INS La Romnica

Data:
CFGS: Laboratori danlisi i de control de qualitat
Pgina: 01 de 03
MP07: Assajos Biotecnolgics
Nota:
Nom:
Pt1.: Allament de la casena de la llet i determinaci del seu punt isoelctric

Allament de la casena de la llet

MATERIALS I REACTIUS
- Deu vasos precipitats de 25 ml
- Dos vasos de precipitats de 50ml
- Un vas de precipitats de 250ml
- Proveta de 50ml
- Matrs aforat de 50 ml
- pipeta graduada de 5,0 ml
- pipeta graduada de 1,0 ml
- pipeta graduada de 10,0 ml
- Embut de vidre mitj
- Paper de filtre
- Termmetre
- Reactius per grup:
o Aigua destillada
o Acetat sdic 0,1 M
o cid actic 0,01 M
o cid actic 0,1 M
o cid actic 1,0 M
o NaOH 1N
o ter etlic
o Etanol al 70%
- Materials i reactius ds general:
o Solucions buffer pH 4,0 y 7,0 per calibrar el potencimetre
o Potencimetre (pH-metre)
o Llet sencera corrent ( 1 litre)

Procediment dallament de la casena

1. Escalfar en un vas de precipitats 150ml de aigua destillada a 38C,
afegir-hi 50ml de llet i desprs gota a gota i amb agitaci, addicionar cid
actic fins observar que es forma un precipitat (la llet es talla)
2. Deixar sedimentar i filtrar sobre paper de filtre usant lembut de vidre.
3. Rentar el precipitat amb 20ml detanol en el mateix .
4. Assecar el precipitat collocant varis plecs de paper de filtre.
5. Collocar el precipitat en un vas de precipitats en un vas de precipitats
petit prviament pesat i afegir-hi 5ml d'ter etlic per cada gram de
precipitat
6. Filtrar de nou
7. Rebutjar el lquid, quedant un precipitat blanc de fcil manipulaci, que
s la casena.

Preparaci de la soluci de casena:

1. Collocar aproximadament 250 mg de casena en un vas de 50ml
2. Afegir-hi 20ml d'aigua destillada i 5ml de NaOH 1M. Agitar fins
aconseguir una dissoluci total de la casena.
3. Una vegada dissolta la casena, s'avoca en un matrs aforat de 50 ml, i
addicionar 5ml de cid actic 1 M i enrasar fins els 50 ml.
4. La soluci ha de ser clara i neta i si no s aix, s'ha de tornar a filtrar.
5. Una vegada dissolta la casena, saboca en un matrs aforat de 50 ml,
addicioni 5 ml de cid actic 1N i dilueix amb agua destillada fins 50ml
mescli b.
6. La soluci deu ser clara i lmpida y si no s aix, deu tornar a filtrar.

Determinaci del pI de la casena:

1. En deu vasos de 25 ml nets i secs addicionar exactament els volums dels
reactius segons la segent taula:

Tub

Acetat 0,1 M

Actic 0,1 M

Actic
0,01M

pH
aproximat

0,5

9,5

3,2

3,6

1,5

8,5

3,8

4,2

4,5

4,7

5,1

5,5

10

6,1

pH real

2. Mesurar experimentalment el pH de tots els vasos, que han de cobrir el rang

aproximat semblant al teric (3 a 6,5). Anotar els valors reals en la taula.
3. Afegir 1 ml de dissoluci de casena en cada vas i esperar aproximadament 3
minuts.

4. Mesurar l'absorbncia de cada mostra a 640 nm, tenint la precauci de agitar

b el contingut de cada tub per tenir una soluci hogomnia abans de avocar
una part en la cubeta.
5. Anotar els resultats, representar l'absorbncia en front el pH i determinar el pI
aproximat de la casena.

Qestions
1) Quin s el punt isoelctric de la casena?
2) Per qu les protenes tenen solubilitat mnima en el pI?