Na czym polega spektrofotometria absorpcyjna?

Opiera się na tym, że różne związki chemiczne pochłaniają pewne długości fal, czyli ich absorbancja.

Zakres Fal VIS

400-700 nm

Zakres Fal UV

180-400 nm

Próba ślepa

Jest to próba, która składa się ze wszystkich składników roztworu oprócz substancji oznaczanej.

Krzywa wzorcowa

Zostaje przygotowywana na podstawie roztworów znanych stężeń. Robi się ją po to by jak już
zmierzymy absorbancję badanej próby to żebyśmy mogli ją dopasować do naszej krzywej. Naszą
absorbancje wstawiamy do równania krzywej i obliczamy stężenie.

Widmo absorpcyjne

Jest wykresem zależności absorbancji od długości fali.

Prawo Lamberta Beera

Absorbancja światła monochromatycznego jest proporcjonalna do stężenia substancji absorbującej

oraz do grubości warstwy jej roztworu. Jest to prostoliniowa zależność między stężeniem roztworu i
jego absorbancją przy tej samej fali.

Analityczna długość fali

To fala, przy której badana substancja wykazuje najczęściej maksymalna absorbancję lub bliską
maksymalnej.

Budowa spektrofotometru UV-VIS

1) źródło promieniowania – najczęściej są to lampy deuterowe lub rtęciowe

2) monochromator – służy do wybrania określonej długości fali

3) komora dla kuwet – dla UV są to kuwety kwarcowe

4) detektor – może nim być fotokomórka, fotoogniwo lub fotopowielacz

5) urządzenie rejestrujące wyniki (rejestrator)

Jeśli substancja jest bezbarwna to trzeba ją przeprowadzić przed oznaczaniem w kompleks barwny.

Jakie związki mierzymy w UV?

Białka, aminokwasy aromatyczne, związki aromatyczne, związki zawierające elektrony, wiązania

peptydowe, grupy karbonylowe
Analiza ilościowa UV – VIS

Jest częściej używana, ponieważ, wiele związków ma takie samo widmo. Na podstawie krzywej
wzorcowej możemy sprawdzić ilość badanej substancji w próbie.

Na czym polega spektrofotometria w podczerwieni?

Jest metodą wykorzystującą absorpcję promieniowania podczerwonego przez oscylujące cząsteczki.

Absorpcja promieniowania elektromagnetycznego w zakresie podczerwieni wywołuje w cząsteczce
zmiany energii oscylacyjnej oraz energii rotacyjnej.

Rodzaje drgań

a) drgania walencyjne

- symetryczne

- antysymetryczne

b) drgania deformacyjne

- nożycowe płaskie

- wahadłowe płaskie

- skręcające niepłaskie

- kołyszące niepłaskie

Widma

Widma otrzymane w spektrofotometrii IR są bardzo skomplikowane, dlatego używa się jej głównie do
analizy jakościowej. Zastosowanie bazy danych z częstościami określonych pasm obecnych w danych
związkach chemicznych pozwala na identyfikację związków chemicznych w badanej próbce. Na
widmie widać również pewne grupy charakterystyczne, należą do nich długości fal drgań takich grup
jak: CH, CH2, CH3, OH, NH, NH2, C=C, C=O, NO2

Zakres podczerwieni przy którym mierzymy

1 – 100 µm

Budowa spektrofotometru IR

1) źródło promieniowania – drucik z tlenku ceru, cyrkonu, toru lub itru podgrzany do temp.
1000-1800°C

2) Monochromator – wykonany z NaCl, wrażliwy na porysowania i wilgotność, przechowywane w

temp. większej od otoczenia

3) komora dla kuwet

4) detektor – termiczne i termopary, bolometry

5) urządzenie rejestrujące wyniki (rejestrator)

Analiza jakościowa

Można rejestrować widma gazów, cieczy i ciał stałych

1) gazy – wpuszcza się je do opróżnionej z powietrza kuwety szklanej lub metalowej zamkniętej z obu
stron płytkami z kryształków przepuszczalnych dla IR

2) ciecze – można badać w postaci czystej lub w roztworze, roztwory muszą być bezwodne, ponieważ
widmo wody miesza się z widmem substancji badanej, najczęściej roztwór jest z CCl4

3) ciała stałe – bada się w postaci roztworu, zawiesiny, pastylki lub szklistego filmu. Zawiesiny
sporządza się przez roztarcie w oleju parafinowym i wprowadza się do kuwety.

Analiza ilościowa

Taka sama zasada działania jak w UV – Vis