Llista:

PARÀSITS
Servolab generalllista de treballgenerar(esq)serologiatodos los puestos de
PLANNING Trabajoserologia toxogenerar(abaix)ordenar/reorganitzar(esq)serologia serologia
toxoreorganizar(abaix)imprimirserologiaserologia toxoimprimir
1. Dutxem els tubs de la gradeta de paràsits número 4 per Servolab Microbiologia  control
de muestras  seguimiento de contenedores. PROCEDIMENT
1.1. Tubs buits, comproven si tenim parelles:
1. Ordenar els tubs segons llista de treball i afegir 100ul en cada casete.
1.1.1. Parella si: els dutxem
2. Contrasenya: vidas, vidas
1.1.2. Parella no: no el dutxem
3. Icona VIDASPC
1.2. Les mostres VIDA/TOXO van pel VIDAS cada dia. 4. Seleccionar test (ex: TOXO IGM o RUB)
1.3. Servolab General: llistes de treball  mostrar  serologia (mirem les que van entrar el 5. Identificar les mostres i apretar el botó crear.
dia d’abans) 6. Seleccionar el número on carreguem els casets i puntes (es posa de color vermell) (omplim Esq
1.3.1. FH/QH/SH (codi FH):correspon a FH (fascíola hepàtica)/QH(quiste histatidic)/SH dreta)
(shistosoma) gradeta nevera Hemaglutinació (li posem les sigles al Cristian) 7. Adalt a la casella 1
1.3.2. Paràsits IFI (codi TSG): Leishmania (gradeta fons nevera), Entamoeba 8. Carreguem cartutxos i puntes
(serologia), Trypanosoma Brucei (ICT Cristian). Poden demanar IgG i IgM 9. Boleta blava
10. Quan acabi, les puntes i casetes es tiren al contenidor groc i el full de resultats surt de forma
Plasmodium (no es fa actualment però posem una P).
automàtica.
1.3.3. Strongyloides (codi STRO): serologia.
1.3.4. Codi TASIG/TOCIG/TSG: proves serologia. (TASIGcisticercosis (taena
RESULTATS
solium),TOCIGtoxocara, TSGtriquinella stercolaris).
1.3.5. Serologia TCRU-IFI (codi TASG): COBAS
1. Adalt a la dreta apuntem TOXM o RUB (num de la caixa del lot) (número de tires gastades).
1.3.6. Serologia Toxo (codi VIDA): VIDAS. 2. Escrivim resultat a la llista de treball (positiu i negatiu)
3. Firmem el full de resultats del VIDAS.
Les mostres que no es cursin aquest dia, es guarden a les gradetes per realitzar segons horari.
4. Servolab general  entrada de resultados  llista de Trabajo  serologia  serologia TOXO
5. Entrem cada resultat individualment.
*poden afegir probes de tubs realitzats  busquem que li han demanat.

Dilluns Dimarts Dimecres Dijous Divendres POSITIU Caixa positius al congelador

VIDAS VIDAS VIDAS VIDAS VIDAS NEGATIU Caixa negatius al congelador
TOXO/RBM/AVD TOXO/RBM/AVD TOXO/RBM/AVD TOXO/RBM/AVD TOXO/RBM/AVD
PCR Toxo/Chagas PCR Leishmania PCR Plasmodium PCR Toxo/Chagas
Strong/TASIG-TSG COBAS (T.cruzi) Strong/Entamoeba COBAS (T.cruzi) Strong
Confirmació
T.Cruzi (ELISA)

PCR TOXOPLASMA GONDI

VIDAS

PREPARACIÓ LLISTA:
 1. Servolab Microbiologia  lista de Trabajo  generar  paràsits  T.gondii PCR PCR TERMOCICLADOR
2. Ordenar per ordre de mostres.

1. Programa Real Time PCR.

PREPARACIÓ MOSTRA: 2. Obrim calaix de l’aparell (botó Esquerra + botó mig) i coloquem els tubs adalt a l’esquerra en ordre.
3. Device operation
 LCR: No centrifugar ni rentar. 4. Add test
Congelar en microtubs de 2ml. 5. Toxo
 Sang: Numerar els tubs Eppendorf de 1,5 ml necessaris (2 per mostra). 6. Afegir un C+, C- i el número de mostres.
Dispensar a cada tub: 1 ml de "Wash Solution" (tercer calaix) 7. Canviem seqüència segons la colocació dels nostres tubs.
Afegir 500 µl de sang a cada tub. Barrejar per inversió. 8. Posem nom de les mostres
Incubar 5 minuts a temperatura ambient. Barrejar per inversió. 9. Close  Apply  Start Run  D’acord
Centrifugar 3 min a 13000 rpm. 10. Escriptori  Runs  toxo+data
Eliminar el sobrenadant (respectar el sediment).
Afegir 1 ml de "Wash Solution". TREURE RESULTATS
Resuspendre el pellet per agitació (mixer o pipeta)
Incubar 5 minuts a temperatura ambient. Barrejar per inversió.
1. D’acord
Centrifugar 3 min a 13000 rpm.
2. Therhold:
Eliminar el sobrenadant (respectar el sediment).
 FAM:
El sediment no ha de tenir color (hemolisi). Si és necessari repetir el rentat amb “Wash Solution”.
 HEX:
Resuspender el pellet amb 10 ml de PBS (tercer calaix) (Canviar a tub de 10ml.)
3. Reportar i es generar el document
Centrifugar 5-10' a 3000 rpm. Eliminar el sobrenadant.
4. Guardar document al PC (resultatstoxo TOXO_DATA) i pendrive.
Resuspender el pellet amb 320 µl de Buffer AVE (segon calaix)
5. Imprimim resultats a l’impresora del VIDAS.
Guardar la mostra en microtub 2 ml ( Congelador -20 ºC )
Enviar alíquota CORE: 200ul de mostra tractada + 350ul Buffer Lisis Roche Extracte es guarda DNA TOXO +
POSSIBLES RESULTATS POSITIU
 L. Amniòtic: NO CONGELAR fins que no s’hagi processat (es lisa) Mostra original gradeta nevera TOXO
Traspasar la mostra en un tub cònic de tap groc. Extracte es guarda DNA TOXO -
*les mostres originals es guarden fins passat un mes. NEGATIU
Centrifugar 5-10' a 3000 rpm. Eliminar el sobrenadant. Mostra original gradeta nevera conjunta
INHIBIDA Repetim en el següent RUN
Resuspender el pellet amb 10 ml de PBS
Centrifugar 5-10' a 3000 rpm. Eliminar el sobrenadant. FULL DE RESULTATS
Resuspender el pellet amb 160 µl de AE
Guardar la mostra en microtub 2 ml ( Congelador -20 ºC )
1. Omplim els gràfics on FAM correspon al control positiu, HEX al control intern.
 Orina: Igual que L.Amniòtic.
2. Omplim plantilla amb: positiu, indetectable, inhibida
3. Omplim llista de treball amb: positiu, indetectable, inhibida.
PREPARCIÓ MIX 4. Entrada de resultats a Servolab General  control laboratorio  paràsits  buscar  TCRUZI PCR.
5. Registrem una per una.
El kit es troba el congelador ‘’PCR TOXO TREAL’’. 6. Grapem i entreguem.

- Els primers no es fa Up&Down (segon tope)

- Quan la MIX estigui acabada, es centrifufa 1 minut.
- Control negatiu: tub lila calaix 2 (RNAse Free Water)
PCR TRYPANOSOMA CRUZI (CHAGAS)  PCRTC
- Utilitzem tubs blancs pel LITE en l’ordre: (primer les mostres, C+ i al final C-)

PREPARACIÓ LLISTA:
1. Control +. Control -, Mostres MIX PCT T.REAL X1 PCR
- Fem pols a la centrigufa de plaques de la dreta. 1. Microbiologia MIX II 12,5 µl
2. Rutina diària Primer F (10 µM) 1 µl
Mix TOTAL 18 Primer R (10 µM) 1 µl
Tox P (10 µM) Sonda (tub verd) 0,5 µl
Mostra ADN 7
10x Exo IPC Mix (tub verd fosc) 2,5 µl
50x EXO IPC DNA (tub groc) 0,5 µl
 3. Lista de Trabajo 12. D’acord
4. Generar 13. Escriptori  Runs  TCRUZY+data
5. Paràsits
6. T.Cruzi PCR TREURE RESULTATS

PREPARACIÓ MOSTRA: 1. D’acord

2. Therhold:
 Sang: Afegir 5 ml de Guanidina + 5 ml de Sang (tub groc) - FAM: 1000
48 hores a temperatura ambient (mínim) - HEX: 200
550ul de la barreja al CORE BM (tubs de rosca amb etiqueta CORE). 3. Reportar i es generar el document
Donar Sortida per recepció 4. Guardar document al PC (resultatschagas CHAGAS_DATA) i pendrive.
5. Imprimim resultats a l’impresora del VIDAS.
PREPARCIÓ MIX
POSIBLES RESULTATS
MIX PCT T.REAL X1 PCR
El kit es troba el congelador ‘’PCR CRUZI TREAL’’. Extracte es guarda DNA Chagas +
MIX II 12,5 µl
POSITIU
Pr Cruzi F 1,8 µl Mostra original gradeta nevera Chagas
- Les mostres es fan per duplicat (preparem per 2 més) Pr Cruzi R 1,8 µl Extracte es guarda DNA Chagas -
- Control positiu: 1/80.000 (spin) Sonda cruzi 3 0,6 µl NEGATIU
Mostra original gradeta nevera conjunta
- Els primers no es fa Up&Down (segon tope) 10x Exo IPC Mix 2,5 µl
INHIBIDA Repetim en el següent RUN
50x EXO IPC DNA 0,5 µl
- Quan la MIX estigui acabada, es centrifuga 1 minut.
- Control negatiu: tub lila calaix 2. *les mostres originals es guarden fins passat un mes.
- Utilitzem tubs blancs pel LITE en l’ordre: 1-mostres, 2-control neg i 3- control pos.
- Fem pols a la centrigufa de plaques de la dreta. Mix TOTAL 19,7 FULL DE RESULTATS
Mostra 5,3
ADN 1. Omplim els gràfics on FAM correspon al control positiu, HEX al control intern.
PCR TERMOCICLADOR 2. Omplim plantilla amb: positiu, indetectable, inhibida
3. Omplim llista de treball amb: positiu, indetectable, inhibida.
1. Programa Real Time PCR. 4. Entrada de resultats a Servolab General  control laboratorio  paràsits  buscar  TCRUZI
2. Obrim calaix de l’aparell (botó Esquerra + botó mig) i coloquem els tubs adalt a l’esquerra en PCR.
ordre. 5. Registrem una per una.
3. Device operation 6. Grapem i entreguem.
4. Add test

5. PCR CHAGAS PCR PLASMODIUM

6. Afegir un C+, C- i el número de mostres.
7. Canviem seqüència segons la colocació dels nostres tubs. (Fill: Esquerra a dreta; Dalt abaix). PREPARACIÓ LLISTA:
8. Posem nom de les mostres
9. Close
1. Microbiologia
10. Apply
2. Rutina diària
11. Start Run
 3. Lista de Trabajo
4. Generar
5. Paràsits Mix 1 TOTAL 20
6. T.Plasmodium PCR Mostra DNA o 10
control
PREPARACIÓ MOSTRA

500 ul de mostra total a un tub de rosca + etiqueta cap al CORE BM.

Mix I:

 P.ovale Mix 2 TOTAL 20

 P.malariae Mostra DNA o 10
 P.knowlesi control

Mix II:

- P.vivax
- P.falciparum

Cada mostra ha d’estar per duplicat, una per una MIX I i un altre per la MIX II. Cada MIX té els
seus controls respectius.
S’utilitza la plantilla de la malària a qualsevol dels dos termocicladors.

Preparació de la MIX:

Master Mix I
N de reaccions 1 12
Master A mix 1 5µl 60µl
Master B mix 1 15µl 180µl
Control intern 1µl 12µl
Volumen Master Mix 21µl 252µl

Master Mix 2
N de reaccions 1 12 LEISHMANIA
Master A mix 2 5µl 60µl
Master B mix 2 15µl 180µl PREPARACIÓ LLISTA:
Control intern 1µl 12µl
Volumen Master Mix 21µl 252µl 1. Microbiologia
2. Rutina diària
3. Lista de Trabajo
 4. Generar
5. Paràsits
6. Leishmania PCR TREURE RESULTATS

PREPARACIÓ MOSTRES 1. D’acord

2. Therhold:
Sang total: 250ul de sang total + 250ul H20 lliure de nucleases (nevera)  FAM:
 HEX:
Biopsia cutánea: agafem un morter amb la biopsia i afegim 190ul Buffer Hamilton (pot gran 3. Reportar i es generar el document
calaix) + 10ul de proteinasa K. Aquesta barreja la passem a un eppendorf i estarà tota la nit al 4. Guardar document al PC (resultatsLEISHMANIA LEISHMANIA_DATA) i pendrive.
termobloc de la Marisa. 5. Imprimim resultats a l’impresora del VIDAS.

POSIBLES RESULTATS
PREPARACIÓ MIX
Extracte es guarda DNA Leishmania +
Reactiu Volum (ul)/tub POSITIU
Mostra original gradeta nevera Leishmania
TP biotools 10x 15
Extracte es guarda DNA Leishmania -
Oligo R3 15 uM 1.33 NEGATIU
Oligo R4 15 uM 0,66
Mostra original gradeta nevera conjunta
Oligo Huf 12,5 uM 0,009 INHIBIDA
Oligo Rev 12,5 uM 0,45
Sonda L1 10 uM 0,2 *les mostres originals es guarden fins passat un mes.
Sonda 18S2 10 0,2
uM
Aigua 2,07
FULL DE RESULTATS
Total 20
Mix TOTAL 20
1. Omplim els gràfics on FAM correspon al control positiu, HEX al control intern.
Mostra 10
2. Omplim plantilla amb: positiu, indetectable, inhibida
ADN
3. Omplim llista de treball amb: positiu, indetectable, inhibida.
PCR TERMOCICLADOR 4. Entrada de resultats a Servolab General  control laboratorio  paràsits  buscar 
5. Registrem una per una.
1. Programa Real Time PCR. 6. Grapem i entreguem.
2. Obrim calaix de l’aparell (botó Esquerra + botó mig) i coloquem els tubs adalt a l’esquerra en
ordre.
3. Device operation

COBAS CMIA(TASG)

4. Add test 1. Servolab General

5. PCR Leishmania 2. Listas de Trabajo
6. Afegir un C+, C- i el número de mostres.
7. Canviem seqüència segons la colocació dels nostres tubs. (Fill: Esquerra a dreta; Dalt abaix).
3. Generar
8. Posem nom de les mostres 4. Serologia
9. Close  Apply Start Run  D’acord 5. Todos los puestos de trabajo
10. Escriptori  Runs  LEISHMANIA+data
 6. Serologia TCRU-IFI
7. Ordenar Tubs
8. Ens dirigim al COBAS PURE
9. Menú
10. Sol·licitar pruebas
11. Escanegem mostres i agefim la proba de CHAGAS
12. Guardem
13. Quan acabi, seleccionem totes les mostres, generem un informe i imprimir.

CONFIRMATORI

ELISA STRONGYLOIDES, TAENIA SOLIUM (TASIG), TRICHINELLA (TSG), ENTAMOEBA

Els kits es troben a la nevera de la dreta. Tots tenen el mateix funcionament de reactius i temps i es poden muntar junts. 15. Rentat
16. Pipetejar 100ul de substrat a cada pouet.
Llista de treball:
17. Incubar 15 minuts a temperatura ambient al calaix.
18. Pipetejar 100ul de solució de parada (canvi de color blau a groc)
- Strongyloides: Servolab general  llista de treball  serologia  Strongyloides
- TASIG (cisticercosis (taena solium): 19. Mesurar a 450/620 nm al lector de plaques ELISA.
- TSG (triquiniella stercolaris) - Demo 2 (apretem F2)
- TOCIG (toxocara) - Start i introduïm la placa de treball
- Entamoeba - Clicquem Start
- Esperem que es faci la lectura i introduïm el Pendrive pel lateral
Tindrem mostres per repetir, llavors a la llista apuntem els valors anteriors.
- File  exportar  ok i esperem fins que apareguin dades exportades.
Les mostres per repetir es fan per duplicat. - Imprimim al ordinador del VIDAS (no treiem la lectura del lector fins que estigui imprès)
- El full ha d’estar en horitzontal.

MATERIAL
RESULTATS
- Plaques de microdilució
- Kit (tots menys Strongyloides, es troben al primer calaix del congelador) EXCEL STRONGYLOIDES
- Solució wash (50 ml + 950 H2Od).
Busquem a la FMicrobParàsitsELISA.
PROCEDIMENT
1. Dutxem els tubs (repetits dos cops a la columna de la dreta)
2. Escribim les absorbàncies a la columna de l’esquerra
1. Preparem placa blanca (primer calaix esquerra) (Blanc - C+ - C- Cutoff – Cutoff - Mostres)
3. Seleccionem la taula d’interes i imprimim la selecció
2. Encenem el lector d’absorbàncies.
4. Guardem como perquè això nomes es una plantilla.
3. Dilució de les mostres: 10ul de mostra + 1000ul de tampó diluïent de mostres.
4. Vortex mostres i controls. FULL DE TREBALL
5. Pipetejar 100ul de C +, 100ul de C -, 100ul Cut off i 100ul de mostres diluïdes a la resta de pouets.
6. Omplir les tires amb pouets negres. 1. Apuntem el valors que ens ha indicat el càlcul a l’excel.
7. Tapar les tires amb tires autoadhesives. 2. Les mostres repetides apuntem els dos valors + el de la tanda anterior i ens quedem amb el
8. Agitador de plaques durant 1 minut. número del mig.
9. Incubar 1 hora a 37 graus (estufa Alex). - Negatiu: < 0.9
10. Durant la incubació, encenem el rentador i fem un cebado amb H20d: - Positiu: > 1.1
- Quick - Dubtós: 0.9-1.1
- Prime
- Start Els valors que es trobin en valor dubtós es repetiran al dia següent de fer la tècnica.
11. Repetim el procés però amb WASH
12. Rentat Servolab general  entrada resultados  llista Trabajo  serologia Strongyloides. Apuntem cada
- Número de cicles (5) resultat amb un valor numèric.
- Número de tires
POSITIU Caixa positius al congelador
- Canal A (Wash)
NEGATIU Caixa negatius al congelador
13. Pipetejar 100ul de conjugat a cada pouet

14. Incubar 30 minuts a temperatura ambient al calaix.