Клинични анализи: Протокол №

Анализ на желязо в кръвен серум (FERRENE)

Студент: Група: Фак. №:

1. Принцип на теста

В слабо кисела среда се осъществява дисоциация на Fe от транферин-Fe

комплекса. Fe3+ се редуцира до Fe2+ под действието на аскорбинова киселина. Fe2+
образува интензивно оцветено комплексно съединение (λmax=595 nm) с динатриевата
сол на 3-(2-пиридил)-5,6-ди(2-фурил)-1,2,4-триазин-5‘,5‘‘-дисулфонова киселина,
известна под търговско наименование – FERRENE.

Структурна формула на Ferrene

аскорбинова киселина
Трансферин(Fe3+)2 2Fe2+ + Трансферин

Fe2+ + Ferrene → цветен комплекс

Пречещи влияния: Възможна интерференция: Cu+ образува комплекс с ферен. Като

маскиращ реагент се използва тиоурея, която свързва интерферента под формата на
комплексно съединение.
1. Експретиментална част

Реактиви: R1-Буфериращ разтвор – ацетатен буфер pH=4.65, диметилсулфоксид; R2-

Хромогенен реагент – ферен, аскорбинова киселина; Стандартен разтвор на Fe 5000
µg/dl; Дестилирана вода.
Проба: Kръвен серум.
Прибори: Пипети, Епруветки (14 mL), Kювети за UV-VIS анализ, Аналитична везна,
UV-VIS спектрометър.
2.1. Калибрационни стандарти за Fe - разтворите се приготвят тегловно
(аналитична везна) чрез разреждане с дестилирана вода.

Таблица 1 Приготвяне на калибрационни стандарти

Cизх., Vизх., mкр., Cкр.,

St
[µg/dl] [µl] [g] [µg/dl]
0 5000 (10) 0
1 5000 (10) 50
2 5000 (10) 100
3 5000 (10) 200
4 5000 (10) 400

AFe = 55.845 g/mol

 1.2 . Подготовка на разтвори за UV-VIS анализ (работи се при стайна
температура).
Фактор на разреждане на стандартите и пробите с комбиниран реагент – 13.5
(DF = 13.5).
NB! РАЗТВОРИТЕ СЕ ХОМОГЕНИЗИРАТ БЕЗ ЕНЕРГИЧНО РАЗКЛАЩАНЕ –
ОПАСНОСТ ОТ ОБРАЗУВАНЕТО НА ГОЛЯМО КОЛИЧЕСТВО ПЯНА!

В 14 mL епруветки се отпипетират по 0.1 mL от разтворите на стандарти и

проби. Прибавя се 1 mL от буфериращия реагент – R1. Разтворите се хомогенизират
внимателно, без енергично разклащане и се прехвърлят в кювети. Имерва се
абсорбцията А1. Разтворите се връщат в работните епруветки и се добавят 0.25 mL от
хромогенния разтвор R2. Пробите се хомогенизират внимателно и се изчаква 5 min.
Разтворите се прехвърлят в кювети и отчита абсорбцията A2.

Таблица 2 Приготвяне на разтвори за UV-VIS анализ и опитни данни

VПроба, VR1, A1 VR2, A2 Cпроба,
Проба ∆A µg/dl
mL mL 595 nm mL 595 nm
St 0 0.1 1 0.25
St 50 µg/dl 0.1 1 0.25
St 100 µg/dl 0.1 1 0.25
St 200 µg/dl 0.1 1 0.25
St 400 µg/dl 0.1 1 0.25
Контрола 0.1 1 0.25
X1 0.1 1 0.25
X2 0.1 1 0.25
X3 0.1 1 0.25
∆А=А2-
0.82А1

2.3. Изчисляване на концентрацията на Fe

2. РЕЗУЛТАТИ:

Пациент Резултат Норма

40-155 µg/dl

7.2-27.7 µmol/L

Извършил анализа:
Дата:

Проверил:....................