TUGAS NARRATIVE REVIEW

APLIKASI MIKROBIOLOGI DAN KEAMANAN PANGAN

METODE IDENTIFIKASI BAKTERI PATOGEN : Bacillus cereus

KELOMPOK 4
AIDAH NAFISAH (G031191044)
CLAUDIA GABRELLA LEVEN (G031191003)
FITRI RAMADHAN (G031191037)
KHAERUNNISA (G031191038)
KURNIA MASNI (G031191068)
NURASIA HALEDE (G031191002)
TRI SETYO WIBOWO PUTRA (G031191084)
USWATUN HASANAH MAKMUR (G031191029)

APLIKASI BIOKIMIA DAN FISIOLOGI KEAMANAN PANGAN

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN
DEPARTEMEN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2021
 METODE IDENTIFIKASI BAKTERI PATOGEN : Bacillus cereus
Aidah Nafisah1, Claudia Gabrella Leven1, Fitri Ramadhan1, Kherunnisa1, Kurnia Masni1,
Nurasia Halede1, Tri Setyo Wibowo Putra1, Uswatun Hasanah Makmur1,
Mata Kuliah Aplikasi Mikrobiologi dan Keamanan Pangan, Program Studi Ilmu dan
Teknologi Pangan, Universitas Hasanuddin

ABSTRAK
Food safety is very important to note, one of the threats in food safety is bacteria that
can damage food, for example Bacillus cereus bacteria. Bacillis cereus bacteria can produce
toxins that cause diarrhea, it is necessary to do a food safety test against Bacillus cereus. PCR
or Polymerase Chain Reaction is an in vitro DNA synthesis and amplification technique. This
method includes a method that is quite sensitive to detect infectious diseases, one of which is
food-borne diseases. In the Bacillus cereus PCR test, it was marked by the discovery of specific
DNA sequences from B. cereus. Bacillus cereus biochemical test is a treatment with the aim of
identifying and determining a pure culture of isolated bacteria based on their physiological
properties, for example indole test, mannitol test, catalase test, glucose test, motility test, and
nitrate reduction test. Bacillus cereus is a pathogenic bacterium that can cause diarrhea,
contamination of this bacterium occurs through the food we consume. Therefore, to avoid
contaminants from Bacillus cereus, the prevention is to always apply a sanitation and hygiene
system because in this way B. cereus bacteria are difficult to contaminate food, if it is
contaminated by these bacteria then the food can no longer be consumed.
Keywords: Bacillus Cereus, Rapid Method, Conventional Method, PCR.

I. PENDAHULUAN positif,tumbuh secara aerob-fakultatif, serta

a. Latar Belakang
Keamanan pangan merupakan kondisi dan
upaya yang dibutuhkan untuk mencegah
pangan dari kemungkinan cemaran biologis,
kimia, fisik, serta benda lain yang dapat
mengganggu, membahayakan, serta
merugikan kesehatan manusia. Terjadinya
kontaminasi atau pencemaran biologis pada
makanan dapat diakibatkan oleh bakteri,
salah satunya bakteri Bacillus. Bakteri
Bacillus merupakan salah satu jenis mikroba
patogen yang dapat menyebabkan penyakit
dan intoksikasi (keracunan) pada manusia,
dan kerusakan produk. Bakteri ini terdapat di
segala tempat, terutama air, tanah, dan dapat
mengkontaminasi produk makanan
(Fatmasari, 2015).
Bacillus cereus adalah bakteri berbentuk
batang yang berspora, bersifat gram-
selnya berukuran besar dibandingkan bakteri
batang lainnya. Bakteri ini secara alami
terdapat di tanah dan produk segar. Terdapat
2 tipe toksin yang dihasilkan Bacillus cereus,
yaitu toksin yang menyebabkan diare
(disebabkan oleh protein dengan berat
molekul besar) dan toksin yang
menyebabkan muntah atau emetik
(disebabkan oleh peptide tahan panas dengan
berat molekul rendah) (Purwati, 2008).
Berdasarkan uraian diatas, keamanan
pangan perlu diketahui serta diupayakan agar
tidak terjadi keracunan makanan yang dapat
mengganggu kesehatan manusia. Adapun,
salah satu jenis bakteri yang paling umum
mengkontaminasi makanan adalah Bacillus
cereus. Maka, penelitian ini dilakukan untuk
mencegah terjadinya kontaminasi bakteri
pada bahan pangan agar tercipta kondisi
keamanan pangan.
b. Rumusan Masalah
1. Apa itu Keamanan Pangan?
2. Apa saja tanda-tanda bahan pangan
terkontaminasi bakteri Bacillus cereus?
3. Bagaimana cara menghindari bahan
pangan terkontaminasi bakteri Bacillus
cereus?
c. Tujuan Praktikum
1. Untuk mengetahui Keamanan Pangan.
2. Untuk mengetahui tanda-tanda bahan
pangan terkontaminasi bakteri Bacillus
cereus.
3. Untuk mengetahui cara menghindari
bahan pangan terkontaminasi bakteri
Bacillus cereus.
II. METODOLOGI PENULISAN
Penyusunan narative riview ini
menggunakan metode studi pustaka yaitu
mencari beberapa pustaka yang berkaitan
dengan topik yang akan dibahas. Narative
riview ini mengacu pada beberapa jurnal
yang diperoleh dari hasil pencarian melalui
google scholar dengan total jurnal sebanyak
9 sebagai perbandingan titik focus dengan
menggunakan Metode cepat dan dengan
Metode Konvensional.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri Bacillus cereus
Bacillus cereus merupakan bakteri
patogen, bakteri ini dapat mengkontaminasi
tubuh melalui makanan. Karakteristik dari
Bacillus cereus yaitu bersel tunggal,
berbentuk batang pendek, biasanya dalam
bentuk rantai panjang. Umumnya
mempunyai ukuran lebar 1,0 µm–1,2 µm dan
panjang 3 µm–5 µm, suhu pertumbuhan
maksimum 37-48oC dan minimum 5–20 oC,
suhu pertumbuhan optimum 30 oC dan pH
pertumbuhan 5,5-8,5 (Agustien, 2005).
Bacillus cereus merupakan penyebab paling
umum dua gejala klinis diare dan muntah
pada keracunan makanan berbahan dasar
daging. Bacillus cereus dapat tumbuh pada
makanan siap santap dan membentuk toksin
di dalamnya. Dewanti (2006), menyatakan
sedikitnya ada dua macam toksin B.cereus
yang diketahui dapat menyebabkan
keracunan, yaitu toksin emetik penyebab
muntah selama 2-6 jam setelah konsumsi dan
toksin penyebab diare bereaksi setelah 12-24
jam konsumsi. Bacillus cereus dapat pula
menyebabkan infeksi lain yang lebih
berbahaya seperti infeksi non
gastrointestinal, infeksi saluran pernafasan,
infeksi nosokomial, infeksi sistem saraf
pusat, infeksi saluran kemih, infeksi kulit,
endokarditis, dan osteomielitis (Bottone,
2010).
Pengobatan infeksi akibat Bacillus cereus
didasarkan pada prinsip yang sama seperti
pasien lain tetapi tergantung pada kondisi
klinis, biokimia, dan profil mikrobiologi.
Bacillus cereus sensitif terhadap gentamisin,
teikoplanin, vankomisin, linezoid,
siprofloksasin, dan moksifloksasin. Pada
bayi atau anak-anak, penanganan terbaik
adalah menggunakan vankomisin bersamaan
dengan pengobatan lini pertama atau kedua
yang sesuai sebagai antibiotik lokal.
Alternatif terapeutik lainnya selain
vankomisin meliputi aminoglikosida,
siprofloksasin dan linezolid (Dewanti, 2006).
Metode Identifikasi Cepat
(PCR/Polymerase Chain Reaction)
Metode PCR atau Polymerase Chain
Reaction merupakan suatu teknik sintesis
dan amplifikasi DNA secara in vitro. Metode
ini termasuk metode yang cukup sensitive
untuk mendeteksi penyakit-penyakit
infeksius, salah satunya penyakit akibat
makanan. Pada deteksi kontaminasi bahan
pangan oleh mikroorganisme patogen, PCR
dimanfaatkan untuk dapat menemukan
adanya sekuen DNA spesifik yang dimiliki
oleh kontaminan tersebut. Primer yang
digunakan harus didesain sesuai dengan
sekuen DNA target sehingga produk PCR
yang dihasilkan bisa menunjukkan ada
tidaknya hasil amplifikasi DNA dari
mikroorganisme kontaminan yang menjadi
target deteksi (Nurdyansyah dan Widyastuti,
2017). Komponen-komponen yang
diperlukan untuk berjalannya metode PCR
yaitu sepasang primer (suatu oligonukleotida
pendek yang mempunyai urutan nukleotida
yang komplementer dengan urutan
nukleotida DNA template), buffer PCR,
dNTP (Deoxynucleotide triphosphates) dan
thermal cycler. Adapun tahapan-tahapan dari
proses PCR yaitu (1) pra-denaturasi DNA
template; (2) denaturasi DNA template; (3)
penempelan primer pada template
(annealing); (4) pemanjangan primer
(extension) dan (5) pemantapan
(postextension). Tahap (2) sampai dengan (4)
merupakan tahapan berulang (siklus), di
mana pada setiap siklus terjadi duplikasi
jumlah DNA (Handoyo dan Rudiretna,
2001).
Identifikasi Bacillus cereus pada susu
mentah menggunakan PCR
Dalam penelitian Němečková et.al (2012)
Sebanyak 75 sampel susu mentah dianalisis
dengan metode menggunakan media
dibandingkan. Sampel susu mentah dan
sampel yang sama yang diinaktivasi dengan
pemanasan pada 85°C/10 menit diinokulasi
pada media referensi mannitol- egg yolk-
polymyxine agar (MYPA; Merck,
Darmstadt, Jerman) dan pada media yang
diuji: polimiksin-kuning telur- manitol-
Bacillus agar (PEMBA; Oxoid, Basingstoke,
UK), BrillianceTM Bacillus cereus agar.
Kemudian DNA diisolasi dengan Gen-
EluteTM Bakteri Genomik DNA Kit (Sigma
Aldrich, St. Louis, USA. PCR spesifik
spesies untuk B. cereus dilakukan baik
menurut Manzano et al. (2003) dengan
primer BCFW1 dan BCrevnew, dan dengan
primer yang dirancang BCER-F dan BCER-
R.
Hasilnya Sebanyak 86 galur diisolasi dari
koloni terpilih yang ditumbuhkan dari sampel
yang tidak diaktifkan panas. Kedua media
memberikan hasil yang sama untuk 77%
galur, 14 di antaranya diidentifikasi sebagai
B. cereus sensu lato. PCR dengan B. cereus
menurut Manzano et al. (2003) memberikan
hasil positif untuk masing-masing strain basil
yang diuji (baik galur terisolasi maupun galur
kontrol negatif). Alasannya mungkin karena
Manzano et al. (2003) merancang metode
mereka untuk membedakan spesies dalam
kelompok B. cereus dan tidak fokus pada
kelompok basil lainnya
Dalam penelitian yang dilakukan oleh
Abdos et al (2013), menggunakan metode
PCR dalam mendeteksi Bacillus cereus
dalam makanan bayi. Pada penelitian
tersebut menggunakan 200 sampel makanan
bayi berbahan baku beras dan susu (n=50),
gandum dan susu (n=50), gandum, madu, dan
susu (n=50), serta gandum, pisang dan susu
(n=50) yang dijual di supermarket Isfahan,
Iran. Masing-masing sampel terlebih dahulu
dilakukan uji biokimia berupa uji Gram dan
uji katalase. Kemudian, koloni bakteri yang
memiliki karakteristik dari B.cereus akan
;lanjut ke pengujian metode PCR. Sebelum
masuk ke metode PCR, terlebih dahulu
dilakukan ekstraksi DNA. Strain
ditumbuhkan selama 16 jam pada suhu 37°C.
Lalu, dilakukan penggoresan dari cawan dan
disuspensikan pada 150 𝜇L air steril. Setelah
disuspensikan, dibekukan selama 20 menit
pada suhu -80°C lalu direbus selama 10
menit. Selanjutnya, sel disentrifugasi.
Supernatan yang mengandung DNA genomic
disimpan pada suhu -80°C. Setelah itu,
dilanjutkan dengan pengujian menggunakan
metode PCR. Dari pengujian

Tabel 1. Identifikasi Bacillus cereus menggunakan PCR

Sampel Primer Hasil Sumber

yang
diujikan
Susu Primer BCFW1 dan BCrevnew, Sebanyak 77% positif bakteri Němečk
mentah dan dengan primer yang dirancang Bacillus cereus ová et.al
BCER-F dan BCER-R.' (2012)

Foodstuffs Primer: (5′- Ditemukan 174 isolat yang Amor

in Tunisia GAAAAAGATGAGTAAAAAA positif. Dengan tingkat tertinggi et.al
CAACAA-3′) sebagai primer 67,7% pada produk sereal dan (2018)
degenerasi maju dan (5′- terendah 4,8% pada produk
CATTTGTGCTTTGAATGCTA susu.
G-3′) sebagai primer balik (Sigma
Aldrich).

Food Isolat B. cereus dianalisis Hasil analisis PCR Berthold

product in keberadaan gen toksin emetik menunjukkan bahwa sebagian -Pluta
Poland menggunakan primer primer besar isolat B. cereus dari susu et.al
CesF1 dan CesR2 formula bubuk dan produk susu (2019)
lainnya berpotensi sebagai
penghasil toksin

Makanan Primer yang digunakan bceT, Dari pengujian tersebut, 84 Abdos et

Bayi entFM, hblC. (42%) dari 200 sampel al (2013)
terdeteksi terdapat bakteri
Bacillus cereus.
Cooked Untuk mendeteksi B. cereus dan B. Hasil yang diperoleh dari Sandra
rice thuringiensis pasangan primer penelitian ini adalah level et al
berikut digunakan. BCJH-F kontaminasi B. cereus tertinggi (2012)
(5'TCATGAAGAGCCTGTGTA adalah sampel nasi ayam
CG 3’) dan BCJH-1R (5' (100%), diikuti dengan nasi
CGACGTGTCAATTCACGCGC putih (76,2%), nasi lemak
3') adalah digunakan untuk (70,4%), dan nasi biryani
mengamplifikasi fragmen 475 bp (50%).
dari girase B (gyrB) gen untuk
mendeteksi B. cereus.
 Makanan Pasangan primer BalF/BalR17 Hasil yang diperoleh dari 68 Das et al
tropis khusus untuk kelompok B. cereus. sampel, 25 (36,7% ) sampel (2009)
tersebut, 84 (42%) dari 200 sampel
terdeteksi terdapat bakteri Bacillus cereus.
Pada sampel makanan bayi dengan bahan
baku beras dan susu, jumlah sampel yang
terdeteksi B.cereus sebanyak 31 sampel,
makanan bayi dengan bahan baku gandum
dan susu terdeteksi B.cereus sebanyak 25
sampel, makanan bayi dengan bahan baku
gandum, madu, dan susu terdeteksi
B.cereus sebanyak 18 sampel dan makanan
bayi berbahan baku gandum, pisang dan
susu terdeteksi B.cereus sebanyak 10
sampel.
Penelitian lain yang dilakukan oleh
Sandra et al (2012) juga menggunakan
metode PCR dalam mendeteksi bakteri
Bacillus cereus. Pada penelitian ini,
menggunakan 115 sampel nasi dari
beberapa restoran di Selangor, Malaysia.
Adapun jenis-jenis sampelnya yaitu nasi
lemak, nasi biryani, nasi ayam, dan nasi
putih. 25 jenis beras diambil dari 5 varietas
local di Sarawak, Malaysia, yaitu Keladi
Halus Wangi, Keladi Wangi, Kanowit
Halus Wangi, Lansam Halus Wangi, dan
Bario. Pengujian diawali dengan preparasi,
di mana sampel diinkubasi ada suhu 37°C
selama 12 jam. Sebelum mengekstraksi
DNA, dilakukan metode MPN (Most
Probable Number) terlebih dahulu. Metode
MPN merupakan metode perhitungan sel
berdasarkan jumlah perkiraan. Dalam
penelitian ini, metode tersebut dilakukan
menggunakan spesifik untuk mengisolasi
dan mengidentifikasi bakteri kelompok
Bacillus. Kemudian, dilakukan ekstraksi
DNA dengan cara broth MPN sebelumnya
disentrifugasi dan disuspensi kembali
menggunakan air steril. Kemudian, direbus
positif B. cereus non
enterotoxigenik
selama 20 menit dan secepatnya
didinginkan pada suhu -20 C selama 10
menit. Lalu, disentrifugasi lagi selama 5
menit. Supernatan yang dihasilkan pun
dilanjutkan menggunakan metode PCR
jenis multiplex PCR. Hasil yang diperoleh
dari penelitian ini adalah level kontaminasi
B. cereus tertinggi adalah sampel nasi ayam
(100%), diikuti dengan nasi putih (76,2%),
nasi lemak (70,4%), dan nasi biryani (50%).
Nasi ayam dapat mengontaminasi hingga
100% dikarenakan, nasi ayam meupakan
nasi yang dikukus dan diberi sup ayam serta
ditambah rempah-rempah. Tambahan-
tambahan tersebut yang memberikan
kontribusi terhadap terkontaminasinya nasi
ayam pada B.cereus. Nasi putih juga
termasuk tinggi kontaminasinya,
kemungkinan disebabkan oleh tidak
dicucinya beras dengan baik sebelum
pemasakan. Pada sampel beras, semua
terdeteksi mengandung bakteri B.cereus.
Metode PCR juga dipilih oleh Das et al
(2009) dalam melakukan penelitian
mengenai deteksi bakteri Bacillus cereus
dalam makanan laut tropis. Sebanyak 68
sampel makanan laut diperoleh dari pasar
lokal di Cochin, India. Sampel tersebut di
uji selama 13 bulan muali dari Januari 2004
hingga Februari 2005. 68 sampel tersebut
adalah 50 ikan, 10 udang, dan 8 remis
(clams). Sampel diisolasi menggunakan
media PEMPA (pyruvate-egg yolk-
mannilol-bromocresol purple agar) dan
diikubasi pada suhu 37°C selama 24 jam.
Koloni B. cereus yang dicurigai
menunjukkan reaksi lesitinase diambil,
dimurnikan dan disimpan pada nutrient agar
miring untuk konfirmasi lebih lanjut, yang
dilakukan dengan pewarnaan Gram dan
reaksi biokimia standar. Kemampuan
menghidrolisis pati diuji dengan inokulasi
pada pati agar. Setelah pertumbuhan,
lempeng-lempeng tersebut dipaparkan
dengan uap yodium untuk menemukan zona
bening di sekitar koloni jika terjadi reaksi
positif.
Uji selanjutnya yang dilakukan adalah
enterotoksin diare dan aktivitas hemolitik.
kemampuan produksi enterotoksin diuji
dengan uji reverse passive latex
agglutination (RPLA). Brain Heart Infusion
(BHI) diinokulasi dengan satu loop penuh
kultur dan diinkubasi semalaman pada 37°C
dengan pengocokan konstan pada 150 rpm.
Kultur disentrifugasi pada 4000 X g pada
suhu 4°C. Supernatan bebas sel menjadi
sasaran deteksi enterotoksin dengan uji
RPLA menggunakan kit BCET-RPLA
(Oxoid, Inggris) sesuai instruksi pabrik. Uji
produksi hemolisis dilakukan pada 5 persen
agar darah domba, baik dengan inokulasi
tusuk maupun inokulasi permukaan. Uji
terakhir yaitu metode PCR untuk
mengetahui keberadaan enterotoksin pada
sampel. Hasil yang diperoleh dari 68
sampel, 25 (36,7% ) sampel positif B.
cereus non enterotoxigenik. Pada uji
enterotoksin diare dan aktivitas hemolitik,
20 sampel (29,41%) enterotoxigenik. Pada
uji PCR, PCR spesifik gen hbla
menggunakan pasangan primer HblA1 /
HblA2, menghasilkan produk amplifikasi
sebesar 834 bp hanya pada 30 isolat
enterotoksigenik. Tak satu pun dari isolat
non-enterotoksigenik menghasilkan produk
yang diperkuat dalam PCR ini.
Metode Identifikasi Konvensional (Uji
Biokimia dan Agar Selektif)
Uji Biokimia
Uji biokimia bakteri adalah suatu
perlakuan dengan tujuan untuk
mengidentifikasi dan mendeterminasi suatu
biakan murni bakteri hasil isolasi
berdasarkan sifat fisiologisnya (Rahayu dan
Gumilar, 2017). Tujuan dari uji biokimia ini
yaitu untuk mengetahui sifat-sifat fisiologis
dari koloni bakteri hasil isolasi yang
berdasarkan proses metabolisme dari sel
bakteri. Contoh uji biokimia bakteri yaitu
uji indol, urease, Voges Proskauer (VP),
Metil Red (MR), sitrat, motilitas dan lain-
lain.

Tabel 2. Hasil Uji Biokimia Terhadap Bakteri Bacillus cereus.

Jenis Pengujian Sampel Hasil Sumber

Glukosa Tahu Positif (Yudhistira dkk, 2017)
Manitol Tahu Negatif (Yudhistira dkk, 2017)
Indol Tahu Positif (Yudhistira dkk, 2017)
Motilitas Tahu Negatif (Yudhistira dkk, 2017)
VP Tahu Positif (Yudhistira dkk, 2017)
Kotoran manusia, daging (Tewari dan Singh,
Glukosa Positif 2015)
dan produk daging
Saluran pencernaan ikan (Kurniasih, 2013)
Glukosa Positif
lele
Kotoran manusia, daging (Tewari dan Singh,
Manitol Negatif 2015)
dan produk daging
 Manitol Daging ayam Negatif (Solanki, 2019)
Kepiting bakau, ikan (Moritania dkk, 2019)
Indol Negatif
tembakul dan siput bakau
Indol Daging kari siap santap Negatif (Ali dkk, 2017)
Saluran pencernaan ikan (Kurniasih, 2013)
Motilitas Positif
lele
Motilitas Daging ayam Positif (Tahmasebi dkk, 2014)
VP Daging ayam Positif (Solanki, 2019)
Kotoran manusia, daging (Tewari dan Singh,
VP Positif 2015)
dan produk daging
Katalase Daging ayam Positif (Solanki, 2019)
VP Daging ayam Positif (Solanki, 2019)
Nitrat reduction Daging ayam Positif (Solanki, 2019)
Motilitas Daging ayam Positif (Solanki, 2019)
Manitol Daging ayam Negatif (Solanki, 2019)
Katalase Daging kari siap santap Positif (Ali dkk, 2017)
Saluran pencernaan ikan (Kurniasih, 2013)
Katalase Positif
lele
Nitrat reduction Daging kari siap santap Positif (Ali dkk, 2017)
Kotoran manusia, daging (Tewari dan Singh,
Nitrat reduction Positif 2015)
dan produk daging

Berdasarkan hasil penelitian uji kovaks seperti Ehrlich yang mengandung

biokimia Bacillus cereus didapatkan
perbedaan hasil uji indol dan motilitas pada
sampel tahu yang dilakukan oleh Yudhistira
dkk (2017). Yudhistira dkk (2017)
mendapatkan hasil uji indol Bacillus cereus
positif sedangkan Moritania dkk (2019) dan
Ali dkk (2017) mendapatkan hasil negatif.
Hasil uji motilitas, Yudhistira dkk (2017)
mendapatkan hasil negatif sedangkan
Kurniasih (2013) dan Tahmasebi dkk
(2014) mendapatkan hasil positif. Hal ini
diduga terjadi akibat adanya kesalahan pada
penelitian yang dilakukan oleh Yudhistira
dkk (2017). Hasil negatif pada uji indol
yang ditandai dengan tidak terbentuk
lapisan (cincin) berwarna merah muda pada
permukaan biakan, artinya bakteri Bacillus
cereus tidak dapat membentuk indol dari
triptophan sebagai sumber karbon dan dapat
diketahui dengan menambahkan larutan
para-dimetil-aminobenzaldehida. Dan juga
pada hasil uji motilitas Bacillus cereus,
Yudhistira dkk (2017) mendapatkan hasil
negatif sedangkan Kurniasih dkk (2013)
dan Tahmasebi dkk (2014) mendapatkan
hasil positif. Hal ini diduga terjadi akibat
adanya kesalahan pada penelitian yang
dilakukan oleh Yudhistira dkk (2017). Hasil
positif pada uji motilitas yang ditandai
dengan pertumbuhan koloni menyebar dan
timbul kekeruhan seperti kabut yang berarti
bakteri bergerak.
Selective Agar
Media selektif merupakan media padat
yang mengandung cairan empedu (bile
salts), senyawa kimia tertentu, antibiotik,
dan pewarna yang dapat menghambat
pertumbuhan mikroba lain dan membantu
pertumbuhan mikroba tertentu yang
diinginkan. Media selektif digunakan untuk koloni eosin merah muda. Hal ini sesuai
menumbuhkan mikroba yang diperoleh dari dengan pernyataan (Mossel et al, 1967)
spesimen yang diperoleh dari tempat yang bahwa MYP Agar untuk isolasi Bacillus
memungkinkan tumbuhnya berbagai jenis cereus dalam makanan dan bahan makanan.
mikroba . Contoh medium jenis ini adalah Media ini membedakan Bacillus cereus dari
Medium Lowenstein - Jenson. Pada jurnal bakteri lainnya berdasarkan resitensinya
penelitian sanjoy et all 2009 terhadap Polymyxin B, kurangnya
Tabel 3. Identifikasi Bacillus cereus fermentasi Mannitol, dan terbentuknya
menggunakan media selektif Lecithinase. Nitrogen, vitamin, dan sumber
karbon berasal dari daging sapi ekstrak
Sampel Metode Hasil Sumber
(beef extract) dan Peptone dalam MYP
Finfish, Isolasi : Positif (Das et Agar. D-Mannitol adalah sumber
Udang Media untuk al., karbohidrat, dan fermentasi terdeteksi oleh
Dan Selektif ikan 2009)
Kerang PEMPA sebanya pH indikator phenol red. Bakteri yang
k 36,7 memfermentasi Mannitol mengakibatkan
dan produksi asam dan menghasilkan koloni
29,41 berwarna kuning, Bacillus cereus tidak
% memfermentasi mannitol/ Mannitol negatif
Nasi Isolasi : Positif Ruriani dan menghasilkan koloni berwarna merah
Goreng Media untuk 7 dan muda (pink).
Selektif dari 15 Nurhayat
MYP sampel i (2010) Hasil yang diperoleh B. Cereus dan
Nasi enterotoksigenik B. Cereus ditemukan di
goreng 36,7 dan 29,41 persen sampel ikan, masing-
masing. Semua isolat penghasil
Metode yang digunakan pada penelitian
enterotoksin diare menunjukkan adanya
ini adalah Pelapisan selektif pada agar
hbla gen tidak ada dalam isolat non-
polimiksin-piruvat-kuning telur-manitol-
enterotoksigenik yang diuji dalam
bromocresol ungu (PEMPA) digunakan
penelitian ini.
untuk isolasi B. cereus dari finfish, udang
Pada kedua jurnal tersebut dilakukan
dan kerang. Kemampuan memproduksi
Identifikasi berdasarkan media selektif
enterotoksin dari semua 42 isolat yang
yaitu PEMPA dan MYP. Sampai saat ini,
diperoleh dari sampel dinilai dengan uji
tiga gen berbeda yaitu hbla, bceT dan
reverse passive latex aglutination (RPLA)
entFM bertanggung jawab untuk produksi
dan adanya gen virulen yang berbeda. yaitu
enterotoksin diare di B. Cereus telah
hbla, bceT dan entFM disaring oleh PCR.
dikarakterisasi. Uji aglutinasi lateks pasif
Namun ada beberapa medium atau
terbalik (RPLA) adalah uji yang andal
media selektif seperti MYP, LB, SSA,
untuk mendeteksi B. cereus enterotoksin
BSA, SCB, TSIA, PEMPA dan LIA. Pada
diare (Granum PE , dkk 1993).
jurnal Ruriani dan Nurhayati (2010)
B. Cereus NCIM 2106 digunakan
menyatakan bahwa dari 15 sampel nasi
sebagai strain standar. Strain standar bakteri
goreng yang diuji ada 7 sampel yang
lain sepertiB. Subtilis NCIM 2545,
menunjukan adanya pertumbuhan bakteri
Salmonella dublin ATCC 15480,
Bacillus cereus pada media agar Mannitol
Escherichia coli NCIM 2068 dan
egg yolk polymyixin (MYP) yang ditandai
stafilokokus aureus NCIM 2079 juga
digunakan untuk PCR. B. cereus
NCIM2106, Bacillus subtilisNCIM2545
dan E. Coli NCIM 2068 diperoleh dari
Koleksi Nasional Mikroorganisme Industri,
Laboratorium Kimia Nasional, Pune, India.
Salmonella Dublin ATCC 15480 iperoleh
dari American Type Culture Collection dan
dipelihara di laboratorium. Isolasi dari B.
cereus dilakukan dengan pelapisan selektif
pada polimiksinpiruvat-kuning telur-
manitol-bromocresol ungu agar-agar
(PEMPA) (Szabo RA, dkk 1984). Sampel
ikan (25 gr) dimaserasi dalam 225 ml
normal saline dalam perut blender (Seward
Ltd, UK) dan serial pengenceran 10 kali
lipat dibuat pada normal saline. 0,5 ml dari
setiap pengenceran dilapisi permukaan
pada media PEMPA yang telah dikeringkan
sebelumnya. Plate diinkubasi pada suhu
37°C selama 24 jam. Diduga tipikal B.
cereus Koloni yang menunjukkan reaksi
lesitinase diambil, dimurnikan dan
disimpan pada nutrien agar miring untuk
konfirmasi lebih lanjut, yang dilakukan
dengan pewarnaan Gram dan reaksi
biokimia standar.
Kemampuan menghidrolisis pati diuji
dengan menginokulasikan pada agar pati
(Collins Arnold 2001). Setelah
pertumbuhan, pelat terkena uap yodium
untuk menemukan zona bening di sekitar
koloni dalam kasus reaksi positif.
Selanjutnya pada jurnal Ruriani dan
Nurhayati (2010), umumnya metode yang
digunakan sudah secara umum, dimana
diharapkan pada investigasi kali ini yaitu
Bacillus cereus dan Salmonella pada nasi
goreng ini diharapkan dapat
mengidentifikasi keberadaan kedua
mikroorganisme patogen tersebut dalam
setiap porsi penyajian. Dimana pada
penentuan morfologi bakteri dengan
berdasarkan pewarnaan gram (Pelczar dan
Chan, 1986; Fardiaz, 1989).
Tahapan penelitian yang dilakukan
meliputi: Pengambilan sampel, Isolasi
Bacillus cereus dan Salmonella, Seleksi
pada media selektif (pemupukan dan
pengayaan), dan Analisis mikrobiologis
(morfologi dan identifikasi)Sampel yang
digunakan pada penelitian/jurnal tersebut
ialah nasi goreng dari pedagang kaki lima.
Tahap isolasi bakteri merupakan salah satu
cara untuk mendapatkan jenis bakteri yang
diinginkan. Isolasi merupakan kegiatan
pemisahan mikroorganisme yang akan diuji
dari mikroorganisme lain dengan
menggunakan media selektif, sehingga
diharapkan akan diperoleh biakan atau
kultur murni (Benson, 1998).
Satu mata ose koloni Bacillus cereus dan
Salmonella ditempatkan pada gelas objek,
kemudian ditetesi dengan larutan fisiologis
/ aquades 2-3 tetes dan dilakukan fiksasi di
atas api. Setelah itu ditetesi dengan pewarna
pertama (kristal violet yodium), dibiarkan
sampai kering (1-2 menit), dicuci dengan
alkohol, kemudian ditetesi dengan pewarna
kedua (safranin), dibiarkan beberapa saat
(10 - 20 detik) dan dicuci dengan air
mengalir. Pengamatan di bawah mikroskop
menggunakan lensa obyektif minyak imersi
dengan perbesaran kecil ke besar. Uji
positif umumnya metode yang digunakan
pada jurnal tersebut sudah secara umum,
jika tetap berwarna ungu berbentuk
basil/batang.
Tahap identifikasi didahului dengan
pelarutan sampel dalam larutan fisiologis
dengan perbandingan 10 gr dalam 100 ml
larutan fisiologis. Kemudian dilakukan
pemupukan langsung pada MYP dan
diinkubasi pada suhu 37℃ selama 24 – 48
jam. Keberadaan Bacillus cereus ini dapat
diketahui dari pengamatan koloni pada
media MYP dengan tanda-tanda yaitu
adanya pertumbuhan koloni berbentuk opak
melebar dengan permukaan cembung,
warna merah muda. Hasil pewarnaan gram
untuk menguji kebenaran dugaan terhadap
Bacillus cereus berdasarkan bentuk
mikroskopis menunjukkan bakteri yang
diduga adalah gram positif dengan bentuk
bulat lonjong (basil).
Nasi goreng diduga mengandung /
terserang Bacillus cereus pada lingkungan
misalnya tempat penyimpanan atau
wadahnya, debu dan polusi, berada pada
suhu kamar, serta dari pekerjanya sendiri
bisa menimbulkan bakteri pathogen
tersebut. Hal lain seperti ketidak higienisan
bahan baku pada nasi, sanitasi alat, dll. Hal
ini sesuai dengan pernyataan (Fardiaz,
1997) yang menyatakan bahwa hal ini
sangat rentan untuk terjadinya kontaminasi,
karena penyimpanan makanan selama 6-12
jam atau lebih tanpa lemari pendingin bisa
menyebabkan kontaminasi oleh bakteri
pembentuk spora yang relatif tahan panas
seperti Clostridium perfringens dan
Bacillus cereus.
IV. KESIMPULAN DAN SARAN
a. Kesimpulan
Beberapa kesimpulan yang bisa diambil
dari praktikum ini :
1. Keamanan pangan sangat penting untuk
diperhatikan, salah satu ancaman dalam
keamanan pangan adalah bakteri yang
dapat merusak pangan, contohnya
bakteri Bacillus cereus. Bakteri Bacillis
cereus dapat menghasilkan toksin yg
menyebabkan diare, maka perlu
dilakukan uji keamanan pangan terhadap
Bacillus cereus.
2. PCR atau Polymerase Chain Reaction
merupakan suatu teknik sintesis dan
amplifikasi DNA secara in vitro. Metode
ini termasuk metode yang cukup
sensitive untuk mendeteksi penyakit-
penyakit infeksius, salah satunya
penyakit akibat makanan. Pada uji PCR
Bacillus cereus, ditandai dengan
ditemukannya sekuen DNA spesifik dari
B.cereus.
Uji biokimia Bacillus cereus adalah
suatu perlakuan dengan tujuan untuk
mengidentifikasi dan mendeterminasi
suatu biakan murni bakteri hasil isolasi
berdasarkan sifat fisiologisnya,
contohnya uji indol, uji manitol, uji
katalase, uji glukosa, uji motilitas, dan
uji Nitrat reduction.
Selective agar adalah pengujian
Bacillus cereus dengan mengisolasinya
pada media agar, salah satu contoh
metodenya adalah Pelapisan selektif
pada agar polimiksin-piruvat-kuning
telur-manitol-bromocresol ungu
(PEMPA) dan pada media agar Mannitol
egg yolk polymyixin (MYP) yang
ditandai koloni eosin merah muda.
Diduga tipikal B. Cereus Koloni yang
menunjukkan reaksi lesitinase diambil,
dimurnikan dan disimpan pada nutrien
agar miring untuk konfirmasi lebih
lanjut, yang dilakukan dengan
pewarnaan Gram dan reaksi biokimia
standar.
3. Bacillus cereus merupakan bakteri
patogen yang dapat menyebabkan diare,
kontaminasi dari bakteri ini terjadi
melalui makanan yang kita konsumsi.
Oleh karena itu untuk menghindari
kontaminan dari Bacillus cereus, maka
pencegahannya yaitu selalu menerapkan
system sanitasi dan hygiene karena
dengan cara tersebut bakteri B.cereus
sulit mengkontaminasi makanan, apabila
sudah terkontaminasi oleh bakteri
tersebut maka makanan tersebut tidak
bisa lagi untuk dikonsumsi.
b. Saran
 Adapun saran dari praktikum ini adalah
sebaiknya dilakukan perhitungan yang
lebih detail dalam membuat larutan
penyangga agar hasilnya lebih akurat.
V. DAFTAR PUSTAKA
Agata N, Ohta M, Arakawa Y, Mori M. The
bceT gen dari Bacillus cereus
mengkode protein enterotoksik.
Mikrobiologi 1995; 141 : 983-8.
Asano SI, Nukumizu Y, Bando H, Iizuka T,
Yamamoto T. Kloning gen
enterotoksin baru dari Bacillus
cereus dan Bacillus thuringiensis.
Lingkungan ApplMikrobiolbi1997;
63 : 1054-7.
Benson, H.J. (1998), Microbial
Application, Seventh edition, Mc
Graw-Hill Companies Inc., Boston.
Berthold-Pluta, A., Pluta, A., Garbowska,
M., & Stefańska, I. (2019).
Prevalence and toxicity
characterization of Bacillus cereus
in food products from Poland.
Foods, 8(7), 269.
Collins, CH, Lyne, PM, Grange JM.
Metode mikrobiologi collins dan
Lyne. 7ini ed. London: Arnold;
2001.
Fardiaz, D. 1997. “Praktek Pengolahan
Pangan yang Baik”. Pelatihan
Pengendalian Mutu dan Keamanan
Pangan Bagi Staf Pengajar.
Kerjasama Pusat Studi Pangan dan
Gizi (CFNS)-IPB dengan Dirjen
Dikti. Bogor, 21 Juli – 2 Agustus
1997.
Fatmasari, 2015, Uji Sensitivitas Antibiotik
Kloramfenikol, Siprofloksasin,
Eritromisin dan Klindamisin
Terhadap Bacillus cereus Yang
Diisolasi Dari Daging Sapi di Pasar
Tradisional dan Pasar Modern Kota
Makassar, Skripsi, Fakultas
Kedokteran, Universitas Hasanudin,
Makassar.
Gdoura-Ben Amor, M., Siala, M., Zayani,
M., Grosset, N., Smaoui, S.,
Messadi-Akrout, F., ... & Gdoura, R.
(2018). Isolation, identification,
prevalence, and genetic diversity of
Bacillus cereus group bacteria from
different foodstuffs in Tunisia.
Frontiers in microbiology, 9, 447.
Granum PE, Brynestad S, Kramer JM.
Analisis produksi enterotoksin
denganBacillus cereus dari produk
susu, insiden keracunan makanan
dan infeksi non-gastrointestinal.
Mikrobiol Makanan Int J 1993; 17 :
269-79.
Heinrichs JH, Beecher DJ, Macmillan JD,
Zilinskas BA. Kloning molekuler
dan karakterisasihbla gen yang
mengkode komponen B dari
hemolisin BL dari Bacillus cereus. J
Bakteri1993; 175 : 6760-6
John, T. Y. H. (2012). Bacillus cereus and
Bacillus thuringiensis in ready-to-
eat cooked rice in Malaysia.
International food research journal,
829-836.
Mäntynen V, Lindstrom K. Tes DNA cepat
berbasis PCR untuk enterotoksik
Bacillus cereus. Mikrobiol
Lingkungan Appl1998; 64 :1634-9.
Němečková, I., Solichová, K., Roubal, P.,
Uhrova, B., & Šviráková, E. (2012).
Methods for detection of Bacillus
 sp., B. cereus, and B. licheniformis Szabo RA, Todd ECD, Rayman M. Dua
in raw milk. Czech Journal of Food puluh empat jam isolasi dan
Sciences, 29(Special Issue), S55- konfirmasi Bacillus cereus dalam
S60. makanan. J Makanan Prot 1984; 47
: 856-60.
Nurdyansyah, F. Widyastuti, D.A. (2017).
Deteksi Molekuler Mikroorganisme
Patogen Pada Bahan Pangan dengan
Metode RT-PCR. Jurnal Ilmu
Pangan dan Hasil Pertanian. 1(1).
80-89.

Purwati, (2008), Pertumbuhan Bacillus

cereusdan Clostridium perfringens
pada Makanan Tambahan
Pemulihan yang Dikonsumsi Balita
Penderita Gizi Buruk. Jurnal
Penelitian Sains, 31:4.

Relman DA, Persing DH. Metode genotip

untuk identifikasi mikroba. Dalam:
Persing DH, editor.Protokol PCR
untuk penyakit menular yang
muncul. Washington DC: American
society for Microbiology, ASM
Press; 1996. Hal. 3-31.

Rhodehamel EJ, Harmon SM. Bacillus

cereus. Manual Analisis
Bakteriologis online 8ini ed. Revisi
1998. Bab 14 [monografi di
Internet]. Administrasi Makanan
dan Obat-obatan AS;2001.

Rudiretna, A. Handoyo, D. (2001). Prinsip

Umum dan Pelaksanaan Polymerase
Chain Reaction (PCR). Unitas. 9(1).
17-29.

Ruriani., E. &, & Nurhayati, . (2010).

Investigasi of bacillus cereus dan
salmonella pada nasi goreng
pedagang kaki lima di sekitar
kampus universitas jember. Jurnal
Agroteknologi, 4(1), 68–75.