8.

PLASMIDIS i CONJUGACIÓ
8.1. Es disposa de les soques d’E. coli UA98(pUA983), UA99(pUA793) i UA1001 (RecA- Pro- Tyr-
R R
Rif ). El plasmidi pUA983 (IncP Km Repts) presenta entre 30-40 còpies per cromosoma i el
R
pUA793 (IncP Tet ) entre 1-2 còpies per cromosoma. Es realitza la següent conjugació
triparental UA1001 x UA98 (pUA983) x UA99(pUA793 )i la mescla de conjugació se sembra en
plaques LB Tet Rif i LB Km Rif, incubant una serie de cada una d’elles a 30oC i una altra a 42oC.
Respon les següents qüestions, suposant que durant la conjugació les soques receptores
sempre han rebut tots dos plasmidis.

a)Quines plaques i quina temperatura d’incubació s’han d’usar per obtenir transconjugants
que hagin incorporat el plasmidi pUA983?

Plaques LB amb Rif i Km incubant a 30oC

Plaques LB amb Rif i Km incubant a 42oC
Plaques LB amb Rif i Tet incubant a 30oC
Plaques LB amb Rif i Tet incubant a 42oC

b)Quines plaques i quina temperatura d’incubació s’han d’usar per obtenir transconjugants
que hagin incorporat el plasmidi pUA793?

Plaques LB amb Rif i Km incubant a 30oC

Plaques LB amb Rif i Km incubant a 42oC
Plaques LB amb Rif i Tet incubant a 30oC
Plaques LB amb Rif i Tet incubant a 30oC
Plaques LB amb Rif i Tet incubant a 42oC

R R
c)Podrien obtenir-se clons Km Tet a 42oC?

Sí NO

8.2. S'ha de realitzar la següent conjugació:

R R
E. coli (RP4) Ap x P. putida HsdR- Rif

a)Amb quins antibiòtics s’hauran de suplementar les plaques selectives per a seleccionar els
clons conjugants?

Amb rifampicina
Amb ampicil·lina
Amb rifampicina i ampicil·lina
No caldrà afegir antibiòtics

b)Quina és la soca donadora en aquesta conjugació?

R
E. coli (RP4) Ap
R
P. putida HsdR- Rif
No hi ha soca donadora en aquesta conjugació biparental
No hi ha soca donadora perquè es tracta d'una conjugació triparental
c) Quina és la soca receptora en aquesta conjugació?
R
E. coli (RP4) Ap
R
P. putida HsdR- Rif
No hi ha soca donadora en aquesta conjugació biparental
No hi ha soca donadora perquè es tracta d'una conjugació triparental

d) Si P. putida hagués estat HsdR+ s’obtindrien més o menys colònies per placa?

Més, perqué no seria un mutant HsdR-

Més, perquè seria més compatible amb la soca d'E.coli
Menys, perquè actuaria el sistema de restricció-modificació
Menys, perquè la soca seria resistent

e)Quina eina biològica s’hauria d’incorporar en l’experiment si el plasmidi RP4 només fos
mobilitzable?

Un plasmid "helper" que portés la regió mob

Un plàsmid "helper" portador dels gens tra
Un plàsmid "helper" portador dels gens hsdRM
Un plàsmid "helper" portador dels gens de resistència

R R
8.3. Els plasmidis pUA357 (Km ) i pUA412 (Tet ) pertanyen al mateix grup d’incompatibilitat,
no presenten transposons i ambdós són estables a E. coli i tenen el mateix número de còpies
per cromosoma. Ambdós plasmidis s’introdueixin a la vegada per conjugació en una soca
R S s
salvatge d’E. coli. Dels transconjugants obtinguts, el 49,5 % son Tet Km , el 49,5 % son Tet
R R R
Km , i l’1 % són Tet Km . En canvi, al realitzar el mateix experiment, però amb una soca d’E.
coli RecA- com a soca receptora no s’obtenen conjugants que presentin les dues resistències.
Com s’explica que en el primer cas s’obtinguin conjugants resistents als dos antibiòtics?

a)Per la formació d’un cointegrat entre els dos plasmidis degut a la presència d’un transposó
de tipus II.

b)Per la formació d’un cointegrat per recombinació entre les zones d’homologia que poden
presentar ambdós plasmidis atès que pertanyen al mateix grup d’incompatibilitat.

c)Per la formació d’un cointegrat per recombinació degut a que al ser plasmidis diferents no
presentaran cap regió d’homologia entre ells.

d)Els resultats no són correctes ja que els dos plasmidis poden coexistir perfectament en la
mateixa cèl·lula atès que pertanyen al mateix grup d’incompatibilitat.

8.4. Qué és mès fácil que s’integri en el cromosoma d’una cèl.lula bacteriana, un plasmidi R ó
un plasmidi R’?

Un plasmidi R’ Un plasmidi R
8.5. Es fa una conjugació
jugació entre una soca Hfr d’ E. coli prototròfica amb una altra de la
mateixa espècie que és F- i presenta el fenotip Thr- Pro- Trp- Leu- StrR. Es prenen
mostres a diferents temps i es sembren alíquotes en les plaques adecuades per obtener
els diferents tipus de recombinants que es presenten en el gràfic adjunt

Es demana

a) Determinar l’ordre relatiu dels

del genes thr, pro, trp , i leu en el cromosoma de la soca
Hfr.

b) Dibuixar les corbes esperables pels següents tipus de recombinants:

recombinant

b.1) Leu+ Thr- Pro- Trp-

b.2) Leu- Thr+ Pro+ Trp+

b.3) Leu- Thr+ Pro- Trp+

8.6. Es sospita que una soca Hfr de Salmonella typhimurium és lisogènica per un
bacteriòfago, peró no es coneix ni el puntt d’inici ni el sentit de la transferència
del cromosoma en aquesta soca.
soc S’ha realizat unaa conjugación ininterrumpida
-
amb una soca receptora F resistent a l’esmentat bacteriòfag i amb el genotipo
pro tyrA trp thy strA s ‘han obtingut els següents resultats:
 % Recombinants

Caràcter seleccionat Pro+ Tyr+ Trp+ Thy+

______________________________________________________

Pro+ 100 36 72 3

Trp+ 68 80 100 6

Tyr+ 25 100 78 4

D’acord amb aquestes dades, quin sería el punt d’integració del profag en el cas
que la cepa Hfr fós lisogènica? Si l’esmentada soca no fós portadora del profag,
cóm es podríen explicar els resultats obtinguts?

Posició en el mapa de Salmonella typhimurium dels marcadors utilizats: pro

(unitat 7); trp (unitat 34); tyr (unitat 55); thy (unitat 61)

8.7. S’ha aïllat un mutant sensible a la temperatura (ts) de la soca d’E. coli UA5073
o
RecA- StrR RifR que a 42oC no creix mentres que a 30 C presenta un
comportament normal. Es vol localitzar de forma aproximada la regió del
cromosoma de UA5073 en la que es troba aquesta mutació ts. Amb aquesta
finalitat, s’utilitzaran 10 plasmidis F' (F'1, F'2, F'3, …F'10) que porten cadascun
d’ellos 10 min succesius del cromosoma d’E. coli (el plásmido F'1 porta els 10
primers minutos, el F'2 els segons 10 min, y axí succesivamene). A més,
cadascun d’aquests plasmidis porta insertat un transposó Tn10 (TcR) en el gen
finP.

a) Sabent que els 10 plasmidis F' es troben en 10 clons de la soca d’E. coli
RecA- Strs Rifs, quines plaques s’haurien d’utilizar i a quina temperatura
s’hauríen d’incubar per localitzar l’esmentada mutació ts després de les
corresponents conjugacions?

b) Es imprescindible que la soca donadora sigui RecA-? I la receptora?

8.9. Un colega de la universitat de Paris ens ha enviat una soca d’Enterococcus
faecalis que és capaç de conjugar amb una soca d’Escherichia coli. Mitjançant
quin mecanisme de transferència genètica es realitzarà aquesta conjugació?

a) Feromones sintetitzades per E. faecalis

b) Feromones sintetitzades per E. coli

c) Transposó conjugatiu pressent a E. faecalis

d) Pilis sintetitzats a E. coli

8.10. Per quina(es) raó(ns) el plasmidi pUA8987 no es pot replicar en una soca d’E.
coli portadora d’una mutació dnaAts quan la transferim a la temperatura restrictiva
o
de 42 C?

a) El plasmidi pUA8987 és replica mitjançant un sistema de RNA I i RNA II

b) El plasmidi pUA8987 utilitza la proteína DnaA d’E. coli per iniciar la seva

replicació

c) El plasmidi pUA8987 utilitza per la seva replicació una proteína RepA

codificada per ell mateix que està sota el control positiu de la proteína

DnaA de l’hoste

d) El plasmidi Rt89 és replica mitjançant el sistema de RNA I i RNA II utilitzant la

proteína DnaA de l’hoste

8.11. Que podem dir respecte els plasmidis R345 i R456 si no es poden mantenir tots dos de

forma autónoma en el citoplasma d’una soca d’ E. coli malgrat cada un d’ells es

estable per sí sol en aquesta soca?