Аналитична надеждност

Специфичност, чувствителност,
интерференции

Доц. Бисера Атанасова

Модул 2020 г
Аналитична чувствителност

Способността на метода да различи със сигурност най-

малки вариации /разлики/ в концентрациите на
изследваната съставка
 представя се чрез наклона на калибрационната крива
 зависи от възпроизводимостта на метода
 критична разлика: 2.88xSDсерия
Аналитична чувствителност

Калибрационна крива за желязо

Slope
=
∆A/∆C
0,2

0,15
Abs (corr)

0,1 y =0,000844.x - 0,0048

0,05

0
0 50 100 150 200 250 300
Концентрация µg/dL

Concentration
Аналитична специфичност

Способност на аналитичната процедура да определя

специфично концентрацията на определена “прицелна”
съставка в присъствие на потенциално интерфериращи
субстанции или фактори в матрикса на пробата
 липемия, хемолиза, иктер
 антикоагуланти
 метаболитни продукти
 лекарства и техни метаболити
 хетерофилни антитела при имунологичните методи
Аналитична интерференция

Ефект на съставки на пробата върху резултата на

изследвания параметър

Фалшиво променен резултат поради:

 ендогенни интерференти: хемолиза, липемия, иктер,
парапротеини
 екзогенни интерференти
 In vivo и In vitro интерференции
Интерференции при фотометричните методи:
ефект върху абсорбционния сигнал
Аналитична интерференция - механизъм

Хемолиза: освобождаване на вътреклетъчни компоненти от

еритроцитите и други кръвни клетки
 повишени вътреклетъчни компоненти в
есктрацелуларното пространство: K, Mg, LD, AST
 спектрални интерференции: хемоглобин 415 нм
повишение или намаление: ефектът зависи от
метода и концентрацията на изследваната съставка
Аналитична интерференция - механизъм

Хемолиза
Химични интерференции:
 аденилат киназа от еритроцитите – повишена активност на
СК и МВ
 свободен Hb– псевдо POD активност – блокира
образуването на диазониева сол – колориметричен метод за
билирубин
 протеази от кръвните клетки намаляват активността на
плазмените коагулационни фактори – интерференция при
хемостазните показатели
 Hb може да реагира с някои съставки на реагента
Аналитична интерференция - механизъм

Билирубин
 спектрална интерференция: 340 - 500 nm – висока
абсорбция на сляпата проба
в силно кисела среда шифт на абсорбцията към UV
в алкална среда се окислява – губи абсорбционните си
свойства
Аналитична интерференция - механизъм

Билирубин
 химична интерференция:
при POD реакция: негативна – отклонява Н2О2
негативна интерференция при Jaffe реакцията – креатинин
албумин – конкурира белтъка за свързване с багрилото –
негативна
Аналитична интерференция - механизъм
Липемия
спектрална интерференция – разсейване на светлината
 степента на разейване зависи от големината, броя и
индекса на рефракция на липидните частици
 най-голямо разсейване - от по – големите частици
хиломикрони и VLDL
положителна или отрицателна интерференция – зависи от
процедурата за корекция със сляпа проба
Аналитична интерференция - механизъм

Липемия
eфект на изчерпване на обема – volume depletion effect
 намаляване на водната фаза в обема на пробата –
намалена концентрация на съставки, разтворени във
водната фаза
 мастно – разтворими съставки – лекарства,
траспортирани с липопоретини – повишена концентрация
Аналитична интерференция - механизъм

Липемия
Физико-химични ефекти
 ограничен достъп на мастно-разтворима съставка до
реагентите от водната фаза
 повлияване на електрофоретичните и хроматографски
процедури от липопротените в матрикса на пробата
Ендогенни интерференции при имунологичните
методи
 оптични измерителни системи – ELISA и флоуресцентните
техники
 по-малко влияние при CLIA/ECLIA
 eндогенни хетерофилни Ab: RF, анти – animal Ab,
неспецифични Ab: повлияват свързването Ag – Ab
 хемолиза – повлиява Ag – Ab – положителна или
отрицателна интерференция
 иктер – интерференциите не са обичайни при CLIA
технологиите
 липемия: разтворимост на Ag в липидната фаза – не може
да се свърже с Ab
Оценка на качеството на пробата: измерване на
серумни индекси

Бихроматични измервания
 измерване на липемията при 700/660 nm - хемолизата и
иктерът не влияят
 измерване на хемолизата при 600/570 nm и се прави
корекция с абсорбцията от липемията
 измерване на иктера при 505/480 nm и се прави корекция с
абсорбциите от липемията и хемолизата
Оценка на качеството на пробата: измерване на
серумни индекси

L- index H – index I -index

Аналитична интерференция
Парапротеинемия
 повишен вискозитет на серума: пипетиране на подходящия
обем
 IgG - образуване на макрокомплекси с СК: повишена серумна
активност
 IgG - образуване на макрокомплекси с LH: инхибира
ензимната активност
Интерференции: модели на проучване

 разлика между проба с добавка и базисната проба /по 20

определяния/
 количество на добавения интерферент: крайната
концентрация в пробата, близка до максималната
физиологична концентрация
 лекарствена интерференция: концентрацията отговаря на
терапевтичната плазмена концентрация
 оценка на разликата между средните стойности в двете
проби: Student’s t-test, p= 0.01
 оценка: разлика > 3SD between-runs
 медицинска оценка
Надеждност на лабораторните резултати

Изискванията за качество зависят от:

o строг физиологичен контрол, тесен референтен интревал:
по-високи изсквания
o клиничните нужди
o разходи
o намаляването на CV% особено при мултифакториална
вариация
Надеждност на лабораторните резултати: подходи
за намаляване на грешките

Преаналитични фактори на вариация

Пре-аналитични грешки: подходи за намаляване
 изготвяне на ясно написани указания за етапа
 обучение – подобряване на професионалната подготовка на
персонала
 автоматизиране на дейностите в преданалитичния етап
 въвеждане на индикатори за качество – възможност за
регистиране на броя на грешките и последващ анализ на
факторите за възникване – база за провеждане на
превантивни мерки
Надеждност на лабораторните резултати: подходи
за намаляване на грешките

Аналитични вариация:
 непрекъснато подобряване на възпроизводимостта и
достоверността
 оптимизиране на стандартизирането и калибрационните
процедури
 намалена аналитична вариация: гаранция за адекватна
клинична интерпретация
Постаналитична вариация:
 оптимизирано оборотно време
 оптимизирана комуникация