‫جامعة دمشق‬

‫كلية طب األسنان‬

‫دراسة عن العالقة بين الحالة التغذوية لتجربة تسوس األسنان والمكورات العقدية اللعابية‬

‫مقدمة البحث‪ :‬قمر دركشلي‬

‫اسم المادة‪:‬‬
‫اسم الدكتور‪:‬‬
‫التاريخ‪:‬‬
 ‫الملخص‬

‫الهدف‬
‫هدفت هذه الدراسة إلى تحديد الكميات النسبية للمكورات العقدية الطافرة (‪ )SM‬والعصيات اللبنية (‪ )LBs‬وعالقتها بتسوس األسنان‬
‫بين السكان البالغين اليمنيين‪.‬‬

‫النتيجة‬
‫ظهرت عالقة ارتباط موجبة بين عددي ‪ SM‬و ‪ LB‬من عينات أنسجة اللعاب ونخر األسنان ودرجة األسنان المتحللة والمفقودة‬
‫والممتلئة (‪ .)p <0.05( )DMFT‬كان هناك ارتباط كبير بين ‪ SM‬و ‪ LBs‬في أنسجة تسوس األسنان (‪ .)P <0.05‬ومع ذلك ‪ ،‬لم‬
‫يكن هناك فرق كبير بين ‪ SM‬و ‪ LBs‬المعزولة من عينات اللعاب (‪ .)P> 0.05‬كان عدد ‪ SM‬و ‪ LBs‬في األشخاص الذين يعانون‬
‫من تسوس نشط أعلى بكثير من أولئك الذين ليس لديهم تسوس نشط (‪ .)P <0.05‬لم يكن هناك فرق كبير بين العادات اليومية ودرجات‬
‫‪ SM‬و ‪ LB‬أو )‪ ، DMFT (p> 0.05‬باستثناء فرق كبير بين تكرار الفرشاة ودرجة )‪.DMFT (p <0.05‬‬

‫المقدمة‬
‫تسوس األسنان من األمراض المعدية‪ g‬الرئيسية التي تصيب غالبية سكان العالم‪ .‬يعتبر من أكثر األمراض انتشارًا ‪ ،‬ال سيما في‬
‫المجتمعات المتخلفة اجتماعيًا‪.‬‬

‫في العقود القليلة الماضية ‪ ،‬قدم بحث مستفيض معلومات مهمة حول الصلة بين تسوس األسنان والبكتيريا اللعابية ‪ ،‬وكشفت بعض‬
‫الدراسات عن وجود ارتباط كبير بين مستويات اللعاب من )‪ Streptococcus mutans (SM‬وظهور التسوس الالحق‪ .‬البيانات‬
‫الموجودة حول العالقة المحتملة بين مستويات اللعاب الملبنة (‪ )LB‬وظهور تسوس األسنان أقل إقناعًا‪ .‬لذلك ‪ ،‬قد تكون مستويات ‪LB‬‬
‫اللعابية مرتبطة بشكل غير مباشر بتطور تسوس األسنان‪.‬‬

‫نظ ًر ا ألن بكتيريا الفم تعتبر أحد العوامل المسببة لألمراض التي تدخل في تطور تسوس األسنان ‪ ،‬فقد تم إجراء العديد من الدراسات‬
‫الميكروبية لفهم مشكلة األسنان بشكل أفضل‪ .‬ومع ذلك ‪ ،‬هناك نقص في البيانات المتاحة حول اكتشاف التنوع الجرثومي لتسوس‬
‫األسنان في السكان البالغين اليمنيين‪ g.‬باإلضافة إلى ذلك ‪ ،‬لم تُنشر بعد دراسات مستقلة عن الثقافة تصف عدد الكائنات الدقيقة المميزة‬
‫في اللعاب واآلفات النخرية لدى البالغين اليمنيين‪ .‬وبالتالي ‪ ،‬هناك حاجة إلى معلومات حول العالقة بين توزيع ‪ SM‬و ‪ LBs‬وتطوير‬
‫تسوس األسنان‪ .‬تم التخطيط للدراسة الحالية للتحقيق في السكان البالغين في اليمن لتحديد‪ g‬الكميات النسبية من ‪ SM‬و ‪ LBs‬ودراسة‬
‫ارتباطهم بتسوس األسنان باستخدام ‪ PCR‬الكمي في الوقت الحقيقي‪.‬‬
 ‫البحث الرئيسي‬

‫الفحص السريري ومقابلة العادات اليومية‬

‫تم إجراء جميع الفحوصات باستخدام مرايا األسنان ومستكشف األسنان‪ .‬وفقًا لمعايير تشخيص تسوس األسنان لمنظمة الصحة‬
‫العالمية ‪ ،‬تم تقييم حالة صحة الفم السريرية ‪ ،‬ولوحظ تسوس (‪ ، )D‬وفقدان بسبب تسوس األسنان (‪ )M‬واألسنان المملوءة (‪( )T‬‬
‫‪ .)DMFT‬أجرى أحد الفاحصين الفحص السريري باستخدام معيار ‪ .DMFT‬تم الحصول على صورة شعاعية لجناح لدغة لكل‬
‫موضوع لتأكيد عمق اآلفة‪.‬‬

‫بعد الفحص السريري ‪ ،‬تم إجراء مقابالت مع جميع األشخاص حول عاداتهم اليومية لصحة الفم‪ .‬استخدمت هذه الدراسة استبيان‬
‫استبيان مقتبس من دراسات سابقة‪ .‬تم سؤال المفحوصين عن ممارسة نظافة الفم وتكرار استهالك السكر‪.‬‬

‫جمع العينات واستخراج الحمض النووي الجيني‬

‫تم استخراج عشرين عينة من أسنان نخرية ألفراد ‪ CA‬باستخدام حفارة ملعقة أسنان حادة ومعقمة‪ .‬تم حفر اآلفة في كل سن ‪ ،‬وتعليقها‬
‫في الكحول ‪ ،‬وحفظها عند ‪ 20-‬درجة مئوية حتى االستخدام‪ .‬تم وزن جرام واحد من قطعة العاج المسوسة وتم تفريقها يدويًا في البداية‬
‫عن طريق التدوير لمدة ‪ 20‬ثانية قبل استخراج الحمض النووي البكتيري‪.‬‬

‫تم جمع أربعين عينة من اللعاب لهذه الدراسة ‪ 20 ،‬عينة من أفراد التليف الكيسي و ‪ 20‬عينة من موضوعات ‪ .CA‬كان من المقرر‬
‫جمع اللعاب في الصباح الباكر في بداية اليوم السابق لتناول اإلفطار للمرضى‪ .‬طُلب من كل مريض ابتالع لعاب موجود مسبقًا ثم‬
‫مضغ قطعة قياسية من شمع البارافين ‪ ،‬وتم جمع ‪ 5‬مل من اللعاب المحفز في أنبوب معقم سعة ‪ 50‬مل ‪ ،‬والذي تم نقله بعد ذلك مباشرةً‬
‫إلى المختبر وحفظه عند درجة ‪ 20‬درجة مئوية‪ C .‬حتى تم استخدامه‪ .‬ثم تم استخراج الحمض النووي الجيني البكتيري الكلي من كل‬
‫عينة لعاب باستخدام تعديل بنا ًء على تعليمات دراسة منشورة‪.‬‬

‫السالالت بكتيرية‬

‫لوحظ في هذه الدراسة عدد السالالت البكتيرية الفموية من نوعين من أنواع الضوابط الداخلية إلنشاء منحنى معياري كمي‪ .‬تم عزل‬
‫‪ SM‬و ‪ LBs‬وتحديدهما وتأكيدهما عن طريق اختبار ‪ PCR‬التقليدي‪.‬‬

‫فحوصات ‪ PCR‬الكمية في الوقت الحقيقي‬

‫لتقدير المستوى اإلجمالي للعينات البكتيرية‪ ، g‬تم الحصول على ‪ qPCR‬للجين ‪ 16S rRNA‬المستهدف على أداة ‪ PCR‬في الوقت‬
‫الحقيقي ‪ ، Applied Biosystems( ABI 7000‬كاليفورنيا ‪ ،‬الواليات المتحدة) في حجم تفاعل إجمالي قدره ‪ 20‬ميكرولتر‪ .‬تم‬
‫وصف البادئات األمامية والعكسية المحددة المستخدمة في هذه الدراسة والتحقق من صحتها في مكان آخر‪ .‬تم إجراء اختبار ‪ PCR‬في‬
‫الوقت الفعلي بحجم إجمالي قدره ‪ 20‬ميكرولتر يتكون من ‪ 10‬ميكرولتر من ‪Solis( Eva Green qPCR Mix Plus ROX × 2‬‬
‫‪ ، Bio Dyne‬إستونيا) ‪ 2 ،‬ميكرومتر لكل تمهيدي أمامي وعكسي ‪ 5 ،‬ميكرولتر من قالب ‪ DNA‬و ‪ 3‬ميكرولتر من الماء الخالي من‬
‫‪ .DNA / RNAse‬تم اختبار كل عينة مرتين‪ .‬تم تعيين شروط التدوير الحراري لجميع فحوصات ‪ qPCR‬على النحو التالي‪ :‬دورة‬
‫واحدة عند ‪ 95‬درجة مئوية لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪ ،‬تليها ‪ 40‬دورة من التمسخ لمدة ‪ 15‬ثانية عند ‪ 95‬درجة مئوية ‪ ،‬والتلدين التمهيدي‪ g‬لمدة ‪20‬‬
‫ثانية عند ‪ 60‬درجة مئوية لـ ‪ SM‬و ‪ ، LBs‬واالستطالة لمدة ‪ 20‬ثانية عند ‪ 72‬درجة مئوية لـ ‪ SM‬و ‪ .LBs‬لبناء منحنيات قياسية‬
‫القياس ‪ ،‬احتوى خليط تفاعل ‪ qPCR‬على حجم إجمالي قدره ‪ 20‬ميكرولتر ‪ ،‬والذي يتكون من ‪Eva Green qPCR Mix × 10‬‬
‫‪ ، Solis Bio Dyne( Plus ROX‬إستونيا) ‪ 2 ،‬ميكرومتر لكل من التمهيدي األمامي والعكسي ‪ 5 ،‬ميكرولتر من قالب ‪DNA‬‬
‫الجينومي من السالالت البكتيرية المذكورة أعاله و ‪ 3‬ميكرولتر من الماء الخالي من الحمض النووي ‪ /‬الحمض النووي الريبي (تراوح‬
‫التركيز من ‪ 10‬نانوغرام ‪ /‬ميكرولتر إلى ‪ 10‬ميكروغرام ‪ /‬مل) [‪ .]14‬يتم التعبير عن النتائج بعدد الخاليا لكل مليلتر ‪ ،‬وفقًا لطريقة‬
‫الحساب الموصوفة في مكان آخر‪.‬‬

‫تحليل البيانات‬

‫تم جمع وتحليل جميع البيانات إحصائيًا بواسطة الحزمة اإلحصائية للعلوم االجتماعية اإلصدار ‪SPSS Inc. ، Chicago ،( 23.0‬‬
‫‪ .)IL‬بسبب االفتراضات التي لم تتحقق للتوزيع الطبيعي بعد نتائج اختبار شابيرو‪-‬ويلك (‪ ، )p <0.05‬تم استخدام االختبارات‬
‫الالمعلمية‪ .‬تم تحليل االرتباطات بين كل من البكتيريا ومؤشر ‪ DMFT‬بواسطة معامل ارتباط سبيرمان الالمعلمي‪ .‬تم استخدام‬
‫اختبارات ‪ Kruskal-Wallis‬و ‪ Mann-Whitney U‬لتحديد الفروق ذات الداللة اإلحصائية بين المجموعات‪ .‬تم اعتبار قيمة ‪ p‬أقل‬
‫من ‪ 0.05‬مهمة‪.‬‬

‫النتيجة‬
‫بنا ًء على نتائج ‪ ، qPCR‬تم اكتشاف ‪ SM‬و ‪ LBs‬في ‪ ٪ 100‬من البالغين اليمنيين (الشكل ‪ 1‬؛ الجدول ‪ )1‬يعرض االرتباطات بين‬
‫الكميات النسبية من ‪ SM‬أو ‪ LBs‬في كل من آفات اللعاب والتسوس ‪ ،‬مع عشرات ‪ .DMFT‬تم العثور على عالقة إيجابية بين ‪SM‬‬
‫المعزولة من عينات األنسجة اللعابية تسوس ولعاب ‪ CA‬ودرجة )‪ ، DMFT (p <0.05‬بينما لم يتم العثور على عالقة ذات داللة‬
‫إحصائية بين ‪ SM‬المعزول من أنسجة تسوس األسنان ودرجة )‪ .DMFT (p> 0.05‬لم يتم العثور على عالقة ذات داللة إحصائية‬
‫بين ‪ LBs‬المعزولة من عينات األنسجة اللعاب وتسوس مع درجة )‪ .DMFT (P> 0.05‬ومع ذلك ‪ ،‬كان هناك ارتباط عكسي كبير‬
‫بين ‪ SM‬و ‪ LBs‬المعزولة من أنسجة تسوس األسنان (‪.)P <0.05‬‬
‫عند مقارنة المجموعتين ‪ ،‬كان عدد‪ SM g‬و ‪ LBs‬في األشخاص الذين يعانون من تسوس نشط أعلى بكثير من أولئك الذين ليس لديهم‬
‫تسوس نشط (‪.)p <0.05‬‬

‫عالوة على ذلك ‪ ،‬ظهرت فروق ذات داللة إحصائية بين عينات اللعاب من موضوعات التليف الكيسي وعينات آفة اللعاب والتسوس‬
‫من موضوعات )‪ .CA (P <0.05‬ومع ذلك ‪ ،‬لم يكن هناك فرق بين عدد البكتيريا المعزولة من عينات آفة اللعاب والتسوس من‬
‫موضوعات )‪ .CA (P> 0.05‬تم العثور على درجات ‪ DMFT‬أعلى بشكل ملحوظ في موضوعات ‪ CA‬مقارنة بأفراد ‪CF (P‬‬
‫)‪ .<0.05‬األسنان المتحللة والمفقودة والممتلئة فيما يتعلق بأعداد ‪ SM‬و ‪ LBs‬ودرجات ‪ DMFT‬أظهرت أيضًا فروقًا ذات داللة‬
‫إحصائية (‪)p <0.05‬‬