< 흡수분광법과 BEER의 법칙 >

1. 학과, 학번, 이름

2. 실험 제목 및 목적

흡수분광법과 BEER의 법칙 | 빛의 투과성, 흡수성, 산란성 등을 이용하여 육안으로

관측할 수 없는 여러 가지 물질에 대한 정보를 얻을 수 있다. 염화코발트가 흡수하는

빛의 영역을 확인한 후, 용액의 농도와 흡광도 간의 상관관계를 결정한다.

3. 이론

1) 정량분석과 정성분석

화학분석에는 정성분석과 정량분석이 존재한다. 분석화학은 분석하고자 하는 시료에

존재하는 성분들을 분리하고, 무엇인지를 확인하고, 그 상대적인 양을 측정하는 방법

을 다루는 학문이다. 정성분석(qualitative analysis)은 시료에 들어있는 화학종, 즉

분석물(analyze)이 무엇인지를 결정하는 것으로 분석물의 농도 혹은 양을 결정하는

것은 아니다. 시료에 존재하는 화학종의 양을 결정하는 것은 정량분석(quantitative

analysis)이라 한다. 즉, 정성분석은 화합물이나 원소의 혼합물에 대한 각 성분의 구

성을 알아내는 것이고, 정량분석은 시료의 절대적인 양 혹은 상대적인 양을 결정하는

것이다. 화합물이나 원소의 혼합물에 대한 각 성분의 구성을 알아내 시료의 구성성분

비를 결정하거나 화합물의 원자 조성과 구조를 밝히는 것이다. 정량분석을 위한 고전

적인 방법으로는 중량분석(무게 분석), 용량분석(부피 분석), 비색분석(광학적 기기 분

석)이 있다. 중량분석은 무게 분석이라고도 하며, 시료에 적당한 침전제를 가하여 정

량하고자 하는 성분을 침전시켜 침전을 걸러서 씻고, 말리거나 가열하여 일정한 화학

적 조성을 갖는 화합물로 만들어 그 중량을 달아 얻은 물질의 화학식과 그 무게를 이

용해 분석 성분의 양을 계산하는 계산 방법이다. 무게 분석법은 부피 분석법보다 시

료의 조성에 대해 정확한 결과를 제공하지만, 실험실에서 분석하는 시간이 많이 소요

된다. 분석 방법의 예시로는 무기 침전제법, 유기 침전제법, 전기 무게 분석법이 있

다. 용량분석은 부피 분석이라고 도하며, 기체 또는 용액의 부피를 측정하여 분석하는

방법이다. 대표적으로 적정법을 사용하여 측정한다. 비색분석은 광학적 기기분석이라

고도 불리며, 물질과 전자기복사 상호작용을 이용한다. 다양한 파장의 빛을 활용하여

물질의 화합분자구조를 알아내는데 적외선, 가시광 선, 자외선, X선 모두 사용된다.

예시로는 분광광도법, 공명 분광법 등이 있다. 최근 들어서 분석화학에서 정량분석은

복잡하고 정교한 분석기기를 활용하여 이루어지고 있다. 전기분석법, 분리분석법 등이

이에 해당하기도 한다.

정성분석은 화학분석법 중에서 시료가 어떤 성분으로 구성되어 있는지 알아내기 위한

분석법의 총칭이다. 물질을 구성하고 있는 화학종이 가지는 특유한 반응 및 물리적

성질을 이용해서 검출 및 확인한다. 정량분석에서와같이 건식분석법과 습식분석법으

로 크게 나눌 수 있다.

건식분석법은 용액을 사용하지 않고 오로지 고체 시약만을 사용하는 분석 방법이다.

이와 반대로, 습식분석법은 시료 및 시약을 수용액으로 만들어 분석하는 방법이다. 무

기물질 중에 함유되어 있는 양이온의 검출에는 매우 조직적인 분석법이 수용되고 있

다.

2) 빛의 성질 (투과성, 흡수성, 산란성)

투과는 빛이나 파동이 어떤 물질에 입사할 때, 그 빛이나 파동이 물질을 통과하여 나

오는 현상이다. 빛이 어떠한 매체를 지날 때, 다른 굴절률을 가지는 물질들이 연속적

으로 놓여있으면, 파동에 변화가 생길 수 있다. 성질이 다른 매질을 지날 때, 매질의

경계면에서 반사와 투과가 동시에 발생한다. 이때, 파동의 위상, 진폭 등의 성질이 바

뀌게 된다. 빛이 투과되는 정도는 물질에 따라 다르게 나타난다.

흡수는 물질이 전자기파를 흡수하는 것을 의미한다. 즉, 입자의 에너지가 매질에 의해

흡수되는 것이다. 매질 내로 흡수된 전자기파의 에너지는 내부 에너지로 변환된다. 전

자기파의 강도가 매질에서의 에너지 흡수로 인해 감소하게 되는 것을 감쇠라고 한다.

서로 다른 원자와 분자는 각각 다른 고유 진동수가 있다. 따라서, 서로 다른 주파수

의 빛을 선택적으로 흡수하며, 같은 물질 내에서 파장에 따라 흡수율이 다르고, 물질

이 다르면 서로 다른 흡수율을 갖는다. 흡수는 물체의 전자 에너지 준위의 위치에 따

라 달라진다. 빛의 에너지와 동일한 진동수로 원자 내 전자와 상호작용하면 원자 내

부의 전자가 진동하기 시작한다. 원자 내 전자는 인접한 원자와 상호작용하고, 진동

에너지를 열에너지로 변환한다. 이러한 이유로 빛 에너지는 다시 볼 수 없게 된다.

산란은 직진하고 있는 입자나 파동이 다른 입자와의 상호작용으로 인해 그 경로가 바

뀌는 것을 의미한다. 산란 전후의 전자기파의 에너지가 변하지 않으면 탄성 산란, 증

가하거나 감소하면 비탄성 산란이라고 한다.

3) 분광법 (spectroscopy)

분자의 구조와 성질을 규명하기 위해 분자 내의 에너지와 빛 에너지 사이의 상호작용

을 이용하는 방법이다. 빛의 흡수, 발광 등의 세기를 빛의 에너지의 함수로 측정한다.

분석 대상의 물리적이고 화학적인 정보를 실험적으로 얻을 수 있도록 한다. 단일 원

자나 분자, 물질 내의 성분들은 각각 빛을 흡수하기도 하며, 특정 파장의 빛을 산란

하기도 하고, 또는 빛을 방출하는 등의 상호작용을 한다. 이러한 빛의 성질로 인해

상호작용하는 현상을 관찰하여, 원자나 분자 또는 다양한 성질을 알 수 있다. 분광법

의 시작은 1800년도 초기이다. 독일의 과학자 프라운호퍼는 분산 분광계를 개발하여

태양의 빛에서 600개가 넘는 선들을 관측하였다. 이를 통해 정밀하게 빛을 측정하는

분광법 연구의 계기를 마련하였다고 볼 수 있다.

원자 분광법은 원자가 빛을 흡수하거나 방출하는 것을 이용한 분광법으로, 원자의 흡

수 파장을 보여주는 분광법을 원자 흡수 분광법, 방출 파장을 보여주는 분광법을 원

자 방출 분광법이라고 부른다. 주로 원자가 흡수하거나 방출하는 전자기파는 가시광

선, 자외선 영역에 해당한다.

분자의 경우 각 분자마다 특유의 분자 분광스펙트럼을 보여준다. 분자의 회전, 진동,

전자 상태 등에 따른 고유의 특성을 갖는 분자 스펙트럼을 알 수 있다. 분자 회전의

경우, 각 회전 에너지 상태 간의 전이에 따라 마이크로파, 밀리미터파 영역의 스펙트

럼을 얻을 수 있다. 분자 진동의 경우 적외선 분광법과 라만 분광법 등을 통해 스펙

트럼을 얻을 수 있다. 들뜬 전자 상태 연구를 위해서는 자외선 분광법이 주로 쓰인

다.

나노입자의 분석에는 주로 자외선-가시광선 분광법이 많이 쓰이고 있다. 나노입자의

특성은 나노입자의 크기와 모양, 농도, 표면의 굴절률 등에 따라 다양하게 나타날 수

있다.

4) 분광법의 기본 원리

분광법의 기본적인 원리는 외부로부터 분자에 빛 에너지를 쪼이면 각 분자마다 갖는

이동, 회전, 진동 에너지 영역의 고유 파장만을 흡수하게 된다는 것이다. 원자, 분자,

물질의 두 에너지 상태 사이의 에너지 차이에 해당하는 에너지를 가진 전자기파를 흡

수하거나 방출하면서 두 에너지 상태가 연결된다는 의미이다. 분자의 화학결합 상태

나 구조적인 특성에 따라 흡수되는 정도가 분자마다 다르므로 분자 간 서로 다른 흡

수스펙트럼이 얻어진다. 가장 간단한 분광법인 흡수 분광법에서는 이러한 원리에 따

라 다양한 흡수스펙트럼을 얻을 수 있다. 물질이 흡수하는 복사선의 세기는 흡광도로

나타낸다. 이때, 흡광도는 복사선의 파장(진동수)에 따라 달라진다. 흡광도와 농도 사

이의 관계를 나타내는 베어-람베르트 법칙(Beer-lambert)은 흡수 분광법의 정량적인

기초가 된다. 방출 분광법은 주로 자외선이나 가시광선 영역에서 활용된다. 그에 비교

해 흡수 분광법은 자외선과 가시광선 영역을 포함한 다른 스펙트럼 영역에서도 활용

된다. 이로부터 원자들의 경우에는 원자의 에너지 준위를 알아볼 수 있다. 분자들의

경우에는 분자의 들뜬 상태의 퍼텐셜 에너지 곡면에 대한 정보를 알아낼 수 있다. 다

음과 같이 스펙트럼에서 나타나는 이러한 성질을 이용하면 물질의 정성 및 정량분석

이 가능하다. 정성분석을 통해서는 물질에 어떤 분자가 있는 것인지 확인할 수 있으

며, 정량분석으로는 흡광도의 차이에 대해서도 알아볼 수 있다.

5) Beer-Lambert 법칙과 기본적인 원리

성분의 농도[J]를 결정하기 위해 특정 파장에서의 복사선 흡수 강도를 이용하는 경우,

그 결과는 베어-람베르트 법칙이다. 흡광도 A와 농도 간의 직선적인 비례 관계를

Beer-Lambert 법칙이라고 한다.  ∝


  log  

위 식에서 A는 흡광도, I0와 I는 각각 입사 강도와 투과 강도, L은 시료의 길이, ε

(epsilon)은 몰 흡광 계수이다. 단위는 (농도)-1(길이)-1이고, 보통 dm3mol-1cm-1이다.

이것은 입사광의 파장에 의존하며, 흡수가 가장 강할 때 가장 크다. 분광 광도계에서

흡광도는 보통 파장의 함수로 그려지며, 이에 따라 A는 주어진 자료로부터 직접 결정

될 수 있다.

특정 파장의 복사선의 흡수 강도는 Beer-Lambert 법칙에 의해 흡수제 종의 농도[J]

와 연계되어 있다.

     

시료의 흡수도     은 빛의 입사 및 최종 강도를 사용하여 다음 형태로 측정된

다.


  log 


복사선의 흡수를 주어진 진동수에서 시료의 투과도 T의 항으로 나타내는 것이 일반

적이다.


 


따라서, A=-logT 이다. 그러면, Beer-Lambert 법칙은 다음 두 형태 가운데 어느 하

나를 택한다.      ,      

보다 쉬게 정의하면, 흡광도는 농도에 비례한다는 식이다. A=ebc (A : 흡광도, e: 몰

흡광계수, b: 셀의 길이, c : 용액의 농도)로도 나타낼 수 있다. 이때, 실험하는 경우

에는 셀의 길이와 몰 흡광계수는 일치하기 때문에, A는 c에 비례함을 알 수 있다.

6) 분광계의 구성 요소

분광계는 크게 광원, 원자화 효율에 영향을 주는 인자, 시료 용기, 단색화 장치, 복사

선 검출기로 구성되어 있다.

광원(light source)은 빛 에너지(자외선, 가시광선 등)를 방출하는 것이다. 주로 속 빈

음극 램프가 가장 많이 사용된다. 정량화하고자 하는 원소나 합금으로 된 속 빈 원통

형의 음극과 텅스텐-양극으로 되어있다. 전기가 높은 에너지 준위에서 바닥 상태로

들어갈 때, 그 원소의 특정 파장 및 빛이 나온다.

원자화 효율에 영향을 주는 인자는 분석하고자 하는 원소를 원자화해준다. 원자화 과

정은 AAS의 감도에 영향을 끼친다. 원자화 과정은 이온이나 분자 상태의 시료로부터

효율적인 방법으로 중성 원자 증기를 만들고, 이를 광로에 분무시켜야 한다.

단색화장치(monochrometer)는 복사선을 단일 파장으로 분리한다. 슬릿(입구와 출구)

를 거울, 렌즈, 프리즘 또는 회절발 등을 이용하여 원하는 파장을 골라내는 장치이다.

프리즘은 간단하고 저렴하며, 분산결과가 비선형적이고 분산 각도가 온도에 따라 변

한다는 특징이 있다. AAS에서 주로 많이 사용하는 단색화 장치는 회절발을 이용하는

것이 대부분이다. 회절발은 빛을 각 성분 파장으로 분산 시 캐는 데 사용한다. 파장

에 따른 각도의 분산이 선형적이다. 또한, 분산 각도가 온도에 따라 변하지 않는다는

특성이 있다. 이 장치에는 홑 빛살 및 겹 빛살형이 있는데, 현대에는 겹 빛살형이 많

이 채택되고 있다. 또한, 바탕 보정기를 장치한 기기도 많다.

시료 용기(sample tube)는 복사선이 투과하는 재질로 된 용기이다. 석영 cell은 자외

선 영역, 가시광선 영역 모두 측정 가능하다. 유리 cell은 가시광선 영역 측정 시 사

용할 수 있다. 플라스틱 cell은 아크릴, PE, 가시광선 영역에서 사용 가능하며. 용매

사용 시 주의해야 한다.

복사선 검출기(detector)는 시료를 통과한 빛 에너지를 신호로 변환하며, 흡광도를 나

타낸다. 비불꽃형 분광기에서는 자외선 및 가시광선의 파장 범위에서 예민한 광전 물

질로 만들어진 광전 중배관이다. 광전증배관은 광전관의 원리를 이용하여 빛을 전류

로 바꾸고 이를 다시 증폭하도록 만든 장치이다. 감도가 좋아서 약한 복사선 측정 시

에 유리하지만, 센 복사선에 노출되면 파손되기 쉽다. 검출기는 관을 두드리는 복사

세기에 비례하여 전류를 발생시킨다.

4. 실험 장비, 초자 및 시약

CoCl2 · 6H2O, 100mL volumetric flask, 전자저울, 증류수, 비커, 스포이트, UV

cell, 분광기

<MSDS>

1) 염화코발트

염화코발트의 분자량은 129.839이다. 끓는점은 1049℃, 녹는점은 737℃이다. 삼키면

유해하며, 알레르기성 피부 반응을 일으킬 수 있다. 흡입 시 천식 또는 호흡곤란을

일으킬 수 있다. 유전적인 결함과 암을 일으킬 것으로 의심된다. 수생생물에 매우 유

독하다.

5. 실험 과정

1) 0.2M / 0.02M CoCl2 · 6H2O 수용액 제조

(1) 100mL volumetric flask를 사용하여 0.2M의 CoCl2 · 6H2O 용액을 100mL를

제조한다.

(2) 0.2M의 CoCl2 · 6H2O 용액을 10mL 취한 후, volumetric flask를 사용하여

100mL의 0.02M CoCl2 · 6H2O 용액을 만든다.

▶ (분자량) * (구하고자 하는 수용액 몰 수) * 0.1L = 시료의 질량

2) 0.1M / 0.05M CoCl2 · 6H2O 수용액 제조

(1) 0.2M CoCl2 · 6H2O 용액을 50mL 취한 후, volumetric flask를 사용하여

100mL의 0.1M CoCl2 · 6H2O 용액을 만든다.

(2) 0.1M CoCl2 · 6H2O 용액을 50mL 취한 후, volumetric flask를 사용하여

100mL의 0.05M CoCl2 · 6H2O 용액을 만든다.

3) UV/Vis 분광기를 이용한 몰흡광계수와 시료의 미지농도 구하기

(1) 분광기의 전원선을 연결한 후 컴퓨터와 분광기를 연결한다.

(2) 분광기의 전원을 켠 후 컴퓨터의 전원을 켠 뒤 바탕화면의 UVWIN 프로그램을

실행시킨다.

(3) 다음과 같은 화면에서 OK 버튼을 누른 후 프로그램에 세팅될 때까지 기다린다.

(4) spectrum 창을 키운다.

(5) parameters 아이콘을 눌러 Scan Parameters 부분의 start를 800, End를 400,

Interval을 1.0nm로 설정한 후 Display All Spectrum 버튼을 체크해준다.

(6) Accessories에 들어가 Sample Name을 변경해준다.

(7) Quartz Cell에 앞서 만든 용액 4가지와 증류수, 미지시료를 담는다.

(앞에서부터 차례대로 증류수 / 0.02 M / 0.05 M / 0.1 M / 0.2 M / 미지시료 )

(8) cell의 불투명한 부분을 잡고 투명한 부분이 빛을 통과할 수 있도록 분광기

에 넣는다.

* 뚜껑이 완전히 닫히지 않으므로 분광기 안쪽에 떨어지지 않게 주의한다.

(9) Baseline Correction을 실행시킨다.

(10) 화살표를 이용하여 측정하고자 하는 셀을 선택한 후 스타트 버튼을 눌러 스펙트

럼을 기록한다.

(11) All Spectrum 옆의 스펙트럼 곡선에서 Peak Pick 아이콘을 눌러 코발트 용액

최대 흡수 파장을 이용한다.

(12) 계산을 통해 몰흡광계수(ε)를 구하고 미지시료의 몰농도를 구해본다.

계산식 A = εbc (A=흡광도; b=셀의 길이=1cm; c=용액의 몰농도)

(13) 사용한 셀은 증류수를 이용하여 깨끗이 세척한 뒤 틀에 보관한다.

(14) 전체 스펙트럼을 확인한다.

6. 참고문헌

화학백과 (대한화학회, http://new.kcsnet.or.kr)

사이언스올 과학백과사전(https://www.scienceall.com/)

물리학백과 (한국물리학회 http://www.kps.or.kr)

7. 결과 및 관찰

1) 결과

A=ebc (A : 흡광도, e: 몰흡광계수, b: 셀의 길이, c : 용액의 농도)

① 몰흡광계수 구하기

e=A/bc

0.097 / (0.02*1)=4.850

0.250 / (0.05*1)=5.000

0.488 / (0.1*1)=4.880
0.996/(0.2*1)=4.980

평균 몰 흡광계수 (4.850+5.000+4.880+4.980)/4 = 4.928

몰농도 최대 흡수 파장 Abs(흡광도) 셀의 길이 몰 흡광계수

0.02 513.00 0.097 1 4.850

0.05 512.00 0.250 1 5.000

0.1 512.00 0.488 1 4.880

0.2 512.00 0.996 1 4.980

② 미지시료의 농도 구하기

위에서 계산한 몰 흡광계수, 관찰을 통한 흡광도를 이용하여 계산한다.

미지시료의 농도 : 0.215 / (4.928*1) = 0.04363

몰농도 최대 흡수 파장 Abs(흡광도) 셀의 길이 몰 흡광계수

0.02 513.00 0.097 1 4.850

0.05 512.00 0.250 1 5.000

 0.1 512.00 0.488 1 4.880

0.2 512.00 0.996 1 4.980

미지시료
511.00 0.215 1 4.928
=(0.0436)

2) 관찰

100mL의 0.2M CoCl2 · 6H2O 용액을 만들기 위해, 아래의 공식을 이용하여 계산한

다.

(분자량) * (구하고자 하는 수용액 몰 수) * 0.1L

= 시료의 질량

237.94 * 0.2 * 0.1 = 4.7586

0.2M의 용액을 사용하여 0.1M, 0.05M, 0.02M의 용액을 만들며, 용액의 농도에 따라

육안으로도 확연한 차이를 느낄 수 있었다.

0.02M 용액의 스펙트럼

그림 7 0.05M 용액의 스펙트럼

0.1M 용액의 스펙트럼

0.2M 용액의 스펙트럼

미지시료의 스펙트럼

위와같이 농도에 따른 흡광도의 스펙트럼은 다음과 같이 나타났다.

peak를 통해 최대 흡수 파장과 최대 흡수 파장에서의 흡광도를 확인할 수 있었다.

전체 스펙트럼

위의 결과란에 첨부한 그래프 “몰농도와 흡광도의 관계”를 보면 비례함을 확인할 수

있었고, 기울기 역시 거의 일정하게 나타나는 모습을 확인할 수 있었다.

8. 토의

1) 시료를 측정할 때의 주의사항

각 시료는 용매, 용액의 pH, 온도, 전해질 농도, 방해물질의 존재 등으로 인해 변할

수 있기 때문에, 정확한 결과를 위해서는 흡광 요소를 뺀 나머지 요인들은 모두 포함

하는 용액을 사용해야 한다.

시료를 분광기를 사용하여 측정할 때, 항상 최대 흡광도를 나타내는 파장을 선택해야

한다. 최대 흡수 파장에서 분석 감도가 가장 크다.

작은 입자들이 빛을 산란시켜 시료의 겉보기 흡광도를 증가시킬 수 있다. 따라서, 시

료 용액에는 먼지나 불순물, 기포 등이 들어가지 않도록 해야 한다.

용기 기벽의 지문 등 또한 빛을 산란시키고 흡수하기 때문에, 용기의 표면은 손으로

직접적으로 만지면 안 된다. 측정 이전에는 깨끗한 화장지로 닦아야 하며, 다른 물질

과의 접촉은 실험의 정확도에 영향을 줄 수 있다.

2) 방해요인

분광학적 방해로 어떤 원소의 원자 흡수 공명선이 다른 원소의 방출선과 겹치는 경우

에 방해 현상이 일어날 수 있다. 물론, 원자 흡수의 특이성으로 인해 이러한 현상은

거의 일어나지 않는다. 만약 이러한 방해가 있다면, 방해 물질을 제거하거나, 다른 분

석 파장을 이용해야 한다. 또한, 시료를 고온에서 처리하는 경우 방해가 일어날 수

있다.

물리적으로 시료 용액은 가용성 염류의 양이 많다. 이로 인하여 물리적인 영향을 일

으킬 수 있다.

불꽃을 사용하는 분광기의 경우, 기준 용액은 대부분 불꽃 내부에서 해리하여 완전히

원자화하지만, 시료 용액은 분석 원소가 시료 용액 내의 이온에 결합하여, 열에 안정

한 화합물을 만들어 원자화를 방해할 수 있다.

또한, 높은 온도 불꽃에 의해 분석 원소가 이온화를 일으켜 중성 원자가 덜 발생하면

이온화 방해가 일어날 수 있다. 이는 분석 원소보다 이온화를 더 잘 일으키는 원소를

가해주며 막아야 한다.

또한, 불꽃 내에서 형성된 입자들에 의해 광원으로부터의 복사선을 산란시켜 흡광도

가 증가한 것처럼 계산되는 경우가 있으며, 불꽃 내에서 시료의 불완전한 원자화로

분자가 형성되고 이로 인해 광원으로부터의 복사선을 흡수하는 경우의 방해는 불특정

방해라고 의미한다.