Translated from English to Ukrainian - www.onlinedoctranslator.

com

ВЕРСІЯ 1–ДАТА НАБРАННЯ ЧИННОСТІ: 01.01.2016

ПРИГОТУВАННЯ ГІЄМЗИ
РОБОЧИЙ РОЗЧИН

СТАНДАРТНА ОПЕРАЦІЙНА ПРОЦЕДУРА ДЛЯ МІКРОСКОПІЇ МАЛЯРІЇ – MM-SOP-04

1. МЕТА ТА СФЕРА ЗАСТОСУВАННЯ

Описати процедуру приготування робочого розчину фарби за Гімза з маточного розчину для звичайного
фарбування плівок малярійної крові.

Ця процедура може бути змінена лише за погодженням національного координатора із забезпечення якості мікроскопії малярії.
Усі процедури, зазначені в цьому документі, є обов’язковими для всіх малярійних мікроскопістів, які працюють у національних
довідкових лабораторіях, у лікарняних лабораторіях або в базових лабораторіях охорони здоров’я в медичних установах, які
проводять мікроскопію малярії.

2. Передумови
Для досягнення оптимального фарбування малярійних плівок крові рекомендується свіжоприготований робочий розчин Гімзи,
виготовлений із добре підготовленої сировини та розведений водою, буферизованою до pH 7,2.Базовий розчин Giemsa,
закуплений для національних програм, стандартизований, щоб мінімізувати часте коригування СОП під час фарбування.

Фарбування фарбою Гімза можна проводити швидким (10% робочий розчин) або повільним (3% робочий розчин) методом.
Експрес-метод використовується в амбулаторних клініках і завантажених лабораторіях, де швидка діагностика є важливою для
лікування пацієнтів. Повільний метод використовується для фарбування великої кількості предметних стекол, наприклад,
зібраних під час поперечних або епідеміологічних досліджень і польових досліджень.

Деякі лабораторії вважають за краще фарбувати слайди окремо, навіть якщо є відносно великі партії, оскільки це
економить кількість необхідної фарби Гімзи. Об’єм робочого розчину фарбування Гімзи, який необхідний, особливо
для фарбування окремих предметних стекол, слід визначати точно, щоб уникнути приготування великого об’єму, який
можна використовувати протягом тривалого часу та, можливо, втратити.

3. МАТЕРІАЛИ ТА ОБЛАДНАННЯ
Для 10% робочого розчину Гімзи: Для 3% робочого розчину Гімзи:
• фарбування Гімзи, перенесене та • Фарба Гімзи, перенесена та відфільтрована з
відфільтроване з основного розчину в основного розчину в 25- або
пляшку на 25 або 50 мл; флакон 50 мл;
• вода буферна, pH 7,2; • вода буферна, pH 7,2;
• стакан або пробірка чиста місткістю 5–10 мл; • циліндр мірний чистий
• пастерівська піпетка і ємністю 100–500 мл;
• Папір фільтрувальний ватман, сорт №1. • пастерівська піпетка і
• Папір фільтрувальний ватман, сорт №1.

4. ЗАХОДИ БЕЗПЕКИ
• Метанол (метиловий спирт) легкозаймистий і дуже токсичний при вдиханні або ковтанні; він може спричинити сліпоту і
навіть смерть, якщо його проковтнути в будь-якій кількості. Уникайте контакту та вдихання. Коли він не
використовується, його слід зберігати в закритій шафі.
• Слід застосовувати універсальні запобіжні заходи, включаючи використання відповідних засобів індивідуального захисту,
таких як рукавички, захисні окуляри та лабораторний халат або халат. Див. MM-SOP-11: Загальні процедури безпеки в
лабораторії мікроскопії малярії.
MM–SOP–04: ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧОГО РОЗЧИНУ GIEMSA

5. ПРОЦЕДУРА
БЛОК-СХЕМА ОПИС ДІЯЛЬНОСТІ
A. Приготування 10 мл 10% A. Приготування свіжого 10% робочого розчину Гімзи з
робочого розчину Гімзи основного розчину для швидкого фарбування кількох
предметних стекол.Для кожного предметного скла з плівкою
крові потрібно близько 3 мл фарби.

1. Помістіть 9 мл буферної води в 1. Помістіть 9 мл попередньо підготовленої буферної води,

склянку або пробірку. pH 7,2, у чистий стакан або пробірку.

2. Відфільтруйте вихідний розчин Гімзи 2. Відфільтруйте основний розчин Гімзи через

через ватман №1 і переклад ватман №1 і перенесіть у 25 до
в контейнер об’ємом від 25 до 50 мл. Ємність 50 мл.

3. За допомогою чистої сухої піпетки додайте 1 мл

основного розчину Гімзи. робитинівізьміть аліквоту з
3. Додайте 1 мл основного розчину Giemsa. великої пляшки, що містить основний розчин Гімзи,
щоб уникнути її забруднення.

4. Приготуйте робочий розчин Giemsa безпосередньо перед

4. Використовуйте морилку протягом 15
фарбуванням плівок (плівок) крові та використайте його протягом
хв приготування та викиньте
максимум 15 хвилин після приготування. Викиньте невикористану
невикористана пляма.
пляму.

B. Приготування 100 мл 3% робочого B. Приготування свіжого 3% робочого розчину Гімзи з

розчину Гімзи основного розчину для повільного фарбування партії з 20–
100 предметних стекол

1. Помістіть 97 мл буферної 1. Помістіть 97 мл попередньо підготовленої буферної

води в мірний циліндр. води, pH 7,2, у чистий мірний циліндр.

2. Відфільтруйте вихідний розчин Гімзи 2. Відфільтруйте основний розчин Гімзи через

через ватман №1 і переклад ватман №1 і перенесіть у 25 до
в контейнер об’ємом від 25 до 50 мл. Ємність 50 мл.

3. За допомогою мірного циліндра або піпетки відміряйте 3 мл

основного розчину Гімзи. робитинівізьміть аліквоту
3. Додайте 3 мл основного розчину Giemsa.
безпосередньо з великої пляшки, що містить основний
розчин Гімзи, щоб уникнути її забруднення.

4. Приготуйте робочий розчин Giemsa безпосередньо перед

4. Використовуйте морилку протягом 15
фарбуванням плівок (плівок) крові та використайте його протягом
хв приготування та викиньте
максимум 15 хвилин після приготування. Викиньте надлишки
невикористана пляма.
плями.

2
MM–SOP–04: ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧОГО РОЗЧИНУ GIEMSA

6. ПРИМІТКИ ПРО ПРОЦЕДУРУ

• Мірні циліндри, піпетки, контейнери та пробірки повинні бути чистими та сухими перед використанням.
• Не створюйте одну партію фарби Giemsa для використання або повторного використання протягом дня або довше.
Морилка Giemsa швидко поглинає водяну пару в повітрі, і, якщо її розбавити деіонізованою, дистильованою або
будь-якою водою, вона швидко втрачає свої барвні властивості, тому пляма погано ковзає вже через короткий
час. Райдужна піна на поверхні створеної плями Гімзи легко прилипає до плівки крові, ускладнюючи
ідентифікацію структур.

7. РОЗРАХУНОК ОБ’ЄМУ МАТЕРІАЛЬНОГО РОЗЧИНУ GIEMSA ТА БУФЕРНОЇ ВОДИ,

НЕОБХІДНОГО ДЛЯ ФАРБУВАННЯ ОКРЕМИХ ПРЕКЛАД.
Для кожної плівки крові потрібно 3 мл робочого розчину для фарбування Гімзи. Таким чином, об’єм основного розчину Гімзи,
необхідний для фарбування окремих слайдів крові, можна розрахувати за наведеною нижче формулою:

необхідний об’єм основного розчину Гімзи на предметне скло = необхідна концентрація Гімзи х 3 мл

Кількість буферної води (pH 7,2), необхідну для фарбування одного предметного скла, можна розрахувати наступним чином:

об’єм буферної води на предметне скло = 3 мл– необхідний об’єм розчину Giemsa на предметне скло

3 мл робочого розчину Гімзи готують шляхом додавання необхідного об’єму основного розчину Гімзи на
предметне скло плюс обчислений об’єм буферної води з рН 7,2, необхідний на предметне скло.

Приклад 1: Фарбування 15 слайдів 10% розчином Гімзи

Таким чином, об’єм основного розчину Гімзи, необхідний для фарбування 15 окремих предметних стекол 10% розчином
Гімзи, можна розрахувати як:
10 x 3 мл x 15 слайдів = об’єм основного розчину Giemsa, необхідний на предметне скло 100

(0,1 x 3 мл) x 15 предметних стекол = 4,5 мл

Подібним чином об’єм буферної води з pH 7,2, необхідний для фарбування 15 окремих предметних стекол 10%
розчином Гімзи, можна розрахувати як:
[3 мл – (0,1 x 3 мл)] x 15 предметних стекол = об’єм буферної води на предметне скло [3

мл – (4,5 мл)] x 15 предметних скла = 40,5 мл

Таким чином, 4,5 мл основного розчину Гімзи слід змішати з 40,5 мл буферної води, щоб приготувати
необхідну кількість 10% робочого розчину Гімзи для фарбування 15 окремих плівок крові.

8. ПОВ’ЯЗАНІ SOP
MM-SOP-02: Приготування основного розчину Giemsa MM-SOP-3a: Приготування

води, буферизованої до pH 7,2 MM-SOP-3b: Приготування води, буферизованої до

pH 7,2 з буферними таблетками MM-SOP-3c: Контроль якості Giemsa основний

розчин і буферна вода MM-SOP 7a: фарбування за Гімзою плівок крові від малярії

MM-SOP-11: Загальні процедури безпеки в лабораторії мікроскопії малярії

3
MM–SOP–04: ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧОГО РОЗЧИНУ GIEMSA

9. ЛІТЕРАТУРА
ВООЗ. Основна малярійна мікроскопія. Частина І. Навчальний посібник. Друге видання. Женева: 2010.

Центри контролю та профілактики захворювань. Лабораторна діагностика малярії. Фарбування на малярійних

паразитів. Атланта, Джорджія; 2013 (http://www.cdc.gov/dpdx/resources/pdf/benchAids/malaria/
malaria_staining_benchaid.pdf, доступ 14 грудня 2015 р.).

10. ІСТОРІЯ ДОКУМЕНТА

Дата Відповідальна особа

Версія Коментарі
(ммм/рррр) (Ім'я прізвище)

Переглянуто та доопрацьовано Гленда Гонзалес,

Січень 2016 1 експертами, під ред Технічний спеціаліст,
відформатований WPRO

4
WHO/HTM/GMP/MM/SOP/2016.04© Всесвітня організація охорони здоров'я, 2016 р. Всі права захищені.