MP7: TÈCNIQUES DE PRODUCCIÓ BIOTECNOLÒGICA

UF2: TÈCNIQUES DE CULTIU

PREPARACIÓ DE SOLUCIONS MARE I DE DILUCIONS

Les concentracions, els volums i les masses de treball en els laboratoris de

biotecnologia i biologia molecular, són summament petits, de manera que usualment
es preparen solucions Mare (Estoc), d'alta concentració, que després es poden diluir.

És més convenient això ja que es pesen masses majors de soluts, el que disminueix
l'error, evita la contaminació dels reactius de la manipulació constant i per diversos
operaris, i a més facilita la preparació de les solucions, ja que no ha d'estar pesant una
i altra vegada els reactius, optimitzant l'ús del temps en el laboratori. Les solucions
mare es preparen a alta concentració, s'ajusten a pH desitjat, s’aliquoten, s'esterilitzen
en autoclau (si es necessari) i es mantenen congelades (en cas que puguin ser
congelades) o en nevera durant un temps prudencial. Per poder fer ús de les
mateixes, simplement hem de diluir-les a la concentració d’ús necessària.

• Es diu que una solució és "N”X (N per) quan aquesta solució està concentrada
N vegades respecte de la d'ús normal. .Ex.: "PBS 5X" és una solució estoc de
PBS 5 vegades més concentrada que el PBS d’ús normal (o "1X").

Es pot preparar-PBS 1 X fent una dilució 1/5 de la solució estoc (per a 500 ml:
100 ml PBS estoc + 400 ml H2O destil·lada).

• A vegades és necessari diluir "molt" una solució concentrada (Ex: 1/104, 1/106).
En aquests casos es solen fer dilucions successives o "Dilucions seriades" per
disminuir els errors de mesurament a pipetejar volums molt petits. Ex: Preparar
1 mL d'una solució d'un anticòs que contingui 0,1 µg / mL, a partir d'una solució
estoc de 1 mg / mL. Hauria de realitzar-se una dilució 1/10000 (1/104) és a dir
pipetejar 0,1 µL estoc + 999,9 µL buffer de dilució. Convé llavors fer dilucions
successives (1/10) que, amb menor error de pipeteig, permetin assolir la
concentració buscada.

CONCENTRACIÓ Les unitats de concentració més utilitzades són:

% p/p: Percentatge massa en massa, g de solut per cada 100 g de dissolució

3
% p/v: Percentatge massa en volum, g de solut por cada 100 cm o 100 ml de dissolució
% v/v: Percentatge volum en volum, ml de solut por cada 100 ml de dissolució.
3
M: Molaritat, nombre de mols de solut por cada 1 litre o 1000 cm de dissolució
g/L: grams de solut per cada litre de dissolució

DILUCIONS: Cal tenir en compte que: Les solucions diluïdes s’expressen sovint en "mili...",
"micro...", "nano...", "pico...", "femto...". Ej: 10 µM, 1 pg/ml, etc.
Recordar:
-3
1 mmol (milimol) = 10 mols (aplicable a d’altres unitats: gram, etc.)
-6
1 µmol (micromol) = 10 mols
-9
1 nmol (nanomol) = 10 mols
-12
1 pmol (picomol) = 10 mols
-15
1 fmol (femtomol) = 10 mols

Les unitats més utilitzades són “mili” y “micro”

 MP7: TÈCNIQUES DE PRODUCCIÓ BIOTECNOLÒGICA
UF2: TÈCNIQUES DE CULTIU


Preparació de solucions a partir de Solucions Mares o Estoc. Per a això farem ús
d'una pràctica equació, coneguda com l'equació d'equivalència, que és la següent:

CONCENTRACIÓ INICIAL x VOLUM INICIAL =

CONCENTRACIÓ FINAL x VOLUM FINAL

𝑪𝒊 ∙ 𝑽𝒊 = 𝑪𝒇 ∙ 𝑽𝒇

Exemple:

1. S’ha de preparar 250mL medi de cultiu amb ampicil·lina 1X, a partir de una solució
estoc congelada 500x. Quin volum de solució estoc s’ha d’afegir?

𝟓𝟎𝟎 ∙ 𝑽𝒊 = 𝟏 ∙ 𝟐𝟓𝟎 𝒎𝑳

𝑽𝒊 = 𝟎, 𝟓 𝒎𝑳

S’haurà d’afegir 0,5 mL de l’ampicil·lina 500X per preparar els 250 mL de

medi de cultiu

2. S’ha de preparar 10 mL d’una dissolució per a l’extracció de ADN vegetal. La

fórmula de la mateixa és la següent: Tris 100 mM, EDTA 50 mM y NaCl 500 mM.
Es parteix de les següents dissolucions mare (estoc):

• Tris 1 M
• EDTA 0,5 M
• NaCl 6 M

Resolució:
a) Tris: aquest és un compost bàsic (2-amino-2- (hidroximetil) -1, 3- propanodiol) l'ús
està molt difós a l'àrea de Biologia Molecular a la preparació de diversos tampons, i
com a agregat a reactius de lisi, purificació, i resuspensió d'àcids nucleics. El seu pes
molecular és de 121,1 g / mol. Per calcular el sol·licitat, aplicarem la fórmula:

𝟏𝑴 ∙ 𝑽𝒊 = 𝟏𝟎𝟎. 𝟏𝟎!𝟑 𝑴 ∙ 𝟏𝟎 𝒎𝑳

𝑽𝒊 = 𝟏 𝒎𝑳

b) EDTA: és el EDTA, i generalment es proveeix en forma de sal disòdica. És un

quelant de ions i es fa ús extensiu del mateix en la preparació de diverses solucions en
Biologia Molecular, així com en solució tampó per electroforesi. El seu pes molecular
és de 362 g / mol.

𝟎, 𝟓 𝑴 ∙ 𝑽𝒊 = 𝟓𝟎. 𝟏𝟎!𝟑 𝑴 ∙ 𝟏𝟎 𝒎𝑳

𝑽𝒊 = 𝟏 𝒎𝑳

c) Clorur de Sodi: les sals s'agreguen per tal d'estabilitzar el medi salí i a més per
coadjuvar a la lisi de les parets cel·lulars vegetals o a les membranes biològiques en
cas de les mostres de mamífers. Per calcular el sol·licitat tindrem:

𝟔𝑴 ∙ 𝑽𝒊 = 𝟓𝟎𝟎. 𝟏𝟎!𝟑 𝑴 ∙ 𝟏𝟎 𝒎𝑳
 MP7: TÈCNIQUES DE PRODUCCIÓ BIOTECNOLÒGICA
UF2: TÈCNIQUES DE CULTIU


𝑽𝒊 = 𝟎, 𝟖𝟑 𝒎𝑳

A les hores, la fórmula serà la següent:

Tris 1M 1 mL
EDTA 0,5M 1 mL
NaCl 6 M 0,83 mL
Agua destil·lada fins a 10 mL (és a dir 7,17 mL)
_______________________________________________________________________________________________

EXERCICIS:

1. La composició normal (1X) per al medi de cultiu MS (medi de cultiu teixits
vegetals) és:

a) Com es prepararies 50 mL de solució d’estoc de MgSO4.7H2O 100x?

b) Com es prepararien 200 mL de dissolució d’estoc conjunta de fosfats,
borats, molibdats a una concentració 50x?
c) Com es prepararia 100 mL d’una solució d’estoc de nitrats 10x?

2. Calculeu el volum (expressat en mil·lilitres) que s’ha d’agafar d’una solució

mare de l’àcid indolacétic (AIA) d’una concentració 1 mg/mL per a preparar 2 L
de medi de cultiu que tingui AIA en una concentració de 0,1 mg/L?

3. Quin volum (expressat en mil·lilitres) s’ha d’agafar d’una solució 50X de

compostos orgànics para preparar 5 litres de medi de cultiu (1X)?
 MP7: TÈCNIQUES DE PRODUCCIÓ BIOTECNOLÒGICA
UF2: TÈCNIQUES DE CULTIU


4. S’han de preparar 50 mL una solució de Lisis per a glòbuls vermells. La
fórmula a preparar és: Tris 10 mM; Sacarosa 11%, Tritón 1%. Es disposa de
Tris 1 M, sacarosa i Triton (comercial)

5. Volem diluir una solució d’ADN problema aïllada prèviament que té una
concentració molt alta. Com es preparen 10 mL d’una dilució 1/20 de l’ADN
problema en tampó TE1X?

6. El cap del laboratori de biotecnologia et demana que preparis els reactius

per fer una electroforesi i et dona les següents dades:
• TBE 10 X (Buffer d’electroforesi) preparar 1000mL
Tris base 0,89 M (Solució mare: Tris 1 M)
Àcid bòric 0,89 M (PM=61 g/mol)
EDTA 0,02 M (Solució mare: EDTA 0,5 M)
H2O destil·lada cps

• Solució Tris 10mM i EDTA 1mM preparar 50 mL. Amb les solució
mare anteriors

• Buffer de carga per a preparació de mostres d’electroforesi en gels

d’agarosa:
Glicerol 60% (Solució mare: Glicerol al 100%)
Blau de Bromofenol 0,01 % (reactiu en polvo)
Solució de Tris 10 mM y EDTA 1mM csp 1,5 mL

• 50 mL de agarosa al 1,5 % p/v en TBE1X

Indica quan s’ha d’agregar de cadascuna de les solucions o quan ha de pesar

dels soluts i la quantitat de dissolvent que ha d’afegir per preparar les
dissolucions requerides.