1.Anh (chị) mô tả ngắn gọn các bước trong quy trình nhuộm Gram?

Trãi trùng lên lame, cố định mẫu

Nhuộm tím kết tinh trong 1p, rữa nước
Nhuộm lugol 1p30s, rữa nước
Tẩy cồn khoảng 20s, rữa nước
Nhuộm safranin 1p theo giáo trình, 1p30s theo hướng dẫn, rữa nước
Làm khô, quan sát với vật kính 100 có dầu cèdre

2. Anh (chị) hãy nêu ngắn gọn nguyên tắc xác định kích thước vi sinh vật?
Đo đường kính khuẩn lạc dùng thước mm thường
Tế bào vsv có kích thước rất nhỏ dùng kính hiển vi và thước trắc vi: TVTK và TVVK đơn vị
Tính kích thước vạch TVTK đựa vào TVVK tương ứng với độ phóng đại
3. Anh (chị) hãy kể tên các chủng VSV thường được sử dụng cho việc lên men rượu?
Nấm men ( saccharomyces), nấm móc (mucor), vi khuẩn ( sarcina ventriculi)
4. Anh (chị) hãy nêu ngắn gọn các bước chuẩn bị môi trường giữ giống trong thạch nghiêng?
Xác định chủng vsv cần giữ giống, chọn môi trường phù hợp, cân đo chính sát các thành phần
môi trường
Môi trường thạch nghiêng cho vào khoảng ¼ ống nghiệm
Khử trùng, để nghiêng ống nghiệm sao cho mép môi trường khoảng ½ đến 2/3 ống nghiệm
5. Anh chị hãy mô tả thí nghiệm cấy làm thuần và giữ giống xạ khuẩn?
Khử trùng môi trường gause, đổ vào petri làm thuần và ống nghiệm giữ giống, chờ thạch đông,
đốt khử trùng que cấy móc chờ nguội lấy xạ khuẩn từ đĩa khuẩn lạc phân lập , cấy 3 điểm trên
mặt thạch, đây nắp petri nút gòn, ủ khi làm thuần, giữ giống bảo quản ở nhiệt thấp.
6. Anh (chị) hãy nêu nguyên tắc và mô tả các bước thực hiện định lượng VSV bằng phương pháp
MPN/ trải đếm khuẩn lạc/ đo OD/ đếm bằng buồng đếm hồng cầu?
Phương pháp MPN:
nguyên tắc: pha loãng tới độ giới hạn, dựa vào đặc điểm mục tiêu, đối với coliforms là môi
trường có sinh khối và ống durham có bọt khí.
Các bước:
Thực hiện 5 lần pha loãng, mỗi lần 3 ống nghiệm theo bậc 10
Mỗi ống nghiệm chứa 1 ống durham + 9ml môi trường bgbl + 1ml dung dịch mẫu
ủ ở điều kiện thích hợp, xác định ống dương tích trong từng nồng đọ
tra bảng MPN ghi nhận kết quả
Phương pháp trải
Nguyên tắc: tính số lượng tế bào sống bằng cách xác định số tế bào trong mẫu có thể tạo khuẩn
lạc trên môi trường thích hợp
Các bước
Đổ môi trường Hansen vào petri, chờ nguôi
Hút 0.1ml dd pha loãng cho vào petri
Khử trùng que gạt, chờ nguội, trãi đều mẫu, ủ
Đếm khuẩn lạc, nồng độ khuẩn lạc phù hợp 30-300, tính số tế bào sống trong 1ml mẫu
Phương pháp buồng đếm hồng cầu
Nguyên tắc: dùng đếm tế bào nấm men hoặc bào tử có kích thước lớn, buồng đếm có nhiều ô
lưới nhỏ chứa 1 lượng tế bào tương ứng với thể tích nhất định.
Các bước
Huyền phù giống nấm men
Pha loãng mẫu, lắc đều, hút bằng ống Pasteur cho vào buồng
Xác định lưới đếm trên vật kính 10, xác định ô đếm trên vật kính 40
Đếm số tế bào trong 5 ô lớn, tính mật độ theo thể tích

7. Anh (chị) hãy nêu mục đích của việc làm phòng ẩm, mô tả các bước thực hiện phòng ẩm và
cấy nấm mốc?
Mục đích: dùng để nuôi cấy và tạo tiêu bản, quan sát hình thái hiển vi vi sinh vật
Các bước
Khử trùng petri có giấy thấm và 1 lame và môi trường czapek doc
Đổ môi trường lên 1 bên lame, nhỏ nước vào giấy thấm
Cấy 1 điểm nấm móc trên mép thạch, ủ điều kiện thích hợp
Xuất hiện khuẩn lạc, gạt bỏ thạch, đậy lamelle lên khuẩn lạc, quan sát hiển vi
8. Anh (chị) hãy nêu mục đích và mô tả các bước của thí nghiệm khảo sát khả năng tạo enzyme
ngoại bào của vi sinh vật?

Mục đích: khảo sát khả năng phân giải các cơ chất tự nhiên bằng cách tiết ra enzyme
Các bước
Khử trùng, đổ môi trường vào petri
Cấy 1 điểm vào môi trường, ủ
Nhỏ lugol lên mặt thạch, dàn đều
Quan sát, do kích thước vòng phân giải trong suốt.

9. Anh (chị) hãy nêu nguyên tắc và mô tả các bước của phương pháp phân lập và làm thuần nấm
mốc/ nấm men/ vi khuẩn/ xạ khuẩn?
Lựa chọn môi trường thích hơp với từng vsv ( gause- xạ khuẩn, cao thịt- pepton – vi khuẩn,
czapek-doc- nấm mốc, Hansen- nấm men), khử trùng, đổ môi trường vào petri chờ đông, đốt khử
trùng que cấy phù hợp ( phân lập: vk, nấm men cấy ria que cấy vòng, xạ khuẩn, nấm móc cấy gõ
que cây móc; làm thuần: vi khuẩn, nấm mốc cấy ria dùng que cấy vòng; nấm mốc, xạ khuẩn cấy
điểm dùng que cấy móc)
Lấy vsv từ mẫu giảng viên cho khi phân lập, lấy khuẩn lạc từ kết quả phân lập khi làm thuần
Rồi cấy theo đúng cách cấy của từng loại vsv, ủ ở điều kiện thích hợp
10. Anh (chị) hãy nêu nguyên tắc và mô tả các bước của phương pháp khảo sát khả năng chịu
đựng áp suất thẩm thấu của VSV?
Nguyên tắc: ấp suất thẩm thấu của môi trường ảnh hưởng đến sự tăng trưởng của vsv. Trong môi
trường có thêm muối hay đường sẽ làm ảnh hưởng đến vsv như thế nào qua việc tăng áp suất
thẩm thấu của dung dich
Các bước
Chuẩn bị các ống môi trường với % chất tan khác nhau
Khử trùng và đổ môi trường thạch nghiên, chờ nguội cấy vsv
Nuôi cấy ở điều kiện thích hợp, quan sát, ghi nhận kết quả tăng trưởng của vsv
THỰC HÀNH

1. Anh (chị) hãy thực hiện các thao tác trải trùng và các bước nhuộm Gram với mẫu vi khuẩn rồi

tiến hành quan sát hiển vi?

2. Anh (chị) tiến hành xác định kích thước của Bacillus/ Saccharomyce/ Lactobacillus…?
3. Anh (chị) hãy thực hiện thao tác cấy làm thuần và giữ giống nấm men/ nấm mốc/ vi khuẩn/ xạ

khuẩn?

4. Anh (chị) hãy thực hiện thao tác cấy xạ khuẩn/nấm mốc để quan sát khả năng phân giải

cellulose/tinh bột tan?

5. Anh (chị) hãy thực hiện các thao tác định lượng bằng phương pháp MPN từ mẫu VSV đã cho?

6. Anh (chị) hãy thực hiện các thao tác làm phòng ẩm và cấy nấm mốc?

7. Anh (chị) hãy thực hiện các bước của phương pháp khảo sát khả năng tạo enzyme ngoại bào

của vi sinh vật?

8. Anh (chị) hãy thực hành các bước của phương pháp đếm bằng buồng đếm hồng cầu?

9. Anh (chị) hãy sử dụng các dụng cụ thí nghiệm để thực hiện thao tác của phương pháp định lượng VSV từ một mẫu lỏng và cho kết quả được
ghi nhận với đơn vị CFU/ml?

10. Anh (chị) hãy sử dụng các dụng cụ thí nghiệm để thực hiện thao tác của phương pháp khảo

sát khả năng chịu đựng áp suất thẩm thấu của VSV?