Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

com

Hóa sinh chuẩn bị & Công nghệ sinh học

ISSN: 1082-6068 (Bản in) 1532-2297 (Trực tuyến) Trang chủ tạp chí:https://www.tandfonline.com/loi/lpbb20

Phương pháp bề mặt đáp ứng để chiết xuất

wedelolactone từEclipta albasử dụng chiết xuất
hai pha nước

Neha N. Gharat & Virendra K. Rathod

Để trích dẫn bài viết này:Neha N. Gharat & Virendra K. Rathod (2020): Phương pháp bề mặt đáp ứng để
chiết xuất wedelolactone từEcliptaalbasử dụng phương pháp chiết xuất hai pha trong nước, Công nghệ Sinh
học & Hóa sinh Chuẩn bị, DOI:10.1080/10826068.2020.1753071

Để liên kết đến bài viết này:https://doi.org/10.1080/10826068.2020.1753071

Xuất bản trực tuyến: 22 tháng 4 năm 2020.

Gửi bài viết của bạn đến tạp chí này

Xem bài viết liên quan

Xem dữ liệu Dấu chéo

Điều khoản & Điều kiện đầy đủ của quyền truy cập và sử dụng có thể được tìm thấy tại

https://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=lpbb20
HÓA SINH HỌC CHUẨN BỊ & CÔNG NGHỆ SINH HỌC
https://doi.org/10.1080/10826068.2020.1753071

Phương pháp bề mặt đáp ứng để chiết xuất wedelolactone từEclipta albasử
dụng chiết xuất hai pha nước
Neha N. Gharat và Virendra K. Rathod
Khoa Kỹ thuật Hóa học, Viện Công nghệ Hóa học, Mumbai, Ấn Độ

TRỪU TƯỢNG TỪ KHÓA

Chiết xuất hai pha dung dịch nước của wedelolactone từEclipta albađã được nghiên cứu bằng cách Hệ thống hai pha nước;
sử dụng hệ thống polymersalt. Hệ thống này bao gồm polyetylen glycol (PEG) ở pha trên cùng Eclipta alba;polyetylen
glycol; phương pháp bề
(polyme) và natri citrate ở pha dưới cùng (muối). Các thông số quy trình như nồng độ PEG, trọng
mặt đáp ứng; natri
lượng phân tử PEG, nồng độ muối và pH đã được tối ưu hóa bằng phương pháp bề mặt phản ứng
citrat; wedelolactone
(RSM) với sự trợ giúp của thiết kế hỗn hợp trung tâm (CCD). Các điều kiện tối ưu hóa cho hệ thống hai
pha nước (ATPS), trong trường hợp tiếp cận một yếu tố tại một thời điểm, được tìm thấy là PEG 6000,
nồng độ PEG 18% (w/v), nồng độ muối 16% (v/v),và độ pH 7; với năng suất khai thác tối đa là 6,52mg/
g. Trong khi, các nghiên cứu của RSM cho thấy hiệu suất trích ly tối đa là 6,73mg/g với các thông số
được tối ưu hóa là PEG 6000, nồng độ PEG 18% (v/v),nồng độ muối 17,96% (v/v),và pH 7. ATPS được
phát hiện là làm tăng hiệu suất chiết xuất của wedelolactone gấp 1,3 lần so với các phương pháp
chiết xuất thông thường khác.

Giới thiệu
Eclipta alba,được sử dụng làm thuốc thảo dược, có đặc tính hạ đường
huyết, chống nhiễm độc gan, chống oxy hóa, chống viêm và kháng
nấm. Nó đã được sử dụng rộng rãi như một chất điều chỉnh sự phát
triển của tóc và một bộ điều biến trí nhớ tiềm năng. Ngoài ra, nó còn
được ứng dụng trong việc thư giãn đầu óc, giải quyết các vấn đề về trí
nhớ và tiêu hóa, chữa sưng các tuyến cũng như đưa ra các liệu pháp
điều trị sốt, khớp, các vấn đề về gan và bệnh ngoài da.[1–3]
Các thành phần hoạt động chính trongE. alba,tức là coumestans
là wedelolactone (Hình 1) cùng với dimethyl wedelolactone, axit
wedelic, apigenin, luteolin, triterpenoid glucoside, Ecliptasaponin
D, Ecliptasaponin C, Daucosterolsigmasterol 3-0 glucoside, v.v.[3]
Các phương pháp như chiết dung môi,[4]khai thác hỗ trợ siêu âm
(UAE),[5]Soxhlet,[6]CO2 siêu tới hạn2khai thác,[7]chiết xuất có sự hỗ
trợ của vi sóng,[số 8,9]và khai thác hỗ trợ áp suất cực cao[10]đã được
báo cáo để chiết xuất wedelolactone. Mặc dù các phương pháp này
có một số ưu điểm là thời gian chiết xuất thấp, nhưng hầu hết các
phương pháp này đều tẻ nhạt về bản chất và không chỉ yêu cầu
dung môi cao mà còn dẫn đến tiêu thụ nhiều năng lượng.
Chiết xuất hệ thống hai pha nước (ATPS) đã được sử dụng
như một phương pháp tuyệt vời, linh hoạt và nổi tiếng để chiết
xuất các sản phẩm tự nhiên. Thực tế, ATPS bao gồm
đại phân tử.[13–16]ATPS mang lại những lợi thế về nồng độ nước
cao ở pha trên và dưới, sức căng giữa các bề mặt, dễ dàng loại
bỏ hỗn hợp, không độc hại với môi trường, tiêu thụ năng lượng
tối thiểu và hiệu suất năng lượng cao so với các phương pháp
khai thác khác. Các phương pháp truyền thống yêu cầu bước
phân tách tiếp theo sau khi chiết xuất phân tử mục tiêu trong
khi đó, ATPS cung cấp quá trình chiết xuất và tách đồng thời
các phân tử mục tiêu, giúp giảm thời gian xử lý.[17]
Mặc dù ATPS chủ yếu được sử dụng để chiết xuất chất
lỏng-lỏng, nhưng gần đây nó đã được sử dụng để chiết xuất
đồng thời chất rắn-lỏng và tách axit glycyrrhizic và chất lỏng
từ rễ cam thảo Trung Quốc.[18]Trong trường hợp ATPS liên
quan đến PEG/hệ thống muối, việc lựa chọn muối đóng vai
trò quan trọng trong quá trình chiết xuất và tinh chế các
phân tử mục tiêu.[19,20]Nhiều loại muối tạo pha đã được sử
dụng để tạo pha, điều này quyết định hiệu quả của quá
trình chiết xuất. Ngoài ra, trong ATPS, muối đảm bảo các
tương tác kỵ nước giữa các phân tử sinh học và bằng cách
thay đổi môi trường xung quanh phân tử, nó thay đổi hành
vi phân vùng.[21]Trước đó, phốt phát hoặc sunfat được sử
dụng để tạo muối từ PEG. Tuy nhiên, việc sử dụng muối với
số lượng lớn như vậy gây ra các vấn đề về môi trường. Để
giảm vấn đề này, việc thay thế các loại muối này là cần thiết.
[22]Muối citrate (thân thiện với môi trường và

polyme/polyme hoặc polyme/các thành phần muối đáng tin cậy) và amoni cacbonat được ưa chuộng do chúng phụ
thuộc vào giá trị tới hạn, khi nồng độ vượt quá tính chọn lọc cao, thân thiện với môi trường, tương thích sinh học
giá trị tới hạn hình thành hai giai đoạn.[11,12]Tương tự, các hệ thống hai và dễ dàng mở rộng quy mô.[23]Ngoài ra, citrate là chất thay thế tốt
pha thay thế khác như chất hoạt động bề mặt polyme, muối chất lỏng cho muối vô cơ và chúng tạo ATPS với PEG, có thể được sử dụng
ion hoặc chất lỏng hoạt động bề mặt ion ion cũng được sử dụng trong thuận tiện để chiết xuất. Citrate có thể phân hủy sinh học và không
các hệ thống hai pha polyme để phân chia các hạt tế bào và độc hại; do đó, nó được sử dụng trong các nghiên cứu

LIÊN HỆVirendra K. Rathod vk.rathod@ictmumbai.edu.in Khoa Kỹ thuật Hóa học, Viện Công nghệ Hóa học, Matunga,
Mumbai, Ấn Độ.
- 2020 Tập đoàn Taylor & Francis, LLC
2 NN GHARAT VÀ VK RATHOD
Hình 1.Cấu trúc phân tử của wedelolactone.
được thực hiện bởi Oliveira et al. nơi muối citrate đã được sử dụng
để chiết xuất hexokinase từ máy dò UV-Vis mảng đi-ốt men của thợ làm bánh (Máy dò mảng đi-ốt (DAD), (Saccharomyces
cerevisiae),để thu hồi nhiều enzyme hơn trong giai đoạn trên.[24]
Như chúng ta thấy từ kịch bản hiện tại cho đến bây giờ, các với dung môi A (Methanol 90%), dung môi B (DI Water 10%)
phương pháp được báo cáo đòi hỏi dung môi đắt tiền, thời
gian, năng lượng cao hơn và các điều kiện khắc nghiệt về áp
suất và nhiệt độ. Hơn nữa, hầu hết các kỹ thuật đã công bố để duy trì lần lượt là 7,0 và 2,3 phút.
chiết xuất wedelolactone từE. albachiết xuất được nhiều hợp
chất và do đó cần nhiều bước tinh chế. Do đó, chúng tôi đã
chọn PEG/TPS dựa trên muối để chiết xuất wedelolactone từE.
albađể có được hiệu quả khai thác. Các thông số liên quan đến
ATPS như nồng độ PEG, nồng độ muối, trọng lượng phân tử
PEG và pH đã được tối ưu hóa bằng cách sử dụng kỹ thuật
thống kê thiết kế hỗn hợp trung tâm (CCD)–phương pháp bề
mặt phản ứng (RSM). Hiệu quả hơn nữa của ATPS được so sánh
với các phương pháp chiết xuất dựa trên dung môi truyền
thống.
Nguyên liệu và phương pháp
Nguyên vật liệu
E. albabột lá (<100tôim) đã được mua từ thị trường địa
phương ở Mumbai. Methanol (loại HPLC 99,8%) và nước
khử ion (DI) mới pha chế được sản xuất từ nhà máy nước
DI (từ Millipore Milli - Q50, Burlington, Massachusetts,
United States) được sử dụng làm dung môi cho phân tích
HPLC. PEG có trọng lượng phân tử khác nhau, tức là PEG
4000, PEG 6000, PEG 8000 và natri citrate được sử dụng để
chiết xuất, được mua từ Thomas Baker, Mumbai, Ấn Độ.
Tiêu chuẩn Wedelolactone được lấy từ các biện pháp tự
nhiên Pvt. Ltd, Bangalore, Ấn Độ.
Chuẩn bị ATPS
ATPS được điều chế từ các trọng lượng phân tử khác
nhau của dung dịch gốc PEG và muối natri xitrat. 0,5 g
củaE. albabột được đưa vào bình nón 25mL ở các mức
pH xác định. Tổng thể tích 20mL được duy trì bằng cách
bổ sung nước DI. Hơn nữa, hỗn hợp được khuấy ở tốc độ
600 vòng / phút bằng máy khuấy từ trong 2 giờ ở nhiệt
độ phòng (30 ± 2-C). Ly tâm hỗn hợp ở 8000 -g vòng/
phút trong khoảng 10 phút để loại bỏ bột thừa. Hỗn hợp
thu được được thu thập từ phễu tách và
phân tích thêm bằng HPLC. Tất cả các thí nghiệm được
thực hiện ba lần và giá trị trung bình được xem xét với
độ lệch chuẩn. Sản lượng đã được tính theo công thức
đưa ra dưới đây.
nh - mg
- Tôi o
mL- Hệ số pha loãng - Thể tíchðmLQUẦN QUÈ
- -
Khu vực
Dốc
Năng suất mg=g¼
Trọng lượng bộtðgQUẦN QUÈ
phân tích HPLC
Các mẫu được phân tích trên HPLC theo phương pháp được
báo cáo trước đó với một chút sửa đổi.[25]Phân tích HPLC được
thực hiện bằng hệ thống Agilent 1260 được kết nối với
model G1315D), Bơm nhị phân và cột C-18 (Eclipse, 250-
4.6mm, 5tôim). Quá trình rửa giải gradient được thực hiện
với tốc độ dòng 0,3 mL/phút, bước sóng 351 nm (30 ± 2-C)
nhiệt độ cột. Hơn nữa, thời gian chạy và thời gian lưu được
Thiết kế thử nghiệm
Để nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố khác nhau và sự
tương tác của chúng đối với năng suất chiết xuất của
wedelolactone, thiết kế giai thừa đầy đủ CCD của RSM đã
được sử dụng. ATPS được hình thành ở nồng độ xác định.
Để tránh các điểm cực đoan, bốn yếu tố CCD đã được áp
dụng. Bốn yếu tố được coi là ảnh hưởng đến hiệu suất chiết
xuất trong ATPS là trọng lượng phân tử PEG, nồng độ PEG,
nồng độ muối và pH. Phản hồi thu được từ mô hình đã cho
là sản lượng của wedelolactone từE. alba.Các cấp thấp hơn,
trung bình và cao hơn của bốn yếu tố được sử dụng trong
RSM phù hợp với kết quả nghiên cứu một yếu tố. Các điều
kiện thiết kế thử nghiệm với 30 kết hợp có thể được đưa ra
trongBảng 1.
Biểu thức đa thức bậc hai đã cho trong phương trình
(1)cho thấy sự tương tác toán học giữa bốn
các nhân tố.
X X X
kTôi¼b0quần què bTôiXTôiquần què biiX2 quần què
Tôi bijXTôiXj (1)
Ở đâukTôilà phản ứng dự đoánb0,bTôi,bii, Vàbijlần lượt là
các hệ số hồi quy của các hiệu ứng chặn tuyến tính, bậc
hai và tương tác, vàxiVàxjlà những yếu tố độc lập.[26]
Chiết xuất Soxhlet
Chiết xuất soxhlet của wedelolactone được thực hiện với 1 g
E. albađể lại bột cùng với 150mL metanol trong bộ chiết
Soxhlet, như đã báo cáo trước đó.[25]Một bộ chiết Soxhlet
chứa một bình chưng cất được đặt trong bể dầu, giá đỡ ống
mềm, cũng như bình ngưng. Một túi giấy lọc bao gồm
E. albabột (1 g) được giữ trong ống kẹp trong khi 150mL
dung môi được lấy vào bình chưng cất. Khi dung môi có
trong bình chưng cất bắt đầu sôi, dung môi mới ngưng
tụ được đổ vào giá đỡ ống lót.
 HÓA SINH HỌC CHUẨN BỊ & CÔNG NGHỆ SINH HỌC 3

Bảng 1.Chạy của thiết kế thử nghiệm. số 8

Con số PEG Mol. Wt. cô đặc PEG. cô đặc muối pH
7
năng suất

1 6000 18.00 19.00 7,00 6,67

2 4000 12.00 14.00 8,00 4.15 6
3 8000 18.00 14.00 7.11 3,40
4 6000 15.00 19.00 7,00 4.10 5
5 4000 12.00 14.00 6,00 3,39

Năng suất (mg/g)

6 8000 18.00 24.00 8,00 4,82 4
7 6000 15.00 19.00 6,00 4,79
3
số 8 4000 12.00 24.00 8,00 2,72
9 8000 12.00 14.00 8,00 5,68 2
10 6000 15.00 19.00 8,00 4,75
11 4000 12.00 24.00 6,00 5,95 1
12 8000 12.00 24.00 8,00 3,93
13 6000 12.00 19.00 7,00 6,42 0
14 4000 15.00 19.00 6,00 4,80 4000 6000 8000
15 8000 15.00 19.00 7,00 4.21 PEG Mol. Wt.
16 6000 15.00 14.00 7,00 6,54
17 4000 18.00 14.00 8,00 6.23 Hình 2.Ảnh hưởng của khối lượng phân tử PEG đến hiệu suất chiết ở 18% (v/v)CỌC
18 8000 12.00 14.00 6,00 Nồng độ 4,88, 16% (v/v)nồng độ muối, 0,5 g bột, nhiệt độ 30- C,
19 6000 15.00 19.00 7,00 5,33 thời gian 120 phút và pH 7.
20 4000 18.00 14.00 6,00 5,35
21 8000 12.00 24.00 6,00 3,85
22 6000 15.00 19.00 7,00 5.31 số 8
23 4000 18.00 24.00 8,00 3,61
7
24 8000 18.00 14.00 6,00 3,53
25 6000 15.00 19.00 7,00 5,32
6
26 4000 18.00 24.00 6,00 5,32
27 8000 18.00 24.00 6,00 2,78 5
Năng suất (mg/g)
28 6000 12.00 18.00 7,00 5,72
29 6000 12.00 14.00 8,00 5,46 4
30 6000 18.00 14.00 8,00 5,44
3
Phân tích được thực hiện bằng cách sử dụng HPLC và thí 2
nghiệm được thực hiện cho đến khi cạn kiệt hoàn toàn
1
nguyên liệu thô. Nhiệt độ được duy trì ở 90-C.
0
12 14 16 18
Giai đoạn/mẻ khai thác khôn ngoan Nồng độ PEG (%)
Hình 3.Ảnh hưởng của nồng độ PEG đến hiệu suất chiết ở PEG 6000, 16% (v/
Wedelolactone được chiết xuất trong một bộ chiết xuất hàng loạt v) nồng độ muối, 0,5 g bột, nhiệt độ 30-C, thời gian 120 phút, và pH 7.
có dung tích 100mL được trang bị máy khuấy, bình ngưng và vách
ngăn. Để chiết xuất, lượng bột được lấy là 1 g và tỷ lệ dung môi ít hơn 4000 Da dễ hòa tan hơn vì nhóm cuối ưa nước với
trên chất tan được duy trì ở mức 40:1. Hỗn hợp được khuấy trong 3 chuỗi polymer ngắn hơn.[28]Do đó, một loại polymer có
giờ ở 50-C và với tốc độ 600 vòng/phút. Sau 3 giờ, hỗn hợp được lọc nồng độ cao hơn và sức căng bề mặt thấp sẽ có lợi để đạt
và phân tích hàm lượng wedelolactone. Chất rắn còn lại được sử được sự phân tách hiệu quả.[29,30]Mặt khác, người ta đã
dụng cho giai đoạn chiết tiếp theo với dung môi mới và các thông quan sát thấy rằng PEG có trọng lượng phân tử cao hơn
số tương tự được sử dụng trong giai đoạn đầu tiên.[25] (PEG 8000) mang lại hệ số phân chia thấp hơn do chiều dài
chuỗi được tăng cường và khối lượng bị loại trừ.[31]Do đó,
năng suất giảm trên PEG 6000. Li và Li cũng nhận thấy
kết quả và thảo luận những phát hiện tương tự; trong sự phân tách bất đối của
Ảnh hưởng của trọng lượng phân tử PEG Một-xiclohexyl-mandelic-axit.[32]

Trong ATPS, polyetylen glycol (PEG) đã đạt được tầm quan

trọng khi việc sản xuất nó được thực hiện trên quy mô lớn với
nhiều trọng lượng phân tử khác nhau. Trọng lượng phân tử và
tính kỵ nước tương đối của PEG có ảnh hưởng mạnh mẽ đến
hành vi phân vùng của các phân tử sinh học.[27]Việc lựa chọn
đúng trọng lượng phân tử của polyme là cần thiết để thực hiện
quá trình phân tách. Do đó, bắt buộc phải nghiên cứu các trọng
lượng phân tử khác nhau của PEG để chiết xuất các phân tử
mong muốn. Ở đây, chúng tôi đã sử dụng PEG với các trọng
lượng phân tử khác nhau, từ 4000 đến 8000. TừHình 2, có thể
thấy năng suất cao nhất thu được ở giai đoạn đỉnh của ATPE là
PEG 6000; do đó, nó đã được chọn làm tham số được tối ưu
hóa. PEG với trọng lượng phân tử nhỏ hơn,
Ảnh hưởng của nồng độ PEG
Cùng với trọng lượng phân tử của polyme, việc lựa chọn
nồng độ PEG có tác động lớn đến việc trích ly phân tử
mong muốn trong ATPS. Do đó, việc lựa chọn một lượng
PEG thích hợp là cần thiết để phân vùng tốt hơn. Trong
nghiên cứu của chúng tôi, nồng độ PEG tăng từ 12 lên
18% (v/v),trong khi các tham số khác được giữ cố định (
Hình 3). Ở nồng độ PEG 12%, hiệu suất thu được rất thấp
do không đủ tương tác kỵ nước giữa PEG và bề mặt của
phân tử ở nồng độ PEG thấp. Hơn nữa, nồng độ PEG
trên 18% cho thấy sự tăng cường độ nhớt và sức căng
liên vùng, điều này
4 NN GHARAT VÀ VK RATHOD

số 8 số 8

7 7

6 6

5 5

Năng suất (mg/g)

Năng suất (mg/g)

4 4

3 3

2 2

1 1

0 0
14 16 18 20 22 24 5 6 7 số 8
Nồng độ muối(%) pH
Hinh 4.Ảnh hưởng của nồng độ muối đến hiệu suất chiết ở PEG 6000, 18% (v/ Hình 5.Ảnh hưởng của pH đến hiệu suất chiết ở PEG 6000, 18% (v/v)
v) Nồng độ PEG, 0,5 g bột, nhiệt độ 30-C, thời gian 120 phút, và pH 7. Nồng độ PEG, 16% (v/v)nồng độ muối, 0,5 g bột, nhiệt độ 30-C, thời gian
120 phút.

làm cho việc tách phân tử mục tiêu trở nên khó khăn. Các báo
cáo tương tự đã được quan sát bởi Nadar et al.[33,34]Do đó,
trong thí nghiệm trên, nồng độ hơn 18% không được xem xét
để sử dụng nguyên liệu thô tốt hơn.
Ảnh hưởng của nồng độ muối
Hai pha trong ATPS là đẳng áp và trung hòa về điện. Sau khi
thêm muối vào dung dịch polyme, các ion có trong muối
được tách thành hai pha, phụ thuộc vào ái lực của chúng
đối với pha nước. Do đó, một tiềm năng liên vùng phát sinh,
giúp thực hiện việc chiết xuất các phân tử sinh học. Trong
nghiên cứu này, nồng độ muối thay đổi trong khoảng 14–
24%v/v (hinh 4). Ở nồng độ muối thấp, việc chiết xuất
wedelolactone không được ưu tiên. Năng suất tối đa được
tìm thấy ở nồng độ muối 16% vì sự tăng cường nồng độ
muối lên đến 16%, đẩy nhanh quá trình muối ra khỏi
wedelolactone ở giai đoạn trên. Do đó, nồng độ muối 16%
đã được hoàn thiện cho tất cả các nghiên cứu tiếp theo.
Những phát hiện tương tự đã được báo cáo bởi Indurkar và
Rathod;[17]đối với ATPE của punicalagin. Nồng độ muối trên
20% do bão hòa, khả năng loại bỏ muối có thể làm giảm
tương tác kỵ nước giữa các phân tử sinh học. Do đó, sản
lượng đã giảm trên 20% nồng độ muối. Do đó, tránh được
nồng độ muối cao hơn trong ATPE của wedelolactone.
Ảnh hưởng của độ pH
Độ pH của hệ thống phụ thuộc vào các tính chất như điện tích thực
của phân tử, thành phần ion và đặc tính bề mặt của vật liệu gây ô
nhiễm. Ngoài ra, việc chiết xuất và phân tách phân tử mục tiêu có
thể được điều chỉnh bằng cách sử dụng các đặc tính này bằng cách
tăng tính chọn lọc của ATPS.[35]Để hiểu rõ hơn về ảnh hưởng của độ
pH đối với quá trình chiết xuất wedelolactone trong ATPS, nó đã
thay đổi trong khoảng 5–8 (được điều chỉnh bằng dung dịch natri
cacbonat và axit clohydric) (Hình 5). Phạm vi này đã được chọn vì nó
sẽ đại diện cho điều kiện của hầu hết các vùng nước công nghiệp.[
36]Khi pH tăng từ 5 đến 7, hiệu suất chiết xuất tăng lên, điều này
tiếp tục giảm khi pH
đổi thành 8. Tương tự, pH dưới 6,5 là phù hợp nhất với hệ thống
PEG/sulfate cũng như pH trên 7 là tương thích với hệ thống PEG/
photphat.[34]Như trong trường hợp của hệ thống PEG/citrate, năng
suất cao nhất thu được ở pH 7, pH trung tính được chọn làm thông
số tối ưu hóa cho ATPS. Hầu hết các phân tử sinh học ổn định ở pH
7, đây là điều kiện thuận lợi để thực hiện ATPS.[34]Một xu hướng
tương tự đã được quan sát bởi Wang et al. trong chiết xuất C-
phycocyanin từS. platensis.[35]
lắp mô hình
RSM thuận lợi hơn vì nó tiết kiệm nguyên liệu thô cũng như
thời gian.[37]Để hiểu được sự tương tác của các thành phần
(PEG/hệ thống muối) và để tìm ra nồng độ tối ưu của từng
thành phần cần thiết để chiết xuất tối đa wedelolactone, các
đường cong bề mặt phản ứng ba chiều đã được nghiên
cứu. Theo nghiên cứu từng yếu tố tại một thời điểm, các
thông số như pH, nồng độ muối, trọng lượng phân tử PEG
và nồng độ PEG được phát hiện là có ảnh hưởng đáng kể
đến năng suất. Do đó, các biến này đã được chọn để vẽ các
bề mặt phản hồi cho hiệu suất thu hồi bằng cách sử dụng
CCD (Hình 6). Ban đầu, các điểm dữ liệu rời rạc, điều này
cho thấy cần phải có một số chuyển đổi trong mô hình.
Phản hồi, tức là sản lượng wedelolactone của mỗi lần chạy
thiết kế thí nghiệm được trình bày trongBảng 1. Tác động
lẫn nhau của các tham số khác nhau đã được thể hiện trong
Hình 6a–f. TRONGHình 6a, sự tương tác giữa trọng lượng
phân tử PEG và nồng độ muối đã được quan sát, cho thấy
năng suất tối đa được tìm thấy ở PEG 6000 với nồng độ
muối 17,96%. Tương tự, trong Hình 6b, hiệu suất thu được
cao nhất là 6,73mg/g ở PEG 6000 và nồng độ PEG 18%.
Cũng,Hình 6c, cho thấy ở pH 7, năng suất tối đa đạt được
với PEG 6000. Trong khi đó, ởhình 6d, cùng năng suất thu
được ở pH 7 và nồng độ PEG 18%. Hơn nữa, trongHình 6e,
tương tác giữa nồng độ muối và nồng độ PEG đã được
nghiên cứu với hiệu suất tương tự như kết quả nêu trên.
Cuối cùng, trongHình 6f, sản lượng tối đa là 6,73mg/g quan
sát được ở pH 7 với nồng độ muối 17,96%.
 HÓA SINH HỌC CHUẨN BỊ & CÔNG NGHỆ SINH HỌC 5

(Một) (b)
5,5 6,9

4,75 6.225

4 5,55

sản lượng
sản lượng

3,25 4.875

2,5 4.2

24.00 8000.00 18.00 8000.00

21.50 7000.00 16h50 7000.00

19.00 6000.00 15.00 6000.00

13h50
C: muối cô đặc
16h50
5000.00A: peg mol wt B: chốt conc 5000.00A: peg mol wt
14.00 4000.00 12.00 4000.00

(c) (d)

5,5 6,5

5,05 6.025

4.6 5,55
sản lượng

sản lượng

4.15 5.075

3.7 4.6

8,00 8000.00 8,00 18.00

7,50 7000.00 7,50 16h50

7,00 6000.00 7,00 15.00

6,50 6,50 13h50
D: pH 5000.00A: peg mol wt D: pH B: chốt conc
6,00 4000.00 6,00 12.00

(e) (f)

6,5 5,5

5,75 4,75

5 4
sản lượng

sản lượng

4,25 3,25

3,5 2,5

24.00 18.00 8,00 24.00

21.50 16h50 7,50 21.50
19.00 15.00 7,00 19.00
16h50 13h50 6,50 16h50
C: muối cô đặc B: chốt conc D: pH C: muối cô đặc
14.00 12.00 6,00 14.00

Hình 6.Biểu đồ bề mặt phản hồi về ảnh hưởng của (A) trọng lượng phân tử PEG, (B) nồng độ PEG, (C) nồng độ muối và (D) pH đối với hiệu suất chiết xuất
wedelolactone.

Để phù hợp với mô hình, phân tích phương sai được nhỏ hơn 0,0001 cho thấy mô hình phù hợp với dữ liệu của
thực hiện để nghiên cứu ý nghĩa của mô hình, như thể nghiên cứu này. quan sát đượcPgiá trị của sự thiếu phù hợp
hiện trongban 2. CácPgiá trị được coi là yếu tố chính để 0,0503 là không đáng kể so với lỗi thuần túy. phương trình
hiểu cường độ tương tác của từng tham số. quan sát (2)hiển thị một biểu thức đa thức cho nghiên cứu đã cho,
đượcPgiá trị cho đã cho
6 NN GHARAT VÀ VK RATHOD

Ban 2.Phân tích phương sai (ANOVA). Bàn số 3.So sánh các phương pháp khai thác khác nhau.
Tổng của Nghĩa là Sơ không. phương pháp chiết xuất Năng suất (mg/g) Thời gian (giờ) pH Chất tan:tỷ lệ dung môi
Nguồn hình vuông df hình vuôngFgiá trịPGiá trị 1. Soxhlet 5,05 06.00 7 1:150
Người mẫu 36,00 14 02,57 034,88 <0,0001 Có ý nghĩa 2. Lô hàng 5.10 15.00 7 1:40
A-peg mol.wt. 02.18 01 02.18 029.53 <0.0001 3. ATPS 6,52 02.00 7 1:40
B-peg conc. 00.01 01 00.01 000.03 0,8712
cô đặc muối C. 05.51 01 05.51 074.76 <0.0001
D-pH 00.19 01 00.19 002.60 0.1272 sản lượng khai thác. Mặt khác, ATPE cho thấy quá trình
AB 09.49 01 09.49 128,68 <0,0001
AC 00.87 01 00.87 011.85 0,0036
chiết xuất cao hơn đáng kể do động lực cao hơn liên tục
QUẢNG CÁO 00.50 01 00.50 006.83 0,0195 giữa pha khối và pha rắn, điều này được cho là do sự
trước công nguyên 00.18 01 00.18 002.45 0,1384 chuyển wedelolactone sang pha polyme ngay khi nó
BD 00.15 01 00.15 002.06 0,1714
đĩa CD 02.98 01 02.98 040.36 <0.0001
được chiết xuất ở pha khối.[38]
MỘT2 00.92 01 00.92 012.42 0.0031
b2 02.54 01 02.54 034.47 <0.0001
C2 02.94 01 02.94 039.83 <0.0001 Phần kết luận
Đ.2 00.92 01 00.92 012.42 0,0031
Dư 01.11 15 01.11 ATPS bao gồm PEG với muối natri citrate để chiết xuất
Thiếu phù hợp 00.99 10 00.99 004.72 0,0503 Không đáng kể
wedelolactone từE. albacó thể được sử dụng thành công để
lỗi thuần túy 00.11 05 00.11
tổng cộng 37.11 29 đạt năng suất chiết xuất tối đa của wedelolactone bằng
tr<0,05 là đáng kể. cách thao tác thích hợp với nồng độ muối và PEG. Người ta
quan sát thấy rằng các điều kiện được tối ưu hóa cho ATPS
NĂNG SUẤT¼5:34 0:35 - Một 0:010 - B 0:55 - C 0:10 khi xem xét từng yếu tố một được phát hiện là tương tự
như các nghiên cứu RSM (thử nghiệm). Các thông số tối ưu
- Đ. 0:77 - A - B 0:23 - A - C 0:18 - Một cho hệ thống ATPS là PEG 6000, nồng độ PEG 18% (v/v),
- Đ. 0:11 - B - C 0:43 - C - Đ 0:59 - Một2 nồng độ muối 17,96% (v/v),và độ pH 7; để thu được hiệu
suất chiết là 6,73mg/g. Sự tương tác của các tham số cho
0:99 - B2 1:06 - C2 0:59 - Đ2 thấy rằng ở lượng chất tan thấp hơn, năng suất tối đa
(2) đã đạt được, điều này cũng có lợi về mặt kinh tế.
Hơn nữa, so với Soxhlet và các nghiên cứu hàng loạt, ATPS cho
trong đó (A) trọng lượng phân tử PEG, (B) nồng độ PEG,
thấy năng suất cao hơn.
(C) nồng độ muối và (D) pH.
Biểu đồ bề mặt đáp ứng ba chiều của mô hình cho
năng suất của wedelolactone được thể hiện trongHình Các từ viết tắt
6a–f. Các yếu tố A, C và tương tác lẫn nhau của AB, AC, ATPS Hệ thống hai pha nước Phương
AD, CD, cùng với tương tác bậc hai của tất cả các tham RSM pháp bề mặt đáp ứng Thiết kế
số có ý nghĩa (p<0,05) ảnh hưởng đến sản lượng của CCD hỗn hợp trung tâm Polyethylene
wedelolactone. CỌC glycol
Khai thác hỗ trợ siêu âm
Hiệu suất thí nghiệm là 6,73mg/g phù hợp với hiệu
Các Tiểu vương quốc Ả Rập Thống nhất

DI Nước khử ion

suất dự đoán là 6,78mg/g ở PEG 6000, nồng độ PEG 18% HPLC Sắc ký lỏng cao áp Máy dò mảng
(v/v),nồng độ muối 17,96% (v/v),và độ pH7. ATPE điốt chiết hai pha dung dịch nước
BỐ
UGC Ủy ban tài trợ đại học

So sánh các phương pháp khai thác khác nhau

Kinh phí
Hiệu suất chiết xuất của wedelolactone sau phương pháp chiết
Các tác giả xin cảm ơn Ủy ban Tài trợ Đại học (UGC) của Ấn Độ đã
xuất Soxhlet là 5,05mg/g. Các kết quả cũng được so sánh với công
hỗ trợ tài chính cho công việc nghiên cứu.
việc trước đó của Charpe và Rathod[25]trong đó quá trình chiết giai
đoạn/mẻ thông thường được thực hiện trong bộ chiết thủy tinh
150mL trong 3 giờ với tỷ lệ chất tan trên dung môi là 1:40 và tốc độ
400 vòng/phút. Sau mỗi giai đoạn chiết xuất, dung môi mới được ORCID
thêm vào thành phần và tổng số wedelolactone được chiết xuất Neha N. Gharat http://orcid.org/0000-0002-2779-212X
sau giai đoạn thứ năm. Trong một giai đoạn chiết xuất theo mẻ, Virendra K. Rathod http://orcid.org/0000-0003-1130-0546
trạng thái cân bằng đạt được nhanh hơn tức là do lực dẫn động
không đáng kể. Sản lượng khai thác thu được sau giai đoạn thứ
Người giới thiệu
năm là 5,10mg/g.
Việc so sánh chiết xuất Batch, Soxhlet và ATPE được tóm tắt [1] Karthikumar, S.; Vigneswari, K.; Jegatheesan, K. Sàng lọc các hoạt động
trongbàn số 3. Hiệu suất chiết thu được sau ATPS cao gấp 1,3 kháng khuẩn và chống oxy hóa của láEclipta Prostrata (L). Khoa học.
độ phân giải Tiểu luận.2007,2,101–104.
lần so với phương pháp soxhlet và mẻ thông thường. Trong
[2] Wagner, H.; Geyer, B.; Kiso, Y.; Hikino, H.; Rao, GS Coumestans
chiết xuất giai đoạn/mẻ thông thường, sau khi đạt được trạng là Nguyên tắc hoạt động chính của thuốc gan Eclipta AlbaVà
thái cân bằng, dung môi trở nên không hiệu quả để chiết xuất Wedelia Calendulacea. Thực vật Med.1986,52, 370–374.
tiếp theo, điều này cuối cùng dẫn đến hiệu suất thấp hơn.

[3] Dalal, S.; Kataria, SK; Sastry, KV; Rana, SVS Sàng lọc hóa chất
thực vật của chiết xuất metanol và hoạt tính kháng khuẩn
của các nguyên tắc hoạt động của thảo mộc bảo vệ gan,
Eclipta Alba. người máy. Lá.2010,14,248–258.
[4] Shanshol, ZA; Alaubydi, MA; Sadik, A. Khai thác và tinh chế một
phần Wedelolactone từ địa phươngEclipta Alba Thực vật.
Iraq J. Khoa học.2013,54,1084–1089.
[5] Phương, X.; Vương, J.; Vương, Y.; Lý, X.; Chu, H.; Zhu, L. Tối ưu
hóa chiết xuất Wedelolactone và Polyphenol chống oxy hóa
từ siêu âmEclipta phủ phục LSử dụng phương pháp bề mặt
đáp ứng.Tháng 9 Purif. công nghệ.2014,138,55–64.
[6] Kulkarni, S.; Khatwani, P. Tối ưu hóa các điều kiện chiết xuất và phát
triển phương pháp HPTLC nhạy cảm để ước tính Wedelolactone
trong các chất chiết xuất khác nhau củaEclipta Alba. quốc tế
J.Pharm. Khoa học.2011,3,56–61.
[7] Patil, AA; Sachin, BS; Wakte, PS; Shinde, DB Tối ưu hóa chiết
xuất chất lỏng siêu tới hạn và xác định HPLC của
Wedelolactone từHoa cúc vạn thọbởi Thiết kế mảng trực
giao.J. Adv. độ phân giải2014,5,629–635.
[8] Shi, D.; Đinh, H.; Xu, S. Tối ưu hóa chiết xuất Wedelolactone có hỗ trợ vi
sóng từEclipta AlbaSử dụng phương pháp bề mặt đáp ứng.Đằng
trước. hóa học. Khoa học. Tiếng Anh2014,số 8,34–42.
[9] Đinh, H.; Vương, Y.; Cao, Y.; Hân, X.; Lưu, S.; Đường, G.; Lý, J.; Zhao,
D. Tinh chế Wedelolactone từEclipta Albavà Đánh giá hoạt động
chống oxy hóa.Khoa học tháng chín. công nghệ.2017,52, 1–
2741.
[10] Zhao, HW; Trừng, SP; Zhang, LF; Đồng, HJ; Trương,
YQ; Ultra, W. Chiết xuất có hỗ trợ áp suất cao của
Wedelolactone và Isodemethylwedelolactone từ Ecliptae
Herba và Tinh chế bằng sắc ký dòng đếm tốc độ cao.sinh
học. Sắc ký đồnăm 2019,33,4497–4504.
[11] Ross, KC; Zhang, C. Tách tái tổ hợp b-Glucuronidase từ thuốc lá
chuyển gen bằng chiết xuất hai pha nước.hóa sinh. Tiếng
Anh J.2010,49,343–350.
[12] Asenjo, JA; Andrews, BA Hệ thống hai pha dung dịch nước để
tách protein: Tách pha và ứng dụng.
J. Sắc ký đồ. MỘT.2012,1238,1–10.
[13] Silv-erio, SC; Gracia, J.; Teixeira, JA; Macedo, EA Polyetylen
Glycol 8000quần quèHệ thống hai pha nước muối citrate:
Tính kỵ nước tương đối của các pha cân bằng. Cân Bằng Pha
Chất Lỏng.2016,407,298–303.
[14] Quách, tr.; El-Gohary, Y.; Prasadan, K.; Shiota, C.; Tiêu, X.; Wiersch,
J.; Paredes, J.; Tulachan, S.; Gittes, GK Thanh lọc nhanh chóng và
đơn giản hóa vi-rút liên quan đến Adeno tái tổ hợp.J.Virol.
phương pháp.2012,183,139–146.
[15] Albertsson, P. a. Sự phân chia của các hạt tế bào và các đại phân tử
trong các hệ thống hai pha polymer.quảng cáo Hóa chất đạm.1970,
24, 309–341.
[16] Moreira, S.; Silv-erio, SC; Macedo, EA; Milagrès, AMF; Teixeira,
JA; Mussatto, SI Phục hồi Peniophora Cinerea Laccase bằng
cách sử dụng hệ thống nước hai pha được cấu tạo bởi
Ethylene Oxide/Propylene Oxide Copolymer và muối Kali
Phosphate.J. Sắc ký đồ. MỘT.2013,1321,14–20.
[17] Indurkar, SJ; Rathod, VK chiết xuất hai pha dung dịch nước của Punicalagin (
Mộtquần quèb)từ Pomegranate Peel by Response Surface Methodology.
Khoa học tháng chín. công nghệ.2018,54,1–8.
[18] Hoàng, L.; Lý, W.; Phong, Y.; Phương, X.; Lý, J.; Gao, Z.; Li, H. Phục
hồi đồng thời axit Glycyrrhizic và Liquiritin từ rễ cam thảo Trung
Quốc (Glycyrrhiza Uralensis Fisch) bằng hệ thống hai pha nước
và đánh giá hoạt động sinh học của chất chiết xuất.Khoa học
tháng chín. công nghệ.2018,53,1342–1350.
[19] Taylor, MA Trích xuất Lipase từ Văn hóa lên men Rhizopus Microsporus
bằng phân vùng hai pha dung dịch nước. công nghệ sinh học. công
nghệ sinh học. trang bị.2015,29,723–731.
[20] Nandini, K.; Rastogi, N. Chiết xuất chất lỏng lỏng của Lipase bằng
hệ thống hai pha nước.Thực phẩm Bioproc. công nghệ. 2011,4,
295–303.
HÓA SINH HỌC CHUẨN BỊ & CÔNG NGHỆ SINH HỌC 7
[21] Aires-Barros, MR; Hoa hồng, PA; Ferreira, NẾU; Azevedo, Hệ
thống hai pha nước AM: Một nền tảng khả thi trong sản
xuất dược phẩm sinh học.J. Sắc ký đồ. MỘT.2010, 1217,
2296–2305.
[22] Hustedt, H. Phục hồi enzyme chiết xuất bằng cách tái chế đơn giản hóa
chất tạo pha.công nghệ sinh học. Hãy để.1986,số 8,791–796.
[23] Hạ, CB; Lu, YM; Dương, YZ; Zhao, XD Phân vùng Albumin huyết
thanh bò trong các hệ thống hai pha nước Polyethylene Glycol
(PEG)/Kali Citrate.Chế phẩm sinh học thực phẩm Proc.2010,
88,40–46.
[24] Oliveira, GG; Silva, ĐD; Roberto, IC; Vitolo, M.; Adalberto, Hành vi
phân chia PJ và tinh chế một phần Hexokinase trong các hệ
thống Polyethylene Glycol/Citrate hai pha trong nước.ứng dụng
hóa sinh. công nghệ sinh học.2003,108,787–798.
[25] Charpe, TW; Rathod, VK Kinetics of Ultrasound Assisted Extracting
of Wedelolactone từEclipta Alba. Brazil. J. Chem. Tiếng Anh2016,
33,1003–1010.
[26] Alcântara, LAP; Tối thiểu, LA; Tối thiểu, VPR; Bonomo,
RCF; da Silva, LHM; da Silva, MDCH Đà. Áp dụng Phương
pháp Bề mặt Phản hồi để Tối ưu hóa Phân vùng Whey
Protein trong Hệ thống Hai Pha Nước PEG/Phosphate.J. Sắc
ký đồ. b.2011,879, 1881–1885.
[27] Andrew, Cử nhân; Asenjo, JA Đánh giá lý thuyết và thực nghiệm về
tính kỵ nước của protein để dự đoán hành vi phân chia của
chúng trong các hệ thống hai pha nước: Đánh giá.Khoa học
tháng chín. công nghệ.2010,45,2165–2170.
[28] Rao, JR; Nair, Phương pháp tiếp cận mới của BU đối với việc thu hồi
Glycosamino-Glycan từ nước thải thuộc da.nguồn sinh học. công
nghệ.2011,102,872–878.
[29] Asenjo, JA; Salgado, JC; Andrew, cử nhân; Ortuzar, MF Dự đoán
hành vi phân vùng của protein trong hệ thống hai pha nước
chỉ sử dụng thành phần axit amin của chúng.J. Sắc ký đồ.
MỘT.2008,1178,134–144.
[30] Forciniti, D.; Hội trường, CK; Kula, MR Ảnh hưởng của Trọng lượng
và Nhiệt độ Phân tử Polyme đối với Thành phần Pha trong Hệ
thống Hai Pha Nước.Cân Bằng Pha Chất Lỏng.1991,61, 243–262.
[31] Karkas, T. Đặc điểm của Invertase được phân vùng trong hệ thống hai
pha Poly(Ethylene Glycol)/Magnesium Sulfate Aqueous Aqueous.hóa
sinh. Tiếng Anh J.2012,60,142–150.
[32] Lý, LH; Li, FF Tách chiral củaMột-Cyclohexyl-Mandelic-Axit bằng
hệ thống hai pha dung dịch nước kết hợp với Cu2- b-Phức
hợp Cyclodextrin.hóa học. Tiếng Anh J.2012,211–212, 240–
245.
[33] Yuzugullu, Y.; Duman, YA Dung Dịch Nước Hai Pha (PEG4000/Na2VÌ THẾ4)
Chiết xuất và xác định đặc tính của một chất chuyển hóa axit từ củ
khoai tây (Solanum Tuberosum).chuẩn bị. hóa sinh. công nghệ sinh
học.2015,45,696–711.
[34] Nadarét, SS; Pawar, RG; Rathod, VK Những tiến bộ gần đây trong các
chiến lược chiết xuất enzyme: Đánh giá toàn diện.quốc tế J. Sinh học.
Macromol.2017,101,931–957.
[35] Vương, F.; Lưu, YH; Có thể.; Cui, ZG; Shao, LL Ứng dụng TMA-
PEG để thúc đẩy chiết xuất C-Phycocyanin từS. Platensis
trong PEG ATPS.Proc. hóa sinh.2017,52,283–294.
[36] Saien, J.; Ojaghi, SA Ảnh hưởng của PH pha nước đối với quá trình chiết
xuất chất lỏng-lỏng bằng kỹ thuật tiếp xúc với máy bay phản lực.
J. Ind. Eng. hóa học.2010,16,1001–1005.
[37] Zhao, H.; Trương, Y.; Lu, F.; Bie, X.; Lu, Z.; Ning, H. Quá trình tổng hợp
enzym của Ascorbyl Este từ mỡ lợn được tối ưu hóa bằng cách sử
dụng Novozym 435 trong hỗn hợp đồng dung môi.J. Mol. Catal.
Enzim B. 2011,69,107–111.
[38] Qu, W.; Breksa, AP; Chảo, Z.; Ma, H. Xác định định lượng các
thành phần Polyphenol chính trong sản phẩm lựu.Hóa chất
thực phẩm2012,132,1585–1591.