Machine Translated by Google

Tạp chí của Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx

Danh sách nội dung có sẵn tại ScienceDirect

Tạp chí của Đại học King Saud – Khoa học

trang chủ tạp chí: www.sciencedirect.com

Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và tiềm

năng ứng dụng trong lọc nước cam

Asia Ahmed, Muhammad Sohail

Khoa Vi sinh, Đại học Karachi, Karachi 75270, Pakistan

thông tin bài viết trừu tượng

Lịch sử bài viết: Mục đích: Pectinase được sử dụng trong ngành công nghiệp nước ép trái cây để tăng sản lượng nước ép và tăng
Nhận vào ngày 8 tháng 12 năm 2018
cường quá trình làm trong bằng cách giảm độ đục và độ nhớt. Nghiên cứu hiện tại tập trung vào việc mô tả đặc
Sửa đổi ngày 22 tháng 1 năm 2019 điểm của việc điều chế pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và đánh giá ứng dụng của nó trong việc làm trong
Được chấp nhận ngày 24 tháng 7 năm 2019
nước cam.
Có sẵn trực tuyến xxxx
Phương pháp: Chế phẩm pectinase từ AA15 được đặc trưng để xác định nhiệt độ và pH tối ưu cho hoạt tính và độ
ổn định nhiệt của nó trong môi trường axit. Xem xét các đặc tính mong muốn do enzyme thể hiện, nó đã được áp
Từ khóa:
dụng để làm trong nước cam và các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình làm trong được tối ưu hóa bằng cách sử
Thiết kế hộp Behnken
dụng phương pháp phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM).
Pectinase
Kết quả: Enzim này thể hiện hoạt tính cao nhất khi ủ ở 35 C trong 25 phút trong dung dịch đệm có độ pH 5. Enzim
Ổn định nhiệt
Men này không mất bất kỳ hoạt động nào trong tối đa 1 giờ ở 30 C. Trong khi đó, hoạt tính giảm xuống còn 82% và 67%
khi ủ trong 1 giờ ở nhiệt độ tương ứng là 35 C và 40 C. Hơn nữa, độ ổn định của enzyme khi được đặt trong
dung dịch đệm có pH 2–3 là rất đáng chú ý. Đặc tính hoạt động của pectinase chiết xuất được ở nhiệt độ trung
bình trong môi trường axit cho thấy nó thích hợp ứng dụng trong công nghiệp chế biến nước ép trái cây. Do
đó, các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình làm trong nước cam, bao gồm nhiệt độ, thời gian xử lý và lượng enzyme
được tối ưu hóa bằng cách sử dụng phương pháp RSM và hiệu suất làm trong đạt được là 61% trong điều kiện tối
ưu.
Kết luận: Chế phẩm pectinase được cho là thích hợp để làm trong nước cam và dữ liệu mô tả khả năng ứng cử của
chủng này cho các ứng dụng công nghệ sinh học trong tương lai.
2019 Các tác giả. Sản xuất và tổ chức bởi Elsevier BV thay mặt cho Đại học King Saud. Đây là bài viết truy
cập mở theo giấy phép CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

1. Giới thiệu
Pectinase thể hiện tầm quan trọng sống còn trong lĩnh vực công
nghệ sinh học hiện nay. Chúng được sử dụng rộng rãi trong quá trình
quét sinh học bông, ủ và khử keo sợi thực vật, lên men cà phê và
trà, chiết xuất dầu thực vật, tẩy trắng giấy và xử lý nước thải
pectic. Trong công nghiệp chế biến thực phẩm, nó được sử dụng để
chiết xuất và làm trong nước ép trái cây (Baumann, 1981). Pectinase
vi sinh vật chiếm khoảng 25% doanh số bán enzyme thực phẩm trên toàn
thế giới. Phần lớn trong số đó thu được từ nấm sợi, đặc biệt là từ
A. niger (Jayani et al., 2005, dos
Santos và cộng sự, 2016). Các chế phẩm thương mại của pectinase từ
nguồn nấm có chứa hỗn hợp các enzyme phân giải pectin với các protein
khác. Mặc dù, một loại hoạt động pectinase duy nhất cần thiết cho
một số quy trình công nghiệp, chẳng hạn như để làm trong nước cam.
Vì vậy, các nguồn pectinase thay thế cần phải được đánh giá. Nấm men
sản xuất ra nhiều enzym khác nhau với số lượng đáng kể và có thể là
nguồn hiệu quả để sản xuất pectinase. Nấm men có một số lợi thế so
với nấm sợi như nhiều loài được coi là GRAS và thường tạo ra một
loại pectinase duy nhất (Lessa et al., 2018). Hơn nữa, thời gian
tạo nấm men ngắn hơn có thể được tận dụng để giảm giá thành enzyme
bằng cách thu được nhiều chất chuẩn hơn trong thời gian lên men
tương đối ngắn hơn (Padma và cộng sự, 2011). Tài liệu cho thấy tiềm
năng phân giải pectin của một số chi nấm men bao gồm Saccha-romyces,

Tác giả tương ứng. Kluyveromyces, Rhodotorula, Cryptococcus, Geotrichum và Candida

Địa chỉ email: msohail@uok.edu.pk (M. Sohail). (Vaughn và cộng sự, 1969; Wimborne và Rickard, 1978; Federici, 1985;
Đánh giá ngang hàng thuộc trách nhiệm của Đại học King Saud. Barnby và cộng sự, 1990).

Các thuộc tính xúc tác và tính ổn định của enzyme trong các môi
trường hóa lý khác nhau có ý nghĩa quan trọng đối với việc thương
Sản xuất và lưu trữ bởi Elsevier mại hóa chúng. Đặc điểm sinh hóa của enzyme

https://doi.org/10.1016/j.jksus.2019.07.002
1018-3647/ 2019 Các tác giả. Sản xuất và tổ chức bởi Elsevier BV thay mặt cho Đại học King Saud.
Đây là bài viết truy cập mở theo giấy phép CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và ứng dụng tiềm năng của nó trong việc
lọc nước cam, Tạp chí của Đại học King Saud –Science, https://doi.org/10.1016/j. jksus.2019.07.002
Machine Translated by Google

2 A. Ahmed, M. Sohail / Tạp chí Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx

hỗ trợ duy trì mức hoạt động dự định trong thời gian dài hơn và cải thiện tính cố định chủng bản địa, AA15 của Geotrichum candidum, trên lõi ngô và để sản xuất

ổn định (Celestino và cộng sự, 2006). Đặc tính xúc tác và trọng lượng phân tử pectinase tiếp theo (Ejaz et al., 2018). Trong nghiên cứu này, chế phẩm pectinase

của pectinase khác nhau ở các vi sinh vật khác nhau (Kaur và cộng sự, 2004). Tuy từ AA15 được xác định đặc tính để xác định hoạt tính và độ ổn định của nó ở

nhiên, nấm men và nấm mốc được biết là tạo ra pectinase có thể hoạt động trong nhiệt độ và độ pH khác nhau. Hơn nữa, enzyme thô được sử dụng để làm trong nước

điều kiện có tính axit như trong nước ép trái cây (Kumar và Sharma, 2012). cam và ba trong số các biến số đã được tối ưu hóa bằng cách sử dụng RSM.

Sự hiện diện của các thành phần khác nhau của trái cây, chẳng hạn như

pectin, làm cho nước ép của nó không trong (Vaillant và cộng sự, 1999) và mức

pec-tin tăng cao dẫn đến hình thành chất keo, một vấn đề thường gặp phải trong 2. Vật liệu và phương pháp
quá trình sản xuất nước ép trái cây trong. Mặc dù, quá trình lọc có thể được

thực hiện để tách các hạt bột lơ lửng này nhưng sự tồn tại của pectin gây ra
2.1. Sản xuất pectinase
một số cản trở do cấu trúc phân tử giống như sợi của nó (Sulaiman và cộng sự,

1998). Ngoài ra, enzyme pectinolytic đã được sử dụng để khử pectin hóa trong
G. candidum AA15 được lấy từ bộ sưu tập nuôi cấy của Bộ và được nuôi cấy
các loại nước ép khác nhau bao gồm táo, cam, mosambi, chuối, chanh, xoài, dứa,
để sản xuất pectinase trong điều kiện tối ưu hóa như đã báo cáo trước đó
nho, ổi, đu đủ và xi-rô chà là (Patidar et al., 2018).
(Ahmed và cộng sự, 2019). Môi trường được ly tâm ở tốc độ 3000g trong 15 phút

và thu được chất nổi trên bề mặt nuôi cấy không có tế bào (CFCS) để nghiên cứu
Pectinase kết tụ pectin bằng cách tạo phức hợp với protein, do đó, nước ép thu
thêm.
được có độ nhớt thấp hơn, cuối cùng giúp tăng cường khả năng lọc, hương vị

và màu sắc. Tiền xử lý nước ép trái cây và các thực phẩm dạng lỏng chứa pectin
2.2. Xét nghiệm pectinase
khác bằng pectinase đã được đánh giá là làm thấm dòng chảy trong quá trình vi

lọc, siêu lọc và thẩm thấu ngược do sự có mặt của pectin làm tắc nghẽn màng và
Hoạt tính pectinase trong CFCS được đánh giá bằng cách xác định lượng axit
do đó làm giảm dòng (Rai và cộng sự, 2004). Thật vậy, lượng nước ép táo đã khử
galacturonic bằng phương pháp DNS (Miller, 1959) sử dụng chất đệm pectin cam
pectin tăng hơn hai lần so với nước ép chưa qua xử lý (Rao và cộng sự, 1987).
quýt (0,5% w/v) làm chất nền và axit galacturonic làm chất chuẩn. Một đơn vị

hoạt tính pectinase được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để tạo ra 1

mmole axit galacturonic trong điều kiện xét nghiệm tiêu chuẩn.

Nước ép trái cây nhiệt đới phổ biến trên toàn thế giới do hương vị của

chúng và được sử dụng thay thế cho các loại đồ uống có chứa caffeine truyền
2.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính và độ ổn định của pectinase
thống như cà phê, trà và nước ngọt có ga (Jagtiani et al., 1988). Trong số các

loại trái cây nhiệt đới, trái cây và nước trái cây họ cam quýt đóng vai trò là
Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính pectinase của AA15 đã được nghiên cứu
nguồn cung cấp vitamin C hàng ngày cho chúng ta cũng như cung cấp thêm một số
bằng cách thực hiện xét nghiệm enzyme như đã đề cập ở phần trước ngoại trừ
chất dinh dưỡng bổ sung. Cam là một trong những loại trái cây họ cam quýt nhiệt
nhiệt độ thay đổi từ 25 đến 65 C.
đới quan trọng có nguồn gốc từ châu Á (Kareem và Adebowale, 2007). Pakistan nằm
Hoạt tính pectinase (IU mL1 ) được vẽ đồ thị theo nhiệt độ và nhiệt độ tối ưu
trong một trong những quốc gia nơi sản xuất nhiều loại trái cây được trồng
được xác định. Độ ổn định nhiệt của pectinase được đánh giá bằng cách đặt CFCS
trong các điều kiện khí hậu khác nhau như táo, lê và anh đào (phát triển trong
ở các nhiệt độ khác nhau (25–65 C) trong 1 giờ, làm lạnh trên đá trong 15 phút,
điều kiện khí hậu lạnh), mơ, nho, lựu và dưa (phát triển trong điều kiện khí
sau đó thực hiện xét nghiệm pectinase để xác định hoạt tính còn sót lại của
hậu ấm áp). ) và chuối, xoài, ổi, chà là và các loại trái cây có múi (tức là
enzyme.
trái cây nhiệt đới hoặc cận nhiệt đới). Pakistan xuất khẩu số lượng đáng kể các

loại nước ép trái cây này sang các nước khác nhau và hiện có 38 đơn vị chế
2.4. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính và độ ổn định của pectinase
biến trái cây đang hoạt động ở Pakistan. Quá trình chế biến công nghiệp nước

cam đòi hỏi phải làm rõ bằng enzym do vẻ ngoài mờ đục của nó.
Ảnh hưởng của pH đến hoạt động pectinase của chủng AA15 đã được nghiên cứu

bằng cách cho CFCS thử nghiệm pectinase với sự có mặt của các chất đệm khác nhau

(pH 2,5–8) ở nhiệt độ tối ưu (35 C). Để xác định ảnh hưởng của pH đến độ ổn
Một số nghiên cứu đã báo cáo việc tối ưu hóa quá trình làm trong bằng enzyme
định của pectinase bằng AA15, CFCS được cân bằng trong các dung dịch đệm có độ
của nước ép trái cây nhiệt đới bao gồm nước cam (Lee và cộng sự, 2006; Kareem
pH khác nhau và đặt trong bể nước ở 35 C trong 3 giờ. Các phần dịch được thu
và Adebowale, 2007). Sự phân hủy enzyme của pectin bị ảnh hưởng bởi các biến số
thập trong khoảng thời gian 30 phút và hoạt tính còn lại được xác định trong
của quá trình khác nhau bao gồm nồng độ enzyme, nhiệt độ và thời gian xử lý (Rai
các điều kiện xét nghiệm tiêu chuẩn. Các chất đệm được thử nghiệm bao gồm
và cộng sự, 2004). Những yếu tố này cần phải được tối ưu hóa để đạt được hiệu
Glycine-HCl (50 mM, pH 2,5–3,5), natri axetat (50 mM, pH 4,0–5,5), citrat
quả lọc nước tối đa. Một cách tiếp cận thông thường để xác định các điều kiện
photphat (50 mM, pH 6,0–7,0) và Tris-HCl (50 mM, 7,5–9,0).
tối ưu là thay đổi từng yếu tố tại một thời điểm trong khi vẫn giữ các yếu tố

khác ở mức không đổi. Mặc dù chiến lược này đơn giản và dễ hiểu nhưng tốn nhiều

thời gian, công sức và không giải thích được tác động tương tác giữa các yếu

tố. Xem xét những hạn chế này, các công cụ thống kê đã được phát triển để điều 2.5. Quá trình chiết xuất nước trái cây

tra sự tương tác giữa các biến trong quy trình và xác định mức tối ưu của các

biến quan trọng để đạt được năng suất tối đa. Cam được thu mua tại địa phương, rửa sạch bằng nước máy và dùng dao sạch

cắt làm đôi. Một máy ép trái cây loại trục vít được sử dụng để lấy nước trái

cây bằng tay.

Phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM) là một trong những công cụ thống kê hiệu quả

để phân tích nhiều tham số và sự tương tác của chúng với số lượng thử nghiệm 2.6. Xử lý bằng enzyme

tương đối ít hơn, do đó cần ít thời gian hơn.

Trước đây, công cụ này đã được sử dụng để tối ưu hóa quá trình sản xuất Tiềm năng của việc điều chế pectinase của AA15 đã được đánh giá để làm trong

enzyme phân hủy lignin từ Rhizopus (dos Santos và cộng sự, 2017) và làm trong nước cam bằng cách thực hiện một số thí nghiệm sơ bộ nhằm đưa ra ý tưởng điều

các loại nước ép trái cây nhiệt đới khác nhau bằng cách sử dụng pectinase nấm chỉnh mức độ của từng biến số trong thiết kế thí nghiệm tiếp theo. Thiết kế Box

mốc (Lee và cộng sự, 2006). Pectinase nấm men chưa được nghiên cứu bằng các Behnken (BBD) trong phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM) đã được áp dụng trong

công cụ thống kê để đánh giá tính phù hợp của chúng trong việc làm trong nước nghiên cứu này. Các biến được chọn là nhiệt độ ủ,

ép. Trước đây, chúng tôi đã báo cáo về tối ưu hóa thống kê của

Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và ứng dụng tiềm năng của nó trong việc lọc nước cam,
Tạp chí của Đại học King Saud –Science, https://doi.org/10.1016/j. jksus.2019.07.002
Machine Translated by Google

A. Ahmed, M. Sohail / Tạp chí Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx 3

X1 (30–40 C), thời gian xử lý, X2 (60–180 phút) và nồng độ enzyme, X3 (4–8 v/
v %). Tắm nước được sử dụng để duy trì
nhiệt độ của quá trình xử lý enzym đến mức mong muốn.
Độ pH của nước ép được giữ không đổi ở giá trị tự nhiên (3,3–4,2)
vì sự thay đổi độ pH không phải là thông lệ phổ biến đối với quá trình làm
trong nước ép trong công nghiệp (Rai và cộng sự 2004). Đối với mỗi thí nghiệm,
25 ml nước ép được xử lý như mô tả trong Bảng 1.
Một thiết kế gồm 15 kết hợp đã được tạo bằng Minitab 17.
Chức năng phản hồi được đo là độ trong của nước trái cây. Phản hồi
biến (Y) liên hệ với các biến được mã hóa bằng phương trình đa thức bậc hai
như dưới đây.
pectinase của G. candidum AA15 cho thấy enzyme này cho thấy
hoạt động tối đa của nó ở 35 C (Hình 1a) và bất kỳ sự gia tăng nào nữa về
nhiệt độ làm giảm hoạt tính mạnh. Việc giảm
Hoạt động của enzyme ở nhiệt độ cao có lẽ là do sự biến tính nhiệt của enzyme
(Amin và cộng sự, 2013). Tối ưu
nhiệt độ cho hoạt tính pectinase từ AA15 tương đương với
nhiệt độ tối ưu (30 C) cho pectinase của chủng khác
của G. candidum (Hang và Woodams, 1992). Mặc dù enzyme ưa nhiệt ổn định
trong thời gian dài ở nhiệt độ cao trong quá trình tiền xử lý các chất khác
nhau trong
các ngành công nghiệp và chúng cũng đóng vai trò như một giải pháp thay thế thân

thiện với môi trường so với các hóa chất khắc nghiệt (Dhiman và cộng sự, 2013). Tuy nhiên,
Y ¼ b0 þ b1X1 þ b2X2 þ b3X3 þ b12X1X2 þ b13X1X3 þ b23X2X3
enzyme hoạt động ở nhiệt độ mesophilic hoặc cận mesophilic là
þ b11X2 1 þ b22X22 þ b33X23 áp dụng hiệu quả trong công nghiệp chế biến thực phẩm để bảo quản
đặc tính dinh dưỡng và cảm quan (Nakagawa và cộng sự, 2005).
Các hệ số của đa thức được biểu diễn bằng b0 (hằng số
thuật ngữ), b1, b2 và b3 (hệ số tuyến tính), b12, b13 và b23 (tương tác
hệ số) vàb11, b22 và b33 (hệ số bậc hai). Minitab 17
được sử dụng để tạo bảng phân tích phương sai (ANOVA) cũng như
hỗ trợ để xác định tác động và hệ số hồi quy của các số hạng tuyến tính, bậc (Một) 110

hai và tương tác riêng lẻ. Giá trị F ở một xác suất 100

0,05 tức là giới hạn độ tin cậy 95% được sử dụng để đánh giá ý nghĩa của tất 90
80
cả các số hạng trong đa thức. Các đường đồng mức đã được tạo
70
từ các hệ số hồi quy để hình dung hiệu ứng tương tác
60
của các biến.
50
tương
động
Hoạt
(%)
đối
40
2.7. Phân tích rõ ràng 30
20

Sau mỗi lần chạy thử nghiệm (theo đề xuất của BBD), pecti-nase bị biến 10
0
tính bằng cách đun nóng huyền phù ở 90 C trong 5 phút.
20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
Bột giấy và các hạt từ nước ép đã qua xử lý được tách ra bằng phương pháp
Nhiệt độ oC
ly tâm ở mức 3000 g trong 10 phút. Chất nổi phía trên được sử dụng để phân tích
(b)
độ trong của nước ép bằng cách đo độ hấp thụ ở bước sóng 660 nm (OD660) trong
máy đo quang phổ dựa vào nước cất làm mẫu trắng đối chứng.

3. Kết quả và thảo luận

Pectinase là một enzyme quan trọng trong công nghiệp có nhiều

các ứng dụng thương mại, chẳng hạn như trong ngành công nghiệp nước ép thực phẩm. Trong này

nghiên cứu hoạt tính pectinase trong chế phẩm thô từ G. candidum
AA15 đã được mô tả và nghiên cứu về khả năng ứng dụng của nó
trong việc làm rõ nước cam.

3.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính và độ ổn định của pectinase

Nhiệt độ được coi là một trong những yếu tố quan trọng đối với Hình 1. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến (a) hoạt động và (b) độ ổn định của pectinase bởi G.
candidum.
hoạt động và tính ổn định của enzyme. Những nghiên cứu về hoạt động

Bảng 1

Ma trận thiết kế Box-Behnken để tối ưu hóa quá trình làm trong nước cam bằng enzyme sử dụng enzyme pectinase từ G. candidum AA15 với thực nghiệm và dự đoán
những phản hồi.

Thí nghiệm số Nhiệt độ (C) X1 Thời gian (phút) X2 Nồng độ enzyme (%v/v), X3 Độ rõ (%) (Giá trị thử nghiệm) Độ rõ (%) (Giá trị dự đoán)

1 30 60 6 11 12
2 40 60 6 0 0
3 30 180 6 36 39
4 40 180 6 14 13
5 30 120 4 36 29
6 40 120 4 10 số 8

7 30 120 8 25 27
8 40 120 8 0 6
9 35 60 4 17 22
10 35 180 4 50 53
11 35 60 số 8 32 29
12 35 180 8 48 42
13 35 120 6 0
14 35 120 6 0
15 35 120 6 0 0 0 0

Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và tiềm năng ứng dụng của nó trên cây cam
làm trong nước trái cây, Tạp chí của Đại học King Saud –Science, https://doi.org/10.1016/j.jksus.2019.07.002
Machine Translated by Google

4 A. Ahmed, M. Sohail / Tạp chí Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx

Ngoài khả năng enzyme hoạt động tối ưu ở nhiệt độ cao hơn et al. (1994), đã báo cáo rằng hầu hết các pectinase thu được từ

nhiệt độ, khả năng chịu nhiệt về khả năng của enzyme nấm men có khoảng pH tối ưu là 3,5–5,5. Hoạt tính của pecti-nase từ AA15 được

chống lại sự biến tính nhiệt cũng là một yếu tố hạn chế quyết định xác định khi có mặt các chất đệm khác nhau

sử dụng enzyme ở quy mô thương mại (Bhatti et al., 2006). pH và người ta thấy rằng enzyme này hoạt động mạnh hơn đối với

Đặc tính ổn định nhiệt của pectinase từ G. candidum AA15 pH axit (từ 3 đến 5,5) với hoạt động tối ưu ở pH 5.

đã được nghiên cứu khi không có chất nền và dữ liệu cho thấy Hoạt tính pectinase giảm mạnh khi phản ứng enzyme được thực hiện ở độ pH cao hơn

rằng hoạt tính bị mất ít hơn 50% ở nhiệt độ dao động 5 và hướng tới môi trường kiềm.
trong khoảng từ 25 đến 40 C thậm chí sau 1 giờ trong khi nó vẫn giữ được 100% mặc dù vậy, có sự gia tăng nhẹ trong hoạt động được quan sát thấy ở

hoạt động ban đầu khi ủ ở 30 C trong 1 giờ (Hình 1b). Nó cho thấy pH 7,5 cho thấy sự hiện diện của isoform của enzyme (Hình 2a).

rằng pectinase từ AA15 được cho là ổn định hơn polygalac-turonase của G. candidum Nhờ hoạt động tối ưu trong môi trường axit nên pecti-nase từ G. candum AA15 có

khi quan sát thấy hoạt động bị mất 50% triển vọng ứng dụng trong trái cây

trong vòng 1 giờ ở 40 C và quan sát thấy sự mất mát hoàn toàn trong vòng ngành công nghiệp nước trái cây và sản xuất rượu vang.

15 phút ở 50 C (Hang và Woodams, 1992). Điểm giữa của nhiệt Tính ổn định của enzyme ở các độ pH khác nhau cũng rất quan trọng đối với các ứng dụng thử

bất hoạt (Tm) đối với pectinase bởi AA15 được tính là 42 C. nghiệm công nghiệp của nó. Sự thay đổi độ pH gây ra hiện tượng thuận nghịch và không thể đảo ngược

Sự ổn định của pectinase ở các nhiệt độ khác nhau là một yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hoạt động của enzyme. Sự proton hóa của axit amin

thuộc tính và pectinase từ G. candidum AA15 có thể được ứng dụng tiềm năng trong enzyme là một cách để phát huy tác dụng có thể đảo ngược trong khi sự biến đổi

công nghiệp chế biến nước ép trái cây vì nó có tính ổn định cao. trong các nhóm axit amin quan trọng về mặt cấu trúc dẫn đến sự thay đổi không thể
đến 40 C trong 1 giờ. đảo ngược trong cấu trúc tự nhiên của enzyme. Hoạt động enzyme

bị giảm đi bởi những thay đổi không thể đảo ngược trong khi các hiệu ứng có thể đảo ngược thì có

3.2. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính và độ ổn định của pectinase không ảnh hưởng đến hoạt động của enzyme (McDermid et al., 1988). Độ ổn định của

pectinase từ AA15 được nghiên cứu ở 35 C với sự có mặt của

Hoạt động của enzyme bị ảnh hưởng rất nhiều bởi pH vì khả năng liên kết của các chất đệm khác nhau và hoạt động còn sót lại đã được ghi nhận. Dữ liệu tiết lộ

chất nền và chất xúc tác bị ảnh hưởng bởi sự phân bố điện tích trên sự ổn định của enzyme ở pH 2 và 3 trong 30 phút; sau đó một

phân tử cơ chất và enzyme. (Kulkarni và cộng sự, 2007). màu trắng sự suy giảm hoạt động đã được quan sát thấy. Tuy nhiên nó vẫn giữ được tới

(Một) 120

100

80

60
tương
động
Hoạt
(%)
đối

40

20

0
2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 số 8

pH

(b)
120
110
100
90
80
70
60
50
động
Hoạt
(%)
lại
còn

40
30
20
10
0
0 30 60 90 120 150

Thời gian (phút)

pH 2 pH 3 pH 4 pH 5

pH 6 pH7 pH 8

Hình 2. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính pectinase (a) và (b) độ ổn định của G. candidum AA15.

Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và tiềm năng ứng dụng của nó trên cây cam
làm trong nước trái cây, Tạp chí của Đại học King Saud –Science, https://doi.org/10.1016/j.jksus.2019.07.002
Machine Translated by Google

A. Ahmed, M. Sohail / Tạp chí Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx 5

Hoạt động 50% ở pH từ 2 đến 2 giờ (Hình 2b). Hiệu ứng mạnh mẽ hơn
rõ rệt khi độ pH tăng từ 3. Martos et al. (2013),
báo cáo về tính ổn định của pectinase từ Wickerhanomyces
dị thường ở khoảng pH từ 3–6 trong thời gian dài hơn. Tuy nhiên,
độ ổn định vừa phải của pectinase từ AA15 trong điều kiện axit
chỉ ra sự phù hợp của nó để được áp dụng để làm rõ các vấn đề khác nhau
giá trị hệ số 11, thời gian ủ được cho là yếu tố quan trọng nhất
ảnh hưởng đến độ trong của nước cam trong khi
còn lại là nhiệt độ (10) và nồng độ enzyme (1),
tương ứng.
BBD, giống như nhiều phương pháp bề mặt đáp ứng khác, cung cấp một
tùy chọn để trực quan hóa hiệu ứng tương tác của các biến thông qua bề mặt

các loại nước ép trái cây. và đường cong đồng mức. Các biến thường tương tác một cách phức tạp
theo cách nào đó, chẳng hạn như thời gian làm rõ có mối quan hệ nghịch đảo với

3.3. Phân tích thống kê BBD nồng độ enzyme để đạt được nước ép trong ở nhiệt độ không đổi (Kilara,
1982). Các đồ thị thu được trong nghiên cứu này cho thấy

Số liệu xác định đặc tính của pectinase từ AA15 cho thấy ảnh hưởng tỷ lệ thuận của thời gian điều trị đến phản ứng (Hình 3a)

rằng enzyme có thể được áp dụng để làm trong nước ép trái cây, do đó, các điều đó có thể là do sự lắng đọng của các hạt mịn

nghiên cứu đã được tiến hành để đánh giá tiềm năng của trong nước ép theo thời gian sẽ làm tăng độ trong. Trong khi,

enzym để làm trong nước cam. Ba trong số các yếu tố nhiệt độ có tác động tiêu cực đến phản ứng (Hình 3b)

ảnh hưởng đến quá trình làm rõ tức là nhiệt độ, thời gian và enzyme là điều mong muốn vì việc chế biến thực phẩm ở nhiệt độ thấp là

nồng độ được tối ưu hóa bằng cách sử dụng một công cụ thống kê, thường được ưu tiên để duy trì các đặc tính dinh dưỡng của chúng.

Thiết kế hộp Behnken (BBD). Trong thiết kế 15 lần chạy thử nghiệm, Nồng độ enzyme là một yếu tố quan trọng khác liên quan đến việc làm trong

độ trong của nước cam được lấy làm phản ứng và dữ liệu cho thấy nước ép trái cây vì nó tốn rất nhiều chi phí. Kết quả

rằng phản ứng thay đổi rất nhiều từ 0 đến 50% khi điều kiện cho thấy tác động tiêu cực ban đầu của lượng pectinase

quá trình này khác nhau (Bảng 1). Nó chỉ ra rằng phản ứng phụ thuộc chuẩn bị độ trong của nước ép lên tới 6%, sau đó, nhiều hơn nữa

về các điều kiện và tối ưu hóa các thông số có thể cải thiện độ trong của nước ép đạt được bằng cách tăng lượng pectinase

độ trong của nước ép. Sau khi phân tích, hệ số hồi quy cho chuẩn bị (Hình 3c). Tội lỗi và cộng sự. (2006) đã báo cáo trước đây rằng

phương trình đa thức bậc hai và cho tuyến tính, bậc hai và tốc độ làm trong có thể tăng lên theo lượng enzyme do

các thuật ngữ tương tác đã được xác định (Bảng 2) cho thấy tính đầy đủ của lực đẩy giữa các axit amin tích điện dương và các axit amin khác

mô hình với giá trị R2 là 0,95. Giá trị R2 gần hơn thành phần dẫn đến sự hình thành các hạt đám mây có kích thước lớn

đến 1 chỉ ra rằng mô hình thực nghiệm phù hợp hơn với dữ liệu thực tế. mà cuối cùng đã được giải quyết.

Ý nghĩa thống kê của mô hình đã được khẳng định thêm bằng cách xem xét phân
tích phương sai (ANOVA) cho thấy giá trị F
là 12,28 và giá trị p là 0,007 < 0,05 (Bảng 2).
3.3.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ, thời gian và nồng độ enzyme đến độ trong
Độ trong là một chỉ số quan trọng của nước trái cây có bán trên thị trường
(Sin và cộng sự, 2006). Sự hiện diện của chất pectic gây ra độ đục trong
nước trái cây tươi. Hơn nữa, các phân tử pectin thể hiện tính
khả năng giữ nước tạo nên sự kết dính
cấu trúc mạng và làm cho nước ép có độ nhớt. phân giải pectin
enzyme làm suy giảm các phân tử pectin có trong nước ép và làm giảm
độ đục và độ nhớt (Abdullah et al., 2007). Sự hồi quy
phân tích BBD về độ trong của nước cam bằng chế phẩm pectinase
của AA15 cho thấy tác động đáng kể của các biến số bao gồm nhiệt độ và thời
gian đến phản ứng của quá trình, cũng như tác động bậc hai đáng kể của thời
gian và nồng độ enzyme. Các
các tương tác còn lại không được tìm thấy có ý nghĩa thống kê.
Phương trình bậc hai ở dạng mã hóa có thể được đưa ra là:
3.3.2. Tối ưu hóa
Mục tiêu cuối cùng của BBD là xác định các giá trị tối ưu cho
từng biến để có được phản hồi tối đa. Trong này
nghiên cứu, độ trong tối ưu đạt được là 61% khi sử dụng enzyme
xử lý nước ép được thực hiện với pectinase thô 4% (v/v)
trong 180 phút ở 30 C. Độ trong (61%) thu được từ nghiên cứu của chúng tôi thậm chí còn
cao hơn so với báo cáo trước đó (50%) đối với nước ép quả việt quất bằng cách sử dụng
10 đơn vị pectinase thô từ A. niger LB23 trong 60 phút ở 40–
50 C (Sandri và cộng sự, 2013). Các nhà nghiên cứu cũng so sánh hiệu quả của
cả enzyme thô và enzyme tinh khiết và chiết xuất thô
thấy hiệu quả hơn. Nó đã được khám phá bởi Naidu và Panda
(2003) rằng hoạt tính của pectinase ổn định hơn ở dạng thô so với dạng tinh
khiết do sự tương tác của pectinase với
các protein khác được tạo ra bởi cùng một sinh vật. Hơn nữa,
sử dụng chiết xuất thô có lợi để tránh chi phí enzyme cao
các quá trình thanh lọc.

Y ¼ 149 10:50X1 þ 11X2 1X3 1:87X1 X1 þ 17:13X2X2 4.Kết luận

þ 19:63X3 X3 2:75X1 X2 þ 0:25X1 X3 4:25X2 X3

Sau khi xác định đặc tính sinh hóa của pectinase thô từ
trong đó Y là phản hồi, X1, X2 và X3 là nhiệt độ (C), thời gian (phút) G. candidum AA15, có vẻ như enzyme này có thể được ứng dụng
và nồng độ enzyme (%v/v) tương ứng. Với mức cao nhất trong các ngành công nghiệp đặc biệt là các quá trình liên quan đến thực phẩm, nơi enzyme

ban 2

Phân tích hồi quy BBD để tối ưu hóa quá trình làm trong nước cam bằng pectinase thô.

Điều kiện Tác dụng chính hệ số Tổng bình phương df Bình phương trung bình Giá trị F giá trị p

Người mẫu 0,00 4364.10 9 484,90 12,28 0,007

X1-Nhiệt độ 21:00 10,50 882.00 1 882,00 22,33 0,005

Thời gian X2 22:00 11,00 968.00 1 968,00 24,51 0,004

Nồng độ enzyme X3 2:00 1,00 8.00 1 8,00 0,20 0,672

X1X1 3,75 1,87 75,60 1 12:98 0,33 0,591

X2X2 34,25 17,13 905,69 1 1082,83 27,41 0,003

X3X3 39,25 19,63 1422,06 1 1422,06 36,00 0,002

X1X2 5,50 2,75 30,25 1 30,25 0,77 0,422

X1X3 0,50 0,25 0,25 1 0,25 0,01 0,940

X2X3 8,50 4,25 72,25 1 72,25 1,83 0,234

Lỗi 197,50 5 39,50

Tổng cộng 14

df = Bậc tự do; Giá trị F = Hàm Fisher; giá trị p = mức độ tin cậy.

R2 = 0,956, R2 (đã điều chỉnh) = 0,878.

Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và tiềm năng ứng dụng của nó trên cây cam
làm trong nước trái cây, Tạp chí của Đại học King Saud –Science, https://doi.org/10.1016/j.jksus.2019.07.002
Machine Translated by Google

6 A. Ahmed, M. Sohail / Tạp chí Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx

Sơ đồ đường viền của độ trong và nồng độ enzyme, thời gian Sơ đồ đường viền rõ ràng so với thời gian, nhiệt độ

180
số 8

Độ
trong Độ rõ
< -10
< 0 0
–

160 -10 –
0
10 10 20
–
7 –

20 30
–
30
–
0 10 10 20
40 40
–
50 140 20 –
30
–
> 30
> 50

(phút)
gian
Thời
6 120 Giữ giá trị
Giữ giá trị
Nồng độ enzyme 6
Nhiệt độ 35
enzyme

100
Nồng
(%)
độ

80

60
4 60 80 100 120 140 160 180 30 32 34 36 38 40

Thời gian (phút) Nhiệt độ (°C)

(Một) (b)

Sơ đồ đường viền của độ trong và nồng độ enzyme, nhiệt độ

số 8

Độ rõ
< -10
-10 –
0
0 –
10
7
10 –
20
> 20

Giữ giá trị

6 Thời gian 120
enzyme
Nồng
(%)
độ

4 30 32 34 36 38 40

Nhiệt độ (°C)

(c)

Hình 3. Đồ thị đường viền thể hiện tác động tương tác của (a) nồng độ enzyme và thời gian (b) thời gian và nhiệt độ (c) nhiệt độ và nồng độ enzyme đến độ trong của nước cam.

hoạt động ở nhiệt độ phòng là cần thiết. Các điều kiện xử lý khác
nhau cho thấy các biến số vận hành này ảnh hưởng rất lớn đến độ
trong của nước cam. Các điều kiện tối ưu của các biến này được xác
định bằng cách sử dụng các biểu đồ bề mặt đường viền hoặc phản ứng
để thu được đặc tính mong muốn của nước ép phù hợp cho các quá
trình làm rõ dựa trên màng tiếp theo. Với những kết quả đầy hứa hẹn
này, chủng này có thể là chủng thay thế cho chủng thương mại để sản
xuất pectinase.
Tuyên bố về lợi ích cạnh tranh
Các tác giả tuyên bố rằng họ không có lợi ích tài chính hoặc mối
quan hệ cá nhân cạnh tranh nào có thể ảnh hưởng đến công việc được
Amin, F., Bhatti, HN, Bhatti, IA, Asgher, M., 2013. Việc sử dụng cám lúa mì để tăng cường
sản xuất exo-polygalacturonase bởi Penicillium notatum bằng phương pháp bề mặt phản ứng.
Pak. J. Agric. Khoa học. 50, 469–477.
Barnby, FM, Morpeth, FF, Pyle, DL, 1990. Sản xuất endopolygalacturonase từ Kluyveromyces
marxianus. I. Độ phân giải, tinh chế và đặc tính từng phần của enzyme. Vi khuẩn enzym.
Technol. 12, 891–897.
Baumann, JW, 1981. Ứng dụng enzyme trong công nghệ nước ép trái cây. Trong: Enzyme
và Chế biến thực phẩm. Springer, Dordrecht, trang 129–147.
Bhatti, HN, Asgher, M., Abbas, A., Nawaz, R., Sheikh, MA, 2006. Nghiên cứu về động học và
khả năng chịu nhiệt của enzyme invertase axit mới từ Fusarium solani. J. Agric. Hóa chất
thực phẩm . 54, 4617–4623.
Blanco, P., Sieiro, C., Diaz, A., Villa, TG, 1994. Sản xuất và mô tả một phần đặc tính của
endopolygalacturonase từ Saccharomyces cerevisiae.
Có thể. J. Vi sinh vật. 40, 974–977.
Celestino, SMC, de Freitas, SM, Medrano, FJ, de Sousa, MV, Ferreira Filho, EX, 2006. Tinh
chế và mô tả đặc tính của một pectinase mới từ Acrophialophora nainiana với sự nhấn mạnh
Dhiman, J., Ahmad, S., Gulia, K., 2013. So sánh giữa bộ lọc Thích ứng
vào các đặc tính hóa lý của nó. J.

báo cáo trong bài viết này. Công nghệ sinh học. 123, 33–42.

Các thuật toán (LMS, NLMS và RLS). IJSETR 2, 100–1103.

Nhìn nhận dos Santos, TC, Resi, NS, Silva, TP, Machado, FPP, Bonomo, RCF, Franco, M., 2016. Vỏ xương rồng cọ gai làm

nguyên liệu sản xuất enzyme phân hủy lignin của Aspergillus niger. Khoa học thực phẩm. Công nghệ sinh học.

25, 205–211.
Các tác giả xin chân thành cảm ơn Viện Hàn lâm Khoa học Thế giới
Thứ ba (TWAS) đã hỗ trợ cấp vide công trình số 10-134 cho MS. dos Santos, TC, de Brito, AR, Bonomo, RCF, Pires, AJV, Oliveira, EA, Silva, TP, Franco, M.,
2017. Tối ưu hóa thống kê các điều kiện nuôi cấy và đặc tính của enzyme phân giải lignin
Người giới thiệu được sản xuất từ Rhizopus sp. Dùng vỏ xương rồng cọ gai. Chem. Anh. Liên lạc. 204, 55–
63.
Ejaz, U., Ahmed, A., Sohail, M., 2018. Tối ưu hóa thống kê quá trình cố định tế bào nấm men trên lõi ngô để sản
Abdullah, AL, Sulaiman, NM, Aroua, MK, Noor, MMM, 2007. Phản ứng tối ưu hóa bề mặt của các
xuất pectinase. Chất sinh học. Nông nghiệp. Công nghệ sinh học. 14, 450–456.
điều kiện để làm trong nước ép khế bằng cách sử dụng enzyme thương mại. J. Thực phẩm
Eng. 81, 65–71.
Federici, F., 1985. Sản xuất, tinh chế và mô tả một phần đặc tính của endopolygalacturonase
Ahmed, A., Khan, MN, Ahmad, A., Khan, SA, Sohail, M., 2019. Tối ưu hóa sản xuất pectinase từ
từ Cryptococcus albidus var. albidus. Antonie van Leeuwenhoek 51, 139–150.
Geotrichum candidum AA15 bằng phương pháp bề mặt phản ứng. Pak. J.Bot. 51 (2), 743–750.
Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và ứng dụng tiềm năng của nó trong việc
lọc nước cam, Tạp chí của Đại học King Saud –Science, https://doi.org/10.1016/j. jksus.2019.07.002
Machine Translated by Google
A. Ahmed, M. Sohail / Tạp chí Đại học King Saud – Khoa học xxx (xxxx) xxx
Hang, YD, Woodams, EE, 1992. Sản xuất và mô tả đặc tính của polygalacturonase từ Geotrichum
candidum. Thế giới J. Vi sinh. Công nghệ sinh học. 8, 480–482.
Jagtiani, J., Chang, HT, Sakai, WS, 1988. Ổi. Chế biến trái cây nhiệt đới. Nhà xuất bản học thuật Inc., Hoa Kỳ.
Jayani, RS, Saxena, S., Gupta, R., 2005. Enzyme pectinolytic vi sinh vật: đánh giá.
Quá trình sinh hóa. 40, 2931–2944.
Kareem, SO, Adebowale, AA, 2007. Làm rõ nước cam bằng pectinase thô từ nấm từ vỏ cam quýt. Thực
phẩm Nigeria J. 25, 130–137.
Kaur, G., Kumar, S., Satyanarayana, T., 2004. Sản xuất, mô tả đặc tính và ứng dụng polygalacturonase
chịu nhiệt của nấm mốc ưa nhiệt Sporotrichum thermophile Apinis. Tài nguyên sinh học.
Technol. 94, 239–243.
Kilara, A., 1982. Enzyme và ứng dụng của chúng trong ngành chế biến táo: đánh giá.
Quá trình sinh hóa. 17, 35–41.
Kulkarni, NS, Jaiswal, JV, Bodhankar, MG, 2007. Ảnh hưởng của việc sửa đổi chất thải nông nghiệp
đến quần thể vi sinh vật đất liên quan đến phản ứng sinh trưởng của thực vật. J. Môi trường.
Biol. 28, 623–626.
Kumar, A., Sharma, R., 2012. Sản xuất pectinase kiềm bằng vi khuẩn (Cocci sps.)
phân lập từ các nguyên liệu trái cây đang phân hủy. J. Phytol. 4, 1–5.
Lee, WC, Yusof, S., Hamid, NSA, Baharin, BS, 2006. Tối ưu hóa các điều kiện để làm rõ nước chuối
bằng enzyme bằng phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM). J. Thực phẩm Eng. 73, 55–63.
Lessa, OA, Reis, NS, Leite, SGF, Gutarra, MLE, Souza, AO, Gualberto, SA, de Oliveira, JR,
Oliveira, EA, Franco, M., 2018. Ảnh hưởng của quá trình lên men trạng thái rắn của vỏ ca cao
lên vỏ ca cao chất chuyển hóa thứ cấp, hoạt động chống oxy hóa và axit béo.
Khoa học thực phẩm. Công nghệ sinh học. 27, 107–113.
Martos, MA, Zubreski, ER, Garro, OA, Hours, RA, 2013. Sản xuất enzyme Pectinolytic bằng nấm men
Wickerhanomyces anomalus phân lập từ vỏ trái cây họ cam quýt. Công nghệ sinh học. Res. Int.
2013, 1–7.
McDermid, AS, McKee, AS, Marsh, PD, 1988. Ảnh hưởng của pH môi trường đến hoạt động của enzyme và sự phát triển
của Bacteroides gingivalis W50. Lây nhiễm. Miễn dịch. 56, 1096–1100.
Miller, GL, 1959. Phương pháp DNS đã được sửa đổi để giảm lượng đường. Hậu môn. Chem. 31, 426–
428.
Vui lòng trích dẫn bài viết này là: A. Ahmed và M. Sohail, Đặc tính của pectinase từ Geotrichum candidum AA15 và ứng dụng tiềm năng của nó trong việc lọc nước cam, Tạp chí của Đại học King Saud –
Science, https://doi.org/10.1016/j. jksus.2019.07.002
7
Naidu, GSN, Panda, T., 2003. Nghiên cứu về độ pH và sự khử hoạt tính nhiệt của enzyme pectinolytic
từ Aspergillus niger. Hóa sinh. Anh. J. 16, 57–67.
Nakagawa, T., Nagaoka, T., Miyaji, T., Tomizuka, N., 2005. Một loại pectin lyase hoạt tính lạnh
từ chủng nấm men Cystofilobasidium capitatum PPY-1 gây bệnh tâm thần và nấm basidiomycetous.
Công nghệ sinh học. ứng dụng. Hóa sinh. 42, 193–196.
Padma, PN, Anuradha, K., Reddy, G., 2011. Phân lập nấm men pectinolytic để sản xuất
polygalacturonase hoạt tính lạnh . Đổi mới. Khoa học thực phẩm. Nổi lên. Technol. 12, 178–181.
Patidar, MK, Nighojkar, S., Kumar, A., Nighojkar, A., 2018. Enzym pectinolytic- lên men ở trạng
thái rắn, phương pháp xét nghiệm và ứng dụng trong ngành công nghiệp nước ép trái cây :
đánh giá. 3 Công nghệ sinh học 8, 199.
Rai, P., Majumdar, GC, Dasgupta, SDES, De, S., 2004. Tối ưu hóa việc sử dụng pectinase trong
tiền xử lý nước ép mosambi để làm rõ bằng phương pháp phản ứng bề mặt. J. Thực phẩm Eng.
64, 397–403.
Rao, MA, Acree, TE, Cooley, HJ, Ennis, RW, 1987. Làm rõ nước táo bằng siêu lọc sợi rỗng: dòng
chảy và lưu giữ các chất bay hơi có mùi. J. Khoa học thực phẩm. 52, 375–377.
Sandri, IG, Lorenzoni, CMT, Fontana, RC, da Silveira, MM, 2013. Sử dụng pectinase được tạo ra
bởi chủng Aspergillus niger mới để xử lý nước ép táo và quả việt quất bằng enzyme. LWT-Khoa
học thực phẩm. Technol. 51, 469–475.
Sin, HN, Yusof, S., Hamid, NSA, Rahman, RA, 2006. Tối ưu hóa quá trình làm rõ bằng enzym nước
ép hồng xiêm bằng phương pháp bề mặt đáp ứng. J. Thực phẩm Eng. 73, 313–319.
Sulaiman, MZ, Sulaiman, NM, Yih, LS, 1998. Hạn chế dòng thấm trong quá trình làm rõ nước khế
chưa qua xử lý bằng siêu lọc màng. Chem. Anh.
J. 69, 45–148.
Vaillant, F., Millan, P., O'Brien, G., Dornier, M., Decloux, M., Reynes, M., 1999.
Vi lọc chéo nước ép chanh dây sau khi hóa lỏng một phần bằng enzym. J. Thực phẩm Eng. 42,
215–224.
Vaughn, RH, Jakubczyk, T., MacMillan, JD, Higgins, TE, Davé, BA, Crampton, VM, 1969. Một số loại men màu
hồng có liên quan đến việc làm mềm ô liu. ứng dụng. Vi sinh vật. 18, 771–775.
Wimborne, MP, Rickard, PA, 1978. Hoạt tính phân giải pectin của Saccharomyces fragilis được nuôi
cấy trong môi trường được kiểm soát. Công nghệ sinh học. Bioeng. 20, 231–242.