Báo Cáo Thí Nghiệm

Bài 6: Quan Sát Nấm Men_Phần 2

I. Mục Đích Thí Nghiệm
• Định lượng nấm men sử dụng buồng đếm hồng cầu.
II. Vật Liệu Và Phương Pháp
a) Vật Liệu:
Buồng đếm hồng cầu
Lá kính
Nước cất
Hai ống nghiệm sạch, khô.
3 pipet kèm quả bóp
Hai mẫu canh trường nấm men R3 và B3
Đèn cồn, bình tia cồn, bông thấm.
b) Phương Pháp Tiến Hành:
• Lắc đều canh trường, dùng pipet hút 1 ml canh trường cho vào ống
nghiệm sạch và khô.
• Dùng pipet khác hút 9ml, 19ml,29ml…99ml nước cất tùy độ pha
loãng mong muốn tương ứng là 1/10; 1/20; 1/30…1/100.
• Dùng bông thấm nước, tẩm nước cất và phết nhẹ lên hai khoang
bên của buồng đếm, đặt lá kính lên rồi dùng ngón tay ấn nhẹ cho lá
kính dính chặt vào phiến kính.
• Dùng pipet lấy canh trường đã pha loãng cho canh trường chảy từ
từ vào khoảng trống giữa lưới đếm và lá kính (nên bỏ đi vài giọt
đầu, không để canh trường tràn ra ngoài khoang đếm, rơi xuống các
rãnh và tránh tạo thành bọt khí.)
• Đặt buồng đếm lên khay kính, để yên trong 3 - 5 phút rồi tiến hành
đếm trong 5 ô lớn chéo nhau tức là 80 ô vuông nhỏ.
• Tính số tế bào trung bình trong mỗi ô lớn, chia cho 16 để tính số tế
bào trung bình trong mỗi ô vuông nhỏ.
• Tính toán:
 Số tế bào trong 1 ml canh trường là: (𝑎 ×1000 ×𝑓)/(ℎ ×𝑆)
Trong đó: a là số tế bào trung bình có trong 1 ô nhỏ
f là hệ số pha loãng của canh trường
h là bề sâu của lưới đếm
S là diện tích một ô nhỏ
1000 là hệ số chuyển đổi 1ml = 1000 mm3 .
III. Kết Qủa Và Thảo Luận:

Một kính trường buồng đếm mẫu nấm men B3 pha Một kính trường buồng đếm mẫu nấm men R3 pha
loãng 10 lần X400 loãng 50 lần X400

Nhận xét:
Mẫu nấm men B3:
Ô lớn thứ nhất: 17 tế bào
Ô lớn thứ hai: 13 tế bào
Ô lớn thứ ba: 15 tế bào
Ô lớn thứ tư: 16 tế bào
Ô lớn thứ năm: 15 tế bào
Trung bình mỗi ô lớn có : 15.2 tế bào
Trung bình mỗi ô nhỏ có 0.95 tế bào suy ra a = 0.95
f = 10 lần
h = 0.1 mm
S = 0.0025 mm2
Số tế bào trong 1 ml canh trường là:
(0.95x10x1000)/(0.0025x0.1)=3.8x107 tb/ml
Mẫu nấm men R3:
Ô lớn thứ nhất: 19 tế bào
Ô lớn thứ hai: 25 tế bào
Ô lớn thứ ba: 29 tế bào
Ô lớn thứ tư: 32 tế bào
Ô lớn thứ năm: 23 tế bào
Trung bình mỗi ô lớn có : 25.6 tế bào
Trung bình mỗi ô nhỏ có 1.6 tế bào suy ra a = 1.6
f = 50 lần
h = 0.1 mm
S = 0.0025 mm2
Số tế bào trong 1 ml canh trường là:
(1.6x50x1000)/(0.0025x0.1)=3.2x108 tb/mL

IV. Kết Luận:

Qua bài thí nghiệm em đã biết được:
✓ Cấu tạo và cách sử dụng buồng đến hồng cầu.
✓ Sử dụng buồng đếm hồng cầu để định lượng mẫu nấm men được
cung cấp.
✓ Sử dụng thành thạo hơn kính hiển vi.