Диана Иванова

Бистра Галунска
Милка Нашар
Мария Раданова
Йоана Киселова-Кънева

ЗАДАЧИ И ПРАКТИЧЕСКИ
УПРАЖНЕНИЯ ПО
БИОХИМИЯ
Ръководство за студенти по медицина
Под общата научна редакция на
проф. Диана Иванова, дбн

2016
Диана Георгиева Иванова
Бистра Цанева Галунска
Милка Аспарухова Нашар
Мария Атанасова Раданова
Йоана Димитрова Киселова-Кънева

ЗАДАЧИ И ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ПО БИОХИМИЯ

Ръководство за студенти по медицина
Второ преработено и допълнено издание, 2016

Под общата научна редакция на проф. Диана Иванова, дбн

Рецензенти: доц. Татяна Янкова, дб; проф. Татяна Влайкова, дб

Печат: „Хеликс прес“ – Варна

ISBN ……………………………..

2
ПРЕДГОВОР

На вниманието на читателите на настоящото четиво предлагаме редактирано и

обновено издание на “Задачи и практически упражнения по биохимия”, съобразено с
единните държавни изисквания за преподаването по биохимия в медицинските
университети. Ръководството, съдържащо задачи, тестови въпроси, клинични казуси с
патобиохимична насоченост и въпроси по тематичното съдържание на основния
лекционен курс по биохимия при Медицински университет „Проф. д-р Параскев Стоянов“
– Варна, е предназначено за работа по време на семинарните и практически занятия на
студентите по медицина. Изданието е съобразено с актуализираната учебна програма на
курса по биохимия и е плод на съвместната работа на преподаватели от Катедрата по
биохимия, молекулна медицина и нутригеномика при МУ-Варна. На нашите студенти
изказваме дълбоката си благодарност за препоръките и конструктивната критика, за да
имаме днес това подобрено издание за общата ни бъдеща работа.

Проф. Диана Иванова, дбн

3
ИЗПОЛЗВАНИ СЪКРАЩЕНИЯ
АМФ аденозинмонофосфат
AДФ аденозиндифосфат
АТФ аденозинтрифосфат
цАМФ цикличен аденозинмонофосфат
АКФ активни кислородни форми
АлАТ аланин аминотрансфераза
АЛК -аминолевулинат
АК аминокиселини
АПБ ацил-пренасящ белтък
апо- апопротеин
АсАТ аспартат аминотрансфераза
АХАТ ацилхолестерол ацилтрансфераза
АЦ аденилат циклаза
1,3-БФГ 1,3-бисфосфоглицерат
ВМК висши мастни киселини
ГАГ глюкозаминогликани
ГМФ гуанозинмонофосфат
ГДФ гуанозиндифосфат
ГТФ гуанозинтрифосфат
дГТФ дезоксигуанозинтрифосфат
цГМФ цикличен гуанозинмонофосфат
Глу глутамат
Глн глутамин
ГНГ глюконеогенеза
ГОТ глутамат оксалацетат трансаминаза
ГП гликопротеини
ГФДХ глицеролфосфат дехидрогеназа
ДАГ диацилглицерол
ДНК дезокирибонуклеинови киселини
ДХ дехидрогеназа
ДХАФ дихидроксиацетонфосфат
ЕР ендоплазматичен ретикулум
ЖК жлъчни киселини
ИМФ инозинмонофосфат
-КГ -кетоглутарат
КоАSH (КоА) коензим А
КТ кетонови тела
ЛХAT лецитин холестеролацилтрансфераза
МАГ моноацилглицероли
НАД+ никотинамидадениндинуклеотид, окислена форма
НАДН никотинамидадениндинуклеотид, редуцирана форма
НАДФ+ никотинамидадениндинуклеотид фосфат, окислена форма
НАДФН никотинамидадениндинуклеотид фосфат, редуцирана форма
ОА оксалоацетат
ПДХ пируватдехидрогеназа
ПКА протеинкиназа А
ПФП пентозофосфатен път
ПХ паратхормон
РНК рибонуклеинови киселини
СОД супероксид дисмутаза
ТАГ триацилглицероли

4
ТАФ тромбоцитно-активиращ фактор
дТМФ дезокситимидинмонофосфат
дТТФ дезокситимидинтрифосфат
УДФ уридиндифосфат
дУМФ дезоксиуридинмонофосфат
ФАД флавинадениндинуклеотид
ФМН флавинмононуклеотид
ФН4 тетрахидрофолиева киселина
ФРФФ 5-фосфорибозил-1-пирофосфат
Фн неорганичен фосфат
ФФ пирофосфат
ФФК фосфофруктокиназа
ХГФРТ хипоксантин/гуанинфосфорибозил трансфераза
ХЕ холестеролови естери
ХМГ-КоА редуктаза хидроксиметилглутарил-КоА редуктаза
ХМ хиломикрони
Х холестерол
ХЧЛ хормон чувствителна липаза
ЦМФ цитидинмонофосфат
ЦДФ цитидиндифосфат
ЦТФ цитидинтрифосфат
ЦТК цикъл на трикарбоновите киселини
BSA говежди серумен албумин
GLUT транспортни протеини за глюкоза
GSH глутатион, редуцирана форма
GSSG глутатион, окислена форма
Hb хемоглобин
НbF фетален хемоглобин
HDL High Density Lipoproteins (високоплътностни липопротеини)
LDL Low Density Lipoproteins (липопротеини с ниска плътност)
MAP-киназа митогенактивирана протеинкиназа
S-АМ S-аденозилметионин
VLDL Very Low Density Lipoproteins (липопротеини с много ниска плътност)

5
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Инструкция за безопасна работа на студентите в лабораториите и учебните зали по
време на упражненията по биохимия в МУ – Варна ........................................................... 8
2. Упражнение No 1 “Аминокиселини”: Аминокиселини, влизащи в състава на белтъците9
3. Упражнение No 2“Белтъци І”: Белтъци – структура и функции ....................................... 15
4. Упражнение No 3“Белтъци ІІ”: Глобуларни и фибриларни белтъци................................ 19
5. Практически упражнения върху “Белтъци”:
5.1.Определяне на изоелектрична точка на казеин.................................................................. 25
5.2.Количествено определяне на белтък по абсорбцията в ултравиолетовата област ......... 26
5.3.Определяне съдържанието на хемоглобин по метода на Драбкин .................................. 28
6. Упражнение No 4 “Ензими І”: Особености на ензимите като биокатализатори.
Номенклатура и класификация. Изоензими. Водоразтворимите витамини като ензимни
кофактори. Кинетика на ензимното действие. .................................................................... 29
7. Упражнение No 5 “Ензими ІІ”: Регулация на ензимната активност. Обратимо и
необратимо инхибиране на ензимното действие. Алостерични ензими. Конститутивни и
индуцируеми ензими. ............................................................................................................ 33
8. Практически упражнения върху “Ензими”:
8.1.Доказване абсолютната специфичност на уреаза .............................................................. 38
8.2.Изчисляване на Кm и Vmax на различни ензими по готови данни чрез метода на
Лайнуивър и Бърк ................................................................................................................. 39
9. Упражнение No 6 “Биоенергетика І”: Макроергични съединения. Биологично
окисление. Окислително фосфорилиране. Устройство на дихателната верига ............... 40
10. Упражнение No 7 “Биоенергетика ІІ”: Скъсени електрон-пренасящи вериги. Свободно-
радикалово окисление и антиоксидантна защита ............................................................... 46
11. Практически упражнения върху “Биоенергетика”:
11.1. Получаване и доказване на цитохром с оксидаза и пероксидаза от мускулна тъкан..50
11.2. Количествено определяне на тотални полифеноли в екстракти от растения по метода
на Folin-Ciocalteu ................................................................................................................... 51
12. Упражнение No 8 “Обмяна на въглехидрати І”: Храносмилане на въглехидрати и
транспорт на монозахариди в клетките. Гликолиза............................................................ 52
13. Упражнение No 9 “Обмяна на въглехидрати ІІ”: Пътища за разграждане на пируват.
ЦТК. Пентозо-фосфатен път ................................................................................................. 59
14. Упражнение No 10 “Обмяна на въглехидрати ІІІ”: Глюконеогенеза, гликогеногенеза и
гликогенолиза ......................................................................................................................... 65
15. Упражнение No 11 “Обмяна на въглехидрати ІV”: Метаболизъм на маноза, фруктоза,
галактоза и лактоза................................................................................................................. 71
16. Упражнение No 12 “Обмяна на въглехидрати V”: Гликопротеини и
глюкозаминогликани ............................................................................................................. 75
17. Упражнение No 13 “Обмяна на въглехидрати VІ”: Обобщение върху въглехидратна
обмяна...................................................................................................................................... 80
18. Практически упражнения върху “Обмяна на въглехидрати”:
18.1. Доказване на продуктите от алкохолната ферментация ................................................ 84
18.2. Построяване на кръвнозахарни криви на здрав индивид и на болен от захарен диабет
с помощта на глюкозооксидазен тест ................................................................................. 85
18.3. Доказване на фруктоза в урина с проба на Селиванов................................................... 88
19. Упражнение No 14 “Обмяна на липиди І”: Смилане и абсорбция на липидите от
храната. Транспорт на екзогенни липиди. ........................................................................... 89
20. Упражнение No 15 “Обмяна на липиди ІІ”: Липолиза. Разграждане на висши мастни
киселини с четен и нечетен брой С-атоми. Кетогенеза и кетолиза. .................................. 93

6
21. Упражнение No 16 “Обмяна на липиди ІІІ”: Биосинтез на висши мастни киселини и
триацилглицероли. Транспорт на ендогенни липиди в кръвта .......................................... 99
22. Упражнение No 17 “Обмяна на липиди ІV”: Биосинтез на холестерол и жлъчни
киселини. Транспорт на холестерол в кръвта – роля на LDL и HDL. ............................. 105
23. Упражнение No 18 “Обмяна на липиди V”: Метаболизъм на комплексни липиди и
ейкозаноиди .......................................................................................................................... 113
24. Практически упражнения върху “Обмяна на липиди”:
24.1. Полуколичествено определяне на кетонови тела в урина с тест ленти по метода на
Легал ..................................................................................................................................... 119
24.2. Количествено определяне на триацилглицероли (ТАГ) в кръвен серум .................... 120
24.3. Количествено определяне на общ холестерол в кръвен серум .................................... 121
25. Уражнение No 19 “Обмяна на аминокиселини І”: Храносмилане на белтъци.
Трансаминиране на аминокиселини. Окислително и неокислително дезаминиране на
аминокиселини. Обезвреждане на амоняк. ........................................................................ 122
26. Упражнение No 20 “Обмяна на аминокиселини ІІ”: Обмяна на отделни
аминокиселини. .................................................................................................................... 128
27. Практически упражнения върху “Обмяна на аминокиселини”:
27.1. Определяне активността на аланин аминотрансфераза (АлАТ) в кръвен серум. ...... 133
27.2. Определяне активността на аспартатаминотрансфераза (АсАТ) в кръвен серум. ... 134
27.3. Определяне на урея в кръвен серум ............................................................................... 135
28. Упражнение No 21 “Обмяна на порфирини”: Биосинтез и разграждане на хем.
Нарушения в обмяната на хем – порфирии. Хипербилирубинемии. Обмяна на желязото.
............................................................................................................................................ 137
29. Практическо упражнение върху “Обмяна на порфирини”: Количествено определяне на
общ и директен билирубин в кръвен серум. ...................................................................... 143
30. Упражнение No 22 “Обмяна на нуклеотиди І”: Синтез и разграждане на пуринови
нуклеотиди. Хиперурикемии............................................................................................... 144
31. Упражнение No 23 “Обмяна на нуклеотиди ІІ”: Синтез и разграждане на
пиримидинови нуклеотиди. Биосинтез на дезоксирибонуклеотиди. .............................. 149
32. Практическо упражнение върху “Обмяна на нуклеотиди”: Количествено определяне на
пикочна киселина в кръвен серум. ..................................................................................... 153
33. Упражнение No 24 “Хранене и метаболизъм на ксенобиотици”: Метаболизъм на
ксенобиотици и ендобиотици. Нутриенти. Хранене. ........................................................ 154
34. Упражнение No 25 “Обмяна на калций”: Хормони, регулиращи калциевия и
фосфатния метаболизъм. ..................................................................................................... 160
35. Упражнение No 26 “Междуклетъчна сигнализация І”: Общи принципи на
междуклетъчната сигнализация. Видове рецептори. Вътреклетъчни рецептори,
рецептори – йонни канали, G-протеин свързани рецептори – аденилатциклазната
система .................................................................................................................................. 163
36. Упражнение No 27 “Междуклетъчна сигнализация ІІ”: G-протеин свързани рецептори
– фосфоинозидната система. Рецептори със собствена каталитична активност. .......... 170
37. Упражнение No 28 “Молекулярна биология”: Репликация, транскрипция, транслация.
Регулация на клетъчния цикъл. Онкогени и туморно-супресорни гени. Регулация на
генната експресия. ................................................................................................................ 173
38. Литература ........................................................................................................................... 180

7
 ИНСТРУКЦИЯ ЗА БЕЗОПАСНА РАБОТА НА СТУДЕНТИТЕ В ЛАБОРАТОРИИТЕ И
УЧЕБНИТЕ ЗАЛИ ПО ВРЕМЕ НА УПРАЖНЕНИЯТА ПО БИОХИМИЯ В МУ – ВАРНА
1. Към всички вещества в лабораториите се отнасяйте като с отровни.
2. Опити с лесно възпламеняващи се вещества да стават далеч от пламък и открити
електрически нагреватели.
3. При нагряване на спиртна лампа на разтвор в епруветка, отворът на последната не
трябва да е обърнат към работещият или съседа му, а в посока, в която няма наблизо
други хора.
4. Да не се навежда лицето над кипящи течности, тъй като има опасност от изпръскване и
изгаряне.
5. Миризма на газове и пари се изпитва чрез леко повяване с ръка от съда към носа на
работещия.
6. При разреждане на концентрирани киселини, особено на сярна киселина, да се добавя
внимателно малки количества от киселината във водата, а не обратно.
7. При работа с биологични материали е абсолютно задължително да се работи с
латексови ръкавици, а след приключване на работата ръцете да се измият с
антибактериален сапун.
8. Изпозлваните при работа наконечници и епруветки задължително да се поставят в
контейнерите, определени за тази цел.
9. Всеки предмет или реактив да се връща незабавно на мястото му след неговото
ползване.
10. Всички опитни данни, наблюдавани явления, изчисления и уравнения да се записват в
Ръководството.
11. Студентите са длъжни:
 Да изслушват внимателно инструктажа от преподавателя за правилното и безопасно
провеждане на практическото упражнение и поведението, което трябва да се спазва;
 Да се разписват в книгите за инструктаж, с което удостоверяват, че са им известни
правилата и изискванията за безопасност на труда и се задължават най-стриктно да
ги спазват;
 Да използват лични предпазни средства (закопчана лабораторна престилка и
латексови ръкавици) при работа в лабораторията;
 След приключване на работа да оставят работното си място и уредите с които са
работили, в порядък и в пожаробезопасно състояние.
 При разливане на реактив или биологичен материал върху работната повърхност,
незабавно да уведомят преподавателя, за да се отстрани и почисти.
12. На студентите е строго забранено:
 Самоволно да извършват дейност, която не е свързана с провежданото упражнение;
 Да извършват самоволно поправки на електрически уреди, инструменти,
инсталации, съоръжения, приспособления и др. При възникнала повреда в
апаратурата незабавно да се уведоми преподавателя;
 Да извършват действия, свързани с нарушаване на цялостта и окомплектоваността
на инсталираната в лабораториите и учебните зали на катедрата апаратура без
знанието на служителите на катедрата;
 Да разхвърлят безразборно предмети около работното си място.

Студент:.....................................................................................................................
Факултетен №..........................
Академична ............./............. година

8
 Упражнение No 1“АМИНОКИСЕЛИНИ”
АМИНОКИСЕЛИНИ, ВЛИЗАЩИ В СЪСТАВА НА БЕЛТЪЦИТЕ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Защо аминокиселините (АК) са важни за човешкия организъм? Откъде набавяме

необходимите за организма АК?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

2. Кои АК наричаме есенциални? Посочете есенциалните АК за човек.

1. ............................................... 2 ............................................... 3 .................................................

4. ............................................... 5 ............................................... 6 .................................................

7. ............................................... 8 ...............................................

3. Представете общата структурна формула на една α-АК. Напишете Фишеровите

проекции на D и L формите на аланин.

Обща формула на α-АК L-аланин D-аланин

4. От какво се определя общият заряд на една АК? Напишете йоногенните групи в

състава на лизин и аспартат. Как ще се заредят те при рН=7,4? (При отговора си
използвайте Приложение 1 на стр. 13.)

9
5. Като използвате Приложение 2 на стр. 15 отговорете на следните въпроси?
Кои аминокиселини имат незареден страничен радикал при физиологично рН?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини се определят като полярни незаредени?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини съдържат ароматно ядро в страничния си радикал?

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини образуват Н-връзки във воден разтвор?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини са хидроксиаминокиселини?

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини са S-съдържащи?

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини имат положително зареден страничен радикал при физиологично рН?

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини имат отрицателно зареден страничен радикал при физиологично рН?

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини са полярни незаредени с ароматно ядро?

...........................................................................................................................................................

Кои аминокиселини имат допълнителна карбоксилна група

...........................................................................................................................................................

6. Кои съединения се наричат амфолити?

...........................................................................................................................................................

10
7. Попълнете таблицата като посочите на кои АК принадлежат така описаните по долу R-
групи. (Използвайте Приложение 1 на стр. 13)
Описание на R (страничните радикали) Аминокиселина/и
Неголям R, съдържащ хидроксилна група.

R, създаващ най-малки стерични ограничения.

R-съдържаща група с рКa=10,0 която при физиологично рН има
положителен заряд.
Сярасъдържаща R-група, неутрална при всички рН стойности.
Ароматна R-група, имаща хидрофобна природа и неутрална при
всички рН стойности.
R-група, представляваща остатък на наситен въглеводород,
имаща значение при хидрофобните взаимодействия.
R-група с рКa около 4, която при рН 7 има отрицателен заряд.
Ароматна R-група, способна да участва във водородни връзки с
рК около 10.
R-група с рКa около 8, образуваща дисулфидни мостове.
R-група с рКa около 12, с положителен заряд при физиологично
рН. При някои белтъци играе важна роля при свързването на
отрицателно заредени фосфатни групи.
Ако тази полярна, но незаредена R-група се подложи на
хидролиза, то съдържащата я аминокиселина се превръща в друга
аминокиселина с отрицателно заредена R-група при рН около 7.

8. Дайте определение за рКа на йоногенните групи, като изходите от уравнението на

Хендерсон-Хаселбах:
рН=рКа+log([A]/[HA])

 Запомнете!
Действителното pKа на йоногенните групи зависи от:
• полярността на средата
• наличието на вода
• потенциала за формиране на Н-връзки.

9. Дайте определение за изоелектрична точка (pI). Определете pI на глицин, като знаете,

че рКа на карбоксилната му група е 2,4, а на амино групата 9,6.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11
 Запомнете!
рН на разтвора близко до pКа не се променя значително дори и след прибавянето на големи
количества киселина или основа. Това се нарича буфериране. Биохимичните анализи се
провеждат в разтвори, съдържащи буфериращ агент с рКа близко до оптималното рН за
експеримента.

10. Разтвор на глицин с концентрация 0,1 М и рН 1,72 е бил титруван с 2М разтвор на

NaOH. В резултат се получава следната графика:

глицин
рКa2=9,60

pH на
р-ра 7
рI=5,97

рКa1=2,34

0 0
00 0.5
0,5 1.0
1,0 1.5
1,5 2.0
2.0
Добавено количество NaOH

Използвайки графиката, попълнетe таблицата и отговорете при каква стойност на рН:

рН
Глицинът съществува по формата на положително зареден йон:
[+NH3-CH2-COOH]
Аминогрупите са йонизирани в 50 % от глициновите молекули
Глицинът има максимални буферни свойства
Карбоксилните групи са йонизирани в 50% от глициновите молекули
Глицинът съществува главно във вид на цвитерйон [+NH3-CH2-COO–]
Половината от молекулите на глицина са във вид на цвитерйон [+NH3-
CH2-COO–], а другата половина – във вид на отрицателно зареден йон
[NH2-CH2-COO–]
Половината от молекулите на глицина са във вид на положително
зареден йон [+NH3-CH2-COOН], а другите – във вид на отрицателно
зареден йон [+NH3-CH2-COO–]
Глицинът е незареден
Глицинът има минимални буферни свойства
Преобладаващата форма на глицина е във вид на отрицателно зареден
йон [NH2-CH2-COO–]

12
 Запомнете!
рН на кръвта
Подържа се в тесни граници (7.35 - 7.45.) от:
 катиони (Na+, K+, Ca+ и Mg+)
 аниони (Cl-, PO43- и SO42-)
 хемоглобина в еритроцити
 бикарбонатните йони (HCO3-) в кръвната плазма
Ако кръвта не е добре буферирана, се достига до метаболитна ацидоза или алкалоза. Те могат
да бъдат причинени от:
 погълнати вещества
 странични продукти на метаболизма (ацетоацетат, лактат)
 заболяване, свързано с нарушения в екскрецията на киселини или основи чрез
бъбреците
 проблеми в издишването на CO2 от белите дробове (респираторна ацидоза)
 хипервентилация на белите дробове (респираторна алкалоза)

Приложение 1
Стойности на рКа на йоногенните групи в състава на 20-те α-АК

рКа на рКa на рК на
Аминокиселина Съкращение СООН NH2 R-
група група група
Аланин Ala 2,3 9,7 -
Аргинин Arg 2,2 9,0 12,5
Аспарагин Asn 2,0 8,8 -
Аспартат Asp 1,9 9,6 3,9
Глицин Gly 2,4 9,8 -
Глутамат Glu 2,2 9,7 4,1
Глутамин Gln 2,2 9,1 -
Изолевцин Ile 2,4 9,7 -
Левцин Leu 2,4 9,6 -
Лизин Lys 2,2 9,0 10,5
Метионин Met 2,3 9,2 -
Пролин Pro 2,0 11,0 -
Серин Ser 2,2 9,2 -
Тирозин Tyr 2,2 9,1 10,5
Треонин Thr 2,1 9,6 -
Триптофан Trp 2,4 9,4 -
Фенилаланин Phe 1,8 9,1 -
Хистидин His 1,8 9,3 6,0
Цистеин Cys 2,0 10,3 8,4
Валин Val 2,3 9,6 -

13
Приложение 2
20-те α-АК в състава на белтъците

α-АК, влизащи в състава на белтъците

O O
H2N CHC OH H2N CHC OH
O O CH2 CH CH3
H2N CHC OH H2N CHC OH CHCH3 CH2
H CH3 CH3 CH3
глицин аланин левцин изолевцин
O
O H2N CHC OH
O CH2
H2N CHC OH C OH
CH2
CH CH3 S
HN
CH3 CH3
валин пролин метионин
O
O O
H2N CHC OH
H2N CHC OH H2N CHC OH
CH2
CH2 CH2

HN
OH
фенилаланин тирозин триптофан
O
O H2N CHC OH
O O H2N CHC OH CH2
O
H2N CHC OH
H2N CHC OH H2N CHC OH CH2 CH2
CH2 CH OH CH2 C O C O
OH CH3 SH NH2 NH2
серин треонин цистеин аспарагин глутамин
O
O H2N CHC OH
H2N CHC OH CH2
CH2 CH2 O
CH2 CH2 H2N CHC OH
CH2 NH CH2
CH2 C NH N
NH2 NH2 NH
лизин аргинин хистидин
O
O H2N CHC OH
H2N CHC OH CH2
CH2 CH2
C O C O
OH OH
аспарагинова глутаминова
киселина киселина

Дата: Заверил:

14
 Упражнение No 2 “БЕЛТЪЦИ І”
БЕЛТЪЦИ – СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Енкефалините принадлежат към групата на ендорфините (невротрансмитери с

болкопонижаващо действие, участващи в контрола на сексуалното поведение,
допринасящи за създаване на усещане за благополучие). Ендорфините са полипептиди,
изградени от 5 - 31 АК, произвеждани от хипофизната жлеза и хипоталамуса при
гръбначните животни. Някои вещества от растителен произход (морфин, кодеин)
използват същите клетъчни рецептори и упражняват подобен ефект. Рецепторите за
морфин и кодеин в мозък са открити през 1973 г.

Tyr Gly Gly Phe Met

метионин енкефалин

Напишете структурната формула на метионин енкефалина.

Каква е разликата между белтъци и пептиди? Посочете примери за други пептиди с важни
биологични функции.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

2. Посочете осем основни функции на белтъците и дайте примери за белтъци,

изпълняващи тези функции.

Функция Белтъци със съответната функция

15
3. Каква е разликата между прости и конюгирани белтъци? Попълнете таблицата.
Простетична
Клас белтъци Примери
група/остатък
Липопротеини
Гликопротеини
Фосфопротеини
Хемопротеини
Металопротеини
Флавопротеини

4. Избройте и характеризирайте типовете ковалентни връзки и нековалентни

взаимодействия, които участват във формирането на активната конформация на
белтъчните молекули? Дисулфидните връзки са от особено важно значение за
секреторните белтъци, както и за екстрацелуларните домени на мембранните
гликопротеини. Обяснете защо.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Каква е разликата между водородните връзки във вторично- и третичноструктурното

ниво на организация на белтъците?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Определете какво ниво на организация характеризира белтъка α-химотрипсин, който

се състои от 3 полипептида, ковалентно свързани помежду си с дисулфидни връзки.
Обосновете се.
...........................................................................................................................................................

16
7. Обяснете какво представляват структурните мотиви, домените и субединиците:
Структурна
Характеристика
единица
Мотив

Домен

Субединица

8. Коментирайте ролята на шапероните за нормалното функциониране на белтъците в

човешкия организъм. Какви други механизми за оформяне конформацията на
новосинтезираните белтъчни молекули може да посочите?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

9. Зависимостта между сумарния заряд Z на белтъчната молекула и рН служи за

експерименталното определяне на рІ като зарядово свойство на белтъците.
 Разгледайте фигурата по-долу и посочете дали изследваният белтък е алкален или
кисел.

 Пепсинът от стомашния сок има рІ~1. рН на стомашния сок при човека е между 1,2 и
2,0. Кои функционални групи (респективно АК) би трябвало да присъстват в по-голямо
количество в структурата на пепсина, за да може този ензим да има такава ниска pI?

...........................................................................................................................................................

10. Посочете какви ще бъдат получените продукти, ако един белтък бъде подложен на:

 хидролиза:
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

 денатурация:
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

17
11. Кистичната фиброза (CF) е автозомно рецисивно заболяване, при което в около 70% от
случаите причината е мутация (делеция на хидрофобната АК фенилаланин на 508-мо
място, Δ508) в молекулата – транспортен канал за Cl- йони (CF transmembrane conductance
regulator, CFTR). Органите, които се засягат при болните от CF са:
 Бял дроб (сгъстен белодробен секрет, кашлица, инфекции)
 Панкреас (кисти и фибри в панкреаса, не се отделят панкреатични ензими)
 Недохранване, стеаторея
 Блокиране на репродуктивните пътища при мъже, стерилитет
 Солев дефицит
Каква според Вас е съдбата на мутантните CFTR протеини, образувани в клетката?
Дефинирайте значението на протеазомал-убиквитиновата система в клетката.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Обяснете значението на нативната конформация на белтъците от гледна точка на:

 Прионовите болести
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Болестта на Алцхаймер
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. Замяната на една АК с друга в структурата на един белтък е:

 Неконсервативна, когато новата АК е с различна полярност, обем или повърхност.
 Консервативна, когато новата АК е подобна на изходната по полярност, обем или
повърхност.
Какви белтъци са по-подходящи за клинично приложение – при които разликите в АК
състав имат консервативен или неконсервативен характер? Обосновете отговора си. Като
използвате таблицата по-долу, обяснете как разликата в аминокиселинната секвенция
между човешкия, свинския и говеждия инсулин повлиява избора на инсулин за лечение на
диабет при хора? Какви други източници (начини?) за получаване на инсулин се използват
за нуждите на клиничната практика?

Вид инсулин АК 8 АК10 АК 30 Брой замени

Човешки Тре Иле Тре -
Свински Тре Иле Ала 1
Говежди Ала Вал Ала 3
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

18
 Упражнение No 3 “БЕЛТЪЦИ ІІ”
ГЛОБУЛАРНИ И ФИБРИЛАРНИ БЕЛТЪЦИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Дайте определение и посочете поне 3 примера за:

 Фибриларни белтъци:
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Глобуларни белтъци:
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Хемопротеини:
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изяснете ролята на хемовата група в различните глобуларни хемопротеини:
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

2. Сравнете хемоглобин и миоглобин от структурна и функционална гледна точка.

Показател за сравнение Миоглобин Хемоглобин

Структурно ниво на организация

на белтъчната молекула

Функции

Брой O2 молекули, които може да

свърже една молекула от белтъка
Други молекули, които може да
свързва белтъчната молекула
Брой хемови групи, които съдържа
една молекула от белтъка
Фактори, повлияващи свързването
на кислород

19
3. Представете кривите на асоциация/дисоциация на кислород от миоглобин и
хемоглобин. Как ще обясните различния характер на кривите?

4. Как се транспортира СО2 от тъкани към бял дроб?

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................
Как се нарича хемоглобинът, свързал СО2?
...........................................................................................................................................................

5. Какво представлява ефектът на Бор? Представете схема.

6. При какви условия концентрацията на 2,3 – БФГ в еритроцитите се увеличава? Какви

ще бъдат последиците за пациент, страдащ от анемия, ако му бъде прелята консервирана
кръв без 2,3 – БФГ?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Попълнете таблицата, като посочите как влияят върху насищането на Hb с О2

посочените алостерични ефектори. Използвайте стрелка нагоре – за високи нива и стрелка

20
надолу – за ниски нива на ефекторите. Коментирайте къде в организма има такива
условия.
Благоприятстват насищането Нива на
на Hb с О2 ефекторите
рCO2
рO2
рН
2,3-бисфосфоглицерат

8. Кои различия в структурата на HbA и HbF улесняват транспорта на кислород от кръвта

на майката към плода?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

9. Отравянията с СО наподобяват симптомите на други заболявания (напр. остра

миокардна исхемия – главоболие, болки в гърдите, затруднено дишане). По тази причина
СО е наречен още „великия имитатор”. Има ли отношение токсичното действие на СО
към функциите на Hb? В какво се изявяват токсичните ефекти на СО? Обяснете
молекулния им механизъм. Каква терапия бихте предложили при отравяне с СО?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Желязото в свободна хемова група бързо се окислява от молекулния кислород и лесно
преминава от Fe2+ във Fe3+ (от феро във фери) форма. Защо това се наблюдава рядко при
хемоглобин и миоглобин?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. Бебе на 6,5 месеца е постъпило в Клиниката по педиатрия поради увеличена сънливост
и цианоза. Детето е било в добро здраве при раждането и е било на кърма. Поради спиране
на кърмата е препоръчано изкуствено хранене. Резултатите от изследването на кръвта
показват увеличено количество метхемоглобин. Детето се лекува с интравенозни
вливания на аскорбинова киселина и метиленово синьо. След два дни състоянието му се
подобрява значително и цианозата изчезва. Изписва се, като се препоръчва храната да
бъде приготвяна с дестилирана вода. Отговорете на следните въпроси:
 На какво се дължи образуването на метHb?
...........................................................................................................................................................
 По какво се различават функционално Hb и метHb?
...........................................................................................................................................................
 В норма открива ли се метHb в кръвта?
...........................................................................................................................................................

21
 Кои са ендогенните механизми, превръщащи метHb в Hb? Представете схема на
редукцията на метHb до Hb в еритроцити.
...........................................................................................................................................................

 Кои са причините за настъпването на описаната цианоза при бебето?

...........................................................................................................................................................
 Как ще обясните лекуването на токсична метхемоглобинемия с аскорбат и метиленово
синьо?
...........................................................................................................................................................
 Защо храната на детето следва да бъде приготвяна с дестилирана вода след
изписването му?
...........................................................................................................................................................

12. Попълнете липсващите думи в текста:

Xемоглобин А1С, т. нар. .............................. хемоглобин се получава при неензимно

.............................. (биохимичен процес) на хемоглобин А1 и зависи от плазмената
концентрация на ........................... (метаболит). .......................... (същия метаболит)
ковалентно се свързва за β-веригите на HbA. При болни с ........................ ................
(заболяване) хемоглобин А1С е маркер за продължителността и степента на
............................................................. (състояние).

13. Попълнете таблицата и сравнете минорните хемоглобини по отношение на афинитета

им към О2 и свързването им с 2,3 – БФГ.

Минорни Честота на
Особености в структурата
хемоглобини срещане в %
HbA2
HbF
HbA1с

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

22
14.Попълнете следната схема, показваща различните типове хемоглобинопатии. Посочете
примери.

ХЕМОГЛОБИНОПАТИИ

ХЕМОГЛОБИ
ХЕМОГЛОБИНОП НОПАТИИ
АТИИ

...........................................................................................................................................................

15.Хетерозиготни индивиди за HbS имат повече HbA, отколкото HbS в кръвта си.
Обяснете защо.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

16. При какви обстоятелства се наблюдава образуване на хемоглобина на Барт?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

17. Кой тип таласемии преобладават при българската популация?

...........................................................................................................................................................

18. Кои особености в структурата на колаген и еластин обуславят техните функции?

Попълнете липсващите думи в текста:

Изграждат структури с особени изисквания за .............................. (качество). Не

съществуват като мономери, аобразуват пакети от .............................. (структури),
свързани с .............................. (вид) връзки. Съдържат голям брой ............................... (вид)
АК и АК с ...................................... (вид) вериги: ........................... ......................................
..................................... (примери). Съдържат главно ................ .................. (тип вторични
структури), по-малко α-хеликси.

19. Представете основните етапи в биосинтезата на колаген. Коментирайте в кой етап

участва вит. С:

1. ............................................... 2 ............................................... 3 .................................................

. ................................................. .................................................. ...................................................

4. ............................................... 5 ............................................... 6 .................................................

23
.................................................. ................................................. ...................................................

7................................................ 8 ............................................... 9 .................................................

.................................................. ................................................. ...................................................

20. Защо пушачи с дефицит на 1-антитрипсин умират преди 50 год. възраст?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

21. Мутации в гените за -веригите, които участват в образуването на колаген тип 1, 3 и 5

са причина за синдрома на Елерс-Данлос. Как накратко ще характеризирате колагеновите
болести?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

24
 ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ВЪРХУ “БЕЛТЪЦИ"

1. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ИЗОЕЛЕКТРИЧНА ТОЧКА НА КАЗЕИН

Принцип на метода
Стабилността на белтъчните колоидни разтвори зависи от рН на средата. При промяна на
рН се мени заряда на свободните функционални групи, а с това и електрическият заряд на
молекулата. Тази стойност на рН, при която сумарният заряд на цялата молекула е нула,
се нарича изоелектрична точка. Изоелектричната точка на даден белтък зависи от рН и от
йонната сила на разтвора, от конформацията на белтъка. В изоелектричната точка,
коагулацията на белтъците се извършва най-лесно.

Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) 0,01N CH3COOH
(2) 0,1N CH3COOH
(3) 1N CH3COOH
(4) 4% казеин, разтворен в 0,1N CH3COONa
(5) дестилирана вода (dH2O)

На статив се подреждат 9 епруветки. Във всяка епруветка се поставят съответните

разтвори в посочената в таблицата последователност:
Епруветка №
Разтвор в милилитри
1 2 3 4 5 6 7 8 9
d H2O 8,38 7,75 8,75 8,5 8,0 7,0 5,0 1,0 7,4
0,01N оцетна киселина 0,62 1,25 - - - - - - -
0,1N оцетна киселина - - 0,25 0,5 1,0 2,0 4,0 8,0
1 N оцетна киселина - - - - - - - - 1,6
4% казеин в 0,1N CH3COONa 1 1 1 1 1 1 1 1 1
рН 5,9 5,6 5,3 5,0 4,7 4,4 4,1 3,8 3,5
Последният ред показва какво рН се получава в съответната епруветка след смесването на
разтворите. Съдържанието на всяка епруветка се разбърква без силно разклащане, за да не
се образува пяна. Епруветките се инкубират 10-15 мин. на стайна температура. Отчита се
в коя епруветка има най-силно помътняване на разтвора. рН стойността на тази епруветка
отговаря на изоелектричната точка на белтъка.

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

25
2. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА БЕЛТЪК ПО АБСОРБЦИЯТА В
УЛТРАВИОЛЕТОВАТА ОБЛАСТ

Принцип на метода
Белтъците абсорбират силно в UV областта с два абсорбционни максимума – при 200nm и
280nm. Концентрацията на белтък определена по този метод зависи от количеството на
ароматни амино киселини (тирозин, триптофан и фенилаланин). В зависимост от
енергията на погълнатото лъчение електроните на молекулите, присъстващи в пробата
преминават във възбуждено състояние. Електрони, които са възбудени при 280nm,
абсорбират по-ниска енергия от тези при 200nm, а това са електроните, разположени в
ароматни пръстени на аминокиселините фенилаланин, тирозин и триптофан. Белтъците с
ниско съдържание на тези ароматни аминокиселини поглъщат слабо при 280nm.

Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) основен разтвор на BSA: воден разтвор на говежди серумен албумин (BSA) с
концентрация 1mg/ml;
(2) стандартни разтвори на BSA приготвят се чрез разреждане на основния разтвор на
BSA с вода, така че да се получат разтвори с обем 1 ml всеки и концентрации 0,1, 0,2, 0,3,
0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0 mg/ml;
(3) воден разтвор на човешки серумен албумин с неизвестна концентрация (Х1);
(4) воден разтвор на яйчен албумин с неизвестна концентрация (Х2).
(5) говежди серумен албумин с неизвестна концентрация (Х3)
(5) дестилирана вода

Спектрофотометърът се нулира при λ=280 nm срещу дестилирана вода (контрола), в която

е разтворен съответния белтък. Измерва се абсорбцията на стандартните разтвори на BSA
Построява се стандартна права, като на абсцисата (x-oста) се нанасят концентрациите на
стандартните разтвори, а на ординатата (y-оста) – съответстващите им измерени А280.
Измерва се абсорбцията на белтъчните разтвори с неизвестна концентрация – човешки
серумен албумин (Х1) и яйчен албумин (Х2). От стандартната права се определят
концентрациите на белтък в изследваните разтвори.

Изчисления
Проби с неизвестна концентрация на белтъка:
а) с неизвестен абсорбционен коефициент (серумен албумин и яйчен албумин)

От уравнението на стандартната права А280 = а.c(mg/ml) + b се определят коефициентите a

и b: а = ; b = …………,
тогава C(mg/ml) = [(A280-b)/a] . R,

където:
С – концентрация на белтъка
А280 – абсорбция при 280nm
R – разреждане на пробата
дължина на оптичния път 1cm

б) с известен абсорбционен коефициент (например BSA)

26
 С (mg/ml) = А280 : 63 ,
където:
С – концентрация на белтъка
А280 – абсорбция при 280nm
63 – абсорбционен коефициент за BSA
дължина на оптичния път 1cm

Резултати
Стандартни
разтвори 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0
(mg/ml)

А280

Стандартна права (графичен израз):

Белтъчни разтвори с
X1 X2 X3
неизвестна концентрация

А280

Определена концентрация
от стандартна права (mg/ml)
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

27
3. ОПРЕДЕЛЯНЕ СЪДЪРЖАНИЕТО НА ХЕМОГЛОБИН ПО МЕТОДА НА
ДРАБКИН

Принцип на метода
Производните на хемоглобина с изключение на сулфхемоглобин се окисляват от калиев
ферицианид до метхемоглобин. С цианидния йон се образува метхемоглобинцианид.
Полученият цветен комплекс е траен и концентрацията му е пропорционална на
абсорбцията му при 540nm.

Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Реактив на Драбкин, съдържащ NаНСО3, К3Fe(CN)6 и KCN; рН=8,6
(2) цяла кръв

2,5 ml от реактива на Драбкин се поставят в епруветка. Към тях се прибавят 0,01 ml кръв.
Пробата се инкубира 30 мин на стайна температура. Оптическата плътност се определя
със спектрометър срещу реактива на Драбкин, при дължина на вълната 540nm и дължина
на оптичния път в кюветата 1cm.

Изчисления
Концентрацията на хемоглобин в пробата се изчислява по формулата:

Нb(g/L) = 367,7 . Aпроба ,

където:
Aпроба – абсорбция на пробата
367,7 – коефициент на пропорционалност.

Референтни граници
Мъже: 140-174 g/L
Жени: 120-160 g/L

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

28
 Упражнение No 4 “ЕНЗИМИ I”
ОСОБЕНОСТИ НА ЕНЗИМИТЕ КАТО БИОКАТАЛИЗАТОРИ. НОМЕНКЛАТУРА
И КЛАСИФИКАЦИЯ. ИЗОЕНЗИМИ. ВОДОРАЗТВОРИМИТЕ ВИТАМИНИ КАТО
ЕНЗИМНИ КОФАКТОРИ. КИНЕТИКА НА ЕНЗИМНОТО ДЕЙСТВИЕ.

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Посочете характерни особености на ензимите, по които те се отличават от

неорганичните катализатори.
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

2. Попълнете таблицата и обяснете класификацията на ензимите според номенклатурата

на Международния съюз по биохимия и молекулярна биология (IUBMB). Дайте примери
за ензими от отделните класове и за реакции, които катализират.

Главни групи Примери

No
ензими Ензим Ензимна реакция
1.

2.

3.

4.

5.

6.

3. Какво представлява активният център на ензимите? Посочете видовете групи,

участващи във формирането на активния център.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

4. Как може да се обясни специфичността на ензимното действие? Какви типове

специфичност на ензимното действие са Ви известни? Дайте примери.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

29
5. Попълнете таблицата и обяснете ролята на водоразтворимите витамини като ензимни
кофактори:
Химични реакции, в които
Витамини Коензими
участват коензимите
Тиамин (В1)

Рибофлавин (В2)

Пиридоксин (В6)

Кобаламин (В12)

Ниацин (В3, РР)

Пантотенова киселина (В5)

Фолиева киселина (В9)

Биотин (В7, Н)

Аскорбинова киселина (С)

6. Дайте дефиниция за изоензими. Посочете техните особености като отбележите верните

твърдения.
а) катализират една и съща реакция
б) имат еднаква първична структура
в) имат еднаква субстратна специфичност и използват еднакви кофактори
г) имат еднакви Km и/или Vmax
д) различават се по регулацията си
е) имат различна локализация
ж) имат четвъртична структура
Дайте примери за изоензими, използвани при диагностиката на инфаркт на миокарда.

...........................................................................................................................................................

7. Дефинирайте понятията функционални и нефункционални плазмени ензими; хипер- и

хипоензимемия. Попълнете таблицата като посочите ензими, имащи диагностично
значение при дадените заболявания.
Заболявания, засягащи
Ензим(и)
следните тъкани:
Черен дроб
Мускули
Кости
Панкреас
Простата
Стомах

30
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Кои фактори влияят върху скоростта на една ензимно-катализирана реакция? Обяснете

как се променя скоростта на една ензимна реакция при изменение на температурата и рН
на реакционната смес? Подкрепете твърденията си графично.

9. Представете графично зависимостта на скоростта на ензимната реакция от

концентрацията на субстрата. Дефинирайте кинетичните параметри Km и Vmax, отбележете
ги на графиката и обяснете тяхното значение.

10. Коя от дадените графики на Лайнуивър-Бърк (а, б, в) отразява едносубстратна ензимна

реакция при три различни количества (на мястото на концентрации) концентрации на
един и същ ензим (Е1, Е2, Е3)? Обяснете защо. На избраната от Вас графика отбележете
кинетичните параметри Km и Vmax. Коментирайте техните промени при различни
концентрации на ензима.

1/V 1/V 1/V

E1 E1 Е1
E2 E2
E2
E3 E3 E3

1/S 1/S 1/S

а) б) в)

31
11. Как ще се промени скоростта на ензимната реакция при:
 много ниска концентрация на субстрата ([S]<<Km), когато [E] = const?
...........................................................................................................................................................

 много висока концентрация на субстрата ([S]>>Km), когато [E] = const?

...........................................................................................................................................................
От какво ще зависи скоростта на ензимната реакция в двата случая?
...........................................................................................................................................................
Представете графиката на Михаелис-Ментен и посочете кой участък от нея описва
зависимостта на скоростта от концентрацията на субстрата в двата случая, дискутирани
по-горе.

12. Ензимът глюкозо-6-фосфат дехидрогеназа катализира реакцията:

глюкозо-6-фосфат + НАДФ+ 6-фосфоглюконолактон + НАДФН + Н+

Km - стойността на интактния ензим спрямо глюкозо-6-фосфат е 6×10-5 mol/L, а спрямо

НАДФ+ - 6×10-6mol/ L. Патологичен вариант на ензима показва Km спрямо глюкозо-6-
фосфат 2×10-5 mol/L, а спрямо НАДФ+ - 6×10-7mol/L.

Обяснете:
 Как се е променил афинитетът на патологичния ензим спрямо субстратите?
...........................................................................................................................................................
 Променя ли се активността на патологичния ензим в сравнение с тази на нормалния?
...........................................................................................................................................................
13. Ензимите хексокиназа и глюкокиназа катализират фосфорилирането на глюкозата. Ако
стойността на Km за хексокиназа е 0,1mM, а стойността на Km за глюкокиназа е 10mM,
обяснете кой от двата ензима ще функционира със скорост близка до неговата Vmax при:
 ниска концентрация на глюкоза в кръвта (на гладно)
...........................................................................................................................................................
 висока концентрация на глюкоза в кръвта (след обилно въглехидратно хранене)
...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

32
 Упражнение No 5 “ЕНЗИМИ IІ”
РЕГУЛАЦИЯ НА ЕНЗИМНАТА АКТИВНОСТ. ОБРАТИМО И НЕОБРАТИМО
ИНХИБИРАНЕ НА ЕНЗИМНОТО ДЕЙСТВИЕ. АЛОСТЕРИЧНИ ЕНЗИМИ.
КОНСТИТУТИВНИ И ИНДУЦИРУЕМИ ЕНЗИМИ.

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете таблицата и сравнете конкурентно с неконкурентно инхибиране.

Конкурентно Неконкурентно
Признак за сравнение
инхибиране инхибиране
Структурно сходство на инхибитора
със субстрата
Място за свързване на инхибитора
към молекулата на ензима
Взаимодействие на инхибитора със
свободен E и/или с ES комплекс
Промяна в афинитета на ензима към
субстрата (Кm)
Промяна в стойността на Vmax

Примери за инхибитори

2. Попълнете липсващите означения за Км, Vmax на графиките. Посочете коя графика

какъв тип инхибиране илюстрира.
1/V 1/V

1/[S] 1/[S]
a) б)
a) ........................................................................................................................................................

б)........................................................................................................................................................

3. Антифризът, чиято основна съставка е етиленгликолът, е токсичен за човешкия

организъм. Самият етиленгликол не е смъртоносна отрова, но продуктът на неговото
окисление в организма – оксаловата киселина е токсичен. За лечение в такива случаи се
прилага чист етанол в дози близки до токсичните. Дайте биохимично обяснение на
основанията за тази терапия.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

33
4. Разграждането на етанол в организма протича по следната схема:
алкохол ацеталдехид
дехидрогеназа дехидрогеназа
CH3CH2OH CH3CHO CH3COOH
етанол ацеталдехид оцетна киселина
НАД+ НАДН+Н+ НАД+ НАДН+Н+

Алкохол дехидрогеназата е ензим, катализиращ получаването на ацеталдехид. Ензимът

има четвъртична структура, състои се от три полипептидни вериги: α, β и γ. Точкови
мутации в гена за β веригата водят до експресия на β вериги, които обуславят по-
физиологичен рН оптимум (рН=8,5 и рН=7,0) на алкохол дехидрогеназата. Това води до
по-лесно отделяне на НАДН+Н+ т.е. до по-висока ензимна активност на ензима.
Полученият ацеталдехид предизвиква симптомите, съпътстващи алкохолното опиянение:
вазодилатация, зачервяване на лицето, тахирдия.
От друга страна познати са две форми на ацеталдехид дехидрогеназата – митоходнриална
(с ниска стойност на Кm) и цитозолна (с висока стойност на Кm).
Как ще обясните повишената чувствителност към алкохола при част от човешката
популация?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Обяснете на какви условия трябва да отговоря един ензимен инхибитор, за да може да

се използва като лекарство?
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

6. Сулфонамидите са синтетични широкоспектърни противомикробни

химиотерапевтици. Те са пример за антиметаболити - конкурентни инхибитори по
отношение на субстрати или кофактори на ензими. Сулфонамидите са структурни аналози
на р-аминобензоената киселина, която е структурен компонент на фолиевата киселина.
Последната е необходима за биосинтеза на нуклеотиди и нуклеинови киселини и за
бактериалния растеж.

сулфонамид р-аминобензоена киселина фолиева киселина

Обяснете каква е биохимичната основа за действието на сулфонамидите като инхибитори

на бактериалния растеж.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

34
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Вит. К1 е необходим кофактор на гама-глутамил карбоксилазата за посттранслационно

карбоксилиране на глутаматните остатъци до гама-карбоксиглутамати във вит. К-
зависимите съсирващи фактори II (протромбин), VII (протоконвертин), IХ, Х; протеин С и
протеин S. Гама-карбоксилирането позволява съсирващите белтъци да претърпят
конформационни промени, необходими за Са2+-зависимото комплексообразуване и
активирането на факторите на кръвосъсирването. В резултат от гама-карбоксилатната
реакцията се получава неактивен вит. К (вит. К епоксид). Във възстановяването на
активния вит. К са въвлечени два ензима вит. К епоксид редуктаза и вит. К квинон
редуктаза. Редица вещества инхибират тези два ензима и пречат на ензимното
рециклиране на вит. К, стига се до изчерпване на витамина. Като имате предвид, че
дикумарола е структурен аналог на вит. К епоксида обяснете какви ще бъдат механизмът
и ефектът от действието му.

Глутамат Гама-карбоксиглутамат
СО2 карбоксиглутамат
О2
гама-
глутамил
карбоксилаз
Вит. К Вит. К епоксид
а
епоксид
вит. К квинон редуктаза вит. К епоксид редуктаза
Вит. К квинон

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Изяснете механизма и ролята на ограничената (лимитирана) протеолиза като начин за

регулация на ензимната активност. Дайте примери за ензими, които се регулират чрез този
механизъм.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

35
9. Сравнете алостеричните ензими с тези от Михаелисов тип. Представете и коментирайте
кинетичните криви на алостеричен ензим и на ензим от Михаелисов тип.

10. Представете схематично как се осъществява регулацията на ензимите чрез механизма

на обратима ковалентна модификация. Какви функционални групи присъстват в
молекулата на ензими, чиято активност се регулира по този механизъм?

36
11. Сравнете обратимата ковалентна модификация (фосфорилиране и дефосфорилиране) и
ретроинхибирането по следните признаци:
Обратима ковалентна
Признак за сравнение Ретроинхибиране
модификация
Въздействие върху алостерични
центрове
Повлияване от хормони или
невротрансмитери
Ефект (бърз/бавен)
Етап от метаболитната верига, на
който действа
Повлияване на генната експресия

Дата: Заверил:

37
 ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ВЪРХУ “ЕНЗИМИ"

1. ДОКАЗВАНЕ АБСОЛЮТНАТА СПЕЦИФИЧНОСТ НА УРЕАЗА

Принцип на метода
Уреазата катализира хидролитното разграждане на карбамид (урея):
(NH2)2CO + H2O → CO2 + 2NH3
Полученият амоняк може да се докаже с фенолфталеин (розово оцветяване). Уреазата е
строго специфичен ензим. Открива се в бактерии и дрожди. Тя разкъсва –CO–NH–
връзката само в молекулата на карбамида. Съединения, които показват сродство в строежа
си с този на уреята, като например биурет и тиокарбамид, не се атакуват от ензима.

карбамид (урея) биурет тиокарбамид (тиоурея)

Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) 0,1 М разтвор от карбамид
(2) 0,1 М разтвор от биурет
(3) 0,1 М разтвор от тиокарбамид
(4) 1% алкохолен разтвор на фенолфталеин
(5) Разтвор на бактериална уреаза

В три епруветки се поставят:

Реактив Епруветка 1 Епруветка 2 Епруветка 3
Уреаза 200 l 200 l 200 l
0.1 М карбамид 1 ml - -
0.1 М биурет - 1 ml -
0.1 М тиокарбамид - - 1 ml
Фенолфталеин 2-3 капки 2-3 капки 2-3 капки
Епруветките се поставят в термостат за 20 min при 38С. Отчита се действието на уреазата
в трите епруветки. Наблюдава се в коя епруветка ще се получи розово оцветяване.

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

38
2. ИЗЧИСЛЯВАНЕ НА Кm И Vmax НА РАЗЛИЧНИ ЕНЗИМИ ПО ГОТОВИ ДАННИ
ЧРЕЗ МЕТОДА НА ЛАЙНУИВЪР И БЪРК

Принцип на метода
На координатна система се нанася реципрочната стойност от концентрацията на субстрата
(1/[S]) върху абсцисата, а върху ординатата – реципрочната стойност на скоростта на
ензимно катализираната реакция (1/V). Определянето на Кm и Vmax по метода на
Лайнуивър и Бърк включва построяване на права, чиято пресечна точка с ординатата е
1/Vmax, а на абсцисата – -1/Кm. В зависимост от силата и типа инхибиране наклонът на
правата се променя, както и една от двете пресечни точки.
Техника на работа
Материали и консумативи:
(1) Калкулатор
(2) Милиметрова хартия
(3) Моливи, вкл. черен
(4) Гума
(5) Линия
Изчисления
Разполагате с данни, получени при кинетични изследвания на ензими А и Б в отсьствие и
присьствие на инхибитор. С V′ и V″ е означена началната скорост сьответно на
неинхибираната и инхибирана реакция при различни субстратни концентрации.
А. Б.
S V′ V″ S V′ V″
[mol/L] [mol/L/min] [mol/L/min] [mol/L] [mol/L/min] [mol/L/min]
1,0 0,290 0,167 0,02 5 2,50
1,5 0,380 0,230 0,05 7,14 3,57
2,5 0,510 0,330 0,075 7,87 3,95
5,0 0,690 0,500 0,1 8,34 4,17
10,0 0,800 0,670 0,2 9,05 4,54
20,0 0,900 0,800
Изберете подходящото графично представяне, за да получите точни стойности за K m и
Vmax на неинхибирания ензим. По подобен начин изчислете Km и Vmax на инхибирания
ензим. Определете типа на инхибирането.

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

39
 Упражнение No 6 “БИОЕНЕРГЕТИКА І”
МАКРОЕРГИЧНИ СЪЕДИНЕНИЯ. БИОЛОГИЧНО ОКИСЛЕНИЕ. ОКИСЛИТЕЛНО
ФОСФОРИЛИРАНЕ. УСТРОЙСТВО НА ДИХАТЕЛНАТА ВЕРИГА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Какви съединения наричаме “макроергични”? Попълнете таблицата като посочите кои

от съединенията са свръхмакроергични, макроергични и нормоергични. Кои от тях могат
да бъдат донори на Фн и кои – акцептори?
Съединение ΔG0 [kJ/mol] Вид (според ΔG0)
АТФ - 30,5
креатинфосфат - 43,9
фосфоенолпируват - 61,9
УДФ - 30,5
ацетил-КоА - 31,4
глюкозо-6-фосфат - 12,1

...........................................................................................................................................................

2. Защо хидролизата на АТФ е толкова важна при физиологични условия? Какви

причини може да посочите за високата стойност на промяната в свободната енергия при
този процес?
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

3. Какво наричаме фосфатен цикъл? Попълнете следната схема:

Процеси, Процеси,
доставящи консумиращи
ЕНЕРГИЯ ЕНЕРГИЯ

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

4. Посочете особеностите на биологичното окисление като попълните, празните места в

текста.

Биологичното окисление се катализира от ензими от клас ........................................... . В

повечето случаи водородът и електроните, отделени при биологичното окисление

40
достигат кислорода ...............................(по какъв начин), като се предават от редокс-
системи с ........................ редокс-потенциал към редокс-системи с ........................ редокс-
потенциал. Отделената енергия в тези случаи служи за синтез на ................ . Когато
кислородът участва директно в окислителните реакции, отделената енергия се използва
за .............................................. или за следните процеси: ........
.......................................................................................................................................... (посочете
поне 2 процеса).

5. Попълнете схемата, като посочите видовете оксидоредуктази, осъществяващи

биологично окисление.

Оксидоредуктази
Оксидази

Оксигенази

Монооксигенази

Хидроксипероксидази
МАНВОТНМВТНМВТМВНАОТ

6. Дадени са следните редокс двойки и техните стандартни редокс потенциали:

Редокс-двойки Е01 (V) Последователност
Цит. b6/Цит. b6
-0,060
(Fe2+)/(Fe3+)
Цит. f/Цит. f
+0,365
(Fe2+)/(Fe3+)
фередоксин/фередоксин
-0,432
(ред.)/(окис.)
фередоксин редуктаза/фередоксин редуктаза
-0,600
(ред.)/(окис.)
Покажете каква би била най-вероятната последователност на тези редокс двойки, ако са
част от една електрон-пренасяща верига.

7. При всички реакции на дехидрогениране, извършващи се при гликолизата и в ЦТК,

акцептор на електрони е НАД+ (Е0= ˗0,32V). Единственото изключение се явява реакцията,
катализирана от сукцинат дехидрогеназа, която използва като акцептор на електрони
ковалентно свързания с нея ФАД (Е0= +0,05V). Защо ФАД е по-подходящ отколкото
НАД+ при дехидрогенирането на сукцината (Е0 фумарат/сукцинат= +0,03V)?
...........................................................................................................................................................

41
8. Посочете три случая на окислително фосфорилиране на субстратно ниво в клетките,
при които отделената енергия се използва за образуване на АТФ (ГТФ).
 .......................................................................................................................................................................н

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

9. Значението на субстратното фосфорилиране е:

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

10. Попълнете празните места в схемата (комплекси, процеси) и обяснете как са

разположени компoнентите на дихателната верига във вътрешната митохондриална
мембрана. Къде говорим за протонен градиент при дихателната верига? Как се генерира
трансмембранният потенциал?
Δ µH+ Δ µH+

H+ H+ H+ H+ H+

е-
е-
е- е-

ФАДН2 Н2О

ФАД+ О2
НАД+ НАДН+Н+ топлина
О2.- О2
АТФ АДФ+Фн

11. Кои са принципите от химиосмотичната теория на Митчел, описващи механизма на

окислително фосфорилиране?
 .......................................................................................................................................................................н

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

12. Кой от комплексите в дихателната верига не участва пряко в електронния транспорт и

защо? Коментирайте неговото молекулно устройство и функция.

42
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. Попълнете следната схема:

За какво се използва
ТРАНСМЕМБРАННИЯТ
ГРАДИЕНТ?

14. Какво представлява коефициентът на окислително фосфорилиране (Р/О)?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Попълнете таблицата:
Комплекси от Теоретични
Наличен субстрат Коригирани
дихателната верига, стойности за
в средата стойности за Р/О
изпомпващи протони Р/О
НАДН+Н+
Сукцинат
Аскорбат

15. Посочете примери за инхибитори на електронния транспорт в дихателната верига.

сукцинат

Комплекс 2

НАДН+Н+ Комплекс 1 КоQ Комплекс 3 цит. с Комплекс 4 О2

аскорбат

43
16. Сравнете механизма на действие на инхибиторите и разпрягащите агенти. Как ще се
повлияе кислородната консумация и синтеза на АТФ в присъствие на:

 малонат ......................................................................................................................................

 ротенон ......................................................................................................................................

 KCN ......................................................................................................................................

 високи нива на тиреоидни хормони ........................................................................................

17. Какви ще бъдат последствията от дефицит на никотинамид и от абсолютен дефицит на

витамин В2 за дихателната верига?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

18. В интактни митохондрии скоростта на пренос на електрони е строго съгласувана с

потребността от АТФ. Затова, ако скоростта на използване на АТФ е малка, то съответно
и скоростта на електронен пренос ще се понижи. Ако АТФ се изразходва бързо, то и
скоростта на електронен пренос ще е висока. При подобни условия (т.е. при тясно
спрягане на тези два процеса) отношението Р/О (числото на образуване на АТФ за един
атом кислород), когато донор на електрони е НАДН+Н+ е равно на три.
 Дискутирайте как съотношението [АДФ] . [Фн] / [АТФ] (т.нар. фосфатен потенциал)
осигурява дихателен контрол.

...........................................................................................................................................................

 Какъв ще бъде ефектът на ниска и висока концентрация на разпрягащ агент върху

скоростта на електронен пренос и величината Р/О?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

 При прием на разпрягащ агент настъпва силно повишаване на телесната температура и

обилно потооделяне. Дайте обяснение на този факт.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

19. Млада жена решава да редуцира телесното си тегло за относително кратко време,
прибягвайки към забранени субстанции. Поръчва си по интернет продукт за отслабване
със съдържание на 2,4 динитрофенол. За да постигне по-бързо желаните резултати решава
да увеличи два пъти препоръчаната дневна доза. В резултат, на което скоро след приема
на медикамента получава силно сърцебиене, кръвното й налягане рязко се повишава,
телесната й температура бързо се покачва, получава белодробен оток и умира от
полиорганна недостатъчност.
Отговорете на следните въпроси:
- Защо 2,4 динитрофенолът се включва в медикаменти за отслабване?

44
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

- Защо увеличената доза на 2,4 динитрофенолът е довела до смъртта на младата жена?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
- Какво се случва в митохондриите на младата жена след приема на двойна доза от
медикамента? Посочете верния отговор.
а) О2 консумация намалява
б) НАДН+Н+ се окислява много по-бързо
в) протонният градиент нараства
г) продукцията на СО2 се понижава

20. Дадени са резултатите от изследвания с кислороден електрод на интактни

чернодробни митохондрии, инкубирани с малат или сукцинат и различни допълнителни
вещества за еднакво време.
Всяка проба съдържа:
3 ml буфер, наситен с кислород
0.1 ml митохондриална суспензия
50 µl субстратен разтвор (малат и сукцинат) с концентрация 10 mol/обем проба
10 µl АДФ (1 000 nmol/проба) или буфер
10 µl от разтвор на веществата А, В, С, D или буфер
За всички проби е измервана кислородната консумация за времето на опита.
Максималната кислородна консумация е 1300 nmol. Всички данни са представени в
таблицата по-долу:
Малат/ Малат + Сукцинат/ Сукцинат +
Добавка
без АДФ 1000 nmol АДФ без АДФ 1000 nmol АДФ
- 0 350 0 490
А 1300 1300 1300 1300
В 0 0 0 490
С 0 0 0 0
D 0 0 0 0
А+В 0 0 1300 1300
А+С 0 0 0 0
А+D 1300 1300 1300 1300
Посочете какви може да са според своето действие веществата А, В, С и D:
A: ............................... B: ............................... C: ............................... D: ...............................

Дата: Заверил:

45
 Упражнение No 7 “БИОЕНЕРГЕТИКА ІІ”
СКЪСЕНИ ЕЛЕКТРОН-ПРЕНАСЯЩИ ВЕРИГИ. СВОБОДНО-РАДИКАЛОВО
ОКИСЛЕНИЕ И АНТИОКСИДАНТНА ЗАЩИТА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Направете сравнителна характеристика между дихателна верига и скъсени електрон-

пренасящи вериги:
Скъсени електрон -
Характеристика според Дихателна верига
пренасящи вериги

Получаване на АТФ

Компоненти

Участие на кислород

Функции

Локализация

2. Сравнете функциите на скъсените електрон-пренасящи вериги с участието на цит. P450

в митохондриите с тези, локализирани в ендоплазмения ретикулум.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

3. Попълнете липсващите думи в текста:

Електрон-пренасящите вериги за десатурация на мастни киселини се намират в

.......................(къде?) и съдържат цитохром ........ (от кой вид?); донор на водород
обикновено е ................. (кой коензим?).

В състава на хидроксилазни вериги в ЕР с участието на цитохром .......... (от кой вид?) и

донор на водород ................................ (кой коензим?) внасят .................... (какво?) в
молекулата на субстрата, като повишават ........................ му (какви негови свойства?).

D-аминоацидооксидазите в ентероцити са ензими, които ...............................................

(каква роля имат?). Те изискват кофактор .........................(кой?) и са локализирани в
..................(къде в клетката?).

46
При окислението в пероксизомите се прехвърлят електрони директно върху ............. (коя
молекула?), като при това се образува............................... (какво съединение?), което
поради своята висока реактивоспособност се причислява към ........................................... .
Това съединение се елиминира с участието на ...................................................
................................................................................. (кои ензими?).

4. Работещи в среда с висока концентрация на ксенобиотици (бензол, ксилол,

тетрахлорметан, анестетици и др.) трудно се поддават на анестезия при хирургична
интервенция. Как бихте дискутирали това наблюдение?
...........................................................................................................................................................

5. Попълнете таблицата:
Наименование
АКФ Характеристика
на АКФ
О2- Образува се както в ............................................. ............, така и на
други места в клетката при метаболизма в норма. Генерира други
................. ................... .............., но ..... ................ да дифундира
далеч от мястото на образуване.
Н2О2 Не е свободен радикал, но може да генерира такива в присъствие
на ............... в реакцията на ................. Преминава през клетъчните
мембрани.
ОН. Най-................................. радикал, атакуващ биологичните
молекули. Получава се в присъствието на ................................
R. .................... свободен радикал, получен след атака от ОН. върху
RH.
RCOO. Образува се при окислението на .................................................

HOCl Получава се при ………………………........................................

...................................................................................................
O2↑↓ Кислород с ......................................... спинове на е-. Получава се
при ................ рО2 и абсорбция на енергия.

6. Дискутирайте дихателната верига в митохондриите като източник на свободни

радикали. Къде в дихателната верига се образуват активни кислородни форми (АКФ)?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Какво означава понятието „респираторен взрив“? Можем ли да припишем на АКФ

положителни свойства в клетката?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

47
8. Еритроцитите са клетки, изложени често на агресивното действие на активни
кислородни форми. Тяхната антиоксидантна защита е представена главно от ензимите
глутатионпероксидаза и глутатионредуктаза. Главни метаболитни пътища в еритроцити са
гликолиза и пентозофосфатен път. Регулаторен ензим за ПФП е глюкозо-6-
фосфатдехидрогеназата, катализиращ процеса:
глюкозо-6-фосфат 6-фосфоглюконо--лактон
НАДФ+ НАДФН
Защо при дефицит на глюкозо-6-фосфатдехидрогеназа се наблюдава повишена хемолиза
на еритроцити? Представете схема в подкрепа на твърденията Ви:

9. Попълнете таблицата:
Ендогенни антиоксиданти Антиоксиданти, приемани с храната
1. Ензимни

2. Неензимни

10. Попълнете липсващите думи и фрази в текста:

Глутатион (GSH) е трипептид, съставен от (кои аминокиселини?) .........................,

......................... и ........................., който преминава от ......................... в .........................
състояние в зависимост от редокспотенциала на средата, в която той се намира.

Функции:

 Обезвреждане на (какъв вид АКФ?) ......................... ......................... както и на

......................... ......................... в реакции, катализирани от ензима .........................
......................... . Богато представен в еритроцити, където предпазва клетките от
оксидативен стрес и увреждане.

 Служи като важен интрацелуларен ......................... и спомага за поддържане на SH-

групите на белтъци в ......................... състояние;

48
 Участва в (кой цикъл?) ......................... ......................... за транспорт на
аминокиселини;

 Участва в реакции на ......................... и ......................... на ксенобиотици.

 Участва при синтезата на ...............................................................................

11. Попълнете празните места в схемата. Кои ензими и кофактори участват в

обезвреждането на съответните АКФ?

12. Опишете механизма на действие на витамин С като антиоксидант.

Дата: Заверил:

49
 ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ВЪРХУ “БИОЕНЕРГЕТИКА”

1. ПОЛУЧАВАНЕ И ДОКАЗВАНЕ НА ЦИТОХРОМ С ОКСИДАЗА И

ПЕРОКСИДАЗА ОТ МУСКУЛНА ТЪКАН.

Принцип на метода
Цитохром с оксидазата е ензимен комплекс в дихателната верига. Активната цитохром с
оксидаза може да бъде доказана чрез реакцията, показана по-долу, при която се получава
цветен комплекс (индофенолово синьо):
H2C OH + O2 H2C
N NH2 +
H2C N N O
цитохром с H2C
оксидаза
Диметил-р-фенилендиамин α-нафтол Индофенолово синьо
Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) 5 g мускулна тъкан
(2) Диметил-р-фенилендиамин (1% алкохолен разтвор)
(3) α- нафтол (1% алкохолен разтвор)
(4) Физиологичен разтвор
(5) 30 % H2O2
(6) o-фенилендиамин (1% алкохолен разтвор)

Мускулната тъкан се нарязва на ситно и се залива с физиологичен разтвор за 10 минути,

след което пробата се филтрува. Взема се част от промитата тъкан и се поставя в
епруветка с вода. Нагрява се на спиртна лампа за 5 минути. Върху парче филтърна хартия
се поставя по малко количество от свежата и от загряваната тъкан и се накапват по
няколко капки от реактивите върху двете проби, в следната последователност: диметил-р-
фенилендиамин; α-нафтол.
Филтратът се разделя в две епруветки. Едната се загрява на спиртна лампа за няколко
минути. След това към двете проби се добавят по 5-6 капки от H2O2 и o-фенилендиамин.

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

50
2. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ТОТАЛНИ ПОЛИФЕНОЛИ В
ЕКСТРАКТИ ОТ РАСТЕНИЯ ПО МЕТОДА НА FOLIN-CIOCALTEU

Принцип на метода
Методът се основава на способността на полифенолите да се окисляват от
фосфоволфрамова и фосфомолибденова киселина в алкална среда до цветен продукт с
абсорбционен максимум при дължина на вълната =760nm.

Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Реактив на Folin (1:10)
(2) Воден извлек от ройбос
(3) Воден извлек от маточина
(4) 7,5% разтвор на Na2CO3
(5) дестилирана вода
Празна проба Проба 1: извлек от Проба 2: извлек от
Реактиви
(l) ройбос (l) маточина (l)
Реактив на Folin (1:10) 750 750 750
Воден извлек  150 150
7,5% разтвор на Na2CO3 600 600 600
дестилирана H2O 150  

Реактивите се накапват в посочената последователност в 3 епруветки, като сместа се

разбърква добре след всяко прибавяне на нов реактив. Следва инкубация на водна баня
при температура 50 С за 10 минути и охлаждане в студена вода за 5 минути. Абсорбцията
се измерва на спектрофотометър при дължина на вълната =760nm срещу празна проба.

Изчисления
Концентрацията на тоталните полифеноли се изчислява по формулата:

С (М кверцетинови еквиваленти) = (244,08 . А760) + 8,71

А760 – измерената абсорбция при 760 nm

244,08 –
8,71 –

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

51
 Упражнение No 8 “ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ І”
ХРАНОСМИЛАНЕ НА ВЪГЛЕХИДРАТИ И ТРАНСПОРТ НА МОНОЗАХАРИДИ В
КЛЕТКИТЕ. ГЛИКОЛИЗА.

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете таблицата относно смилането на приетите с храната въглехидрати:

Жлеза Ензим(и) Субстрати Продукти

Слюнчени жлези

Панкреас

Жлезисти клетки на
чревната лигавица

2. Двадесет годишен студент се оплаква от подуване, коремни болки и диария,

появяващи се приблизително 60 минути след прием на по-голямо количество мляко. При
прегледа се установява лека дехидратация и нормална телесна температура. Каква
причина бихте посочили за представените симптоми? Какви са възможните фактори,
довели до тази непоносимост?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

3. Попълнете празните места в схемата за резорбция на монозахариди от чревния лумен:

чревен лумен

фруктоза глюкоза галактоза

.... мукоза
............ ............ интестинална
епителна клетка
......
..... .....
фруктоза АТФ
глюкоза ........
галактоза .....
АДФ
..... ......
.....
.............
сероза
към
циркулацията

52
4. Посочете мястото на действие на глюкозните преносители в организма. Посочете кой
от тях е инсулин-зависим.
Преносител Място на действие и особености
GLUT-1
GLUT-2
GLUT-3
GLUT-4
GLUT-5

5. Пациент се оплаква от повръщане и диария, развиващи се скоро след прием на мляко.

Проведен е орален лактозотолерантен тест, но нивата на глюкоза и галактоза в кръвта не
се повишават (остават нормални при теста) и се задържат постоянни. Поставена е
диагноза глюкозно-галактозна малабсорбция. Коя е възможната причина за това
заболяване на ниво резорбция на въглехидрати?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Дайте определение за процеса гликолиза. Напишете десетте реакции на

гликолитичната верига. Каква е енергетичната равносметка от разграждането на една
молекула глюкоза по пътя на гликолиза при анаеробна съдба на пирувата?

53
Определение за гликолиза: ............................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Енергетична равносметка на процеса анаеробна гликолиза:

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. По какво се различават хексокиназа І и хексокиназа ІV? Отговорете, като попълните

следната таблица:

Хексокиназа ІV
Характеристика Хексокиназа І
(глюкокиназа)

Тъканна локализация

Субстратна специфичност

Инхибитори/активатори

Зависимост на активността от
концентрацията на глюкоза
Синтезата се индуцира от инсулин
(да/не)

Кm за глюкоза (висока/ниска)

Посочете типа на кинетичната

крива, представяща зависимост на
V от концентрацията на глюкоза

Биологична роля

54
8. Дайте обяснение на представената по-долу схема:

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

9. Обяснете регулацията на ензима пируваткиназа (ПК), като попълните празните места в

схемата:

.
…………….кръвна захар …………….кръвна захар
+ +
…………….инсулин …………….глюкагон
+
+ Фн
ПК АДФ Аденилат
Протеин …………….. Протеин …………….
……………. +
…………….. цАМФ АТФ
Фн ПК
……………..

55
10. Какво е характерно за пропускливостта на вътрешната митохондриална мембрана? Как
преминава водородът, получен в цитозола към митохондриите? Попълнете празните места
в двете схеми. Какво илюстрират те?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

цитозол матрикс

МДХ МДХ

оксалоацетат оксалоацетат
Глу Дихателна
Глу АсАТ верига
АсАТ α-КГ
α- КГ
аспартат аспартат

Външна Вътрешна
митохондриална митохондриална
мембрана мембрана

...........................................................................................................................................................

цитозол матрикс
Глицерол-3-фосфат

ГФДХ ГФДХ

ДХАФ

Дихателна
Външна Вътрешна
верига
митохондриална митохондриална
мембрана мембрана
ГФДХ – глицерол-3-фосфат дехидрогеназа

...........................................................................................................................................................

56
11. Изяснете защо при недостиг на О2 в клетките се повишава продукцията на лактат?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Как ще обясните факта, че при високи нива на О2 в клетките скоростта на гликолизата
се понижава?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. Обяснете особеностите на гликолизата в еритроцити, като попълните липсващите

думи и фрази:

......................................... ........................................... (кой процес?) е главен метаболитен

път в еритроцити, защото те нямат.......................................... (какви органели?).
Крайният продукт на гликолизата в еритроцити е ................................ . Съществено за
непрекъснатото протичане на......................................... ........................................... (кой
процес?) е регенерирането на............................ (кой кофактор?) чрез
.........................................................................................реакция. При гликолизата в
еритроцити на ниво 1,3-БФГ ........ протича ....................................... фосфорилиране. Част
от 1,3-БФГ се изомеризира в .............................. (метаболит), който се хидролизира до
....................................... (метаболит) чрез ензима ...................................... Част от АТФ се
............................, което обезпечава непрекъснатото протичане на гликолизата с висока
активност.

14. Разгледайте схемите по-долу и обяснете при кое заболяване и защо гликолизата в
черен дроб, скелетни мускули и мастна тъкан намалява.

57
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

58
 Упражнение No 9 “ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ ІІ”
ПЪТИЩА ЗА РАЗГРАЖДАНЕ НА ПИРУВАТ. ЦТК. ПЕНТОЗОФОСФАТЕН ПЪТ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Представете пътищата за разграждане на пируват в аеробни и анаеробни условия:

2. Попълнете таблицата относно устройството на мултиензимния пируватдехидрогеназен

(ПДХ) комплекс:
Ензим Име Кофактор Катализирана реакция

Е1

Е2

Е3

Е4

Е5

3. Пируватдехидрогеназният комплекс (ПДХ) е мултиензимен комплекс с множествени

копия на Е1-Е3 и 5 кофактора. Дефицит на кои водоразтворими витамини може да наруши
окислителното декарбоксилиране на пируват:

...........................................................................................................................................................

4. Обяснете молекулния механизъм на окислителното декарбоксилиране на пирувата.

Кои са регулаторните ензими в ПДХ комплекс? Посочете инхибитори. Колко молекули

59
АТФ се синтезират при окислителното декарбоксилиране на пируват, получен от 1
молекула глюкоза при гликолизата?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Новородено на възраст 2 месеца е прието по спешност в клиниката поради значителна

загуба на тегло и хипотония. Анализът на кръвните проби показва следните резултати:
лактат – силно повишен, пируват – силно понижен, съотношение лактат/пируват = 13/1,
аланин – силно повишен, ПДХ комплекс (изолиран от екстракти на клетъчна култура от
лимфобластни клетки) – с намалена активност спрямо тази на контролни клетки, пируват
карбоксилаза и ФЕП карбоксикиназа – в референтните граници. С какво свързвате
повишените лактат и аланин? Каква диагноза може да бъде поставена? Каква диета ще
окаже благоприятен ефект върху пациента? Защо се очаква да бъде засегната нервната му
система?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Попълнете липсващите думи и фрази в текста:

Пируват дехидрогеназният дефицит засяга...................... (коя тъкан?), чиято нормална

функция зависи главно от ........................... (метаболит) като енергетичен източник. Този
ензимен дефицит е най-честата причина за .............................................. ..........................
......................... проявяваща се в различни форми:

 .......................................................................................................................................................................

60
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

7. Обяснете катаболитната роля на ЦТК. Защо ЦТК се обозначава като амфиболитен път?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Обяснете енергетичната роля на ЦТК, като попълните таблицата по-долу. Коя е

реакцията на субстратно фосфорилиране?
Брой молекули АТФ,
Продукт Реакции, при които се получава в ЦТК
които се синтезират
1.
НАДН + Н +
2.
3.
ФАД.Н2
ГТФ
12 АТФ/
Общо
1 mol окислен ацетил КоА

9. Попълнете таблицата относно регулаторните ензими от ЦТК:

Регулаторни ензими в Активатори Инхибитори
ЦТК

10. По какво α-кетоглутарат дехидрогеназният (а-КГ ДХ) комплекс в ЦТК се различава от

ПДХ комплекс, участващ в окислителното декарбоксилиране на пируват?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. Арсенът е химичен елемент, който се среща под различни форми в почва и в състава
на различни минерали. Хората са изложени на действието на арсен и съединенията му при
консумацията на вода, храна (особено пилешко месо - попада в него при третиране на
птиците с някои антибиотици), вино (обработка на лозите с арсен-съсържащи пестициди)
и др. Много промишлени производства също използват арсенови съединения –
производства на полупроводници, пестициди, стъкло, обработка при съхраняване на
дървен материал и др. В миналото арсенът се е използвал дълго време за умъртвяване на

61
зъбната пулпа и за облекчаване на болките при възпаление. Съединенията на арсена са
особено токсични в разтвор и това ги прави опасни при невнимателна употреба, а в
съвременното зъболечение и ненужни. Една от големите опасности при използването на
арсенови препарати е, че при не добро запечатване на зъба той може да попадне в
междузъбното пространство, където да некротизира венеца и дори костта. Предозирането
с препарата може да доведе до болки в корема, повръщане, дезориентация и други
симптоми. Употребата на арсен в днешно време е все по-ограничена, отстъпвайки място
на съвременните методи на лечение. Основните токсични ефекти на арсена са:
 Измествафосфата от много реакции, в т.ч. нарушава окислителното фосфорилиране,
като се конкурира с неорганичен фосфат и блокира ATФ синтезата, формирайки
нестабилен арсенат (As.AДФ)
 As(III) се свързва със сулфхидрилни групи (R-SH), от състава на различни белтъци и
инхибира тяхната активност
Като знаете, че арсенът образува стабилен комплекс с SH-групите на липоевата киселина,
представете какви ще бъдат последствията от отравяне с арсен върху метаболизма на
пируват и ЦТК:
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

12. Препаратът флуороацетат се използва като средство за борба с гризачите. Проникнал в

клетката, той се превръща във флуороацетил-КоА. Проучванията показват, че флуороацетат
води до намаляване скоростта на гликолизата, до натрупване на глюкозо-6-Ф и фруктозо-6-
Ф, до десетократно увеличаване концентрацията на цитрата и до силно снижаване на
всички останали междинни продукти на ЦТК. Кой ензим от ЦТК се блокира? Защо се
намалява скоростта на гликолизата? Защо отравянето с флуороацетат е смъртоносно?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. Чести ли са ензимните дефицити в ЦТК? Коментирайте защо. Кой ензимен дефицит в
ЦТК Ви е известен и в какви общности се среща?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

14. Попълнете текста за ПФП:

Вътреклетъчно ПФП е локализиран в....................................................... (къде в клетката?)

Осигурява основните наличности на.......................................... (кои субстрати/кофактори?)
за биосинтезните процеси. Осигурява механизъм за метаболизма на постъпващите с
храната .................................. Доставя ............................................ (кой субстрат?),
необходим за синтезата на нуклеотиди. В хода на неокислителните

62
.................................................... реакции се получават различни С3 – С7 захари за нуждите
на клетката. Скоростта и посоката на реакциите по всяко дадено време се определя
от.............................. .............. ...................................................................... (кои фактори?). В
ПФП ............. .................. ......................................... АТФ.

15. Представете на обща схема връзката между гликолиза и ПФП. Кои са общите
метаболити?

16. Сравнете наличностите на НАД+ и НАДН в клетките:

......................е необходим за гликолизата; НАД+ е 100 пъти ........................ от НАДН,

затова клетката използва ..........................., а не ........................ за редуктивни
биосинтетични процеси. Гл-6Ф ДХ и 6-Ф-глюконат ДХ поддържат цитоплазмено
съотношение на НАДФH/НАДФ+ ~............................. .

17. Представете схематично ролята на НАДФН за редукцията на Н2О2:

63
18. Глюкозо-6-Ф ДХ дефицит е най-често срещаният ензимен дефицит при хора. Засяга
над 200 млн души (Африка, Азия, Средния изток, Средиземноморието). Унаследява се Х-
свързано, установени са над 400 различни мутации в гена за глюкозо-6-Ф ДХ, но само
някои имат клинични изяви. При наличието на глюкозо-6-Ф ДХ дефицит е възможно да се
развие хемолитична анемия. Обяснете какви метаболитни събития могат да доведат до
хемолиза на еритроцитите при дефицит на ензима глюкозо-6-Ф ДХ?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

64
 Упражнение No 10 “ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ ІІІ”
ГЛЮКОНЕОГЕНЕЗА, ГЛИКОГЕНОГЕНЕЗА И ГЛИКОГЕНОЛИЗА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете липсващите думи и фрази в текста относно процеса глюконеогенеза (ГНГ):

ГНГ е процес на .................... ....... ...................... ........ .................................. ..............................

Функциите на ГНГ са ....................................................................................................... .
Процесът е локализиран в......................, ...................... и .............................. (къде в клетката)
на ........................., ......................, ............................... (кои органи). Основни субстрати за
ГНГ са ......................., ............................ и ...................... . Освободените от липидите
мастни киселини.................... (да или не) източник за синтезата на глюкоза по пътя на
ГНГ. ГНГ е процес, при който ......... ................................... (печели или консумира) енергия
под формата на ............... и ................. Напишете сумарното уравнение на ГНГ от
пируват:

...........................................................................................................................................................

2. Направете схема, описваща преодоляването на първата термодинамична бариера в

процеса ГНГ (пренос на пируват в митохондриите, получаване на ОА, пътища за изнасяне
на ОА в цитозола). Отбележете субстратите, ензимите, транспортните белтъци във
вътрешната митохондрийна мембрана, кофакторите и продуктите.

65
3.Въпреки, че в ГНГ участват голяма част от гликолитичните ензими, ГНГ не е обратен на
гликолизата път. Кои са трите енергетични бариери, които се преодоляват при ГНГ?
Преставете катализираните от хидролази ключови реакции на ГНГ.
Термодинамична Клетъчна
Субстрати Продукти Ензим(и) Кофактор(и)
бариера (име) локализация
I

II

III

4. Фруктозо-2,6 БФ е ключовият метаболит за регулацията на процеса ГНГ в черен дроб.

Обяснете неговото получаване в клетката и как той повлиява ГНГ. Представете схема в
подкрепа на твърденията си. Защо казваме, че ГНГ и гликолизата се регулират
реципрочно?

5. Алкохолик е приет по спешност в клиниката. Седмица по-рано, той е приемал големи

количества алкохол, апетитът му е бил силно намален, а през последните 3 дни не е
приемал храна. Кръвните изследвания показват следните резултати: глюкоза: 1,6 mmol/L
(референтни граници след 24 ч. гладуване: 4,4-5,6); лактат: 7,2 mmol/L (референтни

66
граници: 0,6-2,2); pH: 7,14 (референтни граници: 7,36-7,45); етанол: 295 mg/dL
(физиологична граница: до 10 mg/dL или 0,1‰, допустими граници за трезво лице: 10-20
mg/dL или 0,1-0,2‰ (за България, по закон, допустимата граница за алкохол в кръвта на
водач на превозно средство е до 0,5 ‰); токсично ниво: 150-300 mg/dL или 1,5-3‰).
Обяснете как приемането на големи количества етанол повлиява ГНГ. Какви са причините
за повишените нива на лактат? Какъв терапевтичен подход бихте предложили?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Представете чрез схема цикъла на Кори и обяснете неговото биологично значение.

7. Кофеинът инхибира ензима цАМФ фосфодиестераза. Обяснете какъв ефект ще има

върху процеса ГНГ изпиването на чаша силно кафе сутрин на гладно. Какво влияние ще
окаже инсулин върху фосфодиестеразата и съответно - върху ГНГ?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

67
8. Свържете етапите на процеса гликогеногенеза, означени с цифри от (1) до (4) с техните
субстрати (А-Г) и ензими (а-г):
Етап от процеса
Субстрат Ензими
гликогеногенеза
(1) А. a.
Синтеза на УДФ – глюкоза Гликоген гликоген синтаза
(2) Б. б.
Синтеза на праймер Глюкозо-1-Ф тирозин-гликозил трансфераза, гликогенин
В.
(3) в.
Гликоген (12-14
Елонгация на веригата амило-α(1→4)→α(1→6)-трансгликозилаза
гл. остатъка)
(4) Г. г.
Образуване на разклонения Гликогенин УДФ-глюкозо пирофосфорилаза

(1) --- ---

(2) --- ---
(3) --- ---
(4) --- ---

9. Попълнете липсващите думи на схемата и изяснете ролята на ензима

протеинфосфатаза за регулацията на процеса гликогеногенеза. Кой хормон активира
протеинфосфатаза? Кои ензими от обмяната на гликоген стават активни и кои – неактивни
при увеличени нива на този хормон в кръвта?
........................................... ............................................ Фн
активен/неактивен активен/неактивен

........................................... ..............................................
... активен/неактивен активен/неактивен
Протеинфосфатаза

.............................................. (ПФ)
Фн ..............................................
.............................................. Фн
активен/неактивен активен/неактивен

10. Каква е съдбата на глюкозо-1-Ф в скелетни мускули и черен дроб, ако не е нужен за
гликогеногенезата?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. Сравнете в таблицата алостеричната регулация на гликогеновата обмяна в черен дроб

и скелетни мускули.
Ензим, който
Регулация в: Модулатор Гликогенолиза Гликогеногенеза
се повлиява
Черен дроб

68
 Мускули

12. Попълнете празните места в схемата и обяснете хормоналната регулация на процеса

гликогенолиза в черен дроб. Кога този процес протича с най-голяма активност и как той
участва в регулацията на кръвната захар?
.........глюкоза в кръв

глюкоза
глюкагон

Ензим…………………
АЦ
глюкозо-6-Ф

цАМФ
Ензим………………...

ПКа ...........................

.................. на ............................ на
......................................... ...................................... Фн
(гликоген)n-1

...................................... ...................................... Фн

(гликоген)n
13. Като знаете, че кофеинът активира ензима гликогенфосфорилаза а, обяснете какъв ще
бъде неговият ефект върху чернодробните депа на гликоген. Обяснете значението на
процесите на фосфорилиране за хормоналната регулация на гликогеновия метаболизъм в
черен дроб. В подкрепа на твърденията си представете схема по Ваш избор.

14. Предположете какви ще са вероятните последици върху гликогенния метаболизъм от:

 Замяна на АК серин на 14 място с аланин в чернодробна гликоген фосфорилаза;
...........................................................................................................................................................

69
 Свръхекспресия на киназа на гликоген фосфорилаза а в черен дроб;
...........................................................................................................................................................
 Загуба на гена, кодиращ инхибитор 1 на протеин фосфатаза 1.
...........................................................................................................................................................

15. Пациентът е 12-годишно момиче. При приемането му прави впечатление силно

увеличения корем. В историята на заболяването са отбелязани чести епизоди на слабост,
обилно потене, пребледняване, отзвучаващи след прием на храна. Детето е било със
забавено физическо развитие – стояло седнало едва на 1 година, ходело самостоятелно на
2 години, имало проблеми в училище. При прегледа е установено кръвно налягане 120/78
mmHg (норма: до 108/64mmHg), повишена телесна температура (38ºС), тегло под
нормалното за възрастта му (22,4 kg), ръст под референтните граници (128 cm), увеличен
черен дроб и мускулна слабост. Биопсията на черен дроб показала твърд, бледожълт,
нециротичен материал, с раздути и дилатирани хепатоцити и компресирани портални
области. Оцветяването за въглехидрати показало наличие на големи количества от
позитивно реагиращ материал в паренхимните клетки, който се разграждал от ензима
слюнчена α-амилаза. Съдържанието на гликоген било 11% (референтна граница: до 6%),
структурата на гликогена била нормална. Съдържанието на липиди било 20,2 g/100 g
чернодробна тъкан (референтна граница: < 5 g). Получени са следните резултати от
клинико-лабораторните изследвания:
Референтни
Показател Пациент
граници
глюкоза в кръв (mmol/L) 2.8 3.9-5.6
лактат в кръвен серум (mmol/L) 6.6 0.56-2
пируват в кръвен серум (mmol/L) 0.43 0.05-0.1
свободни МК в кръвен серум (mmol/L) 1.6 0.3-0.8
ТАГ (mmol/L) 3.15 <1.18
кетонови тела в урина +++ –
pH на кръвта 7.25 7.35-7.44
общ СО2(mmol/L) 12 24-30
глюкозо-6-фосфатаза(U/g чернодробна тъкан) 22 214±45
глюкозо-6-фосфат ДХ (U/g чернодробна тъкан) 0.07 0.05-0.13
фосфоглюкомутаза (U/g чернодробна тъкан) 27 25±4
гликогенфосфорилаза (U/g чернодробна тъкан) 24 22±3
фруктозо-1,6-бисфосфатаза (U/g чернодробна тъкан) 8.4 10±6
Отговорете на следните въпроси, като попълните таблицата:
Въпроси Отговори
Кои метаболитни процеси/етапи са засегнати?
Кой е дефицитният ензим?
Обяснете причините за епизодите на
хипогликемия при гладуване.
Какъв е характерът на метаболитната ацидоза?
Как ще се отрази на пациента парентерално
хранене с глюкоза?

Дата: Заверил:

70
 Упражнение No 11 “ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ ІV”
МЕТАБОЛИЗЪМ НА МАНОЗА, ФРУКТОЗА, ГАЛАКТОЗА И ЛАКТОЗА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. При хората има необходимост от приемане на есенциални АК и МК, но не и на

есенциални монозахариди, защото всички те могат да се синтезират в човешкия организъм
от глюкоза. Представете схематично как може да се образува манозо-6-Ф от глюкоза.

2. Фруктозният сироп е широко използван в хранителната индустрия като подсладител.

Фруктозата се метаболизира като се превръща в метаболити от гликолитичния път.
Представете чрез схема метаболизма на фруктоза. Обяснете защо фруктозата се влага в
енергийни напитки.

3. Попълнете таблицата и обяснете каква е разликата между алдолаза А и алдолаза В?

Тъканна Роля в обмяната Последици
Ензим Субстрат Продукти
локализация на въглехидрати при дефицит

Алдолаза А

Алдолаза В

71
4. В какви метаболити може да се превърне глицералдехид, получен от действието на
алдолаза В? Попълнете схемата, като на последния ред посочите метаболитните пътища, в
които могат да се включат получените метаболити.

глицералдехид

5. Какви могат да бъдат последствията за здрави индивиди от повишена фруктозна

консумация?
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

6. Генетични ензимни дефицити са причина за вродена фруктозна непоносимост и

есенциална фруктозурия? Кои са дефектните ензими? Какво влияние има натрупването на
фруктозо-1-Ф върху въглехидратната обмяна? Как ще обясните хипогликемията и
увеличението на АсАТ и АлАТ в серума на болен с вродена фруктозна непоносимост след
натоварване с фруктоза?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Предпочитаният източник на енергия за сперматозоиди е фруктоза. Каква е ролята на

сорбитол дехидрогеназата за метаболизма в семенни везикули?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Сорбитолът, който има силен осмотичен ефект, е една от причините за наблюдаваните

усложнения при неконтролиран диабет (катаракта, периферна невропатия, нефропатия,
ретинопатия). Попълнете липсващите обозначения във фигурата:

72
9. Именовайте ензимите Е1 – Е7 от схемата за метаболизма на галактоза:

Е1- ..............................................................................................................

Е2- .............................................................................................................

Е3- ............................................................................................................

Е4- .............................................................................................................

Е5- .............................................................................................................

Е6- .............................................................................................................

Е7- .............................................................................................................

73
10. УДФ-галактозата е субстрат за различни биосинтезни процеси. Попълнете празните
места в схемата и отбележете съединенията, за получаването на които е необходима УДФ-
галактоза.

УДФ-галактоза
лактозосинтаза епимераза

11. Попълнете липсващите думи в текста относно заболяването галактоземия:

Натрупването на .................................. (кой монозахарид?) в кръвта е резултат най-често

от дефицит на ................................................................................... (кой ензим?). То е
свързано и с увеличение на нивата на ............................... (кой монозахарид?).в тъканите,
което вторично води до смущения в обмяната на глюкоза и Фн и съпътстващите ги
симптоми: тъканно увреждане, полиорганна недостатъчност и умствено изоставане. В
резултат на активиране на полиоловия път се синтезира ............................................. (кой
алкохол?), който е причина за катаракти. Дефицит в ензима
.......................................................................... е причина за лека форма на галактоземия.

12. След интравенозно инжектиране на лактоза в плъхове се установява, че тя не се

метаболизира. Приета с храната, тя бързо се метаболизира. При индивиди с дефицит на
ензима галактокиназа се наблюдава 50% метаболизиране на погълнатата р.о. лактоза.
Изяснете причините за установените факти.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. Как се образува лактоза в млечни жлези след раждане?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

14. Обяснете възможно ли е млечна жлеза на жена болна от галактоземия да синтезира

лактоза?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

74
 Упражнение No 12 “ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ V”
ГЛИКОПРОТЕИНИ И ГЛЮКОЗАМИНОГЛИКАНИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете таблицата и обяснете функциите на следните гликопротеини (ГП):

Вид гликопротеин Функция

Колаген, фибрилин, фибронектин,

ламинин

Муцини

Трансферин, церулоплазмин

Имуноглобулини, антигени за
тъканна съвместимост

Хормони: фоликул стимулиращ

хормон, лутеинизиращ хормон,
тироид стимулиращ хормон,
хориогонадотропин, алфа-
фетопротеин, еритропоетин

Ензими (алкална фосфатаза)

Фибриноген

Мембранни рецептори

2. Посочете основните монозахариди и техните производни, които влизат в състава на

гликопротеините.

1. .......................................................................................................................................................
2. .......................................................................................................................................................
3. .......................................................................................................................................................
4. .......................................................................................................................................................
5. .......................................................................................................................................................
6. .......................................................................................................................................................
7. .......................................................................................................................................................
8. .......................................................................................................................................................

75
3. Направете сравнение между N-свързаните и О-свързаните гликопротеини:
Признак за сравнение N-свързани гликопротеини О-свързани гликопротеини
АК-остатък, към който се
свързва монозахаридът
Вътреклетъчни органели,
участващи в биосинтеза
на зрелите гликопротеини
Механизъм на
присъединяване на
въглехидратната
компонента
Участие на долихол
Ензими, участващи в
биосинтеза

4. Обяснете как и къде в клетката се осъществява разграждането на гликопротеините.

Дайте примери за ензими, участващи в този процес.
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

5. Попълнете липсващите думи и фрази относно глюкозаминогликаните (ГАГ):

ГАГ са изградени от повтарящи се .................................. единици, които са

.................................. ........................... и полярни. Протеогликаните (мукопротеини) са
.................... , към които са присъединени ...................... (какви остатъци?) чрез ковалентна
връзка. Тези структурни особености обуславят важни свойства на тези молекули:

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

6. Попълнете таблицата и обяснете структурните особености и функцията на

глюкозаминогликаните:
Основни структурни Тъканна
Клас ГАГ Функция
дизахариди локализация

кератансулфат

хепарансулфат,
хепарин

76
 хондроитин-4-сулфат,
хондроитин-6-сулфат

дерматансулфат

хиалуронова киселина

7. На фигурата по-долу попълнете липсващите структурни компоненти на

протеогликановия агрегат.

……………….

……………..

………………
……………….

………………..

…………

………………….

8. Опишете основните етапи от биосинтеза на ГАГ:

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

77
  Обяснете как се получават мономерите УДФ-глюкозамин, УДФ-N-ацетил
глюкозамин, УДФ-N-ацетил галактозамин, УДФ-глюкуронова киселина, УДФ-
идуронова киселина за биосинтеза на ГАГ.

9. Много от козметичните продукти за третиране на зряла кожа съдържат хиалуронова

киселина. Имайки предвид структурата и произтичащите от нея физико-химични свойства
на ГАГ, дайте биохимично обяснение на този факт.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Лекарственото средство АртроСтоп Рапид съдържа като основни съставки глюкозамин
и хондроитин и допринася за подобряване на състоянието на ставния хрущял. Дайте
биохимично обяснение за основанията да се включи глюкозамин при лечение на
заболявания на ставния хрущял.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. Наследствените заболявания мукополизахаридози се характеризират с абнормно

акумулиране на мукополизахариди. Дайте молекулно обяснение на този факт.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 В урината на пациент с нарушено разграждане на гликопротеини се откриват
увеличени нива на въглехидратния остатък със следната структура:

N-ацетил-галактоза глюкуронова к-на N-ацетил-галактоза

сулфат сулфат

78
Обяснете възможния ензимен дефицит.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Сравнете гликопротеини (ГП) с ГАГ:

Признак ГП ГАГ
Размер на върглехидратните
вериги
Заряд
Разклоненост
Количество въглехидрати по
отношение на белтъчната маса

Дата: Заверил:

79
 Упражнение No 13 “ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ VI”
ОБОБЩЕНИЕ ВЪРХУ ВЪГЛЕХИДРАТНА ОБМЯНА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете таблицата, като нанесете със стрелки (↑ - повишение и ↓- намаление)

влиянието на хормоните, регулиращи процесите и/или количеството на метаболитите с
отношение към нивото на кръвната захар:
Хормон ↑ или ↓ Процес/метаболит
глюкозния транспорт в инсулин-зависими тъкани
глюкозния метаболизъм чрез индукция синтезата на ензими от
Инсулин гликолизата
чернодробната глюконеогенеза
гликогеногенезата
активността на аденилат циклазата и концентрацията на цАМФ
гликогенолизата (гликоген фосфорилаза)
гликогеногенезата (гликоген синтаза)
Глюкагон
фруктозо-2,6-бисфосфат
гликолизата (на ниво фосфофруктокиназа-1)
глюконеогенезата (на ниво фруктозо-1,6-бисфосфатаза)
чернодробната глюконеогенеза
Адреналин чернодробната и мускулна гликогенолиза
активността на аденилат циклазата и концентрацията на цАМФ
транскрипцията на ензими от глюконеогенезата
Кортизол транскрипцията на гликолитични ензими
активността на ензимите, разграждащи белтъците

2. Комбинирайте главните с малките букви, така че да се получи вярно твърдение:

А. Инсулин.......................................................................................................................................

Б. Глюкагон......................................................................................................................................

а/ освобождава се в отговор на ниска кръвна захар

б/ освобождава се в отговор на висока кръвна захар
в/ активира навлизането на глюкоза в клетките на скелетни мускули и мастна тъкан
г/ активира ензима гликогенфосфорилаза
д/ активира ензима гликогенсинтаза
е/ активира ензима фруктозо-1,6-бисфосфатаза
ж/ активира фосфофруктокиназа-2
з/ инхибира фосфофруктокиназа-2
и/ активира фосфофруктокиназа-1
к/ има хипергликемичен ефект
л/ има хипогликемичен ефект
м/ дефицитът му води до диабет тип 1

80
3. Дефинирайте посочените по-долу понятия от обмяната на въглехидрати, като
акцентирате върху тяхната биологична роля.

Глюкоза:
...........................................................................................................................................................
Гликоген:
...........................................................................................................................................................
Глюкагон:
...........................................................................................................................................................
Гликолиза:
...........................................................................................................................................................
Гликогенин:
...........................................................................................................................................................
Гликогенолиза:
...........................................................................................................................................................
Глюконеогенеза:
...........................................................................................................................................................
Гликогеногенеза:
...........................................................................................................................................................

4. Попълнете липсващите думи и фрази относно заболяването захарен диабет:

І. Инсулино-..................................диабет (диабет І тип): Наблюдава се при около 10% от
диабетно болните. Обикновено се проявява преди 30-годишна възраст. Дължи се на
.................................. .................................. или .................................. на инсулин поради:
1) .................................. ..................................на b-клетките в .................................. острови
на .................................., под действие на външни фактори (напр. остро инфекциозно
заболяване);
2) .................................. в гена за инсулин.
II. Инсулино-..................................диабет (диабет II тип): Наблюдава се при почти 90%
от диабетно болните, обикновено се проявява след 40-годишна възраст. Дължи се на
.................................. .................................. .................................. в периферните тъкани
поради една или повече от следните причини:
1) липса или намален брой на .................................. ..................................
2) дефектни .................................. ..................................
3) антитела срещу .................................. (рядко)
4) .................................. дефект - нарушено е .................................. .................................. на
хормоналния сигнал.

81
 ПРИМЕРНИ ВЪПРОСИ ЗА ИЗПИТЕН ТЕСТ
Въпроси с един възможен отговор:
1. За кой от посочените въглехидрати ще се наблюдава намалено разграждане в стомашно-
чревен тракт при дефицит на ензима панкреатична -амилаза?
а) лактоза
б) скорбяла
в) захароза
г) фруктоза
2. При приемане на чаша мляко подсладено със захар основни монозахариди, подлежащи
на резорбция, са:
а) глюкоза и фруктоза
б) фруктоза и галактоза
в) галактоза и глюкоза
г) глюкоза, фруктоза, галактоза
3.Транспортът на глюкоза през клетъчните мембрани се стимулира от инсулин в:
а) мозък
б) черен дроб
в) еритроцити
г) скелетни мускули и мастна тъкан
4. При състояние на добро хранене при здрав индивид мозъкът задоволява енергетичните
си нужди с:
а) ВМК
б) глюкоза
в) кетонови тела
г) холестерол
5. Пируваткиназата катализира превръщането на:
а) пируват в лактат
б) пируват в ацетил-КоА
в) фосфоенолпируват в пируват
г) пируват в оксалацетат
6. Гликолизата в еритроцити:
а) е митохондриален процес
б) има като краен продукт пируват
в) е анаеробен процес
г) се регулира от фруктозо-1,6-бисфосфат
7. При анаеробна гликолиза не се натрупва пируват, защото:
а) малатдехидрогеназата е активна
б) той се превръща от пируватдехидрогеназата в ацетил-КоА
в) отношението НАДН/НАД+ е ниско
г) НАДН, получен в глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназната реакция го редуцира
8. В анаеробни условия скелетните мускули генерират АТФ от глюкоза по пътя на
анаеробната гликолиза, като глюкозата се метаболизира до:
а) ацетил-КоА
б) сукцинат
в) лактат
г) цитрат

82
9. Посочете вярното твърдение. Превръщането на пируват в ацетил-КоА:
а) е обратим процес
б) се нуждае от липоева киселина
в) се осъществява в цитозола
г) зависи от биотин
10. Намалено окисление на ацетил-КоА в ЦТК се наблюдава при:
а) намалено отношение АТФ/АДФ
б) намалено отношение НАДН/НАД+
в) намалено отношение НАД+/НАДН
г) намалено отношение ГТФ/ГДФ
11. Кое НЕ Е характерно за ПФП?
а) продуцира СО2
б) потиска се чрез инхибиране на глюкозо-6-фосфатдехидрогеназата от НАДФН
в) нуждае се от АТФ
г) продуцира рибозо-5-фосфат
Въпроси с комбиниране на отговорите:
12. Посочете верните комбинации на текстовете, обозначени с главни и малки букви:
А) Ензими от ЦТК: .........................................................................................................................

Б) Ензими от гликолиза: .................................................................................................................

а) глицералдехид-3-Ф-ДХ
б) сукцинат ДХ
в) фумараза
г) енолаза
д) цитратсинтаза
е) алдолаза

13. Посочете верните комбинации на текстовете, обозначени с главни и малки букви:

А) В гликолиза: ...............................................................................................................................

Б) В пентозофосфатен път: ............................................................................................................

а) се синтезира АТФ
б) се образува НАДФH
в) не се синтезира АТФ
г) се образува НАДH
д) се образува седохептулозо-7-Ф
е) се образува 1,3-бисфосфоглицерат

Дата: Заверил:

83
 ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ВЪРХУ
“ОБМЯНА НА ВЪГЛЕХИДРАТИ”

1. ДОКАЗВАНЕ НА ПРОДУКТИТЕ ОТ АЛКОХОЛНАТА ФЕРМЕНТАЦИЯ

Принцип на метода
Алкохолната ферментация е процес, който се извършва при анаеробно или полуанаеробно
развиващи се дрожди и е свързан с действието на ензима алкохолдехидрогеназа.
Дрождите декарбоксилират пирувата до ацеталдехид и редуцират последния до етанол. За
доказването на алкохолна ферментация се използва ферментационен апарат, в който се
поместват изследваният разтвор и пресните дрожди. Образуващият се в резултат на
алкохолната ферментация CO2 се натрупва в тръбичката и се открива по поглъщането му
от натриева основа. Присъствието на етанол в тръбичката се доказва с Луголов разтвор в
алкална среда, при което етанолът взаимодейства с йода и образува йодоформ (CHJ3):
С2Н5ОН + 4 J2 + 6 NaOH → CHJ3 + 5 NaJ + HCOONa + 5 H2O
Техника на работа
Реактиви и материали
(1) 5% разтвор на глюкоза
(2) 1% разтвор на винена киселина
(3) 10% разтвор на натриева основа
(4) Луголов разтвор (20 g калиев йодит и 12,7 g йод се разтварят в 100 ml дест.H2O)
(5) 1 g мая за хляб
Доказване на въглероден двуокис
Стрива се 1 g мая за хляб в хаванче с 15 ml 5% разтвор на глюкоза, прибавят се 400μl 1%
разтвор на винена киселина и сместа се прехвърля във ферментационния апарат.
Течността трябва изцяло да запълни коляното му и в късата част да заеме около 1/3 от
обема му. Апаратът се поставя на водна баня при 38ºС и се наблюдава отделянето на CO2,
който се събира в горната част на затвореното коляно. След като приблизително 2 ml от
обема на отвореното коляно се изпълни с CO2, прибавя се 10% разтвор на NaOH до
напълване на съда откъм отвореното коляно. Поставя се леко гумена тапа, съдът се
обръща няколко пъти за да се улесни взаимодействието на газа с натриевата основа, при
което се образува вакуум и тапата се изважда с усилие.
Доказване на етанол
След отварянето на ферментационния апарат и доказването на CO2, в епруветка се
отмерват 4 ml от течността, прибавят се 200 μl Луголов разтвор и 1 ml 10% разтвор на
NaOH до обезцветяване на йода. Епруветката се нагрява леко на спиртна лампа до
усещане на характерната специфична миризма на йодоформа.
Резултати
...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

84
2. ПОСТРОЯВАНЕ НА КРЪВНОЗАХАРНИ КРИВИ НА ЗДРАВ ИНДИВИД И НА
БОЛЕН ОТ ЗАХАРЕН ДИАБЕТ С ПОМОЩТА НА ГЛЮКОЗООКСИДАЗЕН ТЕСТ

Пероралният глюкозотолерантен тест (ГТТ) е основен тест за установяване на нарушен

глюкозен толеранс и за диагностицирането на захарен диабет. Не се провежда
глкюкозотолерантен тест при концентрация на глюкозата над 7,0 mmol/l във взета на
гладно кръв и при повишена глюкозна концентрация над 11,1 mmol/l в кръв взета два часа
след нахранване (постпрандиален тест).
Чрез този тест се оценява възможността на панкреаса, при натоварване на организма с
глюкоза да отговори с адеквана секреция на инсулин, който да нормализира нивата на
кръвната захар. С този тест се дава отговор на въпроса има или няма захарен диабет в
случаите, когато стойностите на кръвната захар са гранични и не са категорично високи.

Провеждане на теста
Сутрин на гладно (0-ва мин.) и на 30-та, 60-та, 90-та и 120-та мин. след перорално натоварване
с глюкозен разтвор, съдържащ 75g глюкоза в 100 ml H2O, се взема капилярна кръв.
Определя се концентрацията на глюкозата в нея. На координатна система, с абсциса
времето, и с ордината – съответно концентрацията на глюкоза, се построява крива,
отчитаща промяната в концентрацията на кръвната глюкоза с времето (кръвнозахарна
крива). Тя има характерен ход при болни с нарушен глюкозен толеранс и при здрави
индивиди.

Принцип на аналитичния метод

глюкозооксидаза
D-глюкоза + Н2О + О2 глюконова киселина + Н2О2
пероксидаза
Н2О2 + ХН2 (хромоген) 2Н2О + Х (цветно съединение)
Количеството на глюкозата е пропорционално на количеството на полученото цветно
съединение.

Техника на работа
Реактиви и материали
(1) Бидестилирана вода
(2) Стандартен разтвор на глюкоза (75mg/100ml)
(3) Работен разтвор, съдържащ ензими и хромоген
(4) Кръвен серум
Зареждат се 7 епруветки по следната схема:
Работни проби (ml)
(серуми от болен и
Контрола Стандарт
Реактив здрав индивид), взети
(ml) (ml)
на
0, 30, 60, 90 и 120 мин
1. Бидестилирана вода 0,01 – –
2. Кръвен серум – – 0,01
3. Стандартен разтвор
– 0,01 –
(75 mg/100ml разтвор на глюкоза)
4. Работен разтвор
1,00 1,00 1,00
(буфер, ензими, хромоген)

85
Епруветките се разклащат и се инкубират на тъмно за 10 мин. на стайна температура (20-
25C). На спектрофотометър се отчита абсорбцията на работните проби (Апроба) и на
стандарта (Астандарт) срещу празна проба при дължина на вълната = 546 nm, дължина на
оптичния път 1см, температура 20-25 С.
Изчисления
А проба
С (mmol/L) = 5,55 . 
А стандарт
5,55 – концентрация на глюкозата в стандарта
Референтни граници на кръвната захар
3,6 – 6,1 mmol/L
Референтни стойности на кръвната захар при провеждане на перорален
глюкозотолерантен тест (ОГТТ):

Концентрация на Концентрация на Концентрация на

Време на отчитане кръвната захар кръвната захар кръвната захар при
на кръвната захар при нормален при нарушен патологичен ОГТТ
ОГТТ (mmol/l) ОГТТ (mmol/l) (mmol/l)
на гладно до 5,55 5,6-7,0 над 7,0
60 min до 8,9 до 10,9 над 11,0
120 min до 7,8 7,8-11,1 над 11,1
Най-голямо диагностично значение имат кръвнозахарните стойности на гладно и 2 часа
след обременяването с глюкоза.

Резултати
Пациент със
Концентрация на
съмнение за Здрав индивид
кръвна захар (С)
захарен диабет
на гладно (0-ва min)
30-та min
60-та min
90-та min
120-та min
Кръвозахарни криви

86
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

87
3. ДОКАЗВАНЕ НА ФРУКТОЗА В УРИНА С ПРОБА НА СЕЛИВАНОВ

Принцип на метода
Фруктозата се отделя в урината твърде рядко. Фруктозурия се наблюдава, когато се
приема храна извънредно богата на фруктоза, както и при някои заболявания с нарушен
метаболизъм на фруктоза. Пробата на Селиванов е специфична за кетозахарите. Тя се
основава на превръщането на последните при загряване в кисела среда в
хидроксиметилфурфурол, който при взаимодействието си с резорцин образува съединение
с червен цвят.
Техника на работа
Материали и реактиви
(1) Реактив на Селиванов (0,05 g резорцин се разтварят в 100 ml 20% разтвор на HCl)
(2) 1% воден разтвор на фруктоза
(3) 1% воден разтвор на глюкоза
В 2 епруветки се поставят по 2 ml от реактива на Селиванов. Към първата епруветка се
прибавят 20l от 1% разтвор на фруктоза, а към втората – същото количество от 1%
разтвор на глюкоза.
Реактив Първа епруветка Втора епруветка
Реактив на Селиванов 2 ml 2 ml
1% разтвор на фруктоза 20l 
1% разтвор на глюкоза  20l
Съдържанието на двете епруветки се разбърква добре и се нагрява до кипене на спиртна
лампа. В епруветката, съдържаща фруктозния разтвор, се наблюдава червено оцветяване.

Резултати
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

88
 Упражнение 14 “ОБМЯНА НА ЛИПИДИ I”
ХРАНОСМИЛАНЕ И АБСОРБЦИЯ НА ЛИПИДИТЕ ОТ ХРАНАТА.

ТРАНСПОРТ НА ЕКЗОГЕННИ ЛИПИДИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете схемата, като посочите познатите Ви видове липиди и функциите, които те

изпълняват при човека. Коментирайте тяхната биологична роля.

функция

функция
функция

функция липиди функция

функция функция

2. Кои са основните панкреатични ензими, участващи в смилането на липидите от

храната? Направете им сравнителна характеристика като попълните таблицата. Какви са
различията при смилането на липидите при кърмачета и при възрастни индивиди?

Признак за Панкреатични ензими

сравнение ................................... .................................... .....................................
Място на действие
Субстрати
Продукти
Активатори

89
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

3. Как хормоните холецистокинин и секретин контролират смилането на приетите с

храната липиди? Представете схема.

4. Обяснете ролята на жлъчните киселини при храносмилането на липидите.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Какви ще бъдат последиците върху смилането на липидите от храната, ако е налице

абсолютен дефицит на жлъчни киселини. Има ли опасност от развиване на авитаминоза?
Какво е стеаторея и какви са възможните причини за това състояние?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

90
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6.Отбележете на схемата състава на зрелите хиломикрони.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Попълнете таблицата относно функциите на апопротеините, влизащи в състава на

зрелите хиломикрони.

Апопротеини Функция

8. Кое от посочените твърдения е НЕВЯРНО за различните аполипопротеини:

а) Могат да бъдат периферни или интегрални за плазмените липопротеинови частици.
б) Играят роля на ензимни кофактори
в) Нямат структурна функция
г) Осигуряват трансфер на липиди
д)Лиганди са за взаимодействие на плазмените липопротеинови частици с
рецепторите в тъканите

91
9. Сравнете насцентните хиломикрони, зрелите хиломикрони и хиломикроните ремнанти
като попълните таблицата:
Признак за Насцентни Зрели Хиломикрони
сравнение хиломикрони хиломикрони ремнанти

Място на образуване

Апопротеини,
влизащи в състава им
Основни липиди,
влизащи в състава им

Плътност

Функция

10. Попълнете липсващите фрази в текста:

Капилярната липопротеин липаза се синтезира и секретира от

............................................................................................................................ (кои клетки?).
Локализирана е в ...................................................................................... (къде в капилярите?).
Разгражда ………..................................................... (субстрат) до ........................................ и
................................. . Активира се от хормона ....................................... . Капилярната
липопротеин липаза се активира от .............................................. (кой апопротеин?),
влизащ в състава на ................................................. (кои липопротеини?) .

11. Каква е съдбата на продуктите, получени под действието на капилярната липопротеин

липаза?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

92
 Упражнение No 15 “ОБМЯНА НА ЛИПИДИ IІ”
ЛИПОЛИЗА. РАЗГРАЖДАНЕ НА ВИСШИ МАСТНИ КИСЕЛИНИ С ЧЕТЕН И
НЕЧЕТЕН БРОЙ ВЪГЛЕРОДНИ АТОМИ. КЕТОГЕНЕЗА И КЕТОЛИЗА.

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълните празните места в схемата, като отбележите субстратите, продуктите,

ензимикте и техните кофактори и отговорете на следните въпроси:
 Как се повлиява процесът липолиза от хормоните адреналин и глюкагон?
...........................................................................................................................................................
 Каква е ролята на ензима хормон чувствителна липаза в мастна тъкан?
...........................................................................................................................................................
 Какви ще бъдат метаболитните последици, ако е дефектен ензимът хормон
чувствителна липаза?
...........................................................................................................................................................
 Каква е метаболитната роля на глицерола, който се получава при липолиза?
...........................................................................................................................................................
 Каква е метаболитната съдба на ВМК, получени при липолиза на ТАГ?
...........................................................................................................................................................

адреналин
глюкагон

β-окисление

рецептор +

Ацил КоА в
хепатоцити
АТФ + ФФн
ДХАФ
+ ВМК с
албумин в ..........
ПКА кръвта .
..........
+ ТАГ .
АТФ АДФ глицерол 3-Ф

АДФ
ВМК ВМК
Ф АТФ
ДАГ глицерол

адипоцити хепатоцити

93
2. Опишете и изразете с реакция процеса “активиране на ВМК”.

3. Представете със схема механизма, чрез който ВМК преминават през вътрешната
митохондриална мембрана. Кои ензими участват и каква е тяхната роля?

Обяснете ролята на карнитина и посочете възможните последици от дефицит на карнитин.

Какви причини биха наложили прием на карнитин?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

94
4. В схемата по-долу напишете имената на ензимите и кофакторите, участващи в процеса
β-окисление на ВМК. Каква е биологичната роля на този процес? През колко цикъла на β-
окисление ще премине една мастна киселина с дължина на веригата С16?

β-въглероден атом

CH3-(CH2)n-CH2-CH2-CO-S-КoA
(ацил-КоА)

Е1

CH3-(CH2)n-CH=CH-CO-S-КoA
(еноил-КоА)

Е2

OH
CH3-(CH2)n-CH-CH2-CO-S-КoA
(3-хидроксиацил-КоА)

Е3

CH3-(CH2)n-CO-CH2-CO-S-КoA
(3-кетоацил-КоА)

Е4

CH3-(CH2)n-CO-S-КoA + CH3-CO-S-КoA
(ацил-КоА, по-къс с 2 С атома) (ацетил-КоА)
Ензим 1 (E1): ...................................................................................................................

Ензим 2 (E2): ...................................................................................................................

Ензим 3 (E3): ...................................................................................................................

Ензим 4 (E4): ...................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Напишете сумарното уравнение на разграждането на стеаринова киселина (С18Н36О2) и

направете енергетична равносметка на процеса.

95
6. Кои са крайните продукти от β-окислението на ВМК с нечетен брой въглеродни атоми и
каква е тяхната съдба?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Попълнете липсващите думи и фрази, отнасящи се за кетоновите тела (КТ), така че да

се получи вярно твърдение:

Кетоновите тела (КТ) са .................................., .................................... и ......................... Те

се образуват в клетките на ............................... (кой орган?) от субстрата
............................ . Биосинтезата им протича особено активно в периодите на
................................ . При продължително гладуване КТ стават важен източник на
енергия за .................................. (кой орган?), като доставят до ..........% от необходимата
му енергия. КТ са предпочитаният източник на енергия за .................................. (кой
орган?), правейки неговата работа с ~28% по-ефективна.

КТ се разграждат в ......................... тъкани до ....................... Продуктът от

разграждането им се включва в ...................... (кой цикъл?) и се окислява до ...........,
............. . При това се освобождава ...................... В ................... тъкан не протича
кетолиза, тъй като липсва ензимът .............................................., необходим за активиране
на ...................................... (кое КТ?).

8. Обяснете метаболитните причини за натрупване на кетонови тела при активно

протичащо β-окисление. Подкрепете отговора си със схема.

96
9. Сравнете процесите кетогенеза и кетолиза по посочените показатели:

Показател Кетогенеза Кетолиза

Субстрати

Продукти

Ензими

Клетъчна локализация

Тъканна/органна
локализация

10. Дефинирайте следните понятия:

Кетонемия: ..................................................................................................................................

Кетонурия: ..................................................................................................................................

Кетоацидоза: ...............................................................................................................................

Посочете възможни причини за възникването на кетоацидоза:

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. Какво знаете за ацетона като кетоново тяло?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Как ще се повлияе процеса кетогенеза при дефицит на ензима средноверижна ацил-
КоА дехидрогеназа?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

97
13. Съставете Ваша собствена „еволюционна диета” и се обосновете от биохимична
гледна точка.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

98
 Упражнение No 16 “ОБМЯНА НА ЛИПИДИ IІІ”
БИОСИНТЕЗ НА ВИСШИ МАСТНИ КИСЕЛИНИ И ТРИАЦИЛГЛИЦЕРОЛИ.
ТРАНСПОРТ НА ЕНДОГЕННИ ЛИПИДИ В КРЪВТА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Посочете субстратите за de novo биосинтеза на ВМК.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

2. Посочете три възможни източника на редуциращи еквиваленти за биосинтеза на ВМК?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

3. Попълнете липсващите ензими (Е1, Е2, Е3, Е4) и метаболити на схемата. Обяснете как
се осигурява цитозолен ацетил-КоА за биосинтеза на ВМК?
митохондрий цитозол

НАДФН+Н+ НАДФ
+
Синтез
на ВМК
α-КГ α-КГ
Е6
Е5
ацетил-КоА

Е2
Е1
ацетил-КоА
ОА
НАДН+Н+
ОА Е3
НАД+
малат

Ензим 1 (E1): ....................................................Ензим 2 (E2):......................................................

Ензим 3 (E3): ....................................................Ензим 4 (E4):......................................................

Ензим 5 (E5): ....................................................Ензим 6 (E6):......................................................

99
4. Синтазата на ВМК при бозайници е мултиензимен белтък. Наименовайте ензимните
му активности означени с 1 до 7.
II домен
I домен
6
5 III домен
2 4
1 3 4 АПБ
3 1
7

Функционална
4

структура
Y 1
Х
SH
SH

SH
Структура по
SH субединици
Х
Y

7 3
4 АПБ 1
III домен 1 4 2
5 3
4 6
I домен
1
II домен
1.............................................................................................
2. ...........................................................................................
3. ...........................................................................................
4. ...........................................................................................
5. ...........................................................................................
6. ...........................................................................................
7. ...........................................................................................
X. ..........................................................................................
Y. ..........................................................................................

Обяснете ролята на означените с “X” и “Y” остатъци. Какви са преимуществата от

обединяването на ензимните активности в един мултиензимен белтък?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

100
5. Кой ензим е регулаторен за биосинтеза de novo на ВМК? Представете схематично
регулацията му чрез фосфорилиране/дефосфорилиране като посочите влиянието на
хормоните инсулин, глюкагон и адреналин.

6. Защо не е възможно едновременно протичане с еднаква активност на процесите

биосинтез и β-окисление на ВМК?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Сравнете биосинтеза и β-окислението на ВМК като попълните таблицата.

Признак за сравнение -окисление на ВМК Биосинтез на ВМК

Тъканна локализация на процеса

Клетъчна локализация на
процеса
Субстрат
Преносител на ацетилни/ацилни
групи (совалков механизъм)
Кофактори

Краен продукт
Главен хормон, активиращ
процеса
Условия, при които процесът
протича активно
Биологично значение на процеса

101
8. Представете схематично получаването на стеарил-КоА от палмитил-КоА.

9. Защо хора и бозайници могат да синтезират само ненаситената олеинова киселина (ω-
9, n-9, C18:1), но не могат да синтезират линолова (ω-6, n-6, C18:2) и линоленова (ω-3, n-3,
C18:3)? Попълнете липсващите думи в схемата:
………………...-КоА
НАДН + Н+ +
Δ 9 ……………….. цитохром ....... О2
9 10
НАД+ + 2 H2O
олеил-КоА

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Представете биосинтеза на ТАГ в черен дроб. Сравнете биосинтезата на ТАГ в черен
дроб, мастна тъкан и интестинална мукоза. Каква е разликата в съдбата на ТАГ в черен
дроб и мастна тъкан?

11. Деветнадесетгодишно момиче е потърсило медицинска помощ поради наднормено

тегло (30 кг над референтните граници). При анамнезата се установява, че храната, която

102
приема, е изключително еднообразна. По-голямата част от калорийния внос е за сметка на
въглехидрати – бисквити, бонбони, безалкохолни напитки, сладкиши, тестени продукти.
Приемът на мазнини с храната е умерен. Обяснете как е възможно да се образува излишък
от ТАГ в организма, когато диетата съдържа предимно въглехидрати?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Попълнете липсващите думи и фрази, така че да се получи вярно твърдение.

VLDL се образуват в (коя тъкан?) .............................................и пренасят

ендогенни................................. от ................................. до ............................тъкани.
Насцентните VLDL съдържат апо-........ .. Те получават апо-....... и апо-......... от HDL в
кръвта. Капилярната (ензим) ............................................... се активира от апо-....... и
разгражда ............................. в състава на VLDL, при което VLDL се превръщат в
........................ липопротеини, от които се получават .............. липопротеини. Те
транспортират ................................... от .................................. тъкан до ............................
тъкани и съдържат апо-......... Останалите аполипопротеини се отдават на HDL. Чрез
рецептор-медиирана .................................. цялостният комплекс (........... + рецептор)
навлиза във вътрешността на клетката, където се слива с (кои
органели?)............................ Рецептори за .......... има в ендотелните клетки, гладко-
мускулните клетки и ................................... В (кои клетки?) ..................................... има още
и т. нар. “.............................”- рецептори. Названието им идва от английската дума за
боклукчия, тъй като те свързват химически модифицирани ............, които се получават
при по-дългото им престояване в кръвната плазма. Неконтролираното поемане на
последните от (кои клетки?) ......................................... води до превръщането им в
......................... клетки.

13. Посочете вярното твърдение:

а) изходен субстрат за синтезата на мастни киселини е ацил-КоА
б) вътрешната митохондриална мембрана е пропусклива за ацетил-КоА
в) синтазата на висши мастни киселини функционира като хептамер при бактерии и
човек
г) ацил-пренасящият белтък (АПБ) не съдържа сулфхидрилна група
д) скоростта на биосинтеза на ВМК е много по-ниска в състояние на добро хранене,
при храна богата на въглехидрати.
е) VLDL, LDL и HDL липопротеини са свързани помежду си в динамично
взаимодействие и пренасят ендогенно синтезирани липиди
ж) апоВ-100 се синтезира в червата
з) липолизата и реестерификацията на ТАГ в мастна тъкан протичат като права и
обратна страна на една и съща реакция

103
 14. Обяснете фигурата, представяща ролята на LDL за иницииране и развитие на процеса
атерогенеза.

Процеси, които протичат Видове клетки, рецептори, протеини и

патологични образувания

А........................................................................
Б........................................................................
В........................................................................
Г........................................................................
Д........................................................................
Е.........................................................................
Ж........................................................................
З........................................................................
И........................................................................
К........................................................................
Л........................................................................
1. ........................................................................
2. ........................................................................
3. ........................................................................
4. ........................................................................
5. ........................................................................
6. ........................................................................
7. ........................................................................
8. ........................................................................
9. ........................................................................
10. ........................................................................
11. ........................................................................

Дата: Заверил:

104
 Упражнение No 17 “ОБМЯНА НА ЛИПИДИ IV”
БИОСИНТЕЗ НА ХОЛЕСТЕРОЛ И ЖЛЪЧНИ КИСЕЛИНИ. ТРАНСПОРТ НА
ХОЛЕСТЕРОЛ В КРЪВТА – РОЛЯ НА LDL И HDL ЛИПОПРОТЕИНИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Холестеролът е най-широко разпространеният стерол при човека. В човешкия

организъм холестеролът се намира в две форми: свободен и естерифициран. На фигурата
попълнете липсващите думи. Коментирайте разликите в структурата и функцията на
свободния холестерол и на холестероловите естери.

………………………………………

……………………………………
…………………………………..

2. Преобладаващата част от холестерола в човешкия организъм има ендогенен произход,

защото холестеролът се синтезира в повечето тъкани. Черният дроб е единственият орган,
който екскретира холестерол. Попълнете липсващите думи в посочената схема, като
изясните главните пътища за внасяне и изнасяне на холестерол от черния дроб.
Коментирайте интегриращата функция на черния дроб в обмяната на холестерола.

Холестерол
от храната HDL

Черен
дроб
VLDL Екскреция на
холестерол

Периферни
тъкани

105
3. За клетките е критично да бъдат обезпечавани постоянно с холестерол. Каква е
биологичната роля на холестерола в човешкия организъм?
 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

4. Биосинтезата на холестерол протича най-интензивно в тънките черва, черния дроб,

кората на надбъбречните жлези, половите жлези и кожата. Попълнете таблицата, като
посочите основните особености в биосинтеза на холестерол.

Клетъчна локализация

Изходни вещества за първата реакция

Източници на енергия

Източник на редуциращи
еквиваленти

Регулаторен ензим

Субстрати и ензими, необходими за

получаването на 3-хидрокси-3-метил-
глутарил-КоА

Субстрати и ензими, необходими за

получаването на мевалонат

5. Изопентенил пирофосфат е изходно съединение за синтезата на важни биологично

активни вещества. Посочете примери за такива.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Обяснете как се елиминира холестеролът от организма?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Епидемиологични проучвания установяват, че приемането на 3 g разтворими фибри (3

ябълки или 3 порции по 28g овесени ядки) могат да снижат общия холестерол с около
0.129 mmol/L (приблизително с 2%). Оценено е, че това намалява риска от сърдечно

106
съдови инциденти с 4%. Дайте биохимично обяснение как включването в диетата на
разтворими фибри води до понижаване на плазмения холестерол.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Обяснете как веганите (хора, които не консумират никакви животински продукти)

компенсират нуждата си от холестерол.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

9. Обяснете един от механизмите за регулация на ензима ХМГ-КоА редуктаза, след като

попълните празните места и добавите липсващите стрелки в посочената схема.

инсулин

Н2О Фн

ХМГ-КоА редуктаза ХМГ-КоА редуктаза

неактивна активна
АДФ АТФ
Киназа на ХМГ-КоА Ф
редуктазата
глюкагон + ПКА + активна

Киназа на ХМГ-КоА ОН
редуктазата
неактивна

10. Какви други начини за регулиране на ХГМ-Ко редуктазата познавате? Допълнете

схемата.
_
ХМГ-КоА редуктаза
_
_ _

Посочете лекарства-инхибитори на ХМГ-Ко редуктазата, които се използват за лечение на

хиперхолестеролемия. Каква структурна особеност притежават тази група лекарства?
Какъв е принципът на тяхното действие?

107
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11.Направете сравнителна характеристика между първични и вторични жлъчни киселини,

като попълните следната таблица:
Първични жлъчни Вторични жлъчни
Признак за сравнение
киселини киселини
Видове, наименования

Тъканна локализация на
биосинтеза им
Субстрати, от които се
получават
 Обяснете защо жлъчните киселини са ефективни емулгиращи агенти в тънките черва.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Посочете биологичните функции на жлъчните киселини.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Каква е разликата мужду жлъчна киселина и жлъчна сол?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Какво представлява заболяването холелитиаза? Посочете възможни причини за
холелитиаза.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

108
12.Обяснете ентерохепаталния кръговрат на жлъчните киселини и соли, като попълните
празните места в схемата.

13.Характеризирайте HDL-липопротеините, като попълните празните места в текста, така

че да се получат верни твърдения:

HDL са ........................ по размер, с ............................ плътност. Образуват се в (кои

органи?) ........................ и .............................. Основни липиди, които HDL съдържат, са:
..............., ....................... и ........................... . Характерните за тях апопротеини са: апо
............, апо ........... апо .............. В кръвната плазма на повърхността на HDL се
присъединява ензимът ............................. (.................................................................................).
Този ензим …………………………………… холестерола, пренесен през мембраните на
периферните клетки върху HDL. HDL са резервоар на апопротеини – aпo ..........и aпo
............ . HDL пренасят холестерол от .............................. тъкани към ............................
тъкан за елиминиране. Високите нива на HDL са показателни за
.................................................. риск от атеросклероза.

14.Попълнете липсващите означения на схемата и обяснете:

 механизма на постъпване на холестерол в периферните клетки
...........................................................................................................................................................
 метаболитните ефекти на холестерол, постъпил чрез ендоцитоза в периферните клетки
...........................................................................................................................................................

109
...........................................................................................................................................................
 приликите и разликите между ензимите ЛХАТ и АХАТ
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

................
клетъчна мембрана
периферна клетка
................

Холестерол вграждане
в……………...
_ .
_
Лизозоми +
Синтез на
Синтез на холестерол
нови………. …………………....
de novo
рецептори (складиране на
холестерол)

15. Характеризирайте LDL като попълните празните места, така че да се получaт вeрни
твърдения:

LDL са....................... по размер и с .......................... плътност от VLDL. Образуват се в

....................... от VLDL под действие на ензима ................................................ . LDL са
богати на .................... и ............................. . Главен апопротеин е aпo-...................... . LDL
транспортират ендогенен холестерол и холестеролови естери (ХЕ) от:
................................. тъкан към ......................... тъкани. Поемането на LDL-холестерола
от периферните тъкани става чрез (кой процес?) .......................................
.............................. . LDL се свързва със специфични ....................... върху повърхността на
....................... клетки. LDL се задържат в кръвта ............................. от другите
липопротеини. Високите нива на LDL са показателни за .......................... риск от
атеросклероза.

16. За биосинтеза на стероидни хормони се консумира много малко холестерол в

сравнение с този, необходим за биосинтеза на жлъчни киселини. Попълнете празните
места в схемата, показваща етапите от биосинтеза на стероидни хормони от холестерол. В
таблицата посочете ензимните дефекти в биосинтезата на стероидни хормони и
последиците от тях за организма.

110
111
 Ензимен дефект Последици

Дата: Заверил:

112
 Упражнение No 18 “ОБМЯНА НА ЛИПИДИ V”
МЕТАБОЛИЗЪМ НА КОМПЛЕКСНИ ЛИПИДИ И ЕЙКОЗАНОИДИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Дайте примери за комплексни липиди, отнасящи се към посочените групи. Представете

общите структури на тези класове липиди като попълните празните места в схемите.

Глицерофосфолипиди:
..................................................
..................................................
..................................................
..................................................

Етерни
глицерофосфолипиди:
..................................................
..................................................
..................................................
...........................

Сфинголипиди:
..................................................
..................................................
..................................................
..................................................

Гликолипиди:
..................................................
..................................................
..................................................
..................................................

2. Каква е биологичната роля на комплексните липиди? Използвайте схемите от

предходната задача, за да обясните от какво се определя техния амфипатичен характер.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

113
3. Представете схематично двете стратегии за биосинтез de novo на глицерофосфолипиди.
Дайте подходящи примери за фосфоглицериди, които се синтезират по всяка от двете
стратегии.

Примери:
...........................................................................................................................................................

Примери:
...........................................................................................................................................................

4. Попълнете празните места в схемата.

фосфатидилхолин

серин
……

фосфоетаноламин

ЦТФ

ЦДФ-етаноламин
серин
ДАГ CO2

S-AM
S-AM: S-аденозилметионин
S-AM
(донор на метилови групи)
S-AM

фосфатидилхолин

114
5. Обяснете пътя за получаване на глицерофосфолипиди, включващ активиране на ДАГ.
Представете схема.

6. Новородено има затруднено дишане и показва признаци на респираторен дистрес

синдром. Обяснете с дефицит на кой фосфолипид е свързано това състояние и какво е
значението на този фосфолипид за нормалното развитие на белите дробове. Възможно ли
е подобен проблем да се наблюдава при възрастни индивиди?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Попълнете таблицата:

Комплексен липид Структурни особености Биологична роля

Фосфатидилинозитол

Кардиолипин

Тромбоцитно-
активиращ фактор

Сфингомиелин

Цереброзиди

Ганглиозиди

Сулфатиди

115
8. Посочете мястото на действие на отделните фосфолипази (А1, А2, С и D) в молекулата
на лецитина. Какви продукти ще се получат от действието на всяка от тях?

Място на
Продукти,
действие в
Фосфолипаза които се
молекулата на
получават
лецитина
А1

А2

9. Какви нарушения в обмяната на комплексните липиди лежат в основата на следните

заболявания:
 Болест на Gaucher
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 болест на Niemann-Pick
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Довършете схемата, за да покажете пътищата за метаболизъм на арахидоновата

киселина, при които се получават различни класове ейкозаноиди.

?
?
?

116
В таблицата опишете какви са физиологичните ефекти на основните класове ейкозаноиди.

Ейкозаноиди Физиологични ефекти

Простагландини

Простациклини

Тромбоксани

Левкотриени

Липоксини

11. Дайте примери за активатори и инхибитори на ензимите, които участват в

метаболизма на арахидоновата киселина.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Какъв е механизмът, чрез който се осъществява противовъзпалителното действие на

аспирина? На какво се дължат нежеланите му странични ефекти? Защо терапия с ниски
дози аспирин (50-80 mg/дневно) има благоприятен ефект при индивиди с риск от
тромбози?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. При някои пациенти с астма се наблюдава задълбочаване на астматичните пристъпи

при прием на нестероидни противовъзпалителни лекарства (НПВЛ). Дайте биохимично
обяснение на този факт.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

117
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

14. Защо при ескимосите честотата на инфарктите е много по-ниска, в сравнение с тази
при икономически развитите общества?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

15. Попълнете таблицата и сравнете трите изоформи на ензима циклооксигеназа (COX-1,

COX-2 и COX-3).

Признак за
COX-1 COX-2 COX-3
сравнение

Локализация

Субстрат/и

Концентрации на ПГ,
които продуцират
Лекарства, които
инхибират ензима
Фактори,
стимулиращи ензима

16. Кой етап от метаболизма на ейкозаноидите се инхибира от стероидни и кой от

нестероидни противовъзпалителни лекарства.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

118
 ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ВЪРХУ “ОБМЯНА НА ЛИПИДИ”

1. ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА КЕТОНОВИ ТЕЛА В УРИНА С

ТЕСТ ЛЕНТИ ПО МЕТОДА НА ЛЕГАЛ

Принцип на метода
Тестът е базиран на реакцията на ацетоацетат с натриев нитропрусид в силно алкална
среда, при която се получава цветен комплекс:

Na2 [Fe(CN)5NO] + CH3–CО–СН2–СООН + NaOH  Na3[Fe(CN)5N=CH–CО–R] + H2O

натриев нитропрусид ацетоацетат цветен продукт (виолетов)

Интензивността на оцветяването е пропорционална на количеството на ацетоацетата в

пробата.
Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Тест-ленти за кетонови тела
(2) Урина

В епруветка се поставят 10 ml урина. Потапя се тест лентата, така че да се намокрят

реагентните зони. Лентата се изважда веднага и се поставя хоризонтално върху филтърна
хартия, за да се избегне смесването на химикали от съседните реагентни зони. Резултатът
се отчита след 40 секунди.

Сравнява се промяната в цвета на реагентната зона, като лентата се държи близо до

цветната скàла. Концентрацията на кетонови тела, на която съответства полученото
оцветяване се отчита в mg/dL.

Референтни граници
За урина:
<5 mg/dL: (–) проба за ацетоацетат
>5 mg/dL: (+) проба за ацетоацетат

Резултати

..........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

119
2. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ТРИАЦИЛГЛИЦЕРОЛИ (ТАГ) В КРЪВЕН
СЕРУМ

Принцип на метода
липаза
Триглицериди Глицерол + мастни киселини

глицерол киназа
Глицерол + АТФ Глицерол-3-фосфат + AДФ

глицерол-3-фосфат оксидаза
Глицерол-3-фосфат + О2 Дихидроксиацетон фосфат + H2O2

пероксидаза
H2O2 + 4-Аминоантипирин Хинонимин + HCl + 4H2O + 4-хлорофенол

Количеството на образуваното цветно съединение (хинонимин) е пропорционалнo на

количеството на ТАГ в изследваната проба.
Техника на работа
Зареждат се 3 епруветки по следния начин:
епруветка 1 епруветка 2 епруветка 3 проба
Реактиви “празна” стандарт серум с неизвестно
проба ТАГ количество ТАГ
Работен разтвор 1000 µl 1000 µl 1000 µl
Дестилирана вода 10 µl - -
Стандартен разтвор на ТАГ - 10 µl
Проба серум - - 10 µl
Епруветките се разбъркват внимателно и се инкубират 10 мин. на стайна температура (20-
25°C). Отчита се абсорбцията (А) на стандарта и на пробата срещу тази на празната проба
на спектрофотометър при дължина на вълната =546 nm. Оцветяването е стабилно 60
минути в защитено от светлина място.
Изчисления
C(mg/dL)=(Апроба/Астандарт) . 200; 200 – концентрация на стандарта в mg/dL
C(mmol/L)=(Апроба/Астандарт) . 2,28; 2.28 – концентрация на стандарта в mmol/L
Референтни граници
<180 mg/dL или 1.71 mmol/L
стойности над 200 mg/dL или 2.28 mmol/L, получени по този метод се приемат за
повишени.
Резултати

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

120
3. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ОБЩ ХОЛЕСТЕРОЛ В КРЪВЕН СЕРУМ

Принцип на метода
Определянето на холестерол намира приложение при диагностицирането и мониторинга
на заболявания, свързани с липидния метаболизъм. Количеството на холестерол е
пропорционално на отделения водороден пероксид, който с хромофора образува цветно
съединение. Интензивността на оцветяването е пропорционална на количеството общ
холестерол в пробата.
холестеролестераза
холестеролов естер + Н2О свободен холестерол + ВМК
холестеролоксидаза
холестерол + О2 холестен-3-он + Н2О2
пероксидаза
2Н2О2 + 4-аминофеназон + фенол хинонимин (червен комплекс) + 4Н2О

Техника на работа
Зареждат се 3 епруветки по следния начин:
епруветка 2 епруветка 3
епруветка 1
Реактиви стандарт на проба кръвен
“празна” проба
холестерол серум
Работен разтвор 1000 µl 1000 µl 1000 µl
Дестилирана вода 10 µl - -
Стандартен р-р на
- 10 µl
холестерол
Проба - - 10µl
Епруветките се разбъркват внимателно и се инкубират 10 мин. на стайна температура (20-
25°C). Отчита се абсорбцията (А) на стандарта и на пробата срещу празната проба на
спектрофотометър при дължина на вълната =546 nm. Цветът е стабилен 60 минути, в
защитено от светлина място.

Изчисления
C (mmol/L) = (Апроба/Астандарт) . 5,17; 5,17 – концентрация на стандарта в mmol/L

Референтни граници:
 препоръчителни стойности: < 200 mg/dL(< 5.17 mmol/L)
 горна граница: 200 – 239 mg/dL (5.2 – 6.2 mmol/L)
 високи стойности: ≥ 240 mg/dL (≥ 6.21 mmol/L)
Резултати
...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

121
 Упражнение No 19 “ОБМЯНА НА АМИНОКИСЕЛИНИ І”
ХРАНОСМИЛАНЕ НА БЕЛТЪЦИ. ТРАНСАМИНИРАНЕ НА
АМИНОКИСЕЛИНИ. ОКИСЛИТЕЛНО И НЕОКИСЛИТЕЛНО ДЕЗАМИНИРАНЕ
НА АМИНОКИСЕЛИНИ. ОБЕЗВРЕЖДАНЕ НА АМОНЯК

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Посочете източниците за формиране на АК резерв в организма и неговото

изразходване.

АК резерв
100 г

2. Кои са етапите от храносмилането на екзогенните протеини? След като попълните

липсващите ензими в схемата, изяснете тяхната роля в разграждането на белтъците в
храносмилателния тракт. По какъв начин се активират ензимите, участващи в
храносмилането на белтъци?

храна

стомах
белтък
панкреас

олиго-
пептиди

тънки черва

кръв
ди- и три-
пептиди АК АК
+ АК АК АК
интестинални
епителни клетки

122
3. Попълнете схемата и обяснете механизма на секреция на солна киселина в стомашен
лумен и нейната роля. Кои са активаторите и инхибиторите на солнокиселата секреция?
Има ли отношение аминокиселината хистидин към храносмилането на белтъците?

ацетилхолин
ацетилхолинхистамин
хистамин PGPGE
I2 и 2E2 гастрин
гастрин
плазма Cl -–
плазма Сl HCO –
НСО
3 -
3

HCO – Gs
Gs АЦ
АЦ Gi
НСО
3 -
3

Cl – HН22CO
СО Са
Ca++++ АТФ
АТФ цАМФ
ц АМФ Са++
Ca++
Сl - 33

? ? ?
?

H2Н
O2О СО
CO22 HН+
+ KК++ Париетална клетка
париетална клетка
? ?
Стомашен
стомашен лумен
лумен
Сl –-
Cl Н++
H KК ++ 10

...........................................................................................................................................................

4. Посочете познатите Ви начини за абсорбция на АК.

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................
Представете схематично ко-транспорта на Na+ и АК в чревен епител. Активен транспорт
ли е това? Обяснете.

123
5. Попълнете празните места в схемата. Кои ензими (Е1 – Е5) катализират отделните
реакции? В кои клетки функционира γ-глутамиловият цикъл? Какви последствия би имал
дефицит на ензима Е4 за ентероцити?

Е5

глицин
АК Е1

Е4
цистеин
γ-глутамил-АК
Е2 н

Е3

Е1- ....................................................................................
Е2- ...................................................................................
Е3- ...................................................................................
Е4- ...................................................................................
Е5- ...................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Какво е значението на процеса дезаминиране на α-АК за техния метаболизъм?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Кои са познатите Ви механизми за освобождаване на амино-азота от АК при човек?

Кой от тези механизми има най-голямо значение?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

124
8. Попълнете сравнителната таблица относно действието на аеробните дехидрогенази
(ДХ) и глутаматдехидрогеназата, участващи в окислителното дезаминиране на АК:

Характеристика Аеробни ДХ Глутамат ДХ

Кофактори
Локализация в клетката
Органна локализация
Енергетична печалба
Функции

9. Защо повишен прием на храна с високо съдържание на белтъци се съпътства и с

повишени нужди от витамин В6? Представете схематично процеса трансаминиране, като
го комбинирате с:
 окислително дезаминиране

 редуктивно аминиране

Каква е ролята на трансаминирането?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Какво е биологичното значение на ензимите АсАТ и АлАТ? Какво знаете за

диагностичната им стойност?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

125
11. Азотът от -аминогрупите циркулира в кръвта главно като:
 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................а

12. Попълнете схемата за глюкозо-аланиновия цикъл и обяснете защо аланинът е една от

аминокиселините с най-голяма концентрация в кръвта. Има ли връзка между глюкозо-
аланиновия цикъл и цикъла на Кори?
......................... ......................... .........................
глюкоза

аланин

13. Кое е представеното по-долу съединение? Къде то се синтезира и кои са източниците

за N- и C-атоми?

...........................................................................................................................................................

14. Допълнете схемата, като обозначите липсващите ензими. Кой е скоростоопределящият

ензим и как се регулира?
Е2
CO2 + NH4+ Е1 карбамоил-Ф
L-цитрулин
2ATФ 2AДФ + Фн
 L-орнитин
N-ацетилглутамат L-аспартат
NH2
……………..  C=O
NH2
ацетил-КоA + глутамат
……………..
Е3

Е5
L-аргининосукцинат
L-аргинин
Фумарат

Малат ЦТК
Е4
Оксалоацетат
126
Е1- ...........................................................................
Е2- ..........................................................................
Е3- ..........................................................................
Е4- ..........................................................................
Е5- ..........................................................................

17. Амонякът е токсичен за човек, защото:

 ....................................................................................................................................................................... а

 .......................................................................................................................................................................

 ....................................................................................................................................................................... а

18. Източниците на амониеви йони в човешкия организъм са:

NH4+

19. Посочете връзката между метаболизма на глутамин и амониеви йони.

Дата: Заверил:

127
 Упражнение No 20 “ОБМЯНА НА АМИНОКИСЕЛИНИ ІІ”
ОБМЯНА НА ОТДЕЛНИ АМИНОКИСЕЛИНИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Напишете в скобите аминокиселините според продукта, до който се метаболизират:

пируват ацетил-КоА ацетоацетил-КоА

оксалоацетат цитрат

фумарат α-КГ глутамат

сукцинил-КоА

2. Решете кръстословицата и изпълнете задачите 2.1 и 2.2:

1
2 3
1 амониеви йони от организма 4. Най-малката
2 4
5 3
5 6
7 8
128
Хоризонтално:
1. Аминокиселина, прекурсор на серотонин.
2. Съкратено наименование на сулфатиращ
агент. 3. Форма, под която се елиминират
аминокиселина 5. Състояние, свързано с
4
нарушен синтез на меланин 6. Органична
киселина в състава на жлъчните соли 7.
Транспортна форма на амониеви йони в
организма 8. Продукт от метаболизма на
глицин, влизащ в състава на бъбречните
камъни
Вертикално:
1. Ензим, участващ в преноса на
аминогрупи 2. Аминокиселина, прекурсор
на катехоламини 3. Съкратено название на
метаболит, който се използва като тест
маркер при дефицит на фолиева киселина 4.
Аминокиселина със значение за процесите
на метилиране 5. Метаболитно нарушение,
свързано с натрупване на хомогентизат.
2.1. Продукт от метаболизма на коя аминокиселина е метаболитът, който сте записали в
кръстословицата в маркираното поле 2 хоризонтално? Представете схематично
възможните пътища за метаболизиране на тази АК.

2.2. Продукт от метаболизма на коя аминокиселина е метаболитът, който сте записали в

кръстословицата в маркираното поле 3 вертикално? Представете схема и обяснете
диагностичното му значение.

3. Представете схематично участието на метионин в реакциите на метилиране.

129
4. Пациентът е новородено от женски пол на здрави родители, нормално износено и
родено в термин. На третия ден от раждането след скринингов тест е установено 9-кратно
повишение на плазмената концентрация на фенилаланин. Назначен е допълнителен
обременяващ тест с тетрахидробиоптерин с последващо измерване на нивата на
фенилаланин на 4, 8, 12 и 24-ти час. Тестът показва, че концентрацията на
аминокиселината в плазмата продължава да се повишава. Нивото на птерини в урината,
както и активността на дихидробиоптерин редуктазата в еритроцити са в референтните
граници. Генетичните изследвания доказват хомозиготна мутация в гена за фенилаланин
хидроксилаза.
Предложете схема с възможните пътища за метаболизиране на фенилаланина.

Отговорете на въпросите:
 Каква диагноза бихте поставили и какви са конкретните причини за заболяването в
цитирания случай?
...........................................................................................................................................................
 Защо е назначен допълнителен обременяващ тест с тетрахидробиоптерин?
...........................................................................................................................................................
 Каква терапия бихте предложили?
...........................................................................................................................................................
 Какви други типове на заболяването можете да опишете?
...........................................................................................................................................................
 Какво е значението на скрининговите изследвания при новородени?
..........................................................................................................................................................
 Какви са последствията за индивида, ако заболяването не се открие възможно най-рано
и не се контролира?
...........................................................................................................................................................

130
8. Допълнете схемата като посочите биологично важни продукти, получаващи се от
тирозин и отговорете на въпросите:

тирозин

С нарушения в кой метаболитен път свързвате следните състояния и какви са клиничните

им изяви:
 Алкаптонурия
...........................................................................................................................................................
 Албинизъм
...........................................................................................................................................................
 Тирозинемия тип І
...........................................................................................................................................................
 Паркинсонова болест
...........................................................................................................................................................

9. Довършете схемата за биосинтез на катехоламини, опишете ензимите и обяснете

регулацията, като използвате знаците (+) – активиране и (–) - инхибиране.

тирозин
Е1:..................................
Е1 ........................................

3,4-дихидрокси- Е2:..................................
фенилаланин ........................................
?
? Е2
Невронална
стимулация Е3:..................................
допамин
........................................
Е3
Е4:..................................
норадреналин ........................................

Е4 +

адреналин

131
10. Попълнете таблицата относно биогенните амини.

Аминокиселина Производни биогенни амини Роля

цистеин
таурин
серин
γ-аминомаслена киселина
триптофан
тирозин
хистидин
путресцин

11. Отговорете на следните въпроси, касаещи разклонените аминокиселини:

 Кои са етапите от техния метаболизъм?
..........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Какво е тяхното значение за функцията на тъканта, в която се метаболизират?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Дайте пример за нарушение в обмяната им:
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

132
 ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ВЪРХУ
“ОБМЯНА НА АМИНОКИСЕЛИНИ”

1. ОПРЕДЕЛЯНЕ АКТИВНОСТТА НА АЛАНИН АМИНОТРАНСФЕРАЗА (АЛАТ)

В КРЪВЕН СЕРУМ

Принцип на метода
АлАТ
L-аланин + -кетоглутарат пируват + глутамат
пируват + 2,4-динитрофенилхидразин 2,4-динитрофенилхидразон на пирувата
Интензивността на оцветяването (концентрацията на 2,4-динитрофенилхидразона на
пируват) е пропорционална на количеството на пируват в пробата (серум) и на
активността на АлАТ.
Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Субстрат на АлАТ
(2) Физиологичен разтвор
(3) Кръвен серум
(4) 2,4- динитрофенилхидразин
(5) Разтвор на NаОН
Зареждат се 2 епруветки по следния начин:
Реактиви Проба/[ml] Празна проба/[ml]
Субстрат на АлАТ 0,25 0,25
Физиологичен разтвор – 0,05
о
Инкубация 3 мин. при 37 С
Серум 0,05 –
о
Инкубация 60 мин при 37 С
2,4- динитрофенилхидразин 0,25 0,25
Разбъркват се и се оставят 20 мин. при стайна температура
Разтвор на NаОН 2,50 2,50
Разбъркват се и се оставят 10 мин. при стайна температура
Измерва се оптичната плътност на пробата спрямо тази на празната проба на
спекртофотометър при дължина на вълната =540 nm.
Изчисления
Активност на АлАТ (μkat/L) = А (отчетена абсорбция) : 0,39
Референтни граници
Активност на АлАТ: жени <35 U/L (<0.60µkat/L); мъже <50 U/L (< 0.85µkat/L)
Резултати
...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................
...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

133
2. ОПРЕДЕЛЯНЕ АКТИВНОСТТА НА АСПАРТАТ АМИНОТРАНСФЕРАЗА
(АСАТ) В КРЪВЕН СЕРУМ

Принцип на метода
АсАТ
L-аспартат+ -кетоглутарат оксалацетат (ОА) + глутамат
ОА + 2,4-динитрофенилхидразин 2,4-динитрофенилхидразон на ОА

Интензивността на оцветяването (концентрацията на 2,4-динитрофенилхидразона на ОА)

е пропорционална на количеството на ОА в пробата (серум) и на активността на АсАТ.
Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Субстрат на АсАТ
(2) Физиологичен разтвор
(3) Кръвен серум
(4) 2,4- динитрофенилхидразин
(5) Разтвор на NаОН
Зареждат се 2 епруветки по следния начин:
Реактиви Проба/[ml] Празна проба/[ml]
Субстрат на АсАТ 0,25 0,25
Физиологичен разтвор – 0,05
о
Инкубация 3 мин. при 37 С
Серум 0,05 –
Инкубация 60 мин при 37оС
2,4- динитрофенилхидразин 0,25 0,25
Разбъркват се и се оставят 20 мин. при стайна температура
Разтвор на NаОН 2,50 2,50
Разбъркват се и се оставят 10 мин. при стайна температура
Измерва се оптичната плътност на пробата спрямо тази на празната проба на
спекртофотометър при дължина на вълната =505 nm.

Изчисления
Активност на АсАТ (μcat/L) = А (отчетена абсорбция) : 0,39
Референтни граници
Активност на АсАТ жени <35 U/L (<0.60µkat/L); мъже <50 U/L (< 0.85µkat/L)
Резултати
...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................
...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

134
3. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА УРЕЯ В КРЪВЕН СЕРУМ

Принцип на метода
Методът се базира на реакцията на Бертло, при която амониевите йони, освободени при
хидролизата на урея от ензима уреаза, реагират с натриев хипохлорид и образуват зелено
оцветен индофенол.

уреаза
Урея +H2O 2 NH4+ + CO2

Натриев нитропрусид
NH4 + + салицилат + NaClO индофенол
Интензивността на оцветяването на индофенола е пропорционална на количеството на
амониеви йони в изследваната проба.
Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Работен реагент – готов за работа (R1 + R3 = 100:1)
Фосфатен буфер 120 mmol/L
Натриев салицилат 60 mmol/L
Натриев нитропрусид 5 mmol/L
ЕДТА 1 mmol/L
Уреаза >500 kU/L
Нереактивни детергенти и стабилизатори

(2) R2 – реактив 2
Фосфатен буфер 120 mmol/L
Натриев хипохлорид 10 mmol/L

(3) Кръвен серум

(4) Стандартен разтвор на урея

Зареждат се 3 епруветки по следния начин:

Празна Проба Стандарт
Реактиви
проба [µl] [µl] [µl]
Работен реагент 1000 1000 1000
R1+R3
Кръвен серум - 10 -
Стандартен разтвор на урея - - 10
Разбъркване и инкубиране 5 мин при 20-25°C или 3 мин при 37°C
Реагент R2 1000 1000 1000
Разбъркване и инкубиране 10 мин при 20-25°C или 5 мин при 37°C.
Отчитане на абсорбцията на пробата и стандарта при 578 nm

135
Изчисления
С (mmol/L) = АПроба / АСтандарт x 8,325
С - концентрация на урея в пробата
А – измерена абсорбция
8,325 – концентрация на стандарта на урея в mmol/L

Референтни граници
Кръвен серум: 1,67-8,35 mmol/L (10-50 mg/dl)
Урина: 333-583 mmol/24 h (20-35g/24h)

Резултати
...........................................................................................................................................................
...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................
...........................................................................................................................................................
...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

136
 Упражнение No 21 “ОБМЯНА НА ПОРФИРИНИ”

БИОСИНТЕЗ И РАЗГРАЖДАНЕ НА ХЕМ. НАРУШЕНИЯ В ОБМЯНАТА НА

ХЕМ – ПОРФИРИИ. ХИПЕРБИЛИРУБИНЕМИИ. ОБМЯНА НА ЖЕЛЯЗОТО.

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете таблицата, съдържаща примери за важни белтъци с порфиринов скелет.

Белтък Функция
Транспорт на О2, СО2 и протони в кръвта, буферни функции

Депо на О2 в скелетните мускули

Компоненти на дихателната верига в митохондриите

Ензимен антиоксидант
Компонент на скъсените електрон-пренасящи вериги за
десатурация на мастни киселини
Компонент на скъсените електрон-пренасящи вериги за
метаболизъм на ксенобиотици

2. Попълнете във фигурите заместителите в позиции 1-8 за: А. Уропорфирин І и Б.

Уропорфирин ІІІ.

А. Б.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

137
3. Сравнете порфирини с порфириногени:
Физични Биологично/медицинско
Структура
свойства значение

Порфирини

Порфириногени

4. Колко молекули глицин са необходими за биосинтеза на хема в състава на една

молекула хемоглобин? Представете схема в подкрепа на отговора си.

5. Попълнете празните места в схемата. Характеризирайте ензима, катализиращ

посочената реакция от биосинтеза на хем по отношение на: вътреклетъчна локализация,
кофактор, регулация.

H2N—СН2—СООН
....................................................
+

Аминолевулинат
синтаза

Сукцинил-КоА -АЛК

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

138
6. Два от ензимите, участващи в биосинтеза на хем, са чувствителни към действието на
йони на тежки метали (например Pb, Hg и др.). Кои са тези ензими? Кои са техните
субстрати и метаболитни продукти? Представете реакциите, които те катализират:

7. При вродена (конгенитална) еритропоетична порфирия е налице дефицит на ензима

уропорфириноген ко-синтаза. Обяснете кой тип порфириногени ще се получават в големи
количества и какви ще бъдат клиничните последствия от това.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Историята на абсента, или както още са го наричали “Зелената фея”, започнала някъде
към края на 18 и началото на 19 век, когато Анри-Луи Перно заедно със заварения си брат
и втория си баща, Дюбие се сдобил с патент върху напитка, закупен от Швейцария.
Първоначално фабриката не се радвала на особен успех, но през 1840 г. ликьорът намерил
приложение във френската армия за превенция на треска, след което започнал да се търси
и по баровете. Много скоро “Зелената фея” започнала “да посяда” редом до изтънчени
дами и видни бохеми в почти всяко парижко кафене, както и да се появява по картините
на Мане, Дега и Гоген и в стиховете на модни тогава поети. Но какво всъщност
представлява абсентът? Това е високо-алкохолен (често над 60-70%) подсладен ликьор, от
различни билки, централно място от които заемат анасон и горчив пелин (Artemisia
absinthium). Последното растение съдържа алкалоида с психотропно действие туйон.
Постоянната консумация довежда до постепенно пристрастяване, съпроводено с
нарушения във функцията на бъбреците, лошо храносмилане, пристъпи на лудост и
“морален упадък”. Като една от жертвите на “Зелената фея” е сочен и Ван Гог. Има теза,
според която Ван Гог всъщност е страдал от остра интермитентна порфирия, чийто
симптоми се засилват от честия прием на абсент. Какво може да е основанието за това
твърдение? Обосновете се.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

9. От най-ранни времена вампирите са често срещан мотив във фолклора на народите.

Писмени източници от времето на шумерите споменават Ахраку – кръвопиещи демони.
Древните китайци пишат за „подскачащи трупове”, които изсмукват жизнената енергия
(Чи) на жертвите си. Дори и древните египтяни разказват легендата за богината Сахмет,
която била кръвопийца. Но най-известната версия на мита за вампирите е тази на
славянската и румънската култури.

139
През 1963 год. английският доктор Ли Илис публикувал изследване, в което твърдял, че в
основата на историите за вампири лежат не суеверия, а реални истории на хора, срадащи
от болестта порфирия. През Средновековието се смятало, че приема на прясна кръв
облекчава състоянието им.
Как мислите - имат ли сказанията за вампирите, толкова
интригуващи днес, реална основа? Обосновете се. Какво може
да е научното обяснение за твърдението, че е възможно
предпазване от вампири с чесън?
.............................................................................................................
.............................................................................................................
.............................................................................................................
.............................................................................................................

10.Попълнете липсващите думи и фрази в текста:

Свободният билирубин е (химична природа?)................................... съединение. Той се

транспортира от моноцитно-макрофагиалната система (ММС) до черния дроб като
....................... с белтъка ................................. . Комплексът на билирубин с
................................. се нарича ..................................... билирубин или..........................
билирубин. В черния дроб билирубинът се конюгира с ........................................
.................................... . Конюгираният билирубин е ............................... във водна среда. Той
се нарича .............................билирубин или .....................билирубин.

11. Обяснете eнтеро-хепаталния кръговрат на жлъчните багрила. Подкрепете обяснението

със схема.

140
12. Какво представлява състоянието “хипербилирубинемия”? Какви са възможните
причини и последствията от него?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

13. Поставете ключовите думи номерирани от 1-7 във фразите, така че да се получи вярно
твърдение:
1. абсорбция
2. Fe3+
3. трансферин
4. феропортин
5. Fe2+
6. феритин и хемосидерин
7. DcytB

През мембраните желязото се транспортира като...........................

В организма желязото се съхранява във вид на .................
Транспортът на желязото в кръвта се осъществява от белтъка.....................
В апикалната мембраната на ентероцитите се осъществява редукция на Fe3+ до Fe2+ от
белтъка .................
В състава на феритина, хемосидерина и трансферина желязото е под формата на............
За транспорта на желязо през базолатералната мембрана на ентероцитите към
циркулацията главна роля играе трансмембранният протеин....................
Нивата на желязото в организма се поддържат относително постоянни чрез регулация на
процесите на абсорбция и загуби на желязо. От двата процеса по-активна регулираща роля
има ..................

14. Дайте определения на понятията:

Понятие Определение
Общ (тотален)
желязо-свързващ
капацитет
Наситен желязо-
свързващ капацитет
Ненаситен (латентен)
желязо-свързващ
капацитет

141
15. Какво представлява хемосидерозата? Какви са причините за това състояние и до какви
метаболитни нарушения води?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

16. Какви видове хемохроматоза са Ви известни и какви са възможните причини за

тяхното възникване? Опишете метаболитните промени, които настъпват при състояние на
хемохроматоза.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

17. Как се регулира постъпването на желязо в периферните тъкани? Каква е ролята на

белтъка хепцидин?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

142
ПРАКТИЧЕСКО УПРАЖНЕНИЕ ВЪРХУ “ОБМЯНА НА ПОРФИРИНИ”
1. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ОБЩ И ДИРЕКТЕН БИЛИРУБИН В
КРЪВЕН СЕРУМ
Принцип на метода
Билирубин в присъствието на диазотирана с натриев нитрит сулфанилова киселина
образува цветен комплекс (азобилирубин), чиято абсорбция се измерва при 540nm.
Директният билирубин реагира директно с реактива, докато индиректният билирубин
трябва да се разтвори в кофеин за да реагира със сулфанилова киселина. Общият
билирубин е сбор от двете фракции (индиректен билирубин + директен билирубин).
Интензивността на цвета на този комплекс е пропорционална на концентрацията на общия
билирубин в пробата серум.
Техника на работа
Материали и реактиви:
(1) Сулфанилова киселина (R1)
(2) Натриев нитрит (R2)
(3) Разтвор на кофеин (R3)
(4) 0,9 % разтвор на NaCl
(5) Кръвен серум
В три епруветки се поставят:
Проба за общ Проба за директен Празна проба
Реактив
билирубин (µl) билирубин (µl) (µl)
R1 200 200 200
R2 20 20 -
0,9 % разтвор на NaCl - 2000 2000
R3 2000 - -
Проба (серум) 100 100 100
Епруветките се поставят за 5 min при стайна температура (20-25С). Отчита се
абсорбцията на трите епруветки срещу дест. Н2О при дължина на вълната λ=540 nm.
Изчисления
C (mmol/L) = (Aпроба – Апразната проба ) . 17,5 . 2 . 17,1;,
където:
А – измерената абсорбция
17.5 – теоретичен фактор след калибриране
2 – фактор на разреждане на серума
17.1 – фактор за превръщане в mmol/L
Референтни граници:
Общ билирубин: <17 μmol/L; Директен билирубин: 1.7 – 5.1 μmol/L
Резултати
...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

143
 Упражнение No 22 “ОБМЯНА НА НУКЛЕОТИДИ І”
СИНТЕЗ И РАЗГРАЖДАНЕ НА ПУРИНОВИ НУКЛЕОТИДИ. ХИПЕРУРИКЕМИИ.

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Посочете биологичната роля и метаболитните функции на пуриновите нуклеотиди:

 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................а

2. Означете субстратите, които участват в изграждането на пуриновия скелет.. Към кой

атом от пуриновия пръстен се присъединява рибозата?

3. Изяснете биологичната роля на фолиевата киселина и посочете поне три нейни

активни форми
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

4. Как сулфонамидите упражняват антибактериалния си ефект?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Защо при лечение с метотрексат се наблюдават анемия, кожни промени и косопад?

...........................................................................................................................................................

144
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. В кой орган се извършва най-активна биосинтеза de novo на пурини? Представете

скоростопределящите (лимитиращи) реакции за биосинтезата на пуринови нуклеотиди de
novo.

7. Обяснете получаването на АМФ и ГМФ от ИМФ. Като следвате посоката на стрелките

в схемата, попълнете липсващите съединения. Имената на ензимите запишете под схемата
срещу съответния символ:

инозин-5'-монофосфат (ИМФ)
+

E1 +
E3

ксантозин-5'-монофосфат (КМФ) аденилосукцинат

E2 E4

гуанозин-5'-монофосфат (ГМФ) аденозин-5'-монофосфат (АМФ)

Е1………………………………………………………………..
Е2………………………………………………………………..
Е3………………………………………………………………..
Е4………………………………………………………………..

145
8. Представете схематично регулацията на биосинтезата на пурини de novo.

9. Кои ензими участват в синтезата на АМФ, ИМФ и ГМФ от готови бази (по т.нар.
спасителен път)? В коя тъкан този път е особено активен?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Установен е дефицит на ензима хипоксантин/гуанин фосфорибозил трансфераза.

Обяснете как това ще се отрази на:
 спасителния път за синтезата на пуринови нуклеотиди
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 биосинтезата de novо на пуринови нуклеотиди
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

146
11. Кой процес е представен на схемата по-долу? В редовете под нея срещу съответния
символ запишете имената на метаболитите и ензимите.

аденозинин гуанозин
H2O пурин Ф
E1 нуклеозид
NH4+ фосфорилаза рибозо-1-Ф
А Д
пурин Ф
нуклеозид E3 NH4+
фосфорилаза рибозо-1-Ф
Б E2
В

H2O+О2 H2O2 ксантин H2O+О2

оксидаза H2O2

А: ……………………………….. Е1: ………………………………..

Б: ……………………………….. Е2: ………………………………..
В: ……………………………….. Е3: ………………………………..
Г: ………………………………..
Д: ………………………………..

12. На сутринта след новогодишно пиршество, 61-годишен мъж усетил тъпа болка в
палеца на левия си крак. Болката постепенно се усилила, което довело до хоспитализация
на четвъртия ден. При прегледа не са открити явни симптоми на заболяване. При
изследване на урината се получили следните резултати: рН = 4.5 и наличие на белтък в
урината; от седимента – кристали, излющени епителни клетки. Двадесет и четири
часовата урина съдържала 115 mg белтък (при норма до 30 mg/24ч.) и 8.97 mmol пикочна
киселина (при референтни граници 1,19 - 4,16 mmol/24ч.); серумно съдържание на
пикочна киселина 0.7 mmol/L (при референтни граници 0.2-0.4 mmol/L).
За какво нарушение считате, че се касае в описания случай?
...........................................................................................................................................................
Кои храни се характеризират с високо съдържание на нуклеотиди?
...........................................................................................................................................................
Считате ли, че богата на белтъци диета ще бъде във вреда на пациента?
...........................................................................................................................................................
Защо при увеличен прием на алкохол състоянието на пациента ще се влоши?
...........................................................................................................................................................

147
13. Попълнете таблицата за заболяванията, свързани с ензимни дефицити при пуриновия
метаболизъм.
Характеристики
Дефектен Характеристика на
Заболяване на дефектния
ензим нарушенията
ензим

Подагра

Синдром на
Леш-Нихан
Т и В клетъчен
имунодефицит

14. Защо всички болни от подагра имат хиперурикемия, но не всички с хиперурикемия са

болни от подагра? Защо при болестта на фон Гирке (вид гликогеноза) се развива
хиперурикемия?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

15.Обяснете молекулния механизъм на действие на алопуринол? Освен за облекчаване на

хиперурикемичните състояния, алопуринолът се използва и за усилване на антитуморните
свойства на 6-меркаптопурина. Защо? Какви са възможните последици при съвместно
прилагане на алопуринол и 6-меркаптопурин на болен от левкемия?

...................................................................................................

...................................................................................................

...................................................................................................

...................................................................................................
алопуринол 6-меркаптопурин
...................................................................................................

...........................................................................................................................................................
...................................................................................................

...........................................................................................................................................................
...................................................................................................

...................................................................................................
Дата: Заверил:

148
 Упражнение No 23 “ОБМЯНА НА НУКЛЕОТИДИ ІІ”
БИОСИНТЕЗ И РАЗГРАЖДАНЕ НА ПИРИМИДИНОВИ НУКЛЕОТИДИ.
БИОСИНТЕЗ НА ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОТИДИ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Означете субстратите, които участват в изграждането на пиримидиновия скелет и

направете сравнение с формирането на пуриновия пръстен.

2. Използвайте схемата, за да обясните биосинтезата de novo на пиримидиновите

нуклеотиди. Коя е скоростоопределящата реакция за тази биосинтеза? В редовете под
схемата, срещу съответния символ запишете имената на метаболитите и на ензимите.

CO2 + Глн + АТФ

E1
1

E3
E2

Ф
В
А Б

НАД+
E4
НАДН+Н+
E6

E5

УМФ ФР
ФФ ФФ
Д Г

А: ……………………………….. Е1: ………………………………..

Б: ………………………………... Е2: ………………………………..
В: ……………………………….. Е3: ………………………………..
Г: ……………………………….. Е4: ………………………………..
Д: ……………………………….. Е5: ………………………………..
Е6: ………………………………..

149
3. Сравнете биосинтезата de novo на пуриновите и пиримидиновите нуклеотиди като
дискутирате етапа, на който се включва рибозо-5-фосфат.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

4. Направете сравнителна характеристика на изоензимите карбамилфосфат синтетаза

(КФС) I и II, като попълните следната таблица:

Характеристика КФС I КФС II

Вътреклетъчна локализация
Метаболитен път, в който
участва
Източник на амино-азот
Активатори/инхибитори

5. С кой ензимен дефицит свързвате оротатната ацидурия? Защо пациентите с тази

диагноза са бледи и отпаднали? Какво е лечението на оротатната ацидурия тип І?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Попълнете на схемата имената на ензимите, които участват в биосинтезата на ЦТФ от

УМФ?
глутамин глутамат
АТФ АДФ АТФ АДФ АТФ АДФ+Ф
УМФ УДФ УТФ ЦТФ
..................... ........................ ........................

..........
7. Допълнете реакцията от биосинтезата на пиримидинови нуклеотиди.

Дискутирайте друг път за биосинтез напиримидинови нуклеотиди.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

150
8. Обяснете как се осъществява регулацията на биосинтезата de novo на пиримидинови
нуклеотиди. Отбележете с “+” или “–“ съответно активирането или инхибирането на
ключовите ензими. Попълнете в празните места в схемата активаторите или инхибиторите
на съответните ензими.

9. Попълнете празните места в схемата. В кои случаи може да се наблюдава повишена

екскреция на крайните продукти от разграждането на урацил и тимин? Свързана ли е със
значими клинични изяви свръхпродукцията на метаболити от разграждането на
пиримидините?

цитозин урац ил

β-уреидопропионат  - уреи доизобутират

NH2 CH2 CH COOH

CН3
+
3

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

151
10. Попълнете празните места в схемата и изяснете ролята на фолиевата киселина за
биосинтеза на дТМФ. Посочете на схемата кои ензими се инхибират от:
а) метотрексат
б) 5-флуорурацил
дТМ Ф ФН2

дУМФ Ензим:
НАДФН + Н+
Ензим:

НАДФ+
N5,N10 -метилен ФН4 Коензим:
ФН4 метил-ФН4

метионин хомоцистеин
гли сер

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. При изключително редкия вроден дефицит на дихидрофолат редуктаза се наблюдава

неонатална хиперхромна мегалобластна анемия. Обяснете ролята на ензима дихидрофолат
редуктаза. Обобщете метаболитната роля на фолиевата киселина в обмяната на
аминокиселини и нуклеотиди.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Защо 5-флуоро-2´-дезоксиуридин-5´-монофосфат се нарича още «инхибитор-

самоубиец»? Какво е приложението на препарата 5-флуорурацил (Efudex®)?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
5-флуорурацил
...........................................................................................................................................................
Дата: Заверил:

152
 ПРАКТИЧЕСКО УПРАЖНЕНИЕ ВЪРХУ “ОБМЯНА НА НУКЛЕОТИДИ”

1. КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ПИКОЧНА КИСЕЛИНА В КРЪВЕН

СЕРУМ

Принцип на метода
уриказа
Пикочна киселина + О2 + 2 Н2О алантоин + СО2 +Н2О2
пероксидаза
2 Н2О2 +ДХБК + аминофеназон хинонимин + НСl + 4 H2O
(ДХБК: 3,5-дихлоро-2-хидрокси бензенсулфонова киселина)

Техника на работа
Три центрофужни епруветки се зареждат по следната схема:
Стандарт на
Проба серумПразна проба
Реактив пикочна
(ml) (ml)
киселина(ml)
Реагент 1 1 1
Дестилирана H2O – – 0.02
Стандарт на пикочна киселина – 0.02 –
Серум 0.02 – –
Разбъркват се добре и се инкубират на стайна температура (20-25°C) за 15 мин.

Абсорбцията на пробата и стандарта се отчита на спектрофотометър срещу абсорбцията на

празната проба, при дължина на вълната λ = 520nm.

Изчисления
А проба
С (mol/L) = 300× 
А стандарт

Референтни граници:
Мъже: <417 μmol/L
Жени: <340 μmol/L

Резултати

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Изводи
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

153
 Упражнение No 24 “ХРАНЕНЕ И МЕТАБОЛИЗЪМ НА КСЕНОБИОТИЦИ”
МЕТАБОЛИЗЪМ НА КСЕНОБИОТИЦИ И ЕНДОБИОТИЦИНУТРИЕНТИ.
ХРАНЕНЕ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Ксенобиотиците са молекули, които не се продуцират в организма.

Дайте примери за различни типове ксенобиотици:
 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................а
Посочете пътища, чрез които ксенобиотиците могат да постъпят в човешкия организъм.
 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................а

2. Направете сравнителна характеристика на ксенобиотици и ендобиотици, като

попълните следната таблица:

Характеристика Ксенобиотици Ендобиотици

Произход

Метаболизъм

Роля на цит. Р450

Биотрансформация

3. В кои органи се осъществява активен метаболизъм на ксенобиотици?

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

154
4. Първа фаза от метаболизма на ксенобиотиците протича с активното участие на ензими,
принадлежащи към цит. Р450 суперфамилията. Характеризирайте тези ензими по следните
критерии:
 изоензимни форми
...........................................................................................................................................................
 субстратна специфичност
...........................................................................................................................................................
 реакционна специфичност
...........................................................................................................................................................
 фактори, влияещи върху активността им
...........................................................................................................................................................
 влияние на субстрата върху активността им
...........................................................................................................................................................
 субклетъчна локализация
...........................................................................................................................................................

5. Какви други биологични роли на ензимите от суперфамилията цит. Р450 познавате?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. След като попълните празните места в схемата, обяснете ролята на АКФ в механизма
на действие на цит. Р450

H ОН
P450(Fe3+)

2 Н+
P450 (Fe3+)
P450 (Fe2+)
H

НАДФН-Р450
редуктаза е- е- НАДФН-Р450
редуктаза
P450 (Fe2+) P450 (Fe2+) – О2

O2

155
7.Обяснете фаза 2 от метаболизма на ксенобиотиците, като попълните таблицата:
Субстрат за
Ензим Конюгиращ агент
конюгиране
Голям брой
GSH
ксенобиотици
УДФ- Анилин, бензоена
глюкуронилтрансферази киселина, канцерогени
Сулфотрансферази Феноли, стероли

8.Крайният ефект от метаболизма на ксенобиотиците може да бъде превръщането им в:

 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

9. Аналгинът (Metamizole) е един от най-достъпните и широко използвани аналгетици у

нас. Комбинираното му прилагане с някои антидепресанти води до забавяне на неговия
метаболизъм и до увеличаване на токсичността му. По какъв начин антидепресантите
повлияват биотрансформацията на аналгина?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. В каква посока трябва да се регулира терапевтичната доза на антикоагулант при

пациенти, приемащи едновременно и барбитурати? Какви са последиците за такива
пациенти, които след установяване на съответния дозов режим за антикоагуланта, рязко
преустановят приема на барбитурати?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. “Средиземноморската диета” е популярен модел за здравословно хранене, който

следва традиционните хранителни навици на остров Крит, други части на Гърция и Южна
Италия. Въпреки, че е описана подробно около 1960 год., тази диета добива широка
популярност след 1990 год. В края на 2010 год. ЮНЕСКО признава този модел за хранене
като нематериално културно наследство на Италия, Гърция, Испания и Мароко.
Основните аспекти на Средиземноморската диета са: редовна физическа активност,
висока консумация на зехтин, бобови култури, зърнени храни, плодове, зеленчуци,
подправки от диви и култивирани ароматни растения, умерена до висока консумация на
риба, умерена консумация на млечни продукти и вино, и ниска консумация на червено
месо и месни продукти. Типично за тази диета, е че липидите осигуряват от 25% до 35%
от общите калории, а наситените мастни киселини – съответно до 8%. Въпреки
повишения прием на липиди, смъртността вследствие на сърдечно-съдови заболявания е
ниска в Средиземноморието. При хипертоници със затлъстяване, които са подложени на
този хранителен режим, се регистрира намаление в нивото на ТАГ, понижаване на
кръвното налагяне и редуциране на теглото.

156
Защо Средиземноморската диета оказва благотворно влияние върху здравето на пациенти
със сърдечно-съдови заболявания?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Съпоставете Средиземноморската диета с хранителния режим на ескимосите по
отношение честотата на инфаркти.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
Защо умерената консумация на вино при Средиземноморската диета също има
благотворно влияние върху здравето?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Съставете Ваша собствена хранителна пирамида, като се ръководите от типовете

храни, които сте приемали в рамките на последната седмица. Ако приемем, че
препоръчителното съотношение е 15-20% белтъци, 30% липиди и 50-55% въглехидрати,
то установявате ли съществени различия с Вашите хранителни навици?

5%
мазнини
сладкиши

10 % 5-10
мляко и %месо,
млечни яйца,
продукти риба
20% 15%
зеленчуци, плодове
картофи,
салата

40% хляб, зърнени храни,

макаронени изделия

препоръчителна хранителна пирамида собствена хранителна пирамида

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

157
13. Пробиотиците са жизнеспособни микроорганизми под формата на хранителна добавка,
които подобряват дейността на гастроинтестиналния тракт. Наблюдавани ефекти при
пробиотици са намаляване на лактозната непоносимост, неселективно усилване
активността на гранулоцити и др. Пребиотиците са хранителна добавка на базата на
инулин (неразградим от човека олигозахарид), която селективно усилва дейността на
съществуващите бактерии в червата. Това осигурява повече енергия и субстрати за
метаболизма. Някои изследвания показват и увеличаване абсорбцията на Ca2+.
Могат ли пробиотиците и пребиотиците да бъдат разглеждани като функционални храни?
На какви условия трябва да отговарят хранителните добавки, за да се включат в групата на
функционалните храни?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

14. Синдромът на китайския ресторант

Първото съобщение за здравен проблем след консумация на храна в китайски ресторант,
съдържаща обилно мононатриев глутамат, е от 1968 г. в САЩ - изтръпване, мравучкания,
„стягане" в гърдите. Многократно са регистрирани данни за сърцебиене, слабост,
безсъние, главоболие, спазми и болки в корема, чревни разстройства, промени в зрението,
задух, алергични реакции.
Мононатриев глутамат (Е621) подобрява вкуса на храната и провокира хората да ядат
повече, дори ако са сити (хиперфагия). Като съставка на храната попада в групата на
веществата с пристрастяващ ефект, което обяснява и масовото му разпространение и
екстремна употреба. Той е “скрит” в различни продукти – снакс, чипс, консерви,
замразени храни, сухи супи, бульони на кубчета, различни подправки, соеви сосове,
сосове за месо. При експеримент с мишки, хранени с Е621, резултатът бил
високостепенно затлъстяване, както и патологични промени в мозъка и в различни органи,
свързани предимно с ендокринната функция.
Какво се крие зад разрешените “Е”-та? Как бихте дискутирали тяхната безопасност?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

15. Смята се, че консумацията на енергийни напитки подобрява концентрацията,

работоспособността и двигателната активност. Основни компоненти в състава им са
кофеин, таурин, креатин, витамини и въглехидрати. Сред младите хора е особено
популярно смесването на енергийни напитки с алкохол с цел отлагане ефектите на
алкохолното опиянение: замайване, главоболие, слабост.
При проведено изследване сред 26 здрави, млади доброволци е бил проследен ефектът от
прием на чист алкохол, сравнен с едновременен прием на алкохол (водка) и енергийна
напитка (Red Bull®). Изследването включвало тестове за субективна самооценка, както и
обективно измерване на определени показатели. Резултатите показали, че субективното
усещане за замаяност, главоболие, отпадналост и алкохолен дъх е много по-слабо при
групата, консумирала алкохол и енергийна напитка, в сравнение с тази, консумирала само
алкохол. При направените обективни тестове за двигателна координация, време за

158
реакция и съдържание на алкохол в издишвания въздух не били установени статистически
значими разлики между двете групи доброволци.
Отговорете на следните въпроси, като се обосновете:
 Крие ли риск за здравето смесването на алкохол с енергийни напитки?
...........................................................................................................................................................
 Защо енергийните напитки не трябва да се консумират непосредствено преди активно
физическо натоварване?
...........................................................................................................................................................

16. Защо креатинът и тауринът се употребяват като хранителни добавки от хора,

занимаващи се активно със спорт и боди-билдинг?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

17. Кое от следните твърдения за приложението на нанотехнологиите в хранителната

индустрия е вярно?
а) нискомолекулни, желиращи агенти (малки органични молекули, които формират
гел/желе във воден разтвор, растителни масла и др.) в храната имат свойството да
улавят/свързват повече полезни съставки. Така те увеличават разтворимостта на слабо
разтворимите компоненти в хранителните продукти и ги правят по-усвояеми от
организма.
б) нанотехнологиите дават възможност за създаването на методи за по бързото и
ефективно мониториране на качеството при производството на храни
в) използват се микросита за разделяне и фракциониране, например за производството
на диетична майонеза с ниско съдържание на мазнини.
г) с помощта на наноносители се въвеждат нутриенти и лекарства
д) нанотехнологиите се използват за подобряване качеството на опаковъчните материали
е) всички са верни

18. Все повече полиетиленовите опаковки изместват стъклените при опаковането на

напитки, сосове, храни. Защо се препоръчва употребата на сокове и вода от стъклени
бутилки и специалните хартиени опаковки? Защо приложението на иновационния
материал DLC (Diamond-Like Carbone) за опаковането на храните увеличава
безопасността им?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

159
 Упражнение No 25 “ОБМЯНА НА КАЛЦИЙ”
ХОРМОНИ, РЕГУЛИРАЩИ КАЛЦИЕВИЯ И ФОСФАТНИЯ МЕТАБОЛИЗЪМ

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Обяснете биологичната роля на калциевите йони, като попълните празните места в

схемата:

Биологична
роля на Са++

2. Нивото на циркулиращия калций в кръвта се регулира от хормони, които повлияват

следните процеси на постъпване и изнасяне на калций:
 .......................................................................................................................................................................а

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

3. Попълнете таблицата и обяснете ролята на паратхормона (ПТХ) за регулацията на

калциево-фосфатната хомеостаза.

Химична природа
Клетки, които синтезират/
секретират активната форма
Секрецията се активира от

Прицелни органи

Ефект върху прицелните органи

Ефект върху плазмената
концентрация на Са2+

160
4. Попълнете таблицата и обяснете ролята на калцитонин за регулацията на калциево-
фосфатната хомеостаза.

Химична природа
Клетки, които синтезират/
секретират активната форма
Секрецията се активира от

Прицелни органи

Ефект върху прицелните органи

Ефект върху плазмената
концентрация на Са2+

5. Попълнете празните места в схемата и обяснете биосинтеза и ролята на вит. D3 за

калциево-фосфатната хомеостаза.

7-дехидрохолестерол
(кожа)

…………....

холекалциферол (вит. D3)

(кожа)

Транспорт с .…….

Ензим:......................................................
…………………………………..………………
холекалциферол
(черен дроб)

Ензим:...................................................... . .

…………………………………..………………
25-(ОН) холекалциферол
(тъкан:.........................)
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

161
6. Довършете фразите така, че да се получи вярно твърдение:
Циркулиращата форма на вит. D в кръвта е:………………....................................................
Циркулиращата форма на вит. D се синтезира в:…................................................................
Физиологично активната форма на вит. D е:...........................................................................
Физиологично активната форма на вит. D се синтезира в: ...................................................
Неактивната форма на вит. D е ................................................................................................

7. При болни в IV – V стадий на хронична бъбречна болест практически отсъства

бъбречна функция. Те развиват също така и костна болест, вследствие на вторичен
хиперпаратиреоидизъм (многократно увеличени нива на ПТХ, в резултат на отпадане на
бъбречната функция).
Обяснете ролята на бъбрека за поддържане на калциево-фосфатната хомеостаза. Кой
ензим от биосинтеза на холекалциферол ще бъде дефицитен при тези болни? Какви ще
бъдат плазмените нива на калций при тях? Защо те развиват вторичен
хиперпаратиреоидизъм? Каква очаквате да бъде костно-минералната им плътност?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

8. Рахитът е заболяване, което се развива у децата при недоимък на витамин D. При деца с
рахит се забавя процесът на костна минерализация и костите често се деформират. Други
признаци на болестта са, повишена раздразнителност и нервност и предразположеност
към други заболявания.
Профилактиката на рахита започва още преди раждането. Бременните трябва да приемат
достатъчно витамин D през последните месеци на бременността и да се излагат на слънце.
От края на първия или втория месец след раждането се препоръчва суплементиране с
витамин D-съдържащи препарати, самостоятелно или във вид на обогатено мляко, и
облъчване с ултравиолетови лъчи.
Обяснете на молекулно ниво защо профилактиката на това заболяване включва
суплементиране с витамин D и облъчване с ултравиолетови лъчи. Какви са очакваните
нива на плазмения калций при деца с рахит?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

162
 Упражнение No 26 “МЕЖДУКЛЕТЪЧНА СИГНАЛИЗАЦИЯ I”
ОБЩИ ПРИНЦИПИ НА МЕЖДУКЛЕТЪЧНАТА СИГНАЛИЗАЦИЯ. ВИДОВЕ
РЕЦЕПТОРИ. ВЪТРЕКЛЕТЪЧНИ РЕЦЕПТОРИ, РЕЦЕПТОРИ ЙОННИ КАНАЛИ
И G-ПРОТЕИН СВЪРЗАНИ РЕЦЕПТОРИ – АДЕНИЛАТЦИКЛАЗНА СИСТЕМА

ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете липсващите думи и фрази:

Сигналната трансдукция включва: предаване на информацията чрез ...................
........................; приемане на сигнала чрез ......................... ..........................; интегриране,
усилване на сигнала и пренасянето му до прицелното място чрез активиране на система
от вътреклетъчни ............................... ....................... . В резултат прицелната клетка
реализира адекватен ................. ........................... .

2. Отбележете верните твърдения, касаещи характерните белези на сигналните молекули:

а/ осъществяват пренос на информация до близко или далечно стоящи клетки
б/ секретират се от сигнализиращата клетка в екстрацелуларното пространство или се
пренасят чрез дифузия през плазмалемата
в/ могат да бъдат с хидрофилна и/или с хидрофобна природа
г/ предизвикват клетъчен отговор само когато са във високи концентрации
д/ свързват се със специфични рецептори в прицелната клетка
е/ концентрациите им се променят циклично
ж/ скоростта на биосинтез и секреция се регулира от йерархична система: хипоталамус-
хипофиза-периферни жлези-прицелни клетки

3. Посочете основните видове междуклетъчна сигнализация и обяснете спецификите им:

(2) (3)
(1)

(4) (5)

163
(1)....................................................................................................................................................

(2)...................................................................................................................................................

(3)...................................................................................................................................................

(4)....................................................................................................................................................

(5)....................................................................................................................................................

4. Означете основните компоненти на вътреклетъчен сигнален път, представен на схемата по-

долу. Обяснете ролята на всеки един от тях.

Вътреклетъчен сигнален път

Промяна в Промяна в генната Промяна във формата или

метаболизма експресия движението на клетката
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

5. Попълнете таблицата и обяснете особеностите и ролята на рецепторите при предаване на

информация между клетките.

Видове рецептори
Тип свързване на лиганда (сигналната
молекула)
Специчфичност към лиганда

Клетъчна локализация
Молекулни събития, които се активират
от лиганд-рецепторния комплекс
Биологична роля

164
6. Обяснете кой тип ефекторна верига е изобразен на схемата и опишете компонентите,
означени с цифри. Дайте примери за сигнални молекули, които използват този или подобни
пътища за предаване на сигнала.

1 – ………………………

клетъчна 2 – ………………………
мембрана 2
3 – ………………………
цитоплазма
3
4 – ………………………

5 – ………………………
4
ядро

ДНК

иРНК
5

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Използвайте схемата от предишния въпрос, за да попълните празните места в текста:

...................................хормони по своята природа са ................................................ Те

......................................... през плазмената мембрана и намират своите рецептори в
............................................... или в .................. на прицелните си клетки. Рецепторите за
стероидни хормони са ................................................. фактори. Свързването на хормона
(лиганда) с рецептора предизвиква ...................................................... промени в рецептора.
В резултат на това, ...........................-................................... комплекс се свързва с
............................................................ ..................................... елемент от ...................................
на прицелни гени и се реализира специфичен.................................... ....................................... .

165
8. Попълнете празните места в схемата и обяснете структурата на никотиновия ацетилхолинов
рецептор и промените, които настъпват в него след свързване на ацетилхолин.

Централен канал

………….
αсубединица
алфа
….. …..
субединица

Йонен канал

….

9. Представете сигнална (ефекторна) верига за предаване на сигнал от невротрансмитера

ацетилхолин с участието на никотиновия ацетилхолинов рецептор:
лиганд (ацетилхолин) рецептор  ............................................................................................
....................................................................................................................................................
........................................................................................................................................................
......................................................................................................................(клетъчен отговор).

10. Миастения гравис е хронично автоимунно заболяване, характеризиращо се с

образуване на антитела срещу ацетилхолиновите рецептори. В резултат на това се
намалява броят на ацетилхолинови рецептори в постсинаптичната мембрана на нервно-
мускулния синапс.

 Обяснете кой етап от ефекторната верига на ацетилхолин се нарушава.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Какви ще са възможните прояви на това заболяване?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
 Обяснете защо за лечението на това заболяване се използват инхибитори на ензима
ацетлхолинестераза, хидролизираща ацетилхолина до холин и ацетат.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

166
11. Тубокураринът е активният компонент на растителната отрова кураре. Попаднал в
кръвта, той се конкурира с ацетилхолина за свързване с никотиновия ацетилхолинов
рецептор. Обяснете защо този алкалоид има смъртоносно действие.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

12. Попълнете празните места в схемата и обяснете особеностите в структурата на

мембранните рецептори, пренасящи информация с помощта на тримерни G-протеини:

13. Попълнете таблицата и обяснете особеностите на тримерните G-протеини:

Особености в
структурата

Видове G-
протеини

Локализация

Активна/неактивна
форма

Биологична роля

167
14. Попълнете празните места в схемата и обяснете как тримерните G-протеини участват в
предаването на сигнала в дадена клетка.

ГТФ ГДФ
R E1 E2 R E1 E2
γ β ………………… γ β
α ……….. α
…… ……
неактивно състояние активно състояние

………………………….. …………………………..

Фн
R E1 E2 R E1 E2
γ β ………………… γ β
α ……….. α
ГДФ ……..

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

15. Обяснете ролята на вторичния посредник цАМФ в процеса на междуклетъчна

сигнализация. Как се регулира вътреклетъчната концентрация на цАМФ?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

16. Попълнете празните места в схемата и обяснете ефекторната верига на хормони,

предаващи информация с посредничеството на цАМФ.

хормон ................ ........... ............. ........................ ........ ...... .............................. ........ ...... .........

................................... ................... ... цАМФ

Фосфорилиране на Фосфорилиране на
вътреклетъчните протеини транскрипционни фактори

Клетъчен отговор

.......................... ............... ..................................... ......................................................... ...................... ..

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

168
17. Холерният токсин блокира ГТФ-азната активност на αs-субединицата на Gs-протеина.
Обяснете как това ще се отрази върху нивото на цАМФ в цитозола на прицелните клетки
и върху ефекторната верига, използваща цАМФ като вторичен посредник.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

18. Пертусис токсинът блокира активирането на αi-субединицата на Gi-протеина.

Обяснете как това ще се отрази върху нивото на цАМФ в цитозола на прицелните клетки
и върху ефекторната верига, използваща цАМФ като вторичен посредник.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

169
 Упражнение No 27 “МЕЖДУКЛЕТЪЧНА СИГНАЛИЗАЦИЯ II”
G-ПРОТЕИН СВЪРЗАНИ РЕЦЕПТОРИ – ФОСФОИНОЗИТИДНА СИСТЕМА.
РЕЦЕПТОРИ СЪС СОБСТВЕНА КАТАЛИТИЧНА АКТИВНОСТ.
ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете празните места на схемата и обяснете ефекторната верига на хормони,

предаващи информация чрез фосфоинозитидната сигнална каскада. Каква е ролята на
калциевите йони?

хормон рецептор плазмена мембрана

................. ...........

ФИФ2

....... .........

Протеинкиназа......
Ca2+ Ca2+……киназа
Ca2+

..........................................................

Клетъчен
отговор

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

2. Дискутирайте значението на Са2+ за клетъчната сигнализация. Посредством какви

механизми Са2+ участват в предаването на сигнала? Сравнете активирането на протеин
киназа С (PKC) и калмодулин киназа (CAM-киназа).
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

3. Попълнете празните места в схемата и обяснете:

 особеностите в структурата на мембранните рецептори с ензимна активност

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

170
 кои са техните лиганди
...........................................................................................................................................................
 какви сигнални протеини участват в сигналната каскада
...........................................................................................................................................................

Лиган : ........................

Рецептор : .........................
плазмена мембрана
цитозол
+ Ras + MAP-киназа киназа киназа
.................... Ras
Фн Фн
Фн ГДФ ....... АТФ
АДФ
Фн
..................................
Фн
АТФ
АДФ
Фн
..............................
АТФ Фн
АДФ

Фн Фн Ген-регулаторни
- протеини

................................... .................................

4. Сравнете тримерните G-протеини с мономерните G-белтъци (Ras –белтъци).

Признак за сравнение Тримерни G-протеини Ras-протеини

Особености в структурата

Активна/неактивна форма
Лиганди, които могат да ги
активират
Рецептори, които могат да
ги активират
Сигнални ензими, които се
активират от G-протеините
Биологична роля

5. Попълнете липсващите думи в текста.

Под действие на .............................., образуван от аргинин и с участие на Са2+-калмодулин

зависима ......................................в ендотел се освобождава цГМФ, синтезиран от

171
ензима................................ . Sildenafil (Viagra) и подобните лекарствени средства
инхибират ензима .......................................... и респективно – разграждането на
........................ във васкуларните съдови гладкомускулни клетки на пениса, което води до
............................. на гладки мускули.

6. Обяснете ролята на цГМФ за зрителната рецепция, като използвате следните ключови

думи.
Ретинални пръчици:.........................................................................................................................
Родопсин/метародопсин:.................................................................................................................
Ретинал:.............................................................................................................................................
Трансдуцин:......................................................................................................................................
Натриеви канали:.............................................................................................................................
Фосфодиестераза:............................................................................................................................

7. Представете схематично сигналната каскада на интерферон.

Дата: Заверил:

172
 Упражнение No 28 “МОЛЕКУЛЯРНА БИОЛОГИЯ”
РЕПЛИКАЦИЯ, ТРАНСКРИПЦИЯ, ТРАНСЛАЦИЯ.
РЕГУЛАЦИЯ НА КЛЕТЪЧНИЯ ЦИКЪЛ. ОНКОГЕНИ И ТУМОРНО-
СУПРЕСОРНИ ГЕНИ. РЕГУЛАЦИЯ НА ГЕННАТА ЕКСПРЕСИЯ.
ВЪПРОСИ И ЗАДАЧИ

1. Попълнете схемата, като посочите участието на различните видове нуклеотиди в

клетъчния метаболизъм.

нуклеотиди

2. Сравнете ядрената ДНК с митохондриалната, като попълните таблицата:

Признак за сравнение Ядрена ДНК Митохондриална ДНК

Място на образуване

% от ДНК, която кодира белтъци

Структура

Генетичен код

Функция

Репликация-особености
Фаза от клетъчния цикъл, през
която се образува

3. Вашият пациент има заболяване, причината за което е дефект в митохондриалната

ДНК. Предполагате, че дефектът е унаследен от:
а) майката

173
 б) бащата
в) или от майката, или от бащата
г) и от майката, и от бащата
д) нито от майката, нито от бащата

4. Кои са основните ензими, участващи в репликацията и транскрипцията? Направете им

сравнителна характеристика, като попълните таблицата.
Основен ензим при Основен ензим при
Признак за
репликацията транскрипцията
сравнение
................................ ......................................
Структура

Субстрати

Продукти
Място на
действие
Механизъм на
действие
Контрол на
точността

5. Какво представлява централната догма на молекулярната биология? Има ли

изключения от нея? Дайте примери за такива и подкрепете твърденията си схематично.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

6. Попълнете празните места в схемата като използвате цифрите от списъка по-долу.

Обяснете принципа и биологичното значение на процеса.

174
 1) ДНК-полимераза
2) Праймаза
3) РНК праймери
4) ДНК-лигаза
5) Топоизомераза
6) Хеликаза
7) Едноверижно свързващи се протеини
8) Водеща верига
9) Изоставаща верига с фрагменти на Оказаки

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

7. Имайки предвид структурата на ацикловир, какъв според Вас е вероятният механизъм

на действие на препарата? Дайте примери и за други антиметаболити, които работят по
подобен начин.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................
ацикловир
...........................................................................................................................................................

8. Първите симптоми на Болестта на Хънтингтън обикновено се проявяват на възраст 30-

40 години. Заболяването се характеризира с нервна дегенерация, интелектуално
изоставане, тремор на крайниците, загуба на волевия контрол на мускулите, оттам и
затруднения в говора, храненето и ''танцуваща'' походка. С какъв тип генетични мутации е
свързано състоянието?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

175
9. Четиридесет и пет годишна жена има кожни прояви на Xeroderma Pigmentosum (XP), без
сравнително честите неврологични симптоми. Тя имала кожа силно обсипана с лунички и
рак на кожата от дълго време. През последните 5 години са й били оперирани 35
неоплазмени образования на различни участъци на кожата, изложени дълго време на
слънцето. Напоследък е настъпило усложнение и в очите, което изисква трансплантация
на роговицата. Какви са молекулярните дефекти при заболяването и каква е тяхната
връзка с предразположеността към рак? Опишете ензимните системи, участващи в
поправката на увредената от UV-светлина ДНК. Какво е тиминов димер? Дайте примери
за други заболявания свързани с генетични дефекти в ДНК репарацията.
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

10. Обяснете как се поправят погрешно сдвоените нуклеотиди в новосинтезираната ДНК

верига. По какъв начин репарационните системи различават дъщерната от матричната
верига?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

11. Контролът на репликацията при еукариоти се осъществява с участието на различни

белтъци:
 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 .......................................................................................................................................................................

 други

12. Представете схематично общата структура на еукариотен промотор.

176
13. Заместете буквите в картинката със съответстващите им понятия. Коментирайте
биологичното значение на процес Б. Дайте пример за състояние, възникнало вследствие
грешки при изпълнението му.

А) .................................................................................................................................................
Б) ..................................................................................................................................................
В) .................................................................................................................................................
а) .................................................................................................................................................
б) ..................................................................................................................................................
в) ..................................................................................................................................................
г) ..................................................................................................................................................

14. Процесингът на РНК включва

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

15. Транспортните РНК-и свързват ковалентно аминокиселините чрез:

а) голяма субединица на рибозомите
б) аминоацил т-РНК синтетаза
в) пептидил трансфераза
г) малката субединица на рибозомите
д) полизомите

177
16. Наименовайте участъците на тРНК. Каква е функцията на всеки един от тях?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

17. Коментирайте РНК интерференцията.

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

18. Генът p53 бе открит през 1979 г. Наричан ''пазител на генома'', ''главния пазач'' и с още
много други определения, той е сред най-забележителните и интересни за изучаване гени,
свързани с онко-заболяванията. След редица изследвания през 1989 г. р53 белтъкът
заслужено получава званието ”Молекула на годината” заради факта, че повече от
половината ракови заболявания са били свързани с мутации именно в този ген. Какво
представлява продуктът на този ген? В регулацията на кои процеси участва и по какъв
начин се елиминира от клетката? Как се регулира неговата активност?
...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

178
19. Всяка молекула, която участва в стъпките на вътреклетъчната сигнална трансдукция, е
потенциален онкогенен продукт, освен ако нейната първоначална функция не е да стопира
(задържа) клетъчния цикъл. Онкогени от различни категории са представени в таблицата.
Посочете към коя категория принадлежат съответните протоонкогени:
Човешки тумори,
асоциирани със
Категория Онкоген Протоонкоген Механизъм
съответния
онкоген
c-sis PDGF (β Свръхекспресия Астроцитом
веригата)
c-erbB1 EGF Свръхекспресия
Карцином на бял
рецепторна дроб
c-erbB2 фамилия Амплификация Рак на гърдата,
яйчници, бял дроб
и стомах
c-erbB3 Свръхекспресия Рак на гърдата
c-ras G-протеин Точкова мутация Различни видове
рак (на бял дроб,
дебело черво,
панкреас)
c-abl Нерецепторна Транслокация Хронична
тирозин киназа миелоидна
левкемия
Остра
лимфобластна
левкемия
c-myc ранни ядрени Транслокация Лимфома на
протеини Бъркит
Циклин D Циклини Амплификация Рак на гърдата,
бял дроб,
езофагиален рак
CDK4 Циклин- Амплификация Глиобластом,
зависими или точкова меланом
кинази мутация

20. Как ще обясните понятието “хистонов код”?

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

...........................................................................................................................................................

Дата: Заверил:

179
ЛИТЕРАТУРА

1. Калицин, Д., Данчева, К., Белева-Стайкова, Р. Ръководство за практически упражнения

по биохимия. Наука и изкуство, София (1980)
2. Косекова, Г., Митев, В., Алексеев, А., Николов, Т. Биохимия в Интернет, Лекции по
биохимия, Централна медицинска библиотека, София (2010).
3. Albert B., Johnson A., Levis J., Raff M. Molecular Biology of the Cell: Reference Edition
(2007)
4. Champe, P.C., R.A. Harvey. Lippincott's IIIustrated Reviews: Biochemistry. J.B.
Lippincott's company, 5th Edition, 2010
5. Devlin, T. M. (ed.) Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, Wiley-Liss, New
York, Fifth Edition. (2010)
6. Lehninger. Principles of Biochemistry, Fourth Edition by David L. Nelson and Michael M.
Cox (2004)
7. Lieberman M. and Marks A. Marks' Basic Medical Biochemistry: A Clinical Approach,
North American Edition (2008)
8. Meisenberg G., Simmon W. Principles of medical Biochemistry.MOSBY Elsevier, 2006
9. Murray, R., Rodwell V., Bender D., and Botham K. M. Harper's Illustrated Biochemistry,
28th Edition (LANGE Basic Science) (Paperback - Jun 2, 2009)
10. Voet D., Voet J. G., and Pratt C. W. Fundamentals of Biochemistry: Life at the Molecular
Level (2008)

180
ЗАДАЧИ И ПРАКТИЧЕСКИ УПРАЖНЕНИЯ ПО БИОХИМИЯ
Ръководство за студенти по медицина

Българска
Второ преработено и допълнено издание

Под общата научна редакция на проф. Диана Иванова, дбн

Рецензенти: доц. Татяна Янкова, дб; проф. Татяна Влайкова, дб

Печат: „Хеликс прес“ – Варна

Схема на корицата: пируватдехидрогеназен комплекс
The RCSB PDB "Molecule of the Month": Inspiring a Molecular View of Biology D.S. Goodsell,
S. Dutta, C. Zardecki, M. Voigt, H.M. Berman, S.K. Burley (2015) PLoS Biol 13(5): e1002140.
doi: 10.1371/journal.pbio.1002140

ISBN……………………………………..

Тираж: 1000
Формат: А4

Адрес на авторите:
Катедра по биохимия, молекулна медицина и нутригеномика с
Лаборатория по нутригеномика, функционални храни и нутрацевтици
Мeдицински университет “Проф. Д-р Параскев Стоянов” – Варна
Бул. “Цар Освободител” 84
9002 Варна
Е-mail: dg_ivanova@yahoo.com

181