A fénymikroszkóp és használata

 Biztonságtechnikai oktatás (külön prezentációban található)

 Bevezetés (az intézeti honlap bemutatásával)
 A fénymikroszkóp

1
 A Sejttan gyakorlatok
• Célja
– A sejttanban használatos módszerek.
– Sejtalkotók és sejtszintű jelenségek
elektronmikroszkópos (EM képek) és
fénymikroszkópos preparátumok, fényképek
megfigyelése, értelmezése.
• Tagozódása
– Tanári
• Bevezetés, magyarázat
• Bemutatás
– Hallgatói munka
• A gyakorlatvezető útmutatás alapján

2
 Segédeszközök
• Irodalom:
̵ Darvas Zs. – László V.: Sejtbiológia c. jegyzet
(Semmelweis Kiadó, 2005)
̵ Fülöp A. K. (szerk.): Biológia Gyakorlatok egyes
fejezetei (pdf-ként elérhetők a honlapról)
̵ Az intézet honlapján és Moodleban elérhető ppt és/vagy pdf
dokumentumok.
̵ Sejttan fényképalbum

• Ajánlott irodalom:
̵ Csaba Gy., Madarász B.: A sejt szerkezete (Semmelweis Kiadó)
̵ Csaba Gy.: Biologikon (Semmelweis Kiadó)

• Saját jegyzetek
̵ Tanári magyarázat
3
̵ Megfigyelés és annak célja, értelme, magyarázata.
 Értékelés és követelmények

• Lásd a honlapon:
• http://gsi.semmelweis.hu/index.php/hu/
oktatas/2023-24-1
• Felhasználónév: student
• Jelszó:

4
 Bevezetés a mikroszkóphoz

• Minden élőlény sejtekből áll.

– A sejtek általában csak mikroszkóppal
figyelhetők meg.

• Mi a mikroszkóp?
– Összetett lencserendszer a közeli tárgyak
nagyítására.

5
Mekkora tárgyakat láthatunk a mikroszkóppal?

6
A világos látóterű fénymikroszkópban
abszorpciós (elnyelési) kép keletkezik

FÉNY

Visszaverődés Elnyelés/ Áthatolás/

Abszorpció Transzmisszió

Kontraszt 7
Ahhoz, hogy a mikroszkópot használni tudjuk,
ismernünk kell a főbb részeit.

8
 Mikroszkóp felépítése
Okulár Binokuláris
tubus
Objektív
Revolver
foglalat
objektívekkel

Minta a
minta-
tartóban

Oszlop
Élesség
állítás Tárgyasztal

Megvilágítás
Minta- Élesség
Kondenzor
mozgató állítás
csavarok

Talp Főkapcsoló
Fényerősség 9
állítása
 A fénymikroszkóp (FM) részei
Mechanikai Optikai
Talp Megvilágító rendszer
Oszlop Kondenzor
A tárgyra összpontosítja a fényt
Kontraszt
Tárgyasztal Objektív
mintabefogóval Feloldóképesség és nagyítás

Binokuláris tubus revolver Okulár

foglalattal Nagyítás és segédeszközök
Állító csavarok
• Fényerősség
• Kondenzor magasság és apertúra (kontraszt)
• Minta mozgatók / Fókusz (Makro és mikro)
• Pupillatávolság / Dioptria korrekció 10
Kondenzor diafragma szerepe:
Kontraszt beállítása

Túl nyitott Helyesen beállított Túl szűk

https://www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/
java/kohler/contrast/

https://www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/java/
kohler/condenseraperture/ 11
 Az objektív és jelzései

Numerikus
Nagyítás apertúra

Tubushossz Speciális
(mm) jelzés(ek)

Fedőlemez
vastagsága
(mm)

Frontlencse 12
 Feloldóképesség
Az objektív feloldóképessége (R, mint resolution)
1/R = dmin,
ahol dmin a felodás határa, az a legkisebb távolság,
amiben 2 pontot még el tudunk különíteni
Abbe-képlet: dmin kiszámítására Nagyítás NA
0 ,5 ∗ 𝜆
𝑑 𝑚𝑖𝑛=
dmin=0,5*/NA vagy𝑛∗ 𝑠𝑖𝑛 𝛼
100 / 1.25 oil

= a megvilágító fény hullámhossza

Objektív Félnyílásszög
NA (numerikus apertúra )= n*sin
= az objektív félnyílásszöge Frontlencse
α
n= a minta és az objektív közötti közeg Immerziós olaj
törésmutatója
Tárgylemez
-> levelgő: 1.00027
-> víz: 1.3 Minta
-> immerziós olaj: 1.51 Fénynyaláb
Immerziós objektív
dmin  200 nm
A felbontás (R) függ a numerikus apertúrától (NA)
(1000x nagyítás)

NA 0,10 NA 0,30 NA 0,50

NA 0,75 NA 0,85 NA 1,30

Kék vagy piros megvilágító fénnyel
érhető el nagyobb feloldás?

700 nm

470 nm
 A fénymikroszkóp össznagyítása (N)

N = Nobj* Nok(*Ntub)

Objektív Okulár Össznagyítás (N)

4x = 40 áttekintés

10x

10x x = 100 közepes nagyítás

40x = 400 nagy nagyítás

16
 Hasznos és üres nagyítás
Az objektív feloldóképességét a nagyítás növelésével javítani
nem lehet, és hasznos kép helyett csak egy elmosódott foltot
látunk, a nagyítás üres lesz. További nagyítással a tárgyról
már újabb információkat nem kapunk (sőt…).
A hasznos nagyítás a numerikus apertúra 500-szorosa és
1000-szerese között van.

Lehet-e valami
haszna az üres
nagyításnak?

Nagyítás ≠ feloldóképesség 17
 Összefoglalás
Az FM fontosabb Felelős optikai
paraméterei rész

Felbontás (R) Objektív

Kontraszt Kondenzor

Nagyítás (M) Objektív és okulár

18
 A (fény)mikroszkóp az
egészségtudományban I.

• Sejttan / Sejttenyésztés
• Szövettan / Fejlődésbiológia

19
 A (fény)mikroszkóp az
egészségtudományban II.

• Hematológia • Mikroszkópos patológia

Sokmagvú (multinukleáris) óriássejt

tumormintákban 20
 A (fény)mikroszkóp az
egészségtudományban III.

• Mikrobiológia • Igazságügyi orvostan

• Beleértve
szájüreg /fogászat

Állati és emberi
szőrszál mintázatok

21
 A (fény)mikroszkóp az
egészségtudományban IV.

• Mikrosebészet

22
 Kapcsolódó irodalom és
segédanyagok
• Lásd a honlapunkon az 1. hétnél
feltöltött pdf

• Jövő heti anyag: Az FM mikrotechnika alapjai

• Filmek(angolul)
https://www.youtube.com/watch?v=3LIZBn7bS4s

https://www.youtube.com/watch?v=RKA8_mif6-E

https://www.youtube.com/watch?v=bdxzcoJIlyE

23
 A mikroszkóp használata
(első vagy második héten)
• Távolítsuk el a porvédőt.

• (Csatlakoztassuk az elektromos hálózathoz és)

kapacsoljuk be a FM-ot.

• Állítsuk be a fényerősséget és a kondenzor

magasságát.

• Állítsuk a tárgyasztalt és az objektívet kb. fél cm-

re egymástól (oldalról figyeljük a műveletet!)

• Helyezzük be a mintát (fedőlemezzel felfelé) és

centráljuk (kívülről, tehát nem az okuláron
keresztül figyelve).
24
 A mikroszkóp használata (folyt.)
• Nézzünk az okulárokba és fókuszáljunk a legkisebb
nagyításon.

• Centráljuk a vizsgálandó területet és váltsunk a

következő (nagyobb nagyítású) objektívre.

• Állítsunk az élességen a mikrométercsavarral.

Nagy nagyításon ne használjuk a makrométer
csavart, mert eltörhet a preparátum!

• Állítsuk be a megfelelő fényerősséget, kontrasztot,

pupillatávolságot.

• Az immerziós objektívet szárazon ne használjuk!

25
Megfigyelés: Film
([1] tesztpreparátum, fakultatív)

• Cél
̵ A FM beállításának gyakorlása
̵ Az abszorpciós kontraszt megfigyelése
̵ Az információtartalom és a nagyítás
összefüggésének megfigyelése
• Eredmény:
• Következtetés:

26
 [1] tesztpreparátum10x okulárral

Obj. 2x NA 0,10 Obj. 10x NA 0,30 Obj. 20x NA 0,50

Obj. 40x NA 0,75 Obj. 60x NA 0,85 Obj. 100x NA 1,30

A mikroszkópos munka befejezése

• Álljunk vissza legkisebb nagyításra.

• Távolítsuk el a mintát.

• Kapcsoljuk ki a mikroszkópot.

• Takarjuk le a porvédővel.

28
Fakultatív diák

29
Nevezze meg a mikroszkóp részeit!
Objektív Látótér Felbontó Fókusz Mély-
lencse képesség állító ség
csavar élesség

Makro Leg-
Legnagyobb Legkisebb csavar nagyobb
Mikro
csavar
Mikro
csavar
Mikro
Legkisebb Legnagyobb csavar Legkisebb

31
A világos látóterű, centrális megvilágítású megfigyelésen
kívül számos egyéb fénymikroszkópos
módszer létezik, melyekkel itt, vagy más tárgyak
kereteiben fognak találkozni.

• Fáziskontraszt
• Interferencia
• Polarizációs
• Sötét látóteres ultramikroszkópia
• Fluoreszcens
• Lézer konfokális (LCM)
• Szuperrezolúciós
• Intravitális
• Stb.
33
Mi a hiba?

34
Kondenzor lencse pozíciójának
szerepe

35
Rosszul centrált kondenzor

36
Helyes centrálás

37
Immerziós folyadék szerepe

38
Mi a különbség?

39
Mi a hiba?

40
43
Mi a fény?

44
Hasznos és üres nagyítás
Az objektív feloldóképességét a nagyítás növelésével javítani
nem lehet, és hasznos kép helyett csak egy elmosódott foltot
látunk, a nagyítás üres lesz. További nagyítással a tárgyról
már újabb információkat nem kapunk (sőt…).
A hasznos nagyítás a numerikus apertúra 500-szorosa és
1000-szerese között van.

Lehet-e valami
haszna az üres
nagyításnak?
Hasznos
Üres 45