Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

com

BÀI VIẾT ĐÁNH GIÁ Tạp chí Nông nghiệp, Tập 40 Số 4: 281-288 (Tháng 10-Tháng 12 năm 2019)

Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh
giá ngắn gọn
C. Kavipriya, A. Yuvaraja, K. Senthil, C. Menaka 10.18805/ag.R-1904

MỘTTỔNG HỢP
Nhiều thập kỷ ghi lại những bằng chứng thành công về công nghệ nông nghiệp đã cho chúng ta thấy một bức tranh rõ ràng về tầm quan trọng của công
nghệ sinh học trong cải tiến cây trồng. Sản xuất trong nông nghiệp cần có mức tăng trưởng ổn định và để đạt được mục tiêu này, các phương pháp truyền
thống phải đi song song với các phương pháp công nghệ sinh học. Kỹ thuật di truyền đã cách mạng hóa con đường cải tiến cây trồng liên quan đến việc xác
định và chuyển các gen mới vào các giống cây trồng ưu tú hiện có. Các phương pháp khác nhau để chuyển gen vào tế bào thực vật đã được phát triển và
những nỗ lực không ngừng đã được thực hiện để nâng cao hiệu quả của nó. Cả hai phương pháp chuyển gen trực tiếp và gián tiếp đều có những ưu điểm
và nhược điểm riêng. Những nỗ lực đã được thực hiện liên tục để loại bỏ những hạn chế và phát triển một phương pháp chuyển gen dễ dàng, ưu việt và
thân thiện với môi trường. Phương pháp biến nạp là cơ sở của kỹ thuật di truyền là rất quan trọng và vi khuẩn nông nghiệpchuyển gen qua trung gian và
súng bắn gen đã cho thấy hoạt động tốt trong những năm gần đây. Nhìn chung phương pháp luận
liên quan, ưu và nhược điểm của các phương pháp khác nhau đã được thảo luận ngắn gọn.

Từ khóa:vi khuẩn nông nghiệp,Gen, Súng bắn gen, Vi tiêm, Biến hình, Siêu âm.

Tcác công trình nghiên cứu chuyên sâu đã nâng cao tính chính xác
của gen được chuyển, sự tích hợp vào bộ gen chủ và biểu hiện sau
phiên mã của nó. Do tầm quan trọng của chúng trong nhân giống
cây trồng nên đây không phải là một lựa chọn thay thế. Sự tồn tại
liên tục của con người chỉ có thể thực hiện được bằng cách tăng sản
lượng và năng suất lương thực. Để đạt được điều này, các phương
pháp nhân giống cây trồng thông thường nên được sử dụng kết
hợp với các phương pháp công nghệ sinh học và phát triển một
phương pháp hiệu quả đáng tin cậy hơn (Altman, 1999). Kỹ thuật di
truyền tạo điều kiện thuận lợi cho việc chuyển giao dễ dàng các gen
liên gen, liên loài và thậm chí giữa các gen. Vương quốc. Việc phát
triển một công cụ có hệ thống để chuyển gen là rất quan trọng vì
nó làm cơ sở cho mọi công trình nghiên cứu về kỹ thuật di truyền.
Cả hai phương pháp trực tiếp và gián tiếp được phát triển cho đến
nay đều chứng tỏ tính hiệu quả của nó nhưng chúng cũng có
những nhược điểm riêng. vi khuẩn nông nghiệpChuyển gen qua
trung gian là phương pháp gián tiếp và có hiệu quả cao so với các
phương pháp khác được phát hiện bất ngờ trong quá trình tìm
kiếm tác nhân gây bệnh túi mật (Queet al., 2019). Sau khi hiểu được
cơ chế phân tử liên quan đến việc chuyển T-DNA vào vật chủ, nó đã
được phát triển thành một phương tiện thành công để chuyển gen
mà chúng ta quan tâm. Phương pháp súng gen là một phương
pháp vật lý đưa gen trực tiếp vào mục tiêu và nó không có vật chủ
cụ thể. Nhiều phương pháp khác như vi tiêm, điện di, chuyển gen
qua trung gian PEG, chuyển gen qua trung gian liposome, chuyển
DNA qua trung gian sợi, chuyển DNA do LASER gây ra (Wright,
1999), v.v., đã được phát triển. Trong hai thập kỷ qua, nhiều cải tiến
đã được thực hiện trong kỹ thuật biến nạp và dẫn đến sự phát triển
nhanh chóng trong phương pháp kỹ thuật di truyền trong các
chương trình nhân giống cây trồng. Công nghệ sinh học hiện đại
chuyển giao trình tự gen đã khắc phục được các rào cản như không
tương thích, vô sinh, rào cản trước thụ tinh, rào cản sau thụ tinh,
nguy cơ chuyển gen giữa các nhóm gen và giữa các sinh vật không
liên quan, các loài hoang dã có quan hệ họ hàng với nhau.
Khoa Giống cây trồng và Di truyền, Trường Cao đẳng Nông nghiệp
và Viện Nghiên cứu, TNAU, Madurai-625 104, Tamil Nadu, Ấn Độ.
Đồng tác giả:A. Yuvaraja, Khoa Giống cây trồng và Di truyền,
Trường Cao đẳng Nông nghiệp và Viện Nghiên cứu, TNAU,
Madurai-625 104, Tamil Nadu, Ấn Độ. Email: yugenics@yahoo.com
Cách trích dẫn bài viết này:Kavipriya, C., Yuvaraja, A., Senthil, K. và
Menaka, C. (2019). Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây
trồng: Đánh giá ngắn gọn. Nhận xét nông nghiệp. 40(4): 281-288.
Nguồn hỗ trợ:Không Xung
đột lợi ích:Không có
Đã gửi:22-05-2019Đã được chấp nhận: 21-10-2019Được phát hành: 12-06-2019
loài (Jeu, 2000),vân vân., Bài đánh giá này đưa ra một cuộc thảo luận ngắn
gọn về các phương pháp chuyển gen khác nhau.
PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN GEN
Gen quan tâm được xác định được chuyển vào mục tiêu bằng
các phương pháp khác nhau được phân loại thành hai loại.
Phương pháp liên quan đến việc sử dụng vectơ để chuyển gen
được gọi là phương pháp chuyển gen gián tiếp. Nếu việc
chuyển gen trực tiếp bằng các phương pháp vật lý và hóa học
khác nhau được gọi là phương pháp chuyển gen trực tiếp. Sự
đa dạng di truyền tồn tại ở các loài hiện có được phân tích để
xác định gen quan tâm có thể đáp ứng mục tiêu và một
phương pháp phù hợp để chuyển gen quan tâm đã xác định
được sử dụng để phát triển một giống cây trồng ưu tú (Bảng 1).
PHƯƠNG PHÁP GIAO TIẾP GEN GIÁN TIẾP
vi khuẩn nông nghiệpchuyển gen qua trung gian
vi khuẩn nông nghiệplần đầu tiên được xác định là tác nhân gây ra
bệnh túi mật (Stephen G. Rogers, 1986), là bệnh gram âm hình que
và hoại sinh độc lập trong đất khi không có vật chủ hoặc tồn tại như
một mầm bệnh khi có sự hiện diện của vật chủ.

Tập 40 Số 4 (Tháng 10-Tháng 12 năm 2019) 22

81
81
 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn

Bảng 1:Các phương pháp chuyển gen khác nhau

Phương pháp chuyển đổi Của cải Người giới thiệu

vi khuẩn nông nghiệpchuyển gen Ti-plasmid chứa T-DNA được sử dụng Slateret al., 2009)
qua trung gian trong quá trình chuyển đoạn DNA Vi
Khôngvi khuẩn nông nghiệpchuyển khuẩn chứa plasmid loại vi khuẩn Mullins, 2018
gen qua trung gian rhizobiumđược sử dụng
Phương pháp chuyển gen bằng virus Sự tích hợp gen vào bộ gen của virus Fiandaca và Federoff, 2014;
Patel và Misra, 2011
súng gen Vi sóng mang được phủ DNA được đưa trực Rajasekaran, 2013
tiếp vào mục tiêu dưới áp suất cao Các điện tích
điện di được sử dụng để tạo ra các lỗ trên màng giúp Young và Dean, 2015
DNA xâm nhập. Micropipette chứa đầy dung
Vi tiêm dịch DNA đưa gen mục tiêu đến nhân hoặc tế Saito, 2005
bào chất Sóng siêu âm đóng vai trò trong việc
siêu âm chuyển gen Akowuahet al., 2005; Cochran
và Wheatley, 2013
Chuyển gen thủy động lực Chuyển gen bằng áp suất thủy tĩnh Jinturkar, Rathi và Misra,
2011; Weiwei Wang, 2013
Polyethylene glycol (PEG) – gây Hợp chất polyether PEG bám vào DNA và vận Sahab, Hayden, Mason và
ra sự hấp thu DNA chuyển nó vào mục tiêu Spangenberg, 2019
Cung cấp gen qua trung gian liposome Liposome cation đưa DNA vào tế bào Kulkarni, Greiser, O'Brien và
chủ Pandit, 2010
Cung cấp gen qua trung gian sợi Sợi cacbua silic tạo điều kiện thuận lợi cho việc chuyển giao Simon và Foroughi-Wehr, 2000

máy chủ phù hợp. Cơ chế độc lực độc đáo của vi khuẩn nông
nghiệpđã được nghiên cứu hàng trăm năm và hiện nay nó đã
được phát triển như một kỹ thuật tiềm năng để chuyển gen.
Chế độ biến đổi này mang tính đặc trưng của vật chủ, có nghĩa
là sự phụ thuộc kiểu gen (BouchHEZ, 1995).
Tác nhân gây bệnhvi khuẩn nông nghiệpbao gồm ba biovar
(Slateret al., 2009),
• Agrobacteria tumefaciensphức hợp loài (biovar I)
• Agrobacteria rhizogenes(sinh học II)
• Viêm vi khuẩn Agrobacteria(sinh học III)
Biovar tôi chủngAgrobacteria tumefaciensBộ gen C58 lần
đầu tiên được giải trình tự và được đổi tên thành Vi khuẩn
phóng xạ Rhizobium. Chúng tạo ra khối u ở gốc và giao điểm
chồi ở nhiều cây một lá mầm thuộc nhiều họ khác nhau (Khung
et al., 2006). CácAgrobacteria tumefaciensvới Ti plasmid có độc
lực do sự hiện diện của T-DNA trong Ti plasmid và DNA này có
khả năng gây ra sự phát triển khối u ở vật chủ với sự trợ giúp
tạo ra nick để tạo ra một chuỗi T-DNA tuyến tính được
chuyển đến tế bào chủ để tạo ra khả năng gây bệnh. Cơ chế
tự nhiên này được khai thác để chuyển gen quan tâm đến
tế bào đích bằng cách chèn trình tự cần chuyển vào vị trí
của T-DNA (Christine Desfeux, 2000).
Cơ chế phân tử
Có ba hệ thống hai thành phần như sau (Nester, 2014).
1) Hệ thống chemotaxis hoạt động như một cảm biến hóa học
được giải phóng từ vị trí bị thương của cây và khiến vi
khuẩn di chuyển đến vị trí mục tiêu.
2) Hệ thống gen độc lực nhiễm sắc thể chvG/chvI xác định
tính axit và kích hoạt VirG.
3) Hệ thống VirA/virG là nhân tố chính thúc đẩy quá trình mã hóa
protein vir như một phản ứng đối với phenol thực vật.
I AAM

của các gen vir (gen độc lực). LB IaaaH

Cấu trúc plasmid Ti và cơ chế phân tử của chuyển T-DNA ipt

Ti plasmid bao gồm hai vùng T-DNA được chuyển vào tế hệ điều hành

bào chủ và vùng Vir giúp chuyển T-DNA vào vật chủ đích
RB
(Zhang,et al.2006). trinh nữ

T-DNA được bao quanh bởi các đoạn lặp trực tiếp gần
25bp, không hoàn hảo và được cho là viền trái (LB) và viền
phải (RB). Các gen mã hóa forauxin, cytokinin và opine đều
có trong T-DNA. Auxin và cytokinin tạo ra sự phân chia tế
bào không kiểm soát được dẫn đến hình thành khối u và Ori
opin đóng vai trò là chất dinh dưỡng cho sự phát triển của
vi khuẩn. Vùng vir bao gồm các gen vir (gen độc lực) với gần
11 operon và có thể mã hóa cho 35 protein gọi là protein vir Hình 1:Ti plasmid trong đó ranh giới LB-trái, ranh giới RB-phải,
trong đó có 20 protein tham gia vào quá trình hình thành vùng vir-vir, mã hóa iaaM và iaaH cho auxin, mã ipt cho cytokinin và
khối u. Protein vir nhận biết trình tự LB và RB và os - mã cho thuốc phiện tương ứng.

282 Nhận xét nông nghiệp

 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn
4) Sự biểu hiện cao nhất của gen vir diễn ra khi chvE gắn
vào monosaccharide do thực vật giải phóng.
Dòng tín hiệu của axit, phenol và đường kích hoạt gen
vir đã phát triển trong quá trình tiến hóa.
Nhận tín hiệu
VirA là một thụ thể màng (histidine kinase) với bốn miền
(miền ngoại chất - monosaccharide cảm nhận và tính axit
nhẹ, miền liên kết - nhận biết các hợp chất phenolic, miền
kinase - hoạt động như một chất xúc tác cho quá trình
phosphoryl hóa, miền nhận - yếu tố hát lên cho virG) và virG
đóng vai trò điều hòa phản ứng giữa các tế bào. VirA tự
phosphoryl hóa một dư lượng histidine cụ thể và chuyển
photphat thành dư lượng axit aspartic của virG mà cuối
cùng bắt đầu phiên mã các operon vir.
Sản xuất T-DNA
T-DNA được tạo ra bởi một phức hợp protein gọi là phức
hợp protein Relaxosome. Phức hợp protein bao gồm virD2,
virD1, virC1 và virC2 gắn vào trình tự biên của T-DNA. Chuỗi
đơn T-DNA tuyến tính được tạo ra bởi VirD2 và nó vẫn gắn
cộng hóa trị vào đầu 5' của chuỗi T (chuỗi đơn của T-DNA)
để tạo ra phức hợp nucleoprotein virD2-T-DNA. Tác dụng
của virD1 là tách vir D2 khỏi viền T- siêu xoắn (loại –I DNA
topoisomerase) và virC1. Và virC2 đóng vai trò là chất tăng
cường sản xuất T-DNA (Meyeret al., 2018).
Sự kết dính của tế bào vi khuẩn và tế bào chủ
Hệ thống liên kết gồm có hai loại gắn kết cực phụ thuộc
polysaccharide đơn cực (UPP) và gắn kết qua trung gian T
pilus.
Vận chuyển sợi chữ T
Kênh lỗ xuyên qua vỏ tế bào được tạo ra bởi Type
– Hệ bài tiết IV (T4SS) (Lacroix và Citovsky, 2018) bao gồm
11 protein vir B và vir D4 sẽ được biểu diễn dưới dạng virB/
virD4 T4SS. Do đó, phức hợp nucleoprotein virD2T-DNA
được truyền qua virB/virDA T4SS cùng với bốn protein vir
(virD5, virE2, virE3 và virF) (Nester, 2014). VirE2 hoạt động
như một protein liên kết chuỗi đơn và bảo vệ phức hợp khỏi
các nuclease của vật chủ. Phức hợp nucleoprotein virD2-T-
DNA cùng với lớp vỏ VirE2 được gọi là “T –complex” và cùng
với protein vir được chuyển vị khác được gọi là “siêu T-
complex” (M. Guo, Ye, Gao, Xu và Yang, 2019).
Tích hợp sợi T
VirE2 được mạng lưới nội chất lưu chuyển và bị phân hủy bởi
virF. Vir F tương tác với protein vip1 để phân hủy virE2 và được
bảo vệ khỏi sự phân giải protein và được ổn định bởi VirD5.
Việc tích hợp T-DNA vào bộ gen của vật chủ là bằng cách sử
dụng cơ chế sửa chữa DNA của vật chủ nhưng nó chưa được
chứng minh hoàn toàn. T-DNA chứa exon duy nhất được tích
hợp vào vùng được phiên mã tích cực của bộ gen chủ. Đầu 3'
của T-DNA có chất khởi động của sinh vật nhân chuẩn được gọi
là vi tương đồng giúp biểu hiện T-DNA(M. Guoet al., 2019).
Biểu hiện của T-DNA
Chúng thể hiện hai loại biểu hiện, một là biểu hiện nhất
thời trong đó gen được phiên mã mà không cần
Tập 40 Số 4 (Tháng 10-Tháng 12 năm 2019)
sự tích hợp vào bộ gen. Điều này xảy ra trong vòng 2-4 ngày kể từ
ngày chuyển giao nhưng nó không được truyền sang thế hệ con
cháu. Sự biến đổi ổn định tức là DNA được chuyển giao có thể được
truyền cho thế hệ con cháu và điều này xảy ra nhờ sự tích hợp DNA
được chuyển giao vào bộ gen của vật chủ trong vòng 10-14 ngày.
Do đó, tế bào chủ có DNA chuyển tích hợp phải được chọn và cây
chuyển gen phải được tái sinh (Tothet al., 2006).
Plasmid Ti đã được giải phóng là gen gây ung thư (gen mã
hóa auxin và cytokinin) sẽ bị cắt bỏ. Gen quan tâm được đặt
giữa các biên giới. Vì chủng Ti plasmid hoang dã có kích thước
100-2000 kb có nhược điểm là bị gãy, nên có một số vị trí bị hạn
chế bởi enzyme và để tránh vectơ nhị phân này, một vectơ chỉ
có T-DNA (mini Ti) và một vectơ khác chỉ có vùng vir (helperTi)
đã được phát triển ( Anami, 2013) (Hình 2).
Hiện nay, phương pháp này được các ngành dược phẩm khai
thác hiệu quả hơn để sản xuất dược phẩm sinh học và enzyme
trong thực vật. DNA đã được chuyển đến nấm men, nấm và tế bào
người được nuôi cấy trongtrong ống nghiệmtình trạng. Trong nhân
giống cây trồng, DNA đã được chuyển sang gần 23 loại cây trồng
(Annaet al. 2000; Wilkins,et al. 2010) (cây ký chủ và cây không phải
ký chủ) dài khoảng 50 ký tự. Nguy cơ tiềm ẩn của việc vô tình phát
hành các sản phẩm đã sửa đổivi khuẩn nông nghiệpnên tránh xâm
nhập vào môi trường bằng cách áp dụng các giao thức tiêu chuẩn
và cải tiến.
KHÔNG-NÔNG NGHIỆP-PHƯƠNG PHÁP DỰA TRÊN
Bốn thập kỷ trước khi người ta xác định được rằng một số
thành viên (Rhizobiaspp) củahọ Rhizobiaceaegia đình cũng có
khả năng chuyển gen sang vật chủ.Ensifer adhaerens,
Ochrobactrum haywardense và Rhizobium etlilà một số loài liên
quan đếnvi khuẩn nông nghiệpđã được sử dụng trong chuyển
gen nhưng chúng có nhược điểm là phạm vi vật chủ hạn chế
(Mullins, 2018) (Hình 3).
Chuyển gen qua trung gian virus
Các virus RNA và DNA lây nhiễm thực vật có thể được sử
dụng làm vật trung gian để chuyển gen đến mục tiêu. Gen
cần chuyển được tích hợp vào bộ gen của virus và lúc này
virus hoạt động như một vật trung gian truyền gen. Virus
mang gen được chuyển sẽ lây nhiễm vào tế bào đích và kết
quả là biến đổi thành công. Nhược điểm chính là số lượng
bản sao cao trên mỗi tế bào và virus-
Hình 2:Quá trình chi tiết liên quan đến việc chuyển đoạn gen
qua trung gianvi khuẩn nông nghiệpđã được biểu đồ hóa
giải thích (Guoet al., 2019).
22
83
83
 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn
Hình 3:Sơ đồ cây thể hiện mối quan hệ phát sinh loài giữavi khuẩn nông nghiệpvà những thứ khác khôngvi khuẩn nông nghiệploài thuộc về
bộ chung Rhizobiales (Slateret al., 2009).
Hình 4:Súng sinh học (researchgate.net).
chuyển gen qua trung gian chỉ có thể tạo ra sự chuyển gen
nhất thời chứ không phải là sự biến đổi ổn định vì chúng không
thể chuyển sang thế hệ con cháu. Một số vectơ virus được sử
dụng là Retrovirus, Adenovirus (Chailertvanitkul và Pouton,
2010), virus liên quan đến Adeno, virus Herpes, virus Pox,
Human Foamy Virus (HFV) và Lentivirus (Fiandaca và Federoff,
2014; Patel và Misra, 2011 ).
PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN GEN TRỰC TIẾP
PHƯƠNG PHÁP VẬT LÝ
Phương pháp phân phối DNA bằng súng hạt/sinh học/đạn đạo
Súng bắn gen/tiêm DNA đạn đạo/bắn phá hạt phủ DNA là
một phương pháp vật lý hiệu quả để đưa gen vào tế bào/
mô/cơ quan (Hình 4). Các hạt vàng, vonfram, bạc hoặc bất
kỳ kim loại nặng nào khác thường có kích thước 0,5-5µm và
trọng lượng 25mg được sử dụng làm chất mang DNA và
chúng được gọi là chất mang vi mô (John O'Brien 2002).
Giống như súng cầm tay, các vật liệu mang vi mô phủ băng
DNA được tăng tốc dưới áp suất cao 900psi (khí heli) và bắn
qua vật liệu thực vật (tế bào/mô/cơ quan). Băng DNA mang
theo vi sóng được đưa trực tiếp vào các mô ở độ sâu vài
mm. DNA được chuyển đến lớp mầm (L2) chỉ hữu ích để có
sự biến đổi ổn định. Không giống như phương pháp chuyển
gen gián tiếp, nó không có vật chủ cụ thể và do đó được sử
dụng thành công trong
284
nhiều loại cây trồng như thuốc lá, đậu nành, gạo, ngô (Liuet
al., 2019), lúa mì (Lazzeri, 1999), bông (Raj asekaran, 2013),
xoài (Andres Cruz-Hernandez), v.v., lớp phủ DNA trên chất
mang là rất quan trọng và nhiều quy trình đã được phát
triển trong khi các phương pháp thường được sử dụng là
giao thức Ca2+ và giao thức PEG /MgCl2. DNA và hỗn hợp
hóa chất kết dính trong lọ vi mô liên tục được khuấy trộn để
tạo ra chất mang vi mô (Rajasekaran, 2013).
Tần số biến đổi được quyết định bởi kích thước gen,
kích thước hạt, mẫu vật được sử dụng trong quá trình biến
đổi, tốc độ của hạt, v.v. và tần số biến đổi trung bình là 9,9%
nếu lượng nano DNA được sử dụng cùng với PEG làm vật
liệu phủ (Ismagulet al., 2018). Hạn chế chính được ghi nhận
là số lượng gen chuyển cao ở một mục tiêu và tổn thương
mô. Điều này sẽ dẫn đến sự im lặng của gen chuyển, sự
biểu hiện sai lệch của gen chuyển và gen chuyển có thể bị
mất. Phương pháp tạo ra vật liệu chuyển gen với một bản
sao gen chuyển đang được nghiên cứu. Việc sử dụng số
lượng nanogram của băng cassette DNA (đạn 40nm được
phủ 1µg YFP-DNA) thay vì plasmid hoàn toàn đã làm tăng
tần số của vật liệu chuyển gen với gen chuyển đơn bản và ít
gây tổn thương mô hơn (O'Brien và Lummis, 2011). Súng
bắn gen được cố định bên trong điều kiện vô trùng, thường
là buồng dòng khí tầng để tạo điều kiện chuyển đổi mà
không bị nhiễm bẩn. Vật liệu cần chuyển được bắn phá tối
đa một lần vì việc bắn phá nhiều lần hơn sẽ gây tổn thương
mô, cắt ngắn nhiễm sắc thể, mất đoạn lớn, trisomy một
phần và chu kỳ cầu nối đứt gãy, v.v. (Liuet al., 2019) mà cuối
cùng có thể gây tử vong. Những cây có phản ứng thấp với
nuôi cấy mô sẽ khó sử dụng súng bắn gen để chuyển gen.
Mặc dù phương pháp này có nhược điểm là nhiều phòng thí
nghiệm không có súng bắn gen và việc chuẩn hóa quy trình
khá khó khăn.
điện di
Phương pháp phân phối DNA không chứa virus cần hai thứ
cơ bản là axit nucleic cùng với huyền phù tế bào và điện
trường (Young và Dean, 2015). Protoplast cùng với axit
nucleic chịu tác động của điện trường trong một khoảng
thời gian ngắn. Màng tế bào được tích điện bởi lớp lipid kép
kỵ nước sẽ được căn chỉnh theo điện trường ứng dụng và
điều đó dẫn đến một lỗ trên màng tế bào gọi là lỗ kỵ nước
(Hình 5).
A) khi có điện trường tác dụng thì các phân tử điện tích
Nhận xét nông nghiệp
 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn

trong màng tế bào get albốc cháy và tạo thành lưỡng cực
dẫn đến sự hình thành các lỗ kỵ nước và kỵ nước (Henshaw,
et al.2006). B) một số lượng lớn các lỗ được hình thành ở cả
hai cực nhưng DNA chỉ đi vào ở cực dương vì DNA mang
điện tích âm get albốc cháy ở cực anode (Young và Dean,
2015).
DNA được căn chỉnh theo cực anode và được lỗ chân
lông xâm nhập vào tế bào. Phương pháp này gây ra sự biến đổi
tạm thời và ổn định trong tế bào (Yoshitoet al, 1991). Protoplast
được chuẩn bị cho quá trình biến đổi cùng với DNA được
chuyển sẽ chịu một điện trường được tạo ra trong thiết bị
chuyên dụng trong một khoảng thời gian ngắn thường là micro
giây (Wang và Lu, 2006). Các lỗ được hình thành tạo điều kiện
thuận lợi cho sự xâm nhập của DNA và tạo ra protoplast với
gen chuyển từ đó cây chuyển gen có thể được tái sinh.
Hiệu quả của phương pháp này được kiểm soát bởi nhiều
yếu tố như cường độ điện trường, thời gian xử lý, tính chất
của màng tế bào, tính chất của axit nucleic, v.v. (Kim, Lee và
Jung, 2010). Đoạn DNA tuyến tính dễ dàng biến đổi khi so
sánh với DNA vòng. Điện áp rất cao dẫn đến sự biến đổi ổn
định trong khi điện áp thấp dẫn đến sự biến đổi nhất thời
(Guo et al., 2012; Markelcet al., 2012). Phương pháp này đạt
được trên lúa, lúa mì, ngô thuốc lávân vân.
Vi tiêm
Tác động vi mô là một kỹ thuật phẫu thuật sử dụng
micropipette để đưa DNA trực tiếp vào nhân hoặc tế bào
chất. Bộ vi tiêm được kết nối với bộ điều khiển vi mô sẽ đưa
DNA vào mục tiêu (Baskaran và Dasgupta, 2011). Pipet giữ
giữ tế bào và pipet tiêm tiêm DNA và tất cả các quá trình
này diễn ra dưới kính hiển vi (Hosokawaet al., 2009). Đây là
một phương pháp phân phối DNA trực tiếp dễ dàng và hiện
nay để tăng hiệu quả vi tiêm mao mạch đã được phát triển
(Hình 6 và 7). Kích thước của micropipette thường là 0,5-
5µm (Saito, 2005).

Hình 5: Sự hình thành lỗ chân lông trên màng tế bào trong quá trình
điện di (researchgate.net).
siêu âm
Siêu âm, như tên cho thấy, nó liên quan đến việc tạo ra lỗ chân lông
bằng cách sử dụng các đặc tính của sóng siêu âm. Màng này bị mất
ổn định bằng cách sử dụng sóng âm. Phương pháp này đang được
nghiên cứu và chưa được thiết lập đầy đủ nhưng nó tạo điều kiện
thuận lợi cho việc phân phối DNA an toàn (Akowuahet al., 2005;
Cochran và Wheatley, 2013; Duet al., 2018; Salibaet al., 2012; Vương
Vi Vi, 2013; Yu, Chen và Yan, 2019).

Chuyển gen thủy động lực

Phương pháp phân phối DNA vật lý và không dựa trên virus
được thực hiện bằng cách làm mất ổn định màng tế bào bằng
cách tạo áp suất thủy tĩnh. DNA có thể dễ dàng xâm nhập qua
màng bị mất ổn định và dẫn đến sự biểu hiện tạm thời của gen
chuyển hoặc biểu hiện ổn định của gen chuyển. Phương pháp
này được sử dụng dễ dàng hơn trong nhiều ngành công nghiệp
dược phẩm (Jinturkaret al., 2011; Vương Vi Vi, 2013).
Hình 6 và 7:Cung cấp DNA bằng vi tiêm (Jinturkaret al., 2011).

ban 2: Ưu điểm và nhược điểm của các phương pháp chuyển gen khác nhau.
Phương pháp chuyển đổi Công trạng Nhược điểm

vi khuẩn nông nghiệpchuyển gen Chuyển đổi ổn định và cao Dành riêng cho máy chủ

qua trung gian tần số biến đổi Một cách

Khôngvi khuẩn nông nghiệpchuyển tiếp cận khác để vi khuẩn Phạm vi máy chủ hạn chế và
gen qua trung gian nông nghiệp tần suất chuyển đổi thấp Chỉ
Phương pháp chuyển gen bằng virus Phạm vi máy chủ rộng chuyển đổi nhất thời Số lượng
Súng bắn gen Dễ dàng hơn và có khả năng thích bản sao cao
điện di ứng cao Áp dụng cho nhiều loài và Khó chuẩn hóa liều lượng
thiết bị đơn giản
Vi tiêm Phương pháp dễ dàng Mất thời gian
siêu âm Cách tiếp cận thân thiện với môi trường Đang nghiên cứu và cần thêm
phát triển
Chuyển gen thủy động Dễ dàng và đáng tin cậy Cần phát triển hơn nữa
Polyethylene glycol (PEG) – Không cần thiết bị chuyên dụng. Việc tạo cây chuyển gen từ
gây ra sự hấp thu DNA Thủ tục đơn giản protoplast là khó khăn.
Cung cấp gen qua trung gian liposome Dễ bào chế, ít độc tính Về mặt Chỉ có thể có ở một số loài hạn chế Tần số
Cung cấp gen qua trung gian sợi kỹ thuật đơn giản biến đổi ít hơn

Tập 40 Số 4 (Tháng 10-Tháng 12 năm 2019) 22

85
85
 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn
PHƯƠNG PHÁP HÓA CHẤT
Polyethylene glycol (PEG) – gây ra sự hấp thu DNA
Polyethylene glycol là một hợp chất polyether có khả năng
gắn với DNA và cùng với Ca2+ chuyển DNA vào mục tiêu
bằng cách xuyên qua màng (Robert et al, 1983). Phương
pháp này đơn giản và không cần thiết bị chuyên dụng (Liu
và Vidali, 2011). Trong phương pháp này, mục tiêu là
protoplast và do đó phương pháp này bắt đầu bằng việc
chuẩn bị protoplast. Thông thường, thịt lá được sử dụng để
chế tạo protoplast. Đĩa lá được xử lý bằng enzym cellulose
và protease để phân hủy thành tế bào (Sahabet al., 2019).
Hỗn hợp enzyme có chứa chất thẩm thấu vì việc duy trì độ
trương là rất quan trọng trong khi điều chế protoplast và
protoplast được tinh chế bằng dung dịch mannitol.
Protoplast đã chuẩn bị được tạo huyền phù trong dung dịch
PEG/Ca2+ và dung dịch DNA có nồng độ 60µm. Lắc nhẹ
dung dịch DNA và protoplast rồi ủ trong thời gian ngắn.
Cuối cùng, thể nguyên sinh được xử lý bằng DNA được trải
trên môi trường thích hợp và thể nguyên sinh chứa ADN
được chuyển được phân lập bằng cách sử dụng chất đánh
dấu và tái sinh toàn bộ cây từ thể nguyên sinh được chuyển
sẽ tạo ra cây chuyển gen (Sahab).et al., 2019). Mặc dù
phương pháp này đơn giản và không có thiết bị đắt tiền
nhưng nó gặp khó khăn trong việc tái sinh thực vật từ
protoplast. Nồng độ của các hóa chất và DNA khác nhau
được chuẩn hóa dựa trên mục tiêu. Nhiều bản sao của DNA
mục tiêu được tạo ra bằng cáchE colihoặc PCR.
Cung cấp gen qua trung gian liposome
Túi chứa dung dịch nước nhỏ được bao quanh bởi lớp lipid
kép được gọi là liposome có đặc tính vận chuyển các chất
vào tế bào bằng cách kết hợp với màng tế bào. Đây là
những túi nhân tạo có thể đóng vai trò là tác nhân phân
phối các vật liệu ngoại sinh bao gồm cả gen chuyển. Chúng
được coi như một khối cầu gồm các lớp lipid kép bao quanh
phân tử để được vận chuyển và thúc đẩy quá trình vận
chuyển sau khi hợp nhất với màng tế bào (QR Chen, 2000).
Lipid cation là những chất có điện tích dương được sử dụng
để chuyển axit nucleic. Liposome có thể tương tác với màng
tế bào tích điện âm dễ dàng hơn so với liposome không tích
điện (Munyeet al., 2015). Do sự hợp nhất giữa liposome
cation và bề mặt tế bào dẫn đến việc đưa DNA trực tiếp qua
màng tế bào (Kulkarni et al., 2010).
Cung cấp gen qua trung gian sợi
Sợi cacbua silic tạo điều kiện thuận lợi cho việc đưa DNA
vào tế bào. Phương pháp này liên quan đến việc xoáy
huyền phù tế bào cùng với cacbua silic và DNA plasmid
(Simon và Foroughi-Wehr, 2000). DNA plasmid được gắn
vào sợi cacbua silic có khả năng đặc biệt là xuyên qua màng
tế bào và tạo ra các tế bào được chuyển hóa. Tế bào được
xử lý được kiểm tra dưới kính hiển vi để xác định tế bào có
gen chuyển và cây chuyển gen được tái sinh từ các tế bào
đã xác định (Skokut, 1999).
Ưu điểm và nhược điểm của các phương pháp chuyển gen khác
nhau
Mỗi phương pháp đều có ưu điểm và nhược điểm riêng liên quan
đến tính ổn định, tính đặc hiệu của máy chủ và khả năng sao chép.
286
con sốvân vân., được trình bày trong Bảng 2 theo gợi ý của
Jinturkaret al., 2011.
CTUYÊN BỐ
Dữ liệu trong 30 năm qua cho thấy có sự cải tiến liên tục
trong các phương pháp chuyển gen. Các phương pháp biến
đổi gen được áp dụng trong kỹ thuật di truyền đã thay đổi
con đường cải tiến cây trồng và dẫn đến những cải tiến
đáng kể trong sản xuất nông nghiệp, bảo vệ cây trồng và
cải tiến cây trồng. Những năm tới sẽ cho thấy nhiều cải tiến
liên quan đến việc phát triển một phương pháp biến đổi
gen dễ dàng, hiệu quả về mặt chi phí và quan trọng hơn.
RHIỆU QUẢ
Akowuah, EF, Gray, C., Lawrie, A., Sheridan, PJ, Su, CH,
Cá cược, T., Newman, CM (2005). Việc cung cấp DNA
plasmid TIMP-3 qua trung gian siêu âm vào tĩnh mạch
hiển dẫn đến tăng kích thước lòng trong mô hình ghép
xen kẽ của lợn. Gene There. 12(14): 1154-1157.
doi:10.1038/ sj.gt.3302498.
Anami, S., Njuguna, E., Coussens, G., Aesaert, S. và Van Lijsebettens,
M. (2013). Chuyển đổi thực vật bậc cao: nguyên tắc và
công cụ phân tử. Int J Dev Biol. 57(6-8): 483-494.doi:
10.1387/ijdb.130232mv.
Andres Cruz-Hernandez, LT, Antonino Cavallaro và Jose Ramon
Botella.). Sự biến đổi tạm thời và ổn định ở Mango bằng
cách bắn phá hạt. Châu Úc.
Anna Nadolska-Orczk, k., Wactcm, Orczvk và Anna Ptvetkiewicz
(2000) . Chuyển hóa ngũ cốc qua trung gian Agrobacter
ium - từ phát triển kỹ thuật đến ứng dụng Acta
Physiologiae Plantarum. 22: 77-88.
Baskaran, P. và Dasgupta, I. (2011). Chuyển gen bằng phương pháp vi tiêm
của Agrobacteria đến mô phân sinh đỉnh chồi phôi của
các giống lúa indica ưu tú. Tạp chí Hóa sinh thực vật và
Công nghệ sinh học. 21(2): 268-274. doi:10.1007/s13562-
011-0078-x.
BouchHEZ, NB a. D. (1995). Ở Planta Agrobacteria qua trung gian
Sự biến đổi của cây Arabidopsis thaliana trưởng thành bằng phương
pháp thấm chân không. Chuyển gen vào thực vật.
Chailertvanitkul, VA và Pouton, CW (2010). Adenovirus: một
kế hoạch chi tiết cho việc cung cấp gen không phải virus. Công nghệ sinh học
Curr Opin. 21(5): 627-632. doi:10.1016/j.copbio.2010.06.011.
Christine Desfeux, SJC và Andrew F. Bent. (2000). Nữ giới
mô sinh sản là mục tiêu chính của Agrobacteria
- Chuyển đổi qua trung gian bằng phương pháp nhúng hoa
Arabidopsis1. Physiol thực vật. 123: 895-900.
Cochran, M. và Wheatley, MA (2013). Cung cấp gen trong ống nghiệm
với các vi bọt polymer được kích hoạt bằng sóng siêu âm.
Siêu âm Med Biol. 39(6): 1102-1119. doi:10.1016/
j.ultramedbio. 2013. 01.013.
Du, X., Wang, J., Chu, Q., Zhang, L., Wang, S., Zhang, Z. và
Yao, C. (2018). Các kỹ thuật vật lý tiên tiến để chuyển gen
dựa trên sự thủng màng. Thuốc cung cấp. 25(1):
1516-1525. doi:10.1080/10717544.2018.1480674.
Fiandaca, MS và Federoff, HJ (2014). Sử dụng qua trung gian virus
chuyển gen vào mô hình bệnh Parkinson: các cuộc điều tra linh
trưởng trên người có mở rộng hiểu biết của chúng ta không? Exp
Neurol. 256: 117-125. doi:10.1016/j.expneurol.2013.03. 014.
Khung, BR, McMurray, JM, Fonger, TM, Main, ML, Taylor,
KW, Torney, F.J., Wang, K. (2006) . Cải tiến quá trình biến nạp
qua trung gian Agrobacteria của ba dòng ngô cận huyết sử
dụng muối MS. Tế bào Thực vật Đại diện 25(10): 1024- 1034.
doi:10.1007/s00299-006-0145-2.
Nhận xét nông nghiệp
 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn
Guo, H., Hao, R., Wei, Y., Sun, D., Sun, S. và Zhang, Z. (2012).
Tối ưu hóa các điều kiện truyền điện của tế bào động vật có
vú với các đặc điểm sinh học khác nhau. J Thành viên Biol. 245
(12): 789-795. doi:10.1007/s00232-012-9480-0.
Guo, M., Ye, J., Gao, D., Xu, N. và Yang, J. (2019).vi khuẩn nông nghiệp-
medi at ed hor izon tal chuyển gen f er: Mec hani sm, ứng dụng
công nghệ sinh học, nguy cơ tiềm ẩn và chiến lược ngăn chặn.
Công nghệ sinh học Adv. 37(1): 259-270. doi:10.1016/j. công nghệ
sinh họcv.2018.12.008.
Henshaw, JW, Zaharoff, DA, Mossop, BJ và Yuan, F. (2006).
Một phương pháp phát hiện phân tử đơn lẻ để hiểu các
cơ chế vận chuyển gen xen kẽ qua trung gian điện
trường. Điện hóa sinh học. 69(2): 248-253. doi:10. 1016/
j.bioelechem.2006.03.006.
Hosokawa, Y., Iguchi, S., Yasukuni, R., Hiraki, Y., Shukunami, C.
và Masuhara, H. (2009). Quá trình chuyển giao gen trong một
tế bào động vật sau khi tiêm vi tia laser femtosecond. Khoa
học bề mặt ứng dụng. 255(24): 9880-9884. doi:10. 1016/
j.apsusc.2009.04.111.
Ismagul, A., Yang, N., Maltseva, E., Iskakova, G., Mazonka, I.,
Skiba, Y., Langridge, P. (2018). Một phương pháp sinh học để
sản xuất cây lúa mì chuyển gen có năng suất cao bằng cách
chèn một gen. BMC thực vật sinh học. 18(1): 135. doi:10.1186/
s12870-018-1326-1.
Jeu, MJD (2000). Kỹ thuật invitro trong nhân giống cây cảnh
Acta Hort. 508: 55-60.
Jinturkar, KA, Rathi, MN và Misra, A. (2011). Cung cấp gen
Sử dụng phương pháp vật lý. Trong Những thách thức trong
việc cung cấp gen và protein trị liệu (trang 83-126).
John O'Brien, SCRL (2002). Một phương pháp chuẩn bị cải tiến
các chất mang vi mô để truyền tải sinh học. Giao thức nghiên
cứu não. 10: 12–15.
Kim, JA, Lee, WG và Jung, NC (2010). Điện tăng cường
chuyển giao gen qua trung gian sử dụng gen vận chuyển. Hóa học
điện sinh học. 78(2): 186-190. doi:10.1016/j.bioelechem.
2009.08.012.
Kulkarni, M., Greiser, U., O'Brien, T. và Pandit, A. (2010). Liposom
chuyển gen qua trung gian của giàn giáo thiết kế mô. Xu
hướng công nghệ sinh học. 28(1): 28-36. doi:10.1016/j.tibtech.
2009.10.003.
Lacroix, B. và Citovsky, V. (2018). Ngoài Agrobacteria-
Biến đổi qua trung gian: Chuyển gen ngang từ vi khuẩn sang
sinh vật nhân chuẩn. Curr Top Microbiol miễn dịch. 418:
443-462. doi:10.1007/82_2018_82.
Lazzeri, SR-GARPBPA (1999). Phân tích hạt
các thông số bắn phá để tối ưu hóa việc đưa DNA vào mô
lúa mì. Báo cáo tế bào thực vật. 19: 118–127.
Liu, J., Nannas, NJ, Fu, FF, Shi, J., Aspinwall, B., Parrott, WA
và Dawe, RK (2019). Sự gián đoạn trình tự quy mô bộ gen
sau quá trình biến đổi sinh học ở lúa và ngô. Tế bào thực
vật. 31(2): 368-383. doi:10.1105/tpc.18.00613.
Liu, YC và Vidali, L. (2011). Polyethylen glycol (PEG) hiệu quả
sự biến đổi qua trung gian của rêu Physcomitrella
patens. J Vis Exp(50). doi:10.3791/2560.
Markelc, B., Bellard, E., Sersa, G., Pelofy, S., Teissie, J., Coer, A.,
Cemazar, M. (2012). Hình ảnh phân tử in vivo và phân tích
mô học về những thay đổi gây ra bởi các xung điện được
sử dụng để truyền điện DNA plasmid tới da: một nghiên
cứu trong buồng cửa sổ phía sau ở chuột. J Thành viên
Biol. 245(9): 545-554. doi:10.1007/s00232-012-9435-5.
Meyer, T., Renoud, S., Vigouroux, A., Miomandre, A., Gaillard, V.,
Kerzaon, I., Lavire, C. (2018). Quy định về sự thoái hóa axit
hydroxycinnamic thúc đẩy lối sống của Agrobacter fabrum.
Tương tác vi khuẩn thực vật Mol. 31(8): 814-822. doi:10.1094/
MPMI-10-17-0236-R.
Mullins, DSR a. E. (2018). Thay thế không dựa trên vi khuẩn nông nghiệp
phương pháp chuyển đổi thực vật Đánh giá thực vật hàng
năm. 1: 1-17. doi:10.1002/9781119312994.apra0659.
Tập 40 Số 4 (Tháng 10-Tháng 12 năm 2019)
Munye, MM, Ravi, J., Tagalakis, AD, McCarthy, D., Ryadnov,
MG và Hart, SL (2015). Vai trò của liposome và peptide trong
việc tăng cường hiệp lực của quá trình truyền máu với vec tơ
lipopolyplex. Dân biểu khoa học 5: 9292. doi:10.1038/
srep09292.
Nester, EW (2014). Agrobacteria: kỹ sư di truyền của tự nhiên.
Khoa học thực vật phía trước. 5: 730. doi:10.3389/fpls.2014.00730.
O'Brien, JA và Lummis, SC (2011). Sinh học nano: một phương pháp
sự biến đổi sinh học của các tế bào và mô bằng cách sử dụng súng bắn
gen với các viên đạn có kích thước nanomet mới. Công nghệ sinh học
BMC. 11: 66. doi:10.1186/1472-6750-11-66.
Patel, DH và Misra, A. (2011). Cung cấp gen bằng cách sử dụng vectơ virus.
Trong những thách thức trong việc cung cấp gen và protein
trị liệu. (trang 207-270).
QR Chen, LZ, SA Stass và AJ Mixson. (2000). Đồng polyme của
histidine và lysine tăng cường rõ rệt hiệu quả truyền máu
của liposome. Liệu pháp gen. 7: 1698–1705.
Quế, Q., Chilton, MM, Elumalai, S., Zhong, H., Dong, S. và Shi,
L. (2019). Tái sử dụng các công cụ phân phối đại phân tử
để biến đổi di truyền thực vật trong kỷ nguyên kỹ thuật
bộ gen chính xác. Phương pháp Mol Biol. 1864: 3-18.
doi:10.1007/978-1-4939-8778-8_1.
Rajasekaran, K. (2013). Sự biến đổi sinh học của hợp tử bông
mô phân sinh phôi. Phương pháp Mol Biol. 958: 47-57. doi:10.
1007/978-1-62703-212-4_4.
Robert J. Klebe, JVH, Z. Dave Sharp và Michael G. Douglas
(1983). Một phương pháp chung để chuyển gen vi khuẩn
và nấm men nhờ polyethylen-glycol. 25: 333-341.
Sahab, S., Hayden, MJ, Mason, J. và Spangenberg, G. (2019).
Tế bào trần lá và sự chuyển gen qua trung gian PEG: Các
thử nghiệm nhất thời và tạo ra cây cải dầu chuyển gen ổn
định. Phương pháp Mol Biol. 1864: 131-152.
doi:10.1007/978-1-4939-8778-8_10.
Saito, HMAM (2005). Công nghệ vi tiêm thông lượng cao
hướng tới Điện sinh học đơn bào. Điện hóa học. 74:
12-18.
Saliba, Y., Mougenot, N., Jacquet, A., Atassi, F., Hatem, S., Fares,
N. và Lompre, AM (2012). Một phương pháp mới đưa gen phi
vi rút siêu âm đến cơ tim người trưởng thành. Tế bào J Mol
Cardiol, 53(6): 801-808. doi:10.1016/j.yjmcc.2012. 07.016.
Simon, M. và Foroughi-Wehr, B. (2000). Ức chế ngoại bào
Hoạt động DNase của vi bào tử lúa mạch với sự hiện diện
của sợi Polyethylene Glycol và Silicon Carbide. Tạp chí
sinh lý thực vật. 156(2): 184-189. doi:10.1016/s0176-
1617(00)80304-1.
Skokut, JFPNLHBDKM (1999). Qua trung gian râu
sự biến đổi mô sẹo phôi của ngô. Báo cáo tế bào thực
vật. 19: 781–786.
Slater, SC, Goldman, BS, Goodner, B., Setubal, JC, Farrand,
SK, Nester, EW, Wood, DW (2009). Trình tự bộ gen của ba
loại sinh học Agrobac terium giúp làm sáng tỏ sự tiến
hóa của bộ gen đa nhiễm sắc thể ở vi khuẩn. Tạp chí vi
khuẩn học. 191(8): 2501-2511. doi:10.1128/jb.01779-08.
Stephen G. Rogers, RBH và Robert T. Fraley (1986). gen
Chuyển giao trong thực vật: Sản xuất thực vật biến nạp bằng
vectơ Ti Plasmid. Các phương pháp trong Enzymoi.Ogy. 118:
627-640.
Toth, S., Kiss, C., Scott, P., Kovacs, G., Sorvari, S. và Toldi, O.
(2006). Chuyển gen qua trung gian Agrobacteria của cây
hồi sinh chịu hạnnấm Ramonda(L.) Rchb. Đại biểu Tế bào
Thực vật 25(5): 442-449. doi:10.1007/s00299-005-0083-4.
22
87
87
 Các phương pháp biến đổi gen để cải tiến cây trồng: Đánh giá ngắn gọn
Wang, HY và Lu, C. (2006). Nghiên cứu thông lượng cao và thời gian thực
của điện di tế bào đơn sử dụng vi lỏng: ảnh hưởng của độ
thẩm thấu trung bình. Công nghệ sinh học Bioeng. 95(6):
1116- 1125. doi:10.1002/bit.21066.
Weiwei Wang, WL, Nan Ma1 và Gustav Steinhoff. (2013). Không
Phương pháp cung cấp gen virut Công nghệ sinh học dược
phẩm hiện tại. 14: 46-60.
Wilkins, TA, Rajasekaran, K. và Anderson, DM (2010). Bông
Công nghệ sinh học. Nhận xét quan trọng trong khoa học thực vật.
19(6): 511-550. doi:10.1080/07352680091139286.
Wright, GH a. MS (1999). Những tiến bộ gần đây trong việc chuyển đổi
của thực vật. Xu hướng trong khoa học thực vật. 4: 226-231.
Yoshito Asano A, YOBAMUC (1991). Điện biến-
Phân phối DNA qua trung gian sợi silicon cacbua và qua trung
gian ở Agrostis alba L. (Redtop). Khoa học thực vật. 79: 247-252.
Young, JL và Dean, DA (2015). Gen qua trung gian điện di
vận chuyển. Cố vấn Genet. 89: 49-88. doi:10.1016/bs.adgen.
2014.10.003.
288
Yu, J., Chen, Z. và Yan, F. (2019). Những tiến bộ trong nghiên cứu cơ chế
về việc cung cấp gen siêu âm ở cấp độ tế bào. Prog Biophys
Mol Biol. 142: 1-9. doi:10.1016/j.pbiomolbio.2018.07.012.
Zhang, X., Henriques, R., Lin, SS, Niu, QW và Chua, NH
(2006) . Chuyển hóa qua trung gian Agrobacter ium của cây
Arabidopsis thaliana bằng phương pháp nhúng hoa. Nat
Protoc. 1(2): 641-646. doi:10.1038/nprot.2006.97.
Truy cập Mở Bài viết này được cấp phép theo Giấy phép Quốc tế
Creative Commons Ghi công 4.0, cho phép sử dụng, chia sẻ,
chuyển thể, phân phối và sao chép dưới bất kỳ phương tiện hoặc định dạng nào, miễn là bạn ghi công phù hợp
cho (các) tác giả gốc và nguồn, cung cấp liên kết tới giấy phép Creative Commons và cho biết liệu các thay đổi đã
được thực hiện hay chưa. Các hình ảnh hoặc tài liệu của bên thứ ba khác trong bài viết này được bao gồm trong
giấy phép Creative Commons của bài viết, trừ khi có quy định khác trong hạn mức tín dụng cho tài liệu. Nếu tài
liệu không có trong giấy phép Creative Commons của bài viết và mục đích sử dụng dự định của bạn không được
quy định pháp luật cho phép hoặc vượt quá mức sử dụng được phép, bạn sẽ cần phải xin phép trực tiếp từ
người giữ bản quyền. Để xem bản sao của giấy phép này, hãy truy cập http://creativecommons.org/ licenses/by/
4.0/.© (Các) tác giả 2019
ISSN: 0976-0539 (Trực tuyến), 0253-1496 (Bản in), Xếp hạng Naas: 4,37
Nhận xét nông nghiệp