Professional Documents
Culture Documents
انًخزجش االٔل
إعذاد
و.و .صْشاء عجذ ادًذ
كلٌة العلوم -لسم التمنٌات االحٌائٌة -انًشدهخ انشاثعخ
.2توفٌر المادة االساس المالئمة لنمو الكائن المجهري المعٌن وانتاج المادة المعٌنة.
.3توفٌر افضل الظروف البٌئٌة والتغذوٌة لهذا العامل المساعد للمٌام بعمله.
تحوٌر هذا الكائن بواسطة الطفرات الوراثٌة والهندسة الوراثٌة للحصوول علوى اعلوى .4
كمٌة من المنتج المطلوب.
تصوومٌم مفاعوول لعموول العاموول المسوواعد والسووٌطرة علووى كوول الظووروف الفٌزوكٌمٌائٌووة .5
مون الفضوالت الناتجوة والباٌولوجٌة بداخله مع االهتمام بالناحٌة االلتصادٌة والوتخل
موووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووون العملٌووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووة االنتاجٌووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووة .
.2باالمكان زراعة كمٌات كبٌرة من الخالٌا المٌكروبٌة وتحت ظروف مسٌطر علٌها .
.3لهووا الموودرة علووى النمووو مووواد اولٌووة رخٌصووة الووثمن ومتوووفرة فووً الطبٌعووة مثوول مخلفووات
المصانع او المخلفات الزراعٌة النتاج المادة المطلوبة.
.4اضافة لمدرتها على التطبع بسهولة علوى الظوروف التغذوٌوة والبٌئٌوة المختلفوة ,وبوذلن
ٌسهل نملها من البٌئوة الطبٌعٌوة الوى المختبور وتنمٌتهوا علوى مصوادر كربونٌوة ونٌتروجٌنٌوة
رخٌصووووة الووووثمن وانتوووواج مركبووووات ذات لٌمووووة علووووى المسووووتوى الصووووناعً وااللتصووووادي.
.4تمتلن األحٌاء المجهرٌوة العدٌود مون التفواعالت الكٌمٌائٌوة والمسوارات األٌضوٌة بموا
ٌوووفر امكانٌووة الحصووول علووى منتجووات مختلفووة اضووافة المتالكهووا مسووارات اٌضووٌة سووواء
تخلٌمٌة او هدمٌوة متنوعوة للموادة الواحودة علوى عكوس الخالٌوا الرالٌوة التوً تكوون فٌهوا
المسارات محدودة.
.5االنظمووة الوراثٌووة فووً االحٌوواء المجهرٌووة تكووون ابسووط موون االنظمووة الوراثٌووة فووً
الكائنات الرالٌة وهذا ٌسهل من التالعب الجٌنوً ( التطفٌور او الكلونوة ) (Cloningبهوا
و امكانٌة ادخال الصفات المرغوبة كما فً حالوة اسوتخدام البكتٌرٌوا انتواج االنسوولٌن و
االنتروفٌن وهرمونات النمو البشرٌة لتطوٌر علم تمنٌة االحٌاء المجهرٌة الصناعٌة.
.6االحٌاء المجهرٌة ال تخضع لموانٌن الشٌخوخة.
.7تتم غالبٌة التفاعالت الحٌوٌة التً تموم بها االحٌاء المجهرٌة تحدث فً وسوط موائً
وتحووت ظووروف معتدلووة موون الحوورارة والحموضووة والضووغط اضووافة لمووا تمتوواز بووه موون
مما ٌجعلها أكثر التصادٌة. تخص
ٚفضم اَزخبة انعضنخ انز ٙرسزطٛع انًُٕ عهٗ يٕاد أنٛةخ سخٛصةخ انة ًٍ ٔ يزةٕفشح ٔركةٌٕ راد (1
كفبءح عبنٛخ ف ٙرً ٛم انًٕاد انًبدح انخبو انًسزعًهخ .
ٚجت اٌ ركةٌٕ َقٛةخ نةٛس فقةظ يةٍ ثةبق ٙاالدٛةبء انًجٓشٚةخ انزةًٚ ٙكةٍ رًٛٛضْةب يجٓشٚةب ٔاًَةب (2
خبنٛخ يٍ انـ phage
رُزخت انعضالد راد االَزبج انصُبع ٙانعبن ٙنهًبدح انًطهٕثخ ثعذ اجشاء عًهٛبد انعضل االٔنٛخ. (3
يةٍ رُزخت انعةضالد انزة ٙركةٌٕ َٕارجٓةب انعش ةٛخ قهٛهةخ ٔ نٛةش يُزجةخ نهسةًٕو رذةذ ا٘ ةش (4
انظشٔ -.
اَزخبة انسالالد ان بثزخ يٍ انُبدٛخ انٕساثٛخ ٔ ال رظٓش فٓٛب بْشح رعذد االشكبل . (5
رُزخت انعضالد نٛش انًًش خ. (6
عضل ٔرُقٛخ ٔرشخٛص االدٛبء انًجٓشٚخ انصُبعٛخ
• تعوود عملٌووة عووزل االحٌوواء المجهرٌووة والحصووول علٌهووا بصووورة نمٌووة وتشخٌصووها حجوور االسوواس
االول الستخدامها فٌما بعد فً اي مون التطبٌموات الصوناعٌة ,وبوالنظر لالخوتالف موابٌن االحٌواء
المجهرٌوة بسوبب االخووتالف موابٌن بٌئووات تواجودها فبالتأكٌود سووٌنعكس ذلون وبشووكل جووهري فووً
عملٌات التأٌض التً تموم بها االحٌاء المجهرٌة .
تختلف طرائك العزل اعتمادا على الكائن المراد عزله والبٌئوة المسوتهدفة الجوراء عملٌوة العوزل •
منها والهدف من الكائن المعزول ( اي المادة المطلوب انتاجها من الكائن المجهري).
الممصود بعملٌة عزل االحٌاء المجهرٌة هو الحصول على مزرعوة نمٌوة ) )Pure cultureأي •
أنها تحوي على االحٌاء المجهرٌة بصورة نمٌةسواء كانت مفردة Single cultureأو مختلطة
• . Mixed culture
• هنان نمطة مهمة من الواجب التفكٌر بها عند عملٌة العزل وهً ان االحٌاء المجهرٌة
الحاملة للصفة المرغوبة البد ان تكون مفٌدة لها فً بٌئتها التً تعٌش فٌها .ومن هوذا
المنطلووك ٌالحووظ ان للبٌئووة التووً تعووزل منهووا االحٌوواء المجهرٌووة الثموول االكبوور فووً نجوواح
عملٌات العزل وذلن الن االحٌاء المجهرٌة موجودة منذ المدم وهً موزعوة وفوك نظوام
ووفك لاعدة البماء لالصلح ,حٌث انه خوالل عملٌوات التطوور توم تسولٌط ضوغوط خا
انتخابٌة على االحٌاء المجهرٌة ادت الى انتخواب المجموعوة التوً ٌمكون ان تمواوم هوذه
الضغوط ,فمثال فً بٌئوة ملحٌوة وضوعت اعودادا كبٌورة ومختلفوة مون االحٌواء المجهرٌوة
فوجووود الملووح كعاموول انتخووابً سووٌلدي الووى لتوول االحٌوواء المجهرٌووة عامووة وتبمووى فمووط
الخالٌا التً لها المابلٌة على مماومة الملح والتكاثر فً مثل هوذه البٌئوة وبعود مودة تبودأ
هووووووذه االحٌوووووواء بالتكوووووواثر واالنتشووووووار فووووووً هووووووذه البٌئووووووة وتكووووووون هووووووً الشووووووائعة .
انعٕايم انًؤثشح ف ٙانعضل ٔاالَزخبة
• من الضروري جدا الحفاظ على الضغوط االنتخابٌة الموجودة فوً بٌئوة العوزل
اثناء عملٌة العزل النجاح عملٌة العزل ومن اهم هذه العوامل هً:
.1االوسوواط الزرعٌووة :تعوود االوسوواط الزرعٌووة المسووتخدمة فووً العووزل موون اهووم
الضغوط االنتخابٌة التً ٌمكن االستفادة منها ,اذ تختلوف االحٌواء المجهرٌوة
فً متطلباتها التغذوٌة فبعضها تكون ذات متطلبات معمدة مثل بكترٌا حامض
الالكتٌن لذلن ٌجوب ان ٌضواف الوى االوسواط المسوتخدمة فوً عزلهوا مركبوات
معموودة مثوول البروتٌنووات والفٌتامٌنووات ,فووً حووٌن االحٌوواء المرضووٌة ٌضوواف
بالزمووا الوودم الووى االوسوواط لتزوٌوودها بالمركبووات المعموودة ,أي انووه ٌراعووى فووً
الوسط حاجة الكائن المجهري الى مصادر الكاربون والنتروجٌن او مدعمات
نمو خاصة وغٌرها لغرض النمو او لغرض تخلٌك منتجات معٌنة ,
• فعلى سبٌل المثال عندما ٌراد عزل كائن مجهري منتج لالٌبٌزات ٌمكن ان ٌحور الوسط الزرعوً
المجهز للعزل باستبدال مصدر الكاربون والطالة الموجود فً الوسط بموادة دهنٌوة ( كلسوٌرٌدات
ثالثٌة او توٌن ) 80كمصودر وحٌود للكربوون وبوذلن نكوون لود سولطنا ضوغطا انتخابٌوا لعوزل هوذا
الكائن المجهري وهكذا ,وعلٌه ٌمكون تحووٌر الوسوط الزرعوً بموا وٌوتالئم موع عملٌوة العوزل موع
االخذ بنظر االعتبار عند تحوٌر الوسط الزرعً ان الهدف االساس منه هو لٌس توفٌر الظوروف
المثلى للنمو والتكاثر وانما الهودف تسولٌط ضوغوط انتخابٌوة مون خوالل التالعوب بمكونوات الوسوط
الزرعً مما ٌوفر فرصة للحصول على الكائن المجهري المرغوب على حسواب االنوواا األخورى
التً لد تكون موجودة فً الوسط.
• ٌمكوون ان ٌسووتعمل فووً عملٌووة العووزل اوسوواط زرعٌووة اخوورى مختلفووة اعتمووادا علووى نوووا الكووائن
المجهري المستهدف فمثال ممكن ان تستعمل االوساط الزرعٌة اآلتٌة فً عملٌة العزل:
-1أسبط نزائٛخ اَزخبثٛخ أ اَزقبئٛخ Selective
media
• (اَزقبئٚ )ٙذزٕ٘ عهةٗ يةبدح ر ةجظ ًَةٕ ثعةا اَةٕات انجكزٛشٚةب ثًُٛةب رسةبعذ ًَةٕ اَةٕات
اخشْٖٔ .زا انُٕت يٍ االٔسبط ٚسبعذ فة ٙانذصةٕل عهةٗ يضسعةخ َقٛةخ يةٍ يجًٕعةخ
يزُٕعخ يٍ انجكزشٚب ,ي م بٌئوة Macconkey agarانذةبٔ٘ عهةٗ بةج خ انكشٚسةزبل
انجُفسةةج Crystal violet ٙثزشكٛةةض يعةةٚ ٍٛةةؤد٘ إنةةٗ ًَةةٕ يخزهةةت رَةةٕات انجكزٛشٚةةب
انسةةبنجخ نصةةج خ جةةشاو ًُٔٚةةع ًَةةٕ انجكزٛشٚةةب انًٕججةةخٔ .يةةٍ االي هةةخ االخةةشٖ عهةةٗ ْةةزا
انُٕت يٍ االٔسبط ( Salmonella Shigella Agar(S.S Agarانذبٔ٘ عهٗ (bile
) salts &Na-citrateانهز ٍٛال رسًخ ثًُٕ انجكزٛشٚب انًٕججخ نصج خ جشاو ٔثعةا
انجكزٛشٚب انسبنجخ نصج خ جشاو يبعذا ) .)Salmonella ٔShigella
-2أسبط نزائٛخ رفشٚقٛخ Differential media
• وسوووط ٌضووواف لوووه بعوووض الموووواد الكٌمٌائٌوووة او الطبٌعٌوووة للتفرٌوووك بوووٌن نموووو
المجامٌع المختلفة من البكتٌرٌا أي انها اوساط ٌمكن ان ٌظهور فٌهوا أكثور مون
نوووا موون االحٌوواء المجهرٌووة والتووً ٌمكوون التمٌووز فٌمووا بٌنهووا موون خووالل بعووض
التغٌرات التً تحصل بالوسط نتٌجة نموها كتغٌر لون الوسط مثال وتسمى هذا
االوساط فً بعض االحٌان ب Indicator Media,مثل:
• -5ا ةةبفخ انةةٗ انضة ٕط االَزخبثٛةةخ اعةةالِ ًٚكةةٍ جعةةم انٕسةةظ اك ةةش اَزخبثٛةةخ
ثم بفخ ثعا انً جطبد ي م انًضبداد انذٕٚٛخ ,انصج بد ٔثعا االيةالح ,
يضةةبداد انجكزشٚةةب ٔٚفضةةم فعُةةذيب ٚةةشاد عةةضل انخًةةبئش أ انفطشٚةةبد رضةةب
ي جطةبد ا بفخ اك ش يٍ يضةبد نزكةٌٕ انعًهٛةخ اك ةش كفةبءح ٔثةبنعكس رضةب
انخًبئش ٔاالعفبٌ عُذ عضل انجكزشٚب.
• -8التهوٌة :التحكم بظوروف التهوٌوة مهوم جودا فعنودما ٌوراد عوزل
االحٌوواء الالهوائٌووة تتخووذ كافووة االجووراءات الالزمووة ,فمووثال ٌضوواف
لالوسوواط الزرعٌووة بعووض المووواد المختزلووة مثوول السٌسووتٌن وتحفووظ
االطباق فوً اوعٌوة محكموة الغلوك ٌوتم تفرٌغهوا وملئهوا بغواز خامول
مثل النتروجٌن .اما عندما ٌراد عوزل االحٌواء الهوائٌوة فأنوه تووفر
كمٌة كبٌرة من االوكسجٌن.