RNA 轉 cDNA

1. 計算：轉 200ng 表示 20ul 中有 200ng 的 RNA

（ex：53ng/ul：200/53=3.8ul  取 3.8ul RNA sample 配製）

（require： 100-1000ng （目前使用 200ng）

2. 轉 cDNA kit（左邊-20°冰箱白盒/紫色補充在旁邊）

- dNTP/OligodT/Reaction Buffer 先退冰/拿冰/拿 RNA

- RT/RI/Gapdh RNA 後退冰

3. RNA+ water（計算 200ng 所需的 RNA 體積再補水到 11ul） + OligodT 1ul =12ul

（先確定用量/標記管（exp/pc/ntc/mix）

Ex：

Exp groups PC (Gapdh RNA) NTC (水)

RNA 3.8ul 1ul 0ul
Water 7.2ul 10ul 11ul
OligodT (fix) 1ul 1ul 1ul
Total (fix) 12ul 12ul 12ul

4. 配 Mix 8ul：（記得多 1 份）

5x Reaction buffer 4ul

10mM dNTP Mix 2ul
RT 1ul
RI 1ul

5. 把 mix 加入 12ul 的 diluted RNA sample

4. 上機 (Program  BK  RT  start on block ½  preheat 到 42° (lid)  pause 上 RNA  1 小時收)