬الواليات المتحدة ‪ ABI 7000 (Applied Biosystems ،‬الوقت الحقيقي‬
‫ميكرولتر‪ .‬تم وصف البادئات األمامية والعكسية المحددة المستخدمة في هذه الدراسة والتحقق من صحتها في مكان آخر‪ .‬تم‬
‫‪ × Eva Green‬في الوقت الفعلي بحجم إجمالي قدره ‪ 20‬ميكرولتر يتكون من ‪ 10‬ميكرولتر من ‪ PCR 2‬إجراء اختبار‬
‫‪ 2‬ميكرومتر لكل تمهيدي أمامي وعكسي ‪ 5 ،‬ميكرولتر من ‪) ،‬إستونيا ‪qPCR Mix Plus ROX (Solis Bio Dyne ،‬‬
‫تم اختبار كل عينة مرتين‪ .‬تم تعيين‪ I‬شروط التدوير ‪ DNA / RNAse.‬و ‪ 3‬ميكرولتر من الماء الخالي من ‪ DNA‬قالب‬
‫على النحو التالي‪ :‬دورة واحدة عند ‪ 95‬درجة مئوية لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪ ،‬تليها ‪ 40‬دورة من ‪ qPCR‬الحراري لجميع فحوصات‬
‫‪ LBs ،‬و ‪ SM‬التمسخ لمدة ‪ 15‬ثانية عند ‪ 95‬درجة مئوية ‪ ،‬والتلدين التمهيدي‪ I‬لمدة ‪ 20‬ثانية عند ‪ 60‬درجة مئوية لـ‬
‫‪ qPCR‬لبناء منحنيات قياسية القياس ‪ ،‬احتوى خليط تفاعل ‪ LBs.‬و ‪ SM‬واالستطالة لمدة ‪ 20‬ثانية عند ‪ 72‬درجة مئوية لـ‬
‫‪ × Eva Green qPCR Mix Plus ROX (Solis Bio‬على حجم إجمالي قدره ‪ 20‬ميكرولتر ‪ ،‬والذي يتكون من ‪10‬‬
‫الجينومي من السالالت ‪ 2 DNA‬ميكرومتر لكل من التمهيدي األمامي والعكسي ‪ 5 ،‬ميكرولتر من قالب ‪) ،‬إستونيا ‪Dyne ،‬‬
‫البكتيرية المذكورة أعاله و ‪ 3‬ميكرولتر من الماء الخالي من الحمض النووي ‪ /‬الحمض النووي الريبي (تراوح التركيز من ‪10‬‬
‫نانوغرام ‪ /‬م‬