‫نتقاسم العيش على هذا الكوكب مع كائنات أخرى مختلفة‬

‫بعضها مرئي بالعين المجردة و بعضها االخر ال نستطيع‬

‫احساسه إال باستخدام األدوات المختلفة كالمجهر أو نرى‬
‫أثرها حولنا في عمليات التخمير أو التفسخ أو ‪....‬‬
‫سنحاول في هذا الفصل التعرف على صفات بعض هذه‬
‫الكائنات في مخبرنا المتواضع في كلية الطب في جامعة‬
‫حلب بالمناطق المحررة‪ -‬مخبر الجراثيم و الطفيليات‬

‫علمي علم الجراثيم‬

‫الطبي‬
‫د‪ .‬أحمد قجة‬
‫السنة الثالثة‬
‫]‪[Document subtitle‬‬

‫‪Dr.Ahmed Kejah &Assitance Aref Nour‬‬

‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫االثنين ‪2018-10-22‬‬

‫المعدات المخبرية ‪ -‬التعريف بعلم األحياء الدقيقة – قواعد السالمة في المخبر الجرثومي‬
‫الصبغ البسيط‬

‫‪ ‬إن المعدات األكثر شيوعا في المخابر هي‪:‬‬

‫األوعية المستخدمة‪:‬‬
‫أطباق بتري ‪ :petri dishes‬توجد في علب تحوي كل واحدة ‪ 20‬طبقا معقما‪ ،‬ويحتاج‬
‫كل منها إلى ‪ 20-15‬مل من اآلغار‪.‬‬
‫أنابيب بيجوكس ‪ :Bijoux‬أوعية ذات أغطية لولبية صغيرة‪ ،‬زجاجية أو بالستيكية‪،‬‬
‫تتسع لحوالي ‪ 5‬مل من السائل‪.‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ :test tubes‬منها بالستيكي و منها زجاجي‪ ،‬تتسع إلى ‪10-5‬مل‪.‬‬
‫أنابيب إبندورف ‪ :Eppendorf‬تستخدم للتثفيل الدقيق‪ ،‬نظيفة و منها نوعين عقيمة‬
‫وغير عقيمة وتتسع إلى ‪1.5-1‬مل كما في الشكل المجاور‪.‬‬

‫الماصات والرؤوس‪:‬‬
‫‪ ‬يمكن استخدام الماصات البالستيكية العقيمة لحجوم ‪10-5‬مل وقد‬
‫تستخدم هذه الماصات مع ماصات إجاصية كبيرة أو مضخات‬
‫آلية‪.‬‬
‫‪ ‬للحجوم الصغيرة أقل من ‪ 1‬مل يمكن استخدام ماصات‬
‫‪ .micropipette‬إن رأس الممص ‪ tips‬يجب أن يكون عقيما‬
‫عند العمل مع العينات الجرثومية لمنع التلوث‪ ،‬ويجب دائما‬
‫التأكد أننا لم نسحب سائل الوسط إلى داخل الممص بسرعة كبيرة‬
‫ألنه سيندفع عبر رأس الماصة إلى داخل الممص ويلوثه‪.‬‬
‫‪ ‬يجب استخدام الماصات المناسبة لمجال الحجوم المراد‬
‫استخدامها‪.‬‬

‫أدوات الزرع والعروات(الالقحة) ‪microbiology‬‬

‫‪:inoculating loops‬‬
‫‪ ‬أداة الزرع المعدنية أو البالستيكية‪ :‬تكون بحجوم مختلفة ‪ 1‬أو ‪ 5‬أو ‪ 10‬ميكرو لتر‪.‬‬
‫‪ ‬عقم ادوات الزرع دائما قبل استخدامها (المعدنية فقط أم البالستيكية فتأتي عقيمة)وبعد استخدامها أيضا‬
‫وانتظر حتى تبرد قبل أن تالمس بها وسط الزرع‪.‬‬

‫‪1‬‬
‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫العروات البالستيكية و العروات المعدنية‬

‫المجاهر الضوئية‪:‬‬
‫‪ ‬المجهر هو أداة تكبير يعتمد عليه بشكل كبير في العمل المخبري‬
‫األجزاء الرئيسية للمجهر‪:‬‬
‫العدسات العينية‪ :‬تكون ذات قدرة تكبيرية ‪ 10x‬في معظم األحيان وقد تكون ‪( 7x‬العدسات العينية في‬ ‫‪‬‬
‫المجاهرة المستخدمة في مخابرنا كلها ذات قدرة تكبيرية ‪.)10x‬‬
‫ذراع المجهر‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫رف الشرائح‪ :‬نضع الشريحة عليه عند الفحص‪ ،‬مزود بحامل للشرائح يثبتها بإحكام ويتحرك أفقيا‬ ‫‪‬‬
‫بواسطة لوالب احكام أفقي‪.‬‬
‫عدسات شيئية متعددة‪ :‬ذات قوة تكبير مختلفة لكل عدسة (‪ )10x , 40x, 100x‬يحمل هذه العدسات‬ ‫‪‬‬
‫حامل دائري يدور لتغيير العدسة الشيئية حسب الحاجة‪.‬‬

‫‪2‬‬
‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫‪ ‬مكثف ضوئي‪ :‬يكون معاير من قبل المعمل‬

‫المصنع‪.‬‬
‫‪ ‬منبع ضوئي‪ :‬له لولب إحكام للتحكم بشدة اإلضاءة‪.‬‬
‫‪ ‬زر التشغيل‪.‬‬

‫مبدأ العمل‪:‬‬
‫قبل توصيل الكهرباء أخفض اضاءة المصباح للحد‬ ‫‪‬‬
‫األدنى ثم أرفع االضاءة ل ‪ 3/4‬الطاقة القصوى بعد‬
‫التوصيل‪.‬‬
‫أدر حامل العدسات الشيئية لتضع العدسة ‪.10x‬‬ ‫‪‬‬
‫تأكد أن السطح السفلي للعينة (الشريحة) جاف وأن‬ ‫‪‬‬
‫رف المجهر نظيف وجاف‪.‬‬
‫افتح كالب تثبيت العينة وضع الشريحة في مكانها ثم‬ ‫‪‬‬
‫أعده برفق ليحكم عليها‪.‬‬
‫استعمل لولب االحكام السريع ثم البطيء إلظهار‬ ‫‪‬‬
‫العينة‪.‬‬
‫أجر ‪ focus‬على المكثف برفع او إنزال قبضته (في‬ ‫‪‬‬
‫معظم الحاالت يكون اخفض ‪ 1mm‬من أعلى نقطة‬
‫له) ثم اتركه هكذا لكل التكبيرات‪.‬‬

‫عند الفحص على التكبير ‪ 10x‬احصل على أفضل صورة‬

‫بـ‪:‬‬
‫‪ ‬اغالق المكثف حوالي ثلثيه‬
‫‪ ‬تغيير شدة االضاءة بحيث تكون جيدة‪ ،‬لكن دون وهج زائد ألنه يخفي بعض التفاصيل‪.‬‬
‫‪ ‬استخدم لوالب االحكام االفقي الستكشاف كل الشريحة‬

‫عند الفحص على التكبير ‪ 40x‬احصل على أفضل صورة بـ‪:‬‬

‫‪ ‬فتح المكثف أكثر‬
‫‪ ‬زيادة شدة االضاءة أكثر‪.‬‬
‫مالحظة‪ :‬يستخدم زيت األرز في العدسة الغاطسة ‪ .x 100‬و ذلك إلزالة لهواء بين الشريحة التي تحتوي على‬
‫العينة و بين العدسة الجسمية و بهذا نكون قد تخلصنا من انكسار الضوء نتيجة مروره بأوساط لها قرينة‬
‫انكسار غبر متجانسة في حالة بدون زيت أرز (وجود الهواء) أما عند وضع زيت األرز الذي يمتلك قرينة‬
‫انكسار قريبة من قرينة انكسار الزجاج فالضوء سيتابع مسيره بشكل مستقيم و يعطينا تفاصيل واضحة للعينة‪.‬‬

‫‪3‬‬
‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫الحواضن‪:‬‬
‫‪ ‬توجد حواضن للجراثيم الهوائية وغير الهوائية وأخرى‬
‫للجراثيم التي تحتاج الى ‪ ،CO2‬يجب تمييز االطباق‬
‫التي ستوضع في الحاضنة بوضع الصقة عليها‪ ،‬ال‬
‫نستخدم الحاضنة لتجفيف االطباق بل نستعمل مجفف‬
‫االطباق‬

‫المثفالت (‪)centrifuge‬‬
‫‪ ‬يجب استخدام انابيب مناسبة لكل مثفلة‪ ،‬فالمثفالت‬
‫الصغيرة تحتاج ألنابيب ‪.Eppendorf‬‬
‫‪ ‬تستخدم المثفلة لفصل المواد عن بعضها اعتمادا على‬
‫وزنها الجزيئي‪.‬‬
‫‪ ‬يجب التأكد بعدها من موازنة المثفلة قبل تشغيلها‪.‬‬

‫االوتوكالف(‪:)autoclave‬‬
‫وعاء ذو جدار مضاعف‪ ،‬يتحمل درجات عالية من الضغط‬
‫الجوي‪ ،‬بسبب الضغط المرتفع (‪ )Bar2‬ترتفع نقطة غليان‬
‫الماء وتصبح ‪ c121‬ويتم التعقيم خالل ‪ 15‬دقيقة‪.‬‬
‫يعتبر من أفضل الطرق بسبب‪:‬‬
‫‪ ‬الوصول لدرجة حرارة عالية لمدة كافية‪.‬‬
‫‪ ‬قوة اختراق كبيرة للبخار الساخن تحت ضغط ‪2bar‬‬
‫‪ ‬تتحرر حرارة اضافية كامنة عند تكاثف البخار داخل االوتوكالف‪.‬‬

‫خيمة الزرع(‪:)laminar air flow‬‬

‫‪ ‬تستعمل في المخابر الجرثومية المتطورة‪ ،‬و خاصة عند صب المنابت‬
‫في اطباق بيتري و عند الرزع و في اختبارات العقامة في المعامل‬
‫الدوائية‪.‬‬

‫‪4‬‬
‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫خيمة الزرع أو الساحبة‬

‫لمحة عن علم الجراثيم‬

‫‪ ‬هو العلم الذي يدرس زمرة من االحياء الدقيقة ‪ microbiology‬تتألف كل من عناصره من خلية واحدة‬
‫بسيطة تمتلك بعض صفات العالم النباتي وبعض صفات العالم الحيواني اضافة الى صفات خاصة بها‪.‬‬

‫أقسام علم االحياء الدقيقة‪:‬‬

‫الجراثيم ‪bacteria‬‬
‫‪ ‬كائنات حية ذات خلية واحدة ال ترى بالعين المجردة وانما ترى بمساعدة المجهر الضوئي العادي ويقدر‬
‫حجمها بالميكرونات (‪ 5-1‬ميكرون)‪.‬‬
‫‪ ‬ال تمتلك نواة واضحة بل طليعة نواة‪.‬‬
‫‪ ‬تنقسم انقساما بسيطا (االنشطار الثنائي)‪.‬‬
‫‪ ‬تحتوي على ‪ DNA‬و‪RNA‬‬
‫‪ ‬تحتوي االنزيمات والمواد الضرورية للقيام بالعمليات االستقالبية االساسية (التنفس‪ ،‬انتاج الطاقة)‪.‬‬
‫‪ ‬تحتوي على جدار قاس مكون من الببتيدوغليكان ‪.peptidoglycan‬‬
‫‪ ‬تحتوي على ريبوزومات ‪.70x‬‬
‫‪ ‬تضم أيضا‪:‬‬
‫‪ .1‬الريكتيسيا ‪ :recttesia‬جراثيم متفلة داخل خلوية ‪intracellular‬‬
‫‪ .2‬المفطورات ‪ :mycoplasmas‬جراثيم من دون جدار الخلية‪.‬‬
‫‪ .3‬الكالميديا ‪ chlamydyae‬جراثيم متطفلة داخل خلوية ‪.intracellular‬‬

‫‪5‬‬
‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫ومن امثلتها‪ :‬البروسيال (تسبب الحمى المالطية) ‪ -‬السالمونيال (الحمى التيفية) ‪ -‬الضمات (الكوليرا) ‪-‬‬
‫المكورات السبحية (تسبب التهاب اللوزات) المكورات العنقودية (الدمامل) النيسيريا (السيالن البني) اللولبية‬
‫الشاحبة (الزهري)‪.‬‬

‫الفيروسات ‪:Viruses‬‬
‫‪ ‬أصغر الكائنات الحية (تقدر أبعادها بالميكرون) وتشاهد بالمجهر اإللكتروني فقط‪.‬‬
‫‪ ‬تحوي إما الحمض النووي ‪ RNA‬أو ‪ DNA‬وليس كليهما‪.‬‬
‫‪ ‬ال تحتوي على نواة أو طليعة نواة‬
‫‪ ‬ال تحتوي على ريبوزومات‬
‫‪ ‬ال تتكاثر باالنشطار الثنائي على عكس الجراثيم‬
‫‪ ‬ال تمتلك جدارا قاسيا بل محفظة بروتينه وغالفا ليبوبروتيني‪.‬‬
‫‪ ‬ال يمكنها أن تتكاثر في منابت صناعية وإنما تحتاج إلى منابت حية مثل أجنة الطيور أو أجنة بشرية‬
‫مجهضة لذا تعد الفيروسات كائنات إجبارية التطفل ‪ Obligate intracellular‬لتأمين آليات إنشاء‬
‫البروتين وإنتاج الطاقة‪.‬‬
‫من أمثلتها‪ :‬فيروس جدري الماء (يسبب الحماق)‪ ،‬فيروس الحصبة (يسبب الحصبة)‪ ،‬فيروس الحصبة‬
‫األلمانية (يسبب الحصبة األلمانية) فيروس النكاف (يسبب النكاف) فيروس اإليدز (يسبب نقص المناعة‬
‫المكتسبة) فيروسات التهابات الكبد ‪.A,B,C,D,E,‬‬

‫الفطريات ‪:Fungi‬‬
‫تقسم بشكل رئيسي إلى فطور وحيدة الخلية (خمائر المبيضات البيضاء ‪ )candida albicans‬وفطور‬ ‫‪‬‬
‫متعددة الخاليا (الرشاشيات ‪ )Aspergillus‬تشاهد بالمجهر العادي‪.‬‬
‫أكبر حجما من الجراثيم ويقدر حجمها بالميكرونات وتختلف عن الجراثيم شكليا وتشبهها فيزيولوجيا‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحتوي على ‪ DNA‬و‪ RNA‬معا‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحتوي على جدار قاس يتركب من الكيتين ‪ chitin‬بشكل أساسي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحتوي على ريبوزومات ‪80s‬‬ ‫‪‬‬
‫ال تحتوي اليخضور ‪chlorophyII‬‬ ‫‪‬‬
‫حقيقية النواة‪ :‬تمتلك نواة محاطة بغشاء نووي تحتوي النواة على الصبغيات والنوية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تتكاثر ال جنسيا باالنشطار الثنائي أو التبرعم‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫الطفيليات (األولي والديدان) ‪:protozoa & Hemlinthes‬‬

‫تتبع األولي البروتستانت الراقية أما الديدان تتبع المملكة الحيوانية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أبعاد األولي (‪ )15-25‬ميكرون‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحتوي ‪ DNA‬و‪ RNA‬معا‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حقيقية النواة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ال تملك جدارا قاسيا بل غشاء مرنا‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحتوي على ريبوزومات ‪.S80‬‬ ‫‪‬‬
‫من أمثلتها‪ :‬المتحوالت ‪ ،Entamoeba‬الجيارديا ‪ ،Giardia‬الليشمانيا ‪.Leishmanial‬‬ ‫‪‬‬

‫‪6‬‬
‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫خطوات أساسية يجب مراعاتها أثناء العمل بالمخبر‪:‬‬

‫‪ -1‬يمنع تناول األطعمة أو المشروبات أو العلكة داخل المخبر‪.‬‬
‫‪ -2‬ال يمكن دخول المخبر دون ارتداء المريول األبيض فهو يحمي مالبسك من التلوث الجرثومي وآثار‬
‫الصبغات‪.‬‬
‫‪ -3‬يجب ارتداء الكفوف الطبية أثناء العمل‪.‬‬
‫‪ -4‬تذكر أنك تعمل مع عينات جرثومية قد تكون ممرضة‪ ،‬تعامل معها بحذر وأغلق المعلق الجرثومي‬
‫جيدا بعد أخذ العينة وال تتركه مفتوحا أبدا‪.‬‬
‫‪ -5‬انتبه من خطر اللهب على المالبس والشعر ومن األفضل ربط الشعر و ارتداء غطاء رأس (‪.)Cap‬‬
‫‪ -6‬عند ابتالع أي مادة عن طريق الخطأ أو تلوث العين أو الجلد بأي مادة يرجى مراجعة المسؤول عن‬
‫الجلسة العملية فورا‪.‬‬
‫‪ -7‬على كل مجموعة تسليم كافة أدواتهم ومجهرهم وطاولتهم كما استلموها‪ :‬نظيفة وبحالة جيدة وإعادة‬
‫كل مادة إلى مكانها‪.‬‬
‫‪ -8‬انتبه أن تثبت الحضور قبل الخروج من المخبر وإال يعتبر الحضور الغيا‪.‬‬
‫‪ -9‬تقيد بالحضور على الموعد المحدد للجلسة واألفضل الحضور قبل ‪ 5‬دقائق أمام المخبر‪.‬‬

‫القسم العملي‬
‫صبغة أزرق المتيلين (الصبغ البسيط)‬
‫‪ ‬الهدف‪ :‬الكشف عن الجراثيم والخاليا البشرية حيث يمكن أن ترى الجراثيم داخل الخلوية أفضل منها في‬
‫صبغة غرام خاصة في الفحص المباشر للسائل الدماغي الشوكي‪.‬‬

‫طريقة العمل‪( :‬انتبه إلى ارتداء كفوف العمل أثناء التعامل مع الجراثيم والصبغات)‬
‫‪ -10‬ضع العينة الجرثومية على شريحة زجاجية وافرشها على كامل الشريحة جيدا باستخدام ‪.loop‬‬
‫‪ -11‬ثبت المحضر الجرثومي بتعريض الشريحة للهب (في المنطقة الزرقاء منه)‪.‬‬
‫‪ -12‬ضع بضع قطرات من محلول أزرق المتيلين على الشريحة واتركها لمدة ‪ 3‬دقائق‬
‫‪ -13‬اغسل بالماء برفق مع ميالن الشريحة مع االنتباه أال يؤذي ضخ الماء إلى إزالة العينة من‬
‫الشريحة‪.‬‬
‫‪ -14‬اترك الشريحة لتجف بالهواء وافحص بالمجهر الضوئي على العدسات الشيئية المختلفة‪.‬‬
‫‪ -15‬ارسم ولون ما شاهدته تحت المجهر بالتكبير ‪ 40‬والتكبير ‪.100‬‬

‫انتهت المحاضرة األولى‬

‫‪7‬‬