Bài : Đo hoạt độ Glutamat Oxaloacetat Transaminase

1. Nguyên tắc

Xác định hoạt độ enzym Transaminase dựa trên nguyên tắc sau:

-Đối với xác định hoạt độ enzym GOT (Glutamat Oxaloacetat Transaminase) :
Got
Acid Aspactic +  Cetoglutaric Oxaloacetic + Acid glutamic
MDH
Oxaloacetic + NADH2 Acid Malic + NAD+
(Malat dehydrogenase)

Trong quá trình phản ứng, tạo phức hợp có độ đục giảm dần, (tốc độ giảm càng
nhanh, hoạt độ enzym GOT càng lớn). Bằng phép đo kinetic ở bước sóng 340nm,
với nhiều thời điểm khác nhau, chúng ta xác định được hiệu số mật độ quang trung
bình, nhờ đó sẽ xác định được hoạt độ enzym GOT.

2. Chuẩn bị

- Dụng cụ: bộ đồ lấy máu tĩnh mạch, ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm, pipet tự
động, đầu côn, bút ghi kính, máy ly tâm, máy sinh hoá bán tự động.

- Thuốc thử: dùng bộ kit hoá chất mua sẵn gồm reagent A - GOT và reagent B -
GOT/GPT. Pha reagent A/ reagent B theo tỷ lệ 4/1 được dung dịch working
reagent.
3. Cách tiến hành

- Lấy máu đúng kỹ thuật, ly tâm lấy huyết thanh

- Hút chính xác 500 µl working reagent vào ống thử rồi ủ sao cho dung dịch đạt
37o C

- Hút 25µl huyết thanh vào ống thử

- Lắc đều đo ngay ở bước sóng 340nm. Sau 120 giây hiện kết quả

- Tác phong: vô khuẩn, đúng kỹ thuật, đúng thời gian (40-50 phút)

4. Nhận định kết quả

-Trị số bình thường: ở 37oC, GOT ≤ 40 U/

- AST máu tăng trong các nguyên nhân:

Các bệnh gan ( tỉ số AST/ALT<1) : Viêm gan do virut cấp, viêm gan do
thuốc( rifampicin, INH, salicylat, heparin) , viêm gan nhiễm độc ( CCl4,
amanit phalloid), tắc mật do các nguyên nhân không phải ung thư , apxe gan.
Các bệnh gan ( tỉ số AST/ALT >1) : xơ gan, viêm gan do rượu, xâm nhiễm
gan ( do di căn ung thư, nhiễm sarcoid, lao, u lympho, luput ban đỏ).
 Các bệnh về tim: suy tim ngoài lồng ngực, phẫu thuật tim, sau thông tim ( tỉ
số AST/ALT >1)
Viêm túi mật, nhiễm độc rựơu cấp, viêm tuỵ cấp hoại tử, viêm đa cơ, viêm
da và cơ, hội chứng vùi lấp.

5 . Kết quả

GOT = 7.93626 Bình thường

Bài : Xác Định Hoạt Độ Enzym ( Gama Glutamyl Transferase)

1. Nguyên tắc
ƔGT
ƔGlutamyl - 3 carboxy - 4 nitroanilide + glycylglycine
ƔGlutamin glycylglycine + 5 amino - 2 nitrobenzoate, phức hợp tạo thành trong
quá trình phản ứng có độ đục tăng dần, được xác định ở bước sóng 405 theo
phương pháp đo kinetic.
2. Chuẩn bị

- Dụng cụ: bộ đồ lấy máu tĩnh mạch, ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm, pipet tự
động, đầu côn, bút ghi kính, máy ly tâm, máy sinh hoá bán tự động.

- Hóa chất:

+ Thuốc thử R1: Dung dịch đệm tris pH8,25 : 100 mmol/l, Glycylglycine : 100
mmol/l

+ Thuốc thử R2: Gama - glutamyl - 3carboxy - 4nitroanilide: 4 mmol/l

Hoá chất thuốc thử được bảo quản ở 2°C – 8°C.

3. Cách tiến hành

+ Trước khi làm xét nghiệm, pha dung dịch làm (Working reagent) theo tỷ lệ 4R₁
+ 1R2

+ Sau đó cho vào 1 ống nghiệm sạch : 1 ml dung dịch working reagent

và 100 µl huyết thanh

+ Lắc đều, ở nhiệt độ 37°C trong 2 phút, rồi đem đo trên máy phân tích ở bước
sóng 405 nm, theo phép đo kinetic với 3 điểm đo sau 1 phút, 2 phút và 3 phút.

+ Kết quả hoạt độ enzym GGT = ∆DA x 1158 (Đơn vị U/l)

4. Nhận định kết quả:

bình thường: GGT ≤ 50 U/l

tăng trong các bệnh về gan : viêm gan virus, tổn thương gan do nhiễm đọc cấp do
các nguyên nhân khác nhau

ngoài ra GGT còn tăng trong các bệnh viêm gan mạn, vàng da do tắc mật, ung thư
gan di căn , nhiễm trùng cấp tính , mạn tính trong các bệnh viêm tuỵ cấp, mạn, u ác
tính.

GGT có thể giảm trong các bệnh viêm thận kề mạn tính, viêm cầu thận mạn tính,
viêm bể thận , thận nag, thận xơ teo.

5. Kết quả

Bình thường GGT ≤ 50 U/l

GGT= 25,4031 U/l Bình Thường

 Bài: Đo Hoạt Độ ( Glutamat Pyruvat Transaminase )

1. Nguyên tắc

- Đối với xác định hoạt độ enzym GPT (glutamat pgruvat transaminase):
GPT
A.Alanin + a cetoglutaric Acid. Pyruvic + glutamic

LDH
A.Pruvic + NAD H₂ (Lactat dehydrogenase) A.lactic + NAD*

Phức hợp tạo thành trong quá trình phản ứng có độ đục giảm dần, được xác định ở
bước sóng 340 nm. Theo phép đo kinetic như đối với GOT.

2. Chuẩn bị

- Dụng cụ: bộ đồ lấy máu tĩnh mạch, ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm, pipet tự
động, đầu côn, bút ghi kính, máy ly tâm, máy sinh hoá bán tự động.

- Thuốc thử: dùng bộ kit hoá chất mua sẵn gồm reagent A - GOT và reagent B -
GOT/GPT. Pha reagent A/ reagent B theo tỷ lệ 4/1 được dung dịch working
reagent.

3. Cách tiến hành

- Lấy máu đúng kỹ thuật, ly tâm lấy huyết thanh

- Hút chính xác 500 µl working reagent vào ống thử rồi ủ sao cho dung dịch đạt
37o C
- Hút 25µl huyết thanh vào ống thử

- Lắc đều đo ngay ở bước sóng 340nm. Sau 120 giây hiện kết quả

- Tác phong: vô khuẩn, đúng kỹ thuật, đúng thời gian (40-50 phút)

4. Nhận định kết quả

1. Trị số bình thường

ở 37oC, GPT ≤ 37 U/l

2. ALT máu tăng trong

Các bệnh gan: viêm gan cấp và mạn , xơ gan ung thư gan

Các bệnh về tim: suy tim sung huyết, viêm ngoài màng tim, nhồi máu cơ tim

Viêm túi mật, nhiễm độc rượu cấp, tai biến mạch máu não, viêm tuỵ cấp hoại tử,
hoại tử thận , cơ.

5 . Kết quả

GPT = 1,9625 U/l Bình thường