‫طرق الفصل والتحليل االلي‬

Separation methods and Instrumental Analysis

E 303
By Lecture 4
Prof. Dr. Munther Abduljaleel M-Ali
 ‫التفلور والتفسفر ‪Fluorescence and phosphorescence‬‬
‫ان العمليات التي ترافق امتصاص االشعة أحيانا انبعاث اشعة‪ ،‬ومن عمليات انبعاث االشعة‬
‫هذه التفلور والتفسفر وبعد كل منهما بالبريق )‪ (Luminescence‬حيث تنبعث الطاقة المشعة‬
‫بشكل اشعة فوق بنفسجية ‪ ،UV‬اشعة مرئية ‪ ،Vis.‬اشعة تحت الحمراء ‪... ،IR‬الخ من الجزيئة‬
‫او االيون او الذرة التي تصل الى الحالة المثارة )‪ (excitation state‬عند امتصاصها‬
‫لالشعة والتي غالبا ما تكون اشعة فوق البنفسجية وكما موضح في المخطط التالي الذي‬
‫يوضح عملية التفلور والتفسفر‪.‬‬

‫او‬
 ‫يحدث التفلور والتفسفر في منطقة اعلى من ‪ UV‬المستخدمة لالثارة ‪. <300nm‬ان تفلور‬
‫االنبعاث يبقى لفترة قصيرة جدا )‪ (10-6 – 10-9 sec‬بعد وصول حالة االثارة اما انبعاث التفسفر‬
‫فيبقى لمدة أطول )‪ (<10-4‬وهذا الزمن يطلق عليه عمر النصف للتفلور والتفسفر‪.‬‬
‫عندما يسلط ضوء ذي طول موجي مناسب على جزيئة معينة فانها تثار الى الحالة المثارة‪ ،‬وعند عودة الجزيئة‬
‫الى الحالة المستقرة يمكن ان تحدث ثالث احتماالت‪:‬‬
‫‪ -1‬فقدان طاقة بشكل غير اشعاعي المتمثل بالسهم )‪.(C‬‬
‫‪ -2‬انبعاث ضوء بنفسجي او مرئي المتمثل بالسهم )‪.(F‬‬
‫‪ -3‬انتقال الى مستوى ثالثي شبه مستقر )‪ (T‬ثم االنتهاء الى الحالة المستقرة )‪ (So‬مع انبعاث ضوء بنفسجي او‬
‫مرئي تفسفر والمتمثل بالسهم )‪.(P‬‬
‫ويكون الطول الموجي للتفلور اقصر من الطول الموجي للتفسفر والشدة أعلى والسبب هو فقدان الطاقة‬

‫بعمليات إشعاعية أو غير إشعاعية قبل بعث الطيف ‪.‬‬

‫‪High E‬‬ ‫‪low E‬‬

‫‪𝐸 = ℎν‬‬

‫𝑐‬
‫‪𝐸=ℎ‬‬
‫𝜆‬

‫𝜆 ‪low‬‬ ‫𝜆 ‪high‬‬
 ‫العوامل المؤثرة على التفلور والتفسفر‬
‫‪ -1‬وجود تركيب جزيئي له القابلية على امتصاص االشعة )‪ (UV-Vis‬وكلما زاد امتصاص‬
‫الجزيئة فإن التفلور او التفسفر يزداد أي كلما زاد معامل االمتصاص الموالري أيضا يزداد التفلور‬
‫أو التفسفر‪.‬‬
‫‪ -2‬وجود روابط ‪( π‬أواصر مزدوجة ومتعاقبة) أو تركيب ‪ :aromatic‬فإن وجود روابط ‪π‬أو‬
‫تركيب حلقي اروماتي مفيد للغاية في عملية االمتصاص ‪ ،‬التي تعتبر بدورها المتطلب األولي‬
‫لإلثارة ‪ ،‬ومن ثم انبعاث الوميض‪ .‬لذلك من البديهي أن ينعكس وجود روابط ‪ π‬أو تركيب حلقي‬
‫اروماتي بشكل إيجابي على كل من الفلورة والفسفرة‪.‬‬
 ‫‪ -3‬المجاميع المعوضة )‪ :(Substituent groups‬فان بعض المجاميع تزيد من شدة‬
‫الوميض الصادر عن الجزيئات التي تحتوي على روابط ‪) π‬مثل مجموعات ال‪OR, -NH2, -‬‬
‫‪(–،OH‬أما المجموعات مثل ال – ‪ SO3H, -NO2, -COOH‬فإنها تقلل من شدة الوميض‪.‬‬

‫‪ -4‬درجة الحرارة‪ :‬درجة الحرارة تؤثر على كل من الفلورة والفسفرة بشكل كبير ‪ ،‬حيث تقل‬
‫الفلورة والفسفرة كلما زادت درجة الحرارة ‪ ،‬وذلك بسبب سهولة حركة الجزيئات في األوساط‬
‫ذات درجات الحرارة المرتفعة مما يزيد فرصة التصادمات وفقدان الطاقة الممتصة بشكل‬
‫غير اشعاعي‪.‬‬
‫‪ -5‬تأثير ‪ :pH‬يؤثر ‪ pH‬على عمليات التفلور والتفسفر بسبب ظاهرة االخماد الكيميائي التي‬
‫تحول المركب الى جزيئة غير متفلورة من خالل تغيير الشكل والشحنة‪ .‬مثال مركب االنلين‬
‫الذي يعطي تفلور ازرق في محيط ‪ ،pH = 5-13‬في الوسط ألحامضي ‪ pH > 5‬وبزيادة‬
‫تركيز ‪ H‬يتكون ايون االنلين الموجب الذي ال يعطي تفلور‪.‬‬

‫وكذلك في الوسط القاعدي ‪ pH < 13‬يتكون ايون االنلين السالب الذي ال يعطي تفلور ‪.‬‬
 ‫األجهزة ‪:Instrumentations‬‬
‫جهاز التفلور ‪ Spectrofluorometer :‬ويتكون من األجزاء التالية ‪:‬‬
‫‪ -1‬المصدر الضوئي مثل الزينون ‪.Xe‬‬
‫‪ -2‬موحد لون اولي‪ :‬مرشح او مفرق أولي ‪ Primary Filter‬ويسمى مرشح االثارة أيضا ويستخدم‬
‫لعزل طول موجي محدد )‪ (λex‬الثارة المواد المتفلورة في العينة‪.‬‬
‫‪ -3‬خلية النموذج‪ :‬تصنع من الكوارتز‪.‬‬
‫‪ -4‬موحد لون ثانوي‪ :‬مرشح أو مفرق ثانوي ‪ Secondary Filter‬ويسمى مرشح االنبعاث أيضا‬
‫يقوم بعزل شعاع التفلور عند طول موجي معين )‪ (λem‬والتخلص من االشعة غير المرغوب فيها‪.‬‬
‫حيث ان ‪ : λex‬الطول الموجي المستخدم لالثارة‪ :λem ،‬الطول الموجي لالنبعاث التفلور‪.‬‬
‫‪ -5‬الكاشف‪.‬‬
‫جهاز التفلور‬
 ‫‪ -2‬جهاز التفسفر ‪Spectrophosphorometer‬‬
‫حيث يكون مشابها لجهاز التفلور مع إضافة األجزاء التالية ‪:‬‬
‫‪ -1‬يستخدام مصراع دوار ‪ rotating shutter‬يسمى فسفوروسكوب ‪.Phosphoroscope‬‬
‫‪ -2‬نظام النتروجين المسال والذي يسمح لدراسة النموذج عند درجة حرارة منخفضة‬
 ‫التطبيقات‬
‫طرق البريق الضوئي ذات حساسية تقدر بـ ‪ 103‬مرة أكثر من الطرق االمتصاصية كما انها انتقائية‬
‫حيث يمكن استخدام التفلور في التحليل العضوي والالعضوي والكيميائي الحياتي والدوائي‬
‫والزراعي‪.‬‬
‫للتفسفر تطبيقات في البيولوجي والطب واالدوية والتلوث وان قياسات التفسفر أكثر حساسية من‬
‫قياسات التفلور كما انها أكثر انتقائية‪.‬‬
‫تقدير بعض المركبات الموجودة في النفط الخام ‪Crude oil‬‬
‫تقدير تراكيز بعض الصبغات النباتية مثل صبغة الكلوروفيل‪.a-‬‬