Machine Translated by Google
145
Lipase như chất xúc tác sinh học thực tế
Manfred T Reetz
Lipase là enzyme được sử dụng nhiều nhất trong hóa học hữu cơ tổng
hợp, xúc tác quá trình thủy phân este của axit cacboxylic trong môi trường
nước hoặc phản ứng ngược trong dung môi hữu cơ.
Những tiến bộ về phương pháp luận gần đây liên quan đến các yếu tố thực tế
ảnh hưởng đến hoạt động của lipase và tính chọn lọc quang học đã được xem
xét. Chọn các ví dụ thực tế liên quan đến việc sử dụng lipase trong sản xuất
các chất trung gian bất đối kháng cũng được làm nổi bật.
Địa chỉ
Max-Planck-Institut für Kohlenforschung, Kaiser-Wilhelm-
Platz 1, 45470 Mülheim/Ruhr, Đức; e-mail: reetz@mpi-muelheim.mpg.de
Ý kiến hiện tại về Sinh học Hóa học 2002, 6:145–150
1367-5931/02/$ — xem trang đầu
© 2002 Elsevier Science Ltd. Bảo lưu mọi quyền.
Đăng trực tuyến ngày 29 tháng 1 năm 2002
Chữ viết tắt
e enantiomeric thặng dư
Độ phân giải động học song song PKR
Giới thiệu Lipase
(triacylglycerol ester hydrolases, EC 3.1.1.3) là các enzyme phổ
biến xúc tác quá trình thủy phân chất béo và dầu [1–3,4•–6•].
Sự kích hoạt bề mặt của lipase xảy ra ở bề mặt tiếp xúc lipid-
nước, một hiện tượng có thể bắt nguồn từ các đặc điểm cấu trúc
độc đáo của loại enzyme này.
Lipase chứa một đơn vị oligopeptide xoắn ốc che chắn vị trí hoạt
động. Cái gọi là nắp này, khi tương tác với một bề mặt kỵ nước
như giọt lipid, trải qua chuyển động theo cách làm lộ ra vị trí
hoạt động cung cấp khả năng tiếp cận miễn phí cho chất nền (kích
hoạt bề mặt). Vị trí hoạt động thường được đặc trưng bởi bộ ba
bao gồm serine, histidine và aspartate, phức hợp enzyme acyl–là
chất trung gian quan trọng trong tất cả các phản ứng được xúc
tác bởi lipase [1–3]. Ngoài chức năng sinh học của chúng đối với
vi khuẩn, nấm, thực vật và động vật bậc cao, lipase đã nhận
được rất nhiều sự chú ý với vai trò là chất xúc tác sinh học
trong nhiều quy trình công nghiệp bao gồm các lĩnh vực như dầu
và chất béo, chất tẩy rửa, làm bánh, làm pho mát, làm sạch bề mặt
cứng như cũng như xử lý da và giấy [1–3]. Hơn nữa, lipase là
enzyme được sử dụng nhiều nhất trong hóa học hữu cơ tổng hợp,
xúc tác quá trình thủy phân hóa học, regio- và/hoặc chọn lọc lập
thể của este axit boxylic car hoặc phản ứng ngược trong dung môi
hữu cơ (Hình 1) [1–3,4• –6 •]. Đánh giá này tập trung vào những
điểm nổi bật gần đây liên quan đến việc sử dụng thực tế của
lipase trong tổng hợp hữu cơ, nhấn mạnh những tiến bộ về phương
pháp và làm nổi bật các ví dụ ứng dụng chọn lọc.
Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính và độ chọn lọc
Bản chất của tác nhân acyl hóa
Mặc dù quá trình este hóa có xúc tác lipase trong dung môi hữu cơ
cung cấp con đường mới cho các nhà hóa học hữu cơ tổng hợp, một
số vấn đề nảy sinh bao gồm giảm hoạt động của enzyme trong môi
trường này và những khó khăn liên quan đến khả năng đảo ngược của
Hình 1
lipaza
(Một) RCO2H+R′OH RCO2R′ + H2O
lipaza
(b) RCO2R′ + R′
′OH RCO2R′
′ + R′OH
Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học
Lipase có thể đảo ngược được xúc tác (a) ester hóa và (b) transester hóa.
quá trình este hóa và transester hóa [6•]. Để giải quyết vấn đề
thứ hai, vinyl axetat được đưa vào làm tác nhân acyl hóa, các
phản ứng không thể đảo ngược do sự hình thành acetaldehyde [1–
3,4•–6•]. Tuy nhiên, acetalde hyde được biết là có thể vô hiệu
hóa một số lipase (ví dụ như những loại từ Candida rugosa và
Geotrichum candum). Cố định lipase (xem bên dưới) có thể giải
quyết được vấn đề, nhưng việc sử dụng ethoxyvinyl este như 1-
ethoxyvinyl axetat hoặc furoate tạo thành một phương pháp thay
thế vì chúng giải phóng không thể đảo ngược etyl axetat dễ bay
hơi và không gây hại như trong quá trình khử đối xứng của meso-
diol (Hình 2) [7].
Việc sử dụng các chất cho acyl khác với vinyl axetat cũng rất
quan trọng trong phương pháp tiếp cận dựa trên bộ nhớ enzyme
được mô tả gần đây để tăng cường tính chọn lọc đối quang của
quá trình chuyển hóa ester được xúc tác bởi lipase [8••]. Người
ta lý giải rằng vì phản ứng tuân theo cơ chế bóng bàn trong đó
serine của lipase phản ứng đầu tiên với chất cho acyl để tạo ra
chất trung gian acyl-enzym, chất này sau đó phản ứng với rượu
bất đối, hiệu ứng ghi nhớ có thể được tạo ra nếu các cấu trúc
của người cho acyl và rượu chirus được kết hợp. Hình 3 cho thấy
một trong nhiều ví dụ ấn tượng minh họa sức mạnh của phương pháp
này.
Ảnh hưởng nhiệt độ Khi
áp dụng lipase trong môi trường không có nước, điều quan trọng
là phải xem xét mức độ hàm lượng nước còn lại, vì điều này ảnh
hưởng đến hoạt động, khả năng điều nhiệt và tính chọn lọc âm
thanh nổi [1–3,4•–6•,9]. Việc loại bỏ (không mong muốn) nước
liên kết chặt chắc chắn sẽ gây ra hiện tượng biến tính nhiệt
(không liên quan đến sự phân cắt liên kết peptit!), một quá trình
đòi hỏi nhiệt độ vượt quá 130°C [10].
Các ví dụ mới về ảnh hưởng của nhiệt độ đối với tính chọn lọc
quang trong phạm vi 60–20°C cho thấy rõ ràng rằng thông số này là
một công cụ đơn giản để có thể tối ưu hóa một phản ứng được xúc
tác bởi lipase nhất định [11•,12•,13••] . Kỳ vọng thông thường
rằng tính chọn lọc quang học tăng lên khi giảm nhiệt độ (mặc dù
phải trả giá bằng thời gian phản ứng dài hơn) được sinh ra trong
quá trình phân giải động học dựa trên quá trình phân giải amoni
của metyl este của axit 2-amino-4-phenylbutyric được xúc tác bởi
lipase từ Thermomyces lanuginosus ( Novo SP398); hệ số chọn lọc
E tăng dần theo
Machine Translated by Google
146 Xúc tác sinh học và chuyển hóa sinh học
Hình 2
R OH Ô
lipaza
+ + CH3CO2Et
EtO HOẶC′
R OH
giảm nhiệt độ từ 40°C (E = 13) xuống 20°C (E = 20), 4°C (E = 30),
–10°C (E = 52) và –20°C (E = 84) [11•]. Một bức tranh khá khác nảy
sinh trong một nghiên cứu liên quan đến ảnh hưởng của nhiệt độ
đến tính chọn lọc đối quang của một số phản ứng este hóa do lipaza
xúc tác nhất định liên quan đến axit 2-aryloxy propionic bất đối
bằng n-butanol (phân giải động học), đặc biệt là khi sử dụng 1%
H2O trong diisopropyl ete làm phương tiện [12•]. Đối với axit 2-p-
methoxyphenyl propionic, hệ số chọn lọc có lợi cho R-este tăng đáng
kể từ E = 13 đến E = 120 khi tăng nhiệt độ từ 37°C lên 57°C [12•].
Mặc dù các tham số kích hoạt không được nghiên cứu, nhưng các giá
trị Km và Vmax , và do đó, các hằng số đặc hiệu xúc tác (Vmax/Km),
đã được xác định. Giá trị Vmax/Km ở 57°C đối với đồng phân đối
ảnh R của chất nền hóa ra lớn hơn 2,6 lần so với ở 37°C. Người ta
đã suy đoán rằng ở nhiệt độ cao hơn, tính linh hoạt lớn hơn của
lipase tạo điều kiện thuận lợi cho sự định hướng ưu tiên của chuỗi
bên axit amin của nó để liên kết hiệu quả hơn với vòng phenyl của
chất nền, cơ sở của các liên kết đó là OH···π và /hoặc tương tác
CH···π.
Trong một nghiên cứu khác, một loại hành vi khác đã được quan
sát, cụ thể là nhiệt độ đảo ngược, cụ thể là trong quá trình phân
giải động học được xúc tác bởi Amano-PS của azirinol (Hình 4)
[13••]. Bằng cách vẽ biểu đồ logarit của hệ số chọn lọc (lnE) so
với nghịch đảo của nhiệt độ theo phương trình Eyring đã sửa đổi
(lnS = – H‡/RT + S‡/R), một hiện tượng đặc biệt đã được
quan sát thấy, cụ thể là sự tồn tại của hai vùng tuyến tính giao
nhau tại một điểm được xác định là nhiệt độ nghịch đảo (Tinv)
(Hình 5). Đây là những trường hợp đảo ngược đầu tiên
Hình 3
HỒ AcO
CAL
Oac
: e = 21
AcO
: e > 818
Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học
Hiệu ứng bộ nhớ bằng cách khớp chất nền [8••]. CAL, lipase từ Candida
Nam Cực.
Sự acyl hóa không thể đảo ngược được xúc tác bởi lipase
R′O của diol [7].
RO
R OH
Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học
nhiệt độ xúc tác enzim. Có ý kiến cho rằng sự tái tổ chức của các
cụm dung môi-chất tan khác nhau xảy ra ở các nhiệt độ khác nhau
[13••].
Ảnh hưởng của dung môi và chất phụ gia
Bản chất của dung môi trong các phản ứng do lipase xúc tác trong
môi trường không chứa nước có ảnh hưởng sâu rộng liên quan đến
hoạt tính và tính chọn lọc lập thể [1–3,4•–6•]. Vai trò của dung
môi hữu cơ trong phản ứng thủy phân hai pha đã được nghiên cứu ở
mức độ ít hơn, nhưng nó cũng có những hậu quả thực tế [14]. Hơn
nữa, tiền xử lý lipase bằng dung môi hữu cơ trước khi sử dụng chúng
trong quá trình este hóa có thể dẫn đến việc loại bỏ độ trễ thời
gian [15•].
Một bước phát triển mới liên quan đến việc sử dụng lipase và các
enzym khác trong môi trường không chứa nước [6•,16] liên quan đến
chất lỏng ion ở nhiệt độ phòng làm dung môi trong hệ thống một pha
hoặc hai pha (H2O/chất lỏng ion) [17–21] . Dung môi ion dựa trên
cation 1-alkyl-3-methylimidazolium là chất lỏng ở nhiệt độ phòng,
về cơ bản không có áp suất hơi, tính ổn định nhiệt và hóa học
tuyệt vời (bao gồm cả khả năng chịu không khí và H2O) và đặc tính
hòa tan tốt, đó là lý do tại sao chúng đã được được gọi là 'dung
môi xanh'. Triển vọng thay thế các dung môi hữu cơ dễ bay hơi và
độc hại đang rất được quan tâm. Các nghiên cứu gần đây liên quan
đến các chuyển đổi được xúc tác bởi lipase trong các chất lỏng
ion như vậy đã cho thấy các lợi ích bổ sung bao gồm hoạt động của
enzyme được tăng cường, như trong (nếu không thì khó)
Sự phân giải amoni của axit boxylic car với amoniac được xúc tác
bởi Candida antarctica lipase (Hình 6) [17]. Quá trình chuyển đổi
định lượng được quan sát thấy trong vòng 4 ngày, trái ngược với
17 ngày cần thiết khi sử dụng methylisobutyl ketone làm dung môi.
Các ưu điểm khác của việc thực hiện các phản ứng được xúc tác bởi
lipase trong chất lỏng ion bao gồm tăng cường tính chọn lọc đối
quang trong quá trình phân giải động học, quá ổn định của các
enzym và khả năng tái sử dụng các enzym mà không làm mất hoạt tính
hoặc tính chọn lọc [17-21]. Tuy nhiên, mặc dù như vậy
hinh 4
N N
Oac Amano PS Oac
+
ph Ồ lipaza ph
Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học
Độ phân giải động học của azirinol được xúc tác bởi Amano PS lipase [13••].
Machine Translated by Google

Lipase như chất xúc tác sinh học thực tế Reetz 147

các phản ứng có thể được thực hiện trong trường hợp không có dung Hình 5
môi hữu cơ thông thường, trên thực tế, những dung môi này thường

được thêm vào trong quá trình xử lý, điều này làm mất đi một phần 5
mục đích ban đầu. Một giải pháp khả thi cho vấn đề này là sự kết

hợp giữa chất lỏng ion và chiết xuất CO2 siêu tới hạn (MT Reetz và

cộng sự, dữ liệu chưa được công bố). CO2 siêu tới hạn như một dung 4
e
môi đơn thuần đã có những lợi ích [16], sự thay đổi của áp suất là
TRONG
t đầu =tư231K
một cách đơn giản để tác động đến tính chọn lọc đối quang [22].
3

Việc sử dụng các chất phụ gia là một cách khác để điều chỉnh hoạt

động và tính chọn lọc đối quang của lipase [1–3,4•–6•]. Các ví dụ
gần đây liên quan đến các chất hoạt động bề mặt không ion như 2

Tween-80 [23•], các ion kim loại khi có một lượng nhỏ nước [24•] 0,0030 0,0035 0,0040 0,0045 0,0050

và các bazơ rắn [25•]. t –1 / k –1

Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học

Hiệu ứng đặc biệt

Phương pháp Klibanov để tăng cường tính chọn lọc của lipase enantio Biểu đồ Eyring cho hệ số chọn lọc E trong độ phân giải động học
trong dung môi hữu cơ bằng cách tạm thời mở rộng chất nền thông qua của azirinol (Hình 4) được xúc tác bởi Amano PS lipase [13••]. Ở nhiệt
sự hình thành muối đã được mở rộng để bao gồm cả việc sử dụng các độ đảo ngược (231K), tính chọn lọc quang điện đạt cực đại (E = 99).

tác nhân bất đối xứng [26•]. Một chiến lược khác để cải thiện tính

chọn lọc quang của quá trình acyl hóa liên quan đến độ phân giải

động học song song (PKR) [27••]. Về bản chất, giá trị dư đồng phân Cải thiện hiệu suất của lipase bằng kỹ thuật di truyền Các nghiên
quang (ee) của chất nền và sản phẩm không phản ứng ở độ phân giải cứu mô hình phân tử và cơ học gần đây cho phép hiểu rõ nguồn gốc

động học thông thường phụ thuộc vào mức độ chuyển đổi. Thật không của tính chọn lọc đối quang được quan sát thấy trong các phản ứng

may, ee của một hợp chất nhất định cao nhất khi lượng hiện tại thấp được xúc tác bởi lipase [36,37•,38•,39,40,41•] và cung cấp các

nhất. Trong PKR, nhược điểm cố hữu này có thể được loại bỏ nếu hai hướng dẫn để cải thiện hoạt động và tính chọn lọc bằng kỹ thuật

phản ứng khác nhau (mặc dù có liên quan) của racemate có thể được protein hợp lý [42••,43••]. Một ví dụ nổi bật dựa trên khái niệm

xúc tác bởi hai chất xúc tác khác nhau, một là chọn lọc R và một là xúc tác có sự hỗ trợ của cơ chất trong quá trình phân giải động học,

chọn lọc S. Điều này đã đạt được trong PKR của rượu chirus bằng bao gồm hai bước đơn giản [42••]. Dư lượng ổn định trạng thái
cách sử dụng lipase chọn lọc R và chất xúc tác tổng hợp dựa trên chuyển tiếp (threonine) gần vị trí hoạt động của lipase trước tiên

phosphine chọn lọc S [27••]. được loại bỏ bằng phương pháp gây đột biến tại chỗ, làm giảm hoạt

động. Hoạt tính của lipase sau đó được phục hồi bằng cách sử dụng

cơ chất đối kháng (2-hydroxypropanoate) có chứa nhóm chức năng xúc

Các khía cạnh thực tế khác tác (OH) bị thiếu, tính chọn lọc đối quang cải thiện từ E = 1,6 lên

Các nghiên cứu có hệ thống liên quan đến việc tinh chế lipase đã E = 22 [42••]. Trong một nghiên cứu ấn tượng khác, tính chọn lọc

cho thấy hai tác động, một tác động rõ ràng liên quan đến việc đối quang của lipase (C. antarctica) phân giải động học 1-chloro-2-

tách các isoenzyme và thực tế là loại quy trình tinh chế có thể có octanol được xúc tác đã được cải thiện từ E = 14 lên E = 28 bằng

ảnh hưởng đến hoạt động và tính chọn lọc [28]. một trao đổi axit amin duy nhất (Ser47Ala), như dự đoán bởi phân tử

làm mẫu [43••].

Đối với các ứng dụng công nghiệp thực sự, một loại enzyme thường cần

được cố định, đó là lý do tại sao nghiên cứu trong lĩnh vực này Một cách tiếp cận khác về cơ bản và rất hứa hẹn sử dụng các phương
vẫn tiếp tục [29–34]. Lò phản ứng màng là một giải pháp thay thế, pháp tiến hóa có định hướng [44••,45••].

như trong quá trình sản xuất Sepracor/Tanabe/DSM của chất trung gian Cụ thể, bằng cách áp dụng PCR dễ bị lỗi, đột biến bão hòa và xáo

diltiazem bất đối sử dụng lipase từ Serratia marcescens [35]. trộn DNA, tính chọn lọc đối quang của lipase (Pseudomonas aeruginosa)

được xúc tác động học

Hình 6

Quá trình phân giải amoni của axit octanoic trong

chất lỏng ion được xúc tác bởi CALB [17]. CALB, Ồ
CALB NH2
lipase từ Candida antarctica B. + NH3
Ô Ô
+
NN CH3 BF4 – dưới dạng dung môi > 95%

Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học

Machine Translated by Google
148 Xúc tác sinh học và chuyển hóa sinh học
Hình 7
kR
r -cơ chất r -sản phẩm (hiệu suất 100%)
nếu như krac >> k R
krac
krac >> kS
kS
S -cơ chất S -sản phẩm
Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học
Nguyên lý phân giải động học [49••].
độ phân giải của este bất đối đã được cải thiện từ E = 1,2
đến E = 51 có lợi cho axit S [46••]. Khi làm như vậy, ít hơn
40 000 dị nhân đã được tạo ra và sàng lọc. Sự đảo ngược của
tính chọn lọc đối quang cũng đã đạt được (E = 30 nghiêng về
axit R; MT Reetz và cộng sự, dữ liệu chưa được công bố). Thành
công phụ thuộc vào sự sẵn có của các thử nghiệm ee thông lượng
cao , được phát triển gần đây [47•]. Trong một nghiên cứu
khác, sự tiến hóa có định hướng đã được áp dụng để chuyển
đổi lipase của tụ cầu thành một phospholipase [48].
Các ví dụ thực tế về các phản ứng được xúc tác bởi
lipase Trong nhiều nghiên cứu gần đây về lipase
trong tổng hợp hữu cơ, chỉ có một số nghiên cứu được nhấn mạnh
ở đây. Ở độ phân giải động học thông thường, một nhược điểm
cố hữu là thực tế là không thể vượt quá mức chuyển đổi tối đa
50% theo cách thực tế, trừ khi xảy ra hiện tượng raxamine đồng
thời của nguyên liệu ban đầu. Sự kết hợp giữa quá trình acyl
hóa được xúc tác bởi lipase và quá trình racemic hóa chất nền
được xúc tác bởi ruthenium cho phép phân giải động học của
este α-hydroxy với năng suất tốt và giá trị ee tuyệt vời (Hình
7) [49••]. Kiểu tiếp cận này có khả năng đạt được tầm quan
trọng trong tương lai.
Trong một ứng dụng khác thường, việc xây dựng thư viện tổ hợp
kiểu Ugi bốn thành phần dựa trên lipase là
Hình 8
Br Cl
Lipase LIP-300
N N
Br
N F3C O
h
Sự phân giải động học được xúc tác bởi lipase của một chất trung gian trong quá trình tổng hợp 1 SCH66336 [56•].
mô tả [50]. Sự phân giải động học được xúc tác bởi lipase là
cơ sở của một số quá trình tổng hợp các sản phẩm tự nhiên và
các chất trung gian bất đối kháng, như trong quá trình điều
chế (+)-allopumiliotoxin [51], (S)- và (R) -verapamil [52],
ricciocarpin A và B [53] và β-keto este [54]. Quy trình BASF
để sản xuất amine bất đối đã được mô tả chi tiết [55]. Các
Và kR > kS
chi tiết về quá trình sản xuất Sepracor/Tanabe/DSM đã đề cập
trước đây của một chất trung gian bất đối trong quá trình
tổng hợp diltiazem hiện đã có sẵn [35]. Schering–Plough đã mô
tả sự phân giải động học của các chất đồng phân kích thích
piperidine dẫn đến một chất trung gian bất đối cần thiết
trong quá trình tổng hợp chất ức chế men chuyển protein
farnesyl SCH66336, một tác nhân chống ung thư cho thấy hoạt
động trong phạm vi phân tử nano (Hình 8) [56•] . Các khía
cạnh mới lạ bao gồm thực tế là có liên quan đến tính chirality
dọc trục (được chuyển đổi có chọn lọc thành tính chirality
trung tâm trong bước khử tiếp theo) và quá trình acyl hóa được
xúc tác bởi lipase xảy ra ở chức năng amin thứ cấp thường khó khăn.
Các ứng dụng công nghiệp khác của quá trình phân giải động
học được xúc tác bởi lipase cũng chứng minh giá trị tổng hợp
to lớn của các enzym này [57–59]. Cuối cùng, việc sử dụng
lipase trong sự kết hợp và phân tách nhóm bảo vệ chọn lọc hóa
học và chọn lọc vùng được quan tâm đặc biệt trong thao tác
hóa học của các phân tử đa chức năng [60•].
Kết luận Việc sử
dụng lipase thông thường trong hóa học hữu cơ và dược phẩm
tạo thành một phương pháp tổng hợp hoàn thiện và thiết thực.
Hơn nữa, những phát triển mới như hiệu ứng phụ gia, độ phân
giải động học song song và động, tối ưu hóa dung môi, cố
định, kỹ thuật protein và tiến hóa có hướng mang đến những cơ
hội thú vị bổ sung dẫn đến các ứng dụng thực tế hơn nữa của
lipase trong hóa học hữu cơ tổng hợp.
Cập nhật
Một biến thể mới hữu ích về mặt tổng hợp của độ phân giải
động lực học đã được xuất bản dựa trên phản ứng Michael thuận
nghịch racemic hóa kết hợp với quá trình thủy phân có xúc tác
lipase [61].
Br Cl Br Cl
N
Ô Br Br
Ô
N N N NH2
Ô Ô
e > 200 1 SCH66336
Ý kiến hiện tại trong sinh học hóa học
Machine Translated by Google
Lời cảm ơn Công việc
này được hỗ trợ bởi Fonds der Chemischen Industrie.
Tài liệu tham khảo và đề nghị đọc
Các bài báo được quan tâm đặc biệt, được xuất bản trong khoảng thời gian xem xét
hàng năm, đã được đánh dấu là:
• tiền lãi đặc biệt
••tiền lãi chưa thanh toán
1. Schmidt RD, Verger R: Lipase: enzyme liên vùng với các ứng dụng hấp dẫn.
Angew Chem Int Ed Engl 1998, 37:1608-1633.
2. Jaeger KE, Dijkstra BW, Reetz MT: Chất xúc tác sinh học vi khuẩn:
sinh học phân tử, cấu trúc ba chiều và ứng dụng công nghệ sinh
học của lipase. Annu Rev Microbiol 1999, 53:315-351.
3. Villeneuve P, Muderhwa JM, Graille J, Haas MJ: Tùy chỉnh lipase cho xúc tác
sinh học: khảo sát các phương pháp hóa học, vật lý và sinh học phân tử. J
Mol Catal B Enzym 2000, 9:113-148.
4. Koeller KM, Wong CH: Enzyme tổng hợp hóa học. Thiên nhiên • 2001,
409:232-240.
Một đánh giá quan trọng về tình trạng hiện tại của các enzyme, bao gồm cả lipase, với vai
trò là chất xúc tác trong các quá trình chuyển hóa hữu cơ phức tạp, đặc biệt là những chất
mà các chất xúc tác tổng hợp thông thường ít phù hợp hơn.
5. Schmid A, Dordick JS, Hauer B, Kiener A, Wubbolts M, Witholt B: Xúc tác
• sinh học công nghiệp hôm nay và ngày mai. Thiên nhiên 2001, 409:258-268.
Đánh giá về xúc tác enzyme thực tế (bao gồm cả xúc tác lipase) trong các ứng dụng công
nghiệp, đồng thời phác thảo các triển vọng trong tương lai.
6. Klibanov AM: Cải thiện enzyme bằng cách sử dụng chúng trong dung môi
• hữu cơ. Thiên nhiên 2001, 409:241-246.
Một cuộc thảo luận toàn diện về ưu và nhược điểm của việc sử dụng enzyme trong
dung môi hữu cơ, lipase là một trong những ví dụ.
7. Akai S, Naka T, Fujita T, Takebe Y, Kita Y: 1-Ethoxyvinyl 2-furoate, một chất
cho acyl hiệu quả cho quá trình khử đối xứng quang chọn lọc được xúc tác
bởi lipase của prochirus 2,2-propan-1,3-diol và meso-1,2-diol. Chèm xã
2000:1461-1462.
8. Lee D, Choi YK, Kim MJ: Nâng cao tính chọn lọc đối quang của lipase •• trong
quá trình chuyển este hóa bằng cách kết hợp cơ chất: một cách tiếp cận dựa trên
bộ nhớ enzyme. Org Lett 2000, 2:2553-2555.
Một cách tiếp cận mới để cải thiện tính chọn lọc quang của các phản ứng acyl hóa
được xúc tác bởi lipase được mô tả. Nguyên tắc cơ bản, kết hợp cơ chất, mang
đến những cơ hội quan trọng cho ứng dụng thực tế của lipase trong các phản ứng này.
9. Won K, Lee SB: Kiểm soát hoạt động của nước bằng máy tính để
quá trình este hóa có xúc tác lipase trong các hệ thống không có dung môi. Chương trình
Công nghệ sinh học 2001, 17:258-264.
10. Turner NA, Vulfson EN: Ở nhiệt độ nào thì enzyme có thể duy trì hoạt tính
xúc tác của chúng? Enzyme Microb Technol 2000, 27:108-113.
11. López-Serrano P, Wegman MA, van Rantwijk F, Sheldon RA:
• Enantioselective enzyme xúc tác quá trình phân giải amoni của các dẫn
xuất axit amin. Ảnh hưởng của nhiệt độ. Tứ diện bất đối xứng 2001,
12:235-240.
Điều này tạo thành một nghiên cứu cổ điển về ảnh hưởng nhiệt độ của phản ứng
xúc tác enzyme, tính chọn lọc quang học tăng khi nhiệt độ giảm với chi phí là
thời gian phản ứng dài hơn.
12. Watanabe K, Koshiba T, Yasufuku Y, Miyazawa T, Ueji S: Ảnh hưởng của nhóm
• thế và nhiệt độ đến tính chọn lọc đối quang đối với quá trình este
hóa có xúc tác lipase của axit propionic 2-(4-được thay thế phenoxy)
trên dung môi hữu cơ. Bioorg Chem 2001, 29:65-76.
Những cải tiến đáng kể về hệ số chọn lọc của phản ứng este hóa chọn lọc đối
quang được quan sát thấy khi tăng nhiệt độ từ 37°C lên 57°C.
13. Cainelli G, De Matteis V, Galletti P, Giacomini D, Orioli P:
•• Ảnh hưởng của nhiệt độ và dung môi đến tính chọn lọc lập thể của enzyme:
nhiệt độ đảo ngược ở độ phân giải động học với lipase. Xã Chèm
2000:2351-2352.
Lần đầu tiên, nhiệt độ đảo ngược đã được quan sát thấy trong quá trình phân
giải động học được xúc tác bởi enzyme, đặc biệt là trong quá trình acyl hóa
được xúc tác bởi lipase của rượu bất đối. Hệ số chọn lọc cao nhất ở nhiệt độ
đảo ngược –42°C (E = 99), tính chọn lọc đối quang ở nhiệt độ thấp hơn hoặc cao
hơn ít rõ rệt hơn.
14. Pencreach G, Baratti JC: So sánh hoạt động thủy phân trong nước và heptan
đối với 32 chế phẩm lipase thương mại.
Enzyme Microb Technol 2001, 28:473-479.
Lipase như chất xúc tác sinh học thực tế Reetz 149
15. Matsumoto M, Kida K, Kondo K: Tăng cường hoạt động của lipase
•
xử lý sơ bộ bằng dung môi hữu cơ. Công nghệ sinh học J Chem Technol 2001,
76:1070-1073.
Tiền xử lý lipase với một số dung môi nhất định dẫn đến tăng hoạt tính và tính chọn
lọc lập thể trong các phản ứng este hóa tiếp theo trong dung môi hữu cơ và thậm chí
trong quá trình thủy phân trong môi trường nước. Một mối tương quan tuyến tính tồn
tại giữa tính kỵ nước của dung môi và tốc độ phản ứng ban đầu tương đối của quá
trình thủy phân khi sử dụng các lipase được xử lý trước.
16. Carrea G, Riva S: Tính chất và ứng dụng tổng hợp của
enzym trong dung môi hữu cơ. Angew Chem Int Ed Engl 2000,
39:2226-2254.
17. Lau RM, van Rantwijk F, Seddon KR, Sheldon RA: Lipase xúc tác phản ứng
trong chất lỏng ion. Org Lett 2000, 2:4189-4191.
18. Schöfer SH, Kaftzik N, Wasserscheid P, Kragl U: Xúc tác enzym trong chất lỏng
ion: xúc tác lipase phân giải động học của 1-phenylethanol với tính chọn
lọc quang được cải thiện. Xã Chèm 2001:425-426.
19. Kim KW, Song B, Choi MY, Kim MJ: Xúc tác sinh học trong chất lỏng ion:
tăng cường rõ rệt tính chọn lọc đối quang của lipase. Tổ chức Lett 2001,
3:1507-1509.
20. Itoh T, Akasaki E, Kudo K, Shirakami S: Lipase xúc tác
acyl hóa chọn lọc đối quang trong hệ dung môi chất lỏng ion: phản
ứng của enzyme neo vào dung môi. Chem Lett 2001:262-263.
21. Lozano P, De Diego T, Carrié D, Vaultier M, Iborra JL:
Sự ổn định quá mức của Candida antarctica lipase B bằng chất lỏng
ion trong quá trình tổng hợp este. Công nghệ sinh học Lett 2001, 23:1529-1533.
22. Matsuda T, Kanamaru R, Watanabe K, Harada T, Nakamura K:
Kiểm soát tính chọn lọc đối quang với áp suất đối với quá trình este
hóa được xúc tác bởi lipase trong carbon dioxide siêu tới hạn. Tứ diện
Lett 2001, 42:8319-8321.
23. Liu YY, Xu JH, Hu Y: Tăng cường tác dụng của Tween-80 đối với lipase
• hiệu suất trong quá trình thủy phân chọn lọc quang học của este ketoprofen.
J Mol Catal B Enzym 2000, 10:523-529.
Việc sử dụng chất hoạt động bề mặt không ion Tween-80 làm tăng tính chọn lọc đối quang
trong độ phân giải động học của este bất đối.
24. Okamoto T, Ueji S: Một phương pháp mới để cải thiện tính
• chọn lọc quang của quá trình thủy phân được xúc tác bởi lipase trong dung
môi hữu cơ chứa một lượng nhỏ nước với sự có mặt của các ion kim loại.
Công nghệ sinh học Lett 2000, 22:1169-1171.
Sự kết hợp của một lượng nhỏ nước và muối như LiCl hoặc MgCl2 làm tăng đáng kể
tính chọn lọc quang của các phân giải động học thủy phân.
25. Quirós M, Parker MC, Turner NJ: Điều chỉnh tính chọn lọc đối quang của lipase
trong • môi trường hữu cơ sử dụng chất đệm trạng thái rắn. J Org Chem 2001,
66:5074-5079.
Đây là nghiên cứu có hệ thống đầu tiên liên quan đến ảnh hưởng của các bazơ như các amin
khác nhau và các bazơ rắn đối với tính chọn lọc đối quang của các phản ứng xúc tác với lipase.
26. Shin JS, Luque S, Klibanov AM: Cải thiện tính chọn lọc đối quang của lipase
• trong dung môi hữu cơ bằng cách tạo muối cơ chất với các chất bất đối.
Công nghệ sinh học Bioeng 2000, 69:577-583.
Khi tăng kích thước của chất nền bằng cách hình thành muối (ví dụ: xử lý este metyl
phenylalanine bằng axit mandelic tạo thành muối tương ứng), tính chọn lọc đối quang
của quá trình phân giải động học dựa trên phản ứng phân hủy propan được tăng lên.
Cấu hình tuyệt đối của phản ion ảnh hưởng đến tính chọn lọc lập thể.
27. Vedejs E, Rozners E: Phân giải động học song song dưới các điều kiện
•• xúc tác: hệ thống ba pha cho phép kích hoạt thuốc thử chọn lọc sử dụng
hai chất xúc tác. J Am Chem Soc 2001, 123:2428-2429.
Quá trình phân giải động học dựa trên acyl hóa của rượu bất đối đặc biệt hiệu
quả khi sử dụng nguyên lý mới của quá trình phân giải động học song song, dựa
trên hai phản ứng xúc tác song song. Một chất xúc tác là lipase liên kết chéo
chọn lọc R và chất còn lại là phosphine bất đối chọn lọc S.
28. Palekar AA, Vasudevan PT, Yan S: Tinh chế lipase: đánh giá.
Biến đổi sinh học Biocatal 2000, 18:177-200.
29. Reetz MT, Wenkel R, Avnir D: Đánh bẫy lipase trong kỵ nước
vật liệu sol-gel: chất xúc tác sinh học dị thể hiệu quả trong môi
trường nước. Tổng hợp 2000:781-783.
30. Vaghjiani JD, Lee TS, Lye GJ, Turner MK: Sản xuất và
đặc tính của các tinh thể enzyme liên kết ngang (CLECs®) để ứng dụng
làm chất xúc tác sinh học ở quy mô quy trình. Biến đổi sinh học Biocatal
2000, 18:151-175.
Machine Translated by Google
150 Xúc tác sinh học và chuyển hóa sinh học
31. Persson M, Wehtje E, Adlercreutz P: Cố định lipase bằng
hấp phụ và lắng đọng: lượng protein cao với hoạt độ nước thấp hơn là tối
ưu. Công nghệ sinh học Lett 2000, 22:1571-1575.
32. Guisan JM, Sabuquillo P, Fernandez-Lafuente R, Fernandez-Lorente G, Mateo C,
Halling PJ, Kennedy D, Miyata E, Re D: Chuẩn bị các dẫn xuất lipase mới có
hoạt tính ổn định cao trong môi trường khan: hấp phụ trên kỵ nước hỗ trợ
cộng với quá trình hydrophilization với polyethylenimine. J Mol Catal B
Enzym 2001, 11:817-824.
33. Schuleit M, Luisi PL: Cố định enzyme trong gel hữu cơ làm cứng bằng
silica. Công nghệ sinh học Bioeng 2001, 72:249-253.
34. Pierre A, Buisson P: Ảnh hưởng của kết cấu xốp của silica gel đối với hoạt
tính enzym của lipase trong các phản ứng este hóa.
J Mol Catal B Enzym 2001, 11:639-647.
35. Shibatani T, Omori K, Akatsuka H, Kawai E, Matsumae H: Enzyme phân giải
diltiazem trung gian bởi Serratia marcescens lipase: cơ chế phân tử tiết
lipase và ứng dụng trong công nghiệp. J Mol Catal B: Enzym 2000, 10:141-149.
36. Gascoyne DG, Finkbeiner HL, Chan KP, Gordon JL, Stewart KR, Kazlauskas
RJ: Cơ sở phân tử cho tính chọn lọc đối quang của lipase từ
Chromobacterium viscosum đối với các este của 2,3-dihydro-3-(4′-
hydroxyphenyl)-1, 1,3-trimetyl-1H-inden-5-ol.
J Org Chem 2001, 66:3041-3048.
37. Ottosson J, Rotticci-Mulder JC, Rotticci D, Hult K: Thiết kế hợp lý của các
• 51. Tan CH, Holmes AB: Sự tổng hợp của (+)-allopumiliotoxin 323B′.
enzyme chọn lọc quang đòi hỏi phải xem xét entropy.
Khoa học Protein 2001, 10:1769-1774.
Entropy được chứng minh là đóng một vai trò quan trọng không kém entanpy đối với
mức độ chọn lọc đối quang của lipase thay đổi khi cố gắng thiết kế lại nó.
38. Kovac A, Scheib H, Pleiss J, Schmid RD, Paltauf F: Cơ sở phân tử của tính
• 53. Held C, Fröhlich R, Metz P: Tổng hợp chọn lọc đối quang của
chọn lọc lập thể của lipase. Eur J Lipid Sci Technol 2000:61-77.
Bài báo xuất sắc này làm sáng tỏ nguồn gốc của tính chọn lọc lập thể của các phản
ứng được xúc tác bởi lipase, xem xét các mô hình định tính như quy tắc Kazlauskas
và các hướng dẫn thực nghiệm khác. Bao gồm cả thông tin gần đây về phức hợp cơ
chất-enzym được nghiên cứu bằng phân tích X-quang và NMR.
39. Tafi A, van Almsick A, Corelli F, Crusco M, Laumen KE, Schneider MP,
Botta M: Mô phỏng trên máy tính quá trình thủy phân este chọn lọc đối quang
được xúc tác bởi Pseudomonas cepacia lipase. J Org Chem 2000, 65:3659-3665.
40. Petersen MTN, Fojan P, Petersen SB: Lipase và esterase hoạt động như thế nào:
đóng góp tĩnh điện. Công nghệ sinh học J 2001, 85:115-147.
41. Svendsen A: Kỹ thuật protein lipase. Biochim Biophys Acta
• 2000, 1543:223-238.
Một đánh giá kích thích về kỹ thuật protein hợp lý của lipase.
42. Magnusson A, Hult K, Holmquist M: Tạo ra một hydrolase •• chọn lọc quang
bằng kỹ thuật xúc tác hỗ trợ cơ chất. J Am Chem Soc 2001, 123:4354-4355.
Bài báo này mô tả một cách tiếp cận hoàn toàn mới và lạ để tăng tính chọn lọc đối
quang của các phản ứng được xúc tác bởi lipase, hứa hẹn mang lại những cơ hội mới
trong xúc tác enzyme nói chung. Việc tạo ra các enzym phù hợp với sự tương phản
đối nghịch có thể trở nên khả thi.
43. Rotticci D, Rotticci-Mulder JC, Denman S, Norin T, Hult K: Cải thiện ••
tính chọn lọc đối quang của lipase bằng kỹ thuật protein hợp lý.
Hóa sinh hóa học 2001, 2:766-770.
Mô hình phân tử được sử dụng để thiết kế lại tính chọn lọc đối quang của C. antarc
tica lipase B trong quá trình phân giải động học của halohydrin bất đối. Nguồn gốc đột
biến đặc trưng cho vị trí tại các vị trí dự đoán trong enzyme đã dẫn đến sự cải thiện
rõ rệt về giá trị E (lên đến E = 28).
44. Arnold FH: Những thách thức về tính toán và tổ hợp đối với •• thiết
kế chất xúc tác sinh học. Thiên nhiên 2001, 409:253-257.
Bài viết này là một bài đánh giá ấn tượng về cách thức cải thiện hiệu suất enzyme
bằng sự kết hợp giữa thiết kế hợp lý và tiến hóa có định hướng.
45. Powell KA, Ramer SW, del Cardayré SB, Stemmer WPC, Tobin MB, •• Longchamp
PF, Huisman GW: Tiến hóa có định hướng và xúc tác sinh học.
Angew Chem Int Ed Engl 2001, 40:3948-3959.
Bài tổng quan này đề cập đến lĩnh vực chung về tiến hóa có định hướng của enzym,
đặc biệt nhấn mạnh vào các phương pháp tái tổ hợp như xáo trộn DNA, các phương
pháp cũng hữu ích trong việc cải thiện hiệu suất của lipase.
46. Reetz MT, Wilensek S, Zha D, Jaeger JE: Sự tiến hóa có định hướng của một
•• enzym chọn lọc đối quang thông qua quá trình gây đột biến đa băng tổ hợp.
Angew Chem Int Ed Engl 2001, 40:3589-3591.
Đóng góp này tạo thành ví dụ đầu tiên về việc áp dụng kỹ thuật tạo đột biến
cassette và kỹ thuật xáo trộn DNA trong việc cải thiện tính chọn lọc đối quang
của phản ứng được xúc tác bởi enzyme, đặc biệt là trong quá trình phân giải động
học của este bất đối được xúc tác bởi các biến thể của lipase từ Pseudomonas aeruginosa.
47. Reetz MT: Các phương pháp dựa trên sự kết hợp và tiến hóa trong
• tạo ra các chất xúc tác chọn lọc quang học. Angew Chem Int Ed Engl 2001,
40:284-310.
Đây là một đánh giá toàn diện về tình trạng hiện tại của các hệ thống sàng lọc
thông lượng cao để thử nghiệm tính chọn lọc quang của các phản ứng xúc tác và xúc
tác sinh học.
48. van Kampen MD, Egmond MR: Tiến hóa có định hướng: từ một
αstaphylococcal lipase thành phospholipase. Eur J Lipid Sci Technol 2000,
102:717-726.
49. Huerta FF, Laxmi YRS, Bäckvall JE: Phân giải động học của •• α este axit
hydroxy. Hữu cơ Lett 2000, 2:1037-1040.
Bài báo mô tả các ví dụ mới về cách tiếp cận mạnh mẽ đối với độ phân giải động
học dựa trên quá trình racemic hóa được xúc tác bởi ruthenium và quá trình acyl
hóa được xúc tác bởi lipase của rượu chirus.
50. Liu XC, Clark DS, Dordick JS: Cấu trúc hóa học của thư viện tổ hợp Ugi bốn
thành phần. Công nghệ sinh học Bioeng 2000, 69:457-460.
Chem Eur J 2001, 7:1845-1854.
52. Brenna E, Fuganti C, Grasselli P, Serra S: Sự tổng hợp qua trung gian
enzyme của (S)- và (R)-verapamil. Eur J Org Chem 2001:1349-1357.
ricciocarpin A và B. Angew Chem Int Ed Engl 2001, 40:1058-1060.
54. Córdova A, Janda KD: Một quá trình tổng hợp chọn lọc lập thể và hóa
học cao của este β-keto thông qua quá trình chuyển hóa este có xúc
tác lipase được hỗ trợ bằng polyme. J Org Chem 2001, 66:1906-1909.
55. Hieber G, Ditrich K: Giới thiệu quá trình sản xuất các chất trung gian bất
đối bằng xúc tác sinh học ChiProsTM trên quy mô thương mại. Chim Oggi 2001,
19(6):16-20.
56. Morgan B, Zaks A, Dodds DR, Liu J, Jain R, Megati S, Njoroge FG,
•
Girijavallabhan VM: Phân giải động học enzym của các đồng phân kích
thích piperidine: tổng hợp chất trung gian chính của chất ức chế men
chuyển protein farnesyl, SCH66336. J Org Chem 2000, 65:5452-5459.
Bài viết này mô tả một ví dụ ấn tượng về việc sử dụng lipase trong công nghiệp để
tổng hợp một loại thuốc điều trị.
57. Wirz B, Iding H, Hilpert H: Các phản ứng enzym đa chọn lọc để tổng
hợp các homochirus cis- và trans-1,3,5-cyclohexanetriol được bảo vệ.
Tứ diện bất đối xứng 2000, 11:4171-4178.
58. Matsubara J, Morita S, Yamashita H, Otsubo K, Kitano K, Ohtani T, Kawano
Y, Bando M, Kido M, Uchida M, Tabusa F: Sự tổng hợp hiệu quả các đồng
phân quang học của chất đối kháng thụ thể vasopressin V2 OPC- 41061 bởi
transester hóa chọn lọc chọn lọc được xúc tác bởi lipase. Dị vòng 2001,
54:131-138.
59. Hanson RL, Shi Z, Brzozowski DB, Banerjee A, Kissick TP, Singh J,
Pullockaran AJ, North JT, Fan J, Howell J và cộng sự: Quá trình
aminoacyl hóa lobucavir bằng enzym chọn lọc vùng chọn lọc để tạo ra
chất trung gian cho tiền chất lobucavir. Bioorg Med Chem 2000, 8:2681-2687.
60. Gum AG, Kappes-Roth T, Waldmann H: Các nhóm • bảo vệ không bền với enyzme
trong quá trình tổng hợp peptit: phát triển glucose- và
niệu đạo có nguồn gốc từ galactose. Chem Eur J 2000, 6:3714-3721.
Lipase (và các enzym khác) đôi khi là cách duy nhất để điều khiển các nhóm bảo
vệ một cách chọn lọc trong các phân tử đa chức năng, như đã trình bày trong bài
báo này.
61. Pesti JA, Yin J, Zhang LH, Anzalone L: Michael-enzim thủy phân thuận nghịch:
một biến thể mới của phân giải động. J Am Chem Soc 2001, 123:11075-11076.