ПУ “Св.

ПАИСИЙ ХИЛЕНДАРСКИ”

Катедра “Биохимия и микробиология”

Биологически факултет

ИЗОЛИРАНЕ И ПРЕЧИСТВАНЕ
НА ЕНЗИМИ

Лектор:
Проф. д-р Илия Илиев
 Молекулна
(20ºC)
Съединение Съкращение маса pK1 pK2 pK3 pK4
N-(2-Acetamido)-2-aminoethanesulfonic ACES 182,2 6,9 - - -
acid
N-(2-Acetamido)-2-iminodiacetic acid ADA 212,2 6,60 - - -
Acetic acid 60,1 4,76 - - -
Arginine Arg 174,2 2,17 9,04 12,48 -
Barbituric acid 128,1 3,79 - - -
N,N-bis(2-Hydroxyethyl)-2-
aminoethanesulfonic acid BES 213,1 7,15 - - -
N,N-bis(2-Hydroxyethyl)glycine Bicine 163,2 8,35 - - -
Boric acid 61,8 9,23 12,74 13,80 -
Citric acid 210,1 3,10 4,75 6,40 -
Ethylenediaminetetraacetic acid EDTA 292,3 2,00 2,67 6,24 10,88
Formic acid 46,03 3,75 - - -
Fumaric acid 116,1 3,02 4,39 - -
Glycine Gly 75,1 2,45 9,60 - -
Glycylglycine 132,1 3,15 8,13 - -
N-2-Hydroxyethylpiperazine-N’-2-
ethanesulfonic acid HEPES 238,3 7,55 - - -
N-2-Hydroxyethylpiperazine-N’-3-
propanesulfonic acid HEPPS 252,3 8,0 - - -
Histidine His 209,7 1,82 6,00 9,17 -
Imidazole 68,1 6,95 - - -
2-(N-Morpholino) ethanesulfonic acid MES 195 6,15 - - -
3-(N-Morpholino) propanesulfonic acid MOPS 209,3 7,20 - - -
Phosphoric acid 98,0 2,12 7,21 12,32 -
Succinic acid 118,1 4,18 5,60 - -
3-Tris TAPS 243,2 8,40 - - -
(hydroxymethyl)aminopropanesulfonic acid
N-Tris (hydroxymethyl)methyl -2-
Before extraction After extraction

hexane hexane

water water
ВЕРТИКАЛНА ЕЛЕКТРОФОРЕЗА

ХОРИЗОНТАЛНА ЕЛЕКТРОФОРЕЗА
Таблица 3.4
Свойства на гел пречистващата среда

Име Разделителен Water Regain Bed Volume

диапазон за (mL/g dry (mL/g dry
протеини gel) gel)
(далтони)
Декстран
(Сефадекс)
G-10 0-700 1,0 ± 0,1 2-3
G-15 0-1500 1,5 ± 0,2 2,5-3,5
G-25 1000-5000 2,5 ± 0,2 4-6
G-50 1500-30,000 5,0 ± 0,3 9-11
G-75 3000-80,000 7,5 ± 0,5 12-15
G-100 4000-150,000 10 ± 1,0 15-20
G-150 5000-300,000 15 ± 1,5 20-30
G-200 5000-600,000 20 ± 2,0 30-40

Полиакриламид
(Био-Гел)
P-2 100-1800 1,5 3,0
P-4 800-4000 2,4 4,8
P-6 1000-6000 3,7 7,4
P-10 1500-20,000 4,5 9,0
P-30 2500-40,000 5,7 11,4
P-60 3000-60,000 7,2 14,4
P-100 5000-100,000 7,5 15,0
P-150 15,000-150,000 9,2 18,4
P-200 30,000-200,000 14,7 29,4
P-300 60,000-400,000 18,0 36,0

Декстран –
Полиакриламид
(Сефакрил)
S-100 HR - - -
S-200 HR 5000-250,000 - -
S-300 HR 10,000- - -
1,500,000
Йонообменни смоли

Име Функционални групи матриц клас

а
Анионообмен Tetramehylammonium Polyster Силно
ници Tetriary amine en Слабо
AG1 Diethylaminoethy e Слабо
AG3 Polyethyleneimine Polyster Слабо
DEAE- Diethylaminoethy en Слабо
Sephacel Diethyl-(2-hydroxylpropul)- e Силно
PEI-Cellulose aminoethyl Sephace
DEAE- l
Sephadex Cellulos
QAE- e
Sephadex Dextran
Dextran
Катионообмен Sulfonic Polyster Силно
ници Carboxylic acid en Слабо
AG-50 Carboxymethyl e Слабо
Bio-Rex 70 Phosphate Acrylic Средн
CM- Sephacel Carboxymethyl Sephace о
P- Cellulose Sulfopropyl l Слабо
CM- Sephadex Cellulos Силно
SP- Sephadex e
Dextran
Dextran
 1. Oxalic Acid
2. Tartaric Acid
3. Malic Acid
4. Lactic Acid
5. Fumaric Acid

Column: Sulfonated PS-DVB, 300 x 6.5mm

Mobile Phase: 0.01N H2SO4
Flowrate: 0.8mL/min.
Detector: RI
 БЛАГОДАРЯ
ЗА
ВНИМАНИЕТО