Machine Translated by Google

Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

Danh sách nội dung có sẵn tại ScienceDirect

Tạp chí khoa học và công nghệ phân phối thuốc

trang chủ tạp chí: www.elsevier.com/locate/jddst

bài nghiên cứu

Một cuộc điều tra về hoạt động của enzyme phosphatase kiềm sau
khi đốt điện và đốt điện
b
Lesley C. Onyekuru , Anabela Moreira , Tiếng Anh Angkawinitwong ,
Một Một Một

, Jiazhe Zhang Gareth

Pedro F. Costa b , Steve Brocchini a, c, R. Williams a,*

Trường Dược UCL, Đại học College London, 29-39 Quảng trường Brunswick, London, WC1N 1AX, Vương quốc Anh
Một

b
Biofabics Lda., Rua Alfredo Allen 455, 4200-135, Porto, Bồ Đào
c
Nha Viện nhãn khoa UCL, Đại học College London, 11-43 Phố Bath, London, EC1V 9EL, Vương quốc Anh

THÔNG TIN BÀI VIẾT TRỪU TƯỢNG

từ khóa: Tính đặc hiệu mục tiêu cao và tính đa chức năng của protein đã dẫn đến sự quan tâm lớn trong việc sử dụng lâm
xử lý điện thủy động lực học sàng. Cuối cùng, sự phát triển của các hệ thống phân phối có khả năng duy trì hoạt tính sinh học của chúng và
quay điện
cải thiện khả dụng sinh học là mấu chốt để đạt được hiệu quả cao và kết quả điều trị khả quan. Các kỹ thuật
phun điện
công nghệ điện thủy động lực học (EHD), cụ thể là quay điện và phun điện, đã được khám phá rộng rãi để đóng
Phosphatase kiềm
gói và phân phối protein. Trong nghiên cứu này, phương pháp quay và phun điện một trục và đồng trục được sử
Hệ thống phân phối protein
dụng để đóng gói phosphatase kiềm (ALP) vào các sợi và hạt poly(ethylene oxide), tương ứng, đồng thời đánh
giá tác động của các kỹ thuật xử lý đối với tính toàn vẹn và hoạt tính sinh học của enzyme. Một đặc tính hóa
lý và hình thái đầy đủ của hỗn hợp và các sản phẩm vỏ-lõi đã được thực hiện. ALP đã được đóng gói thành công
trong các sợi quay điện nguyên khối và vỏ lõi và các hạt được phun điện, với tải trọng thuốc và hiệu quả đóng
gói lần lượt lên tới 21% và 99%. Quay điện đơn trục và đồng trục có hiệu quả như nhau trong việc duy trì chức
năng ALP, dẫn đến không làm mất hoạt tính so với dung dịch nước mới của enzyme. Trong khi kết quả tương tự
cũng được ghi nhận đối với phun điện đơn trục, thì phun điện đồng trục của ALP làm giảm 40% hoạt tính sinh
học của nó, nguyên nhân là do điện áp cao (22,5 kV) được sử dụng trong quá trình xử lý. Điều này chứng tỏ rằng
việc lựa chọn giữa quá trình pha trộn và xử lý EHD đồng trục để đóng gói protein không phải lúc nào cũng đơn
giản, phụ thuộc nhiều vào tác nhân trị liệu được chọn và tác động của các điều kiện xử lý đối với hoạt tính
sinh học của nó.

1. Giới thiệu liều lượng thích hợp tại các trang web mục tiêu. Bản chất không ổn định này của

protein, cũng như khả năng vượt qua các rào cản sinh học thấp, càng cản trở hiệu

Sự quan tâm đến liệu pháp sử dụng các hoạt chất dựa trên protein đã tăng đều quả điều trị của chúng [3]. Do đó, việc tạo ra các hệ thống phân phối protein có

đặn trong những năm qua. Không giống như hầu hết các loại thuốc phân tử nhỏ, khả năng cải thiện tính khả dụng sinh học, bảo vệ hoạt động xúc tác hoặc tác nhân

thủy triều pep và protein hoạt động với tính đặc hiệu cao đối với mục tiêu của của chúng và duy trì liều điều trị trong thời gian dài là cần thiết.

chúng, có khả năng làm giảm tác dụng phụ toàn thân và bất lợi [1]. Hơn nữa, những

tiến bộ trong mô hình tính toán và nghiên cứu proteomic ngày càng cho phép phát Quá trình xử lý điện thủy động (EHD) dựa trên quá trình ép đùn dung dịch

triển protein tái tổ hợp và dự đoán về khả năng ổn định của protein và hoạt tính polyme, nhũ tương hoặc tan chảy dưới điện trường mạnh để sản xuất sợi – quay

sinh học [2]. Tuy nhiên, việc sử dụng các tác nhân trị liệu dựa trên protein - điện – hoặc hạt – phun điện (Hình 1). Cả hai kỹ thuật này đã được khám phá rộng

sinh học - vẫn còn liên quan đến một số hạn chế. Các chất sinh học thường không rãi để phân phối thuốc: mặc dù kỹ thuật quay điện đã được nghiên cứu rộng rãi

ổn định trong ruột, hấp thu kém qua đường uống và có thể dễ dàng bị phân hủy hơn so với kỹ thuật phun điện, nhưng cả hai đều có thể được điều chỉnh để cung

thành các peptit hoặc axit amin cấu thành, làm giảm khả dụng sinh học của chúng. cấp các công thức có lợi thế về cấu trúc và chức năng so với chỉ riêng thành phần

Như vậy, quản lý của họ thường được thực hiện ngoài đường tiêu hóa. Vì protein dược phẩm hoạt tính [4] . Xử lý EHD là phương pháp một bước cho phép sản xuất

có thời gian bán hủy ngắn trong tuần hoàn nên cần phải sử dụng lặp lại để duy trì các hệ thống phân phối thuốc có bề mặt cao

* Đồng tác giả.

Địa chỉ email: g.williams@ucl.ac.uk (GR Williams).

https://doi.org/10.1016/j.jddst.2021.102592 Nhận
ngày 10 tháng 2 năm 2021; Nhận được ở dạng sửa đổi ngày 4 tháng 5 năm 2021; Được chấp nhận ngày 13
tháng 5 năm 2021 Có sẵn trực
tuyến ngày 24 tháng 5 năm 2021 1773-2247/© 2021 (Các) Tác giả. Xuất bản bởi Elsevier BV Đây là một bài báo truy cập mở theo giấy phép CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự.

Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

tỷ lệ diện tích trên thể tích và kích thước nano hoặc vi mô [5]. Một phần
là do khối lượng công việc được thực hiện lớn hơn, quy trình quay điện
hiện nay thực tế hơn và dễ dàng tối ưu hóa hơn so với phun điện [6,7].
Sản xuất quy mô lớn hiện nay cũng dễ dàng hơn với quay điện [8]. Các quy
trình tạo hạt và sợi phần lớn phụ thuộc vào độ nhớt của dung dịch polyme,
và cùng một nguyên liệu polyme và thuốc có thể được xử lý bằng cả phương
pháp quay điện và phun điện. So với sợi quay điện, việc chuẩn bị các hạt
phun điện yêu cầu độ nhớt của dung dịch thấp hơn. Điều này thường đạt
được bằng cách giảm trọng lượng phân tử polyme và/hoặc nồng độ [9,10].
Các quy trình EHD pha trộn hoặc đơn trục (Hình 1A và B) chỉ đơn giản
là phân tán các thành phần hoạt tính sinh học trực tiếp vào chất lỏng làm
việc polyme [11], tạo ra các hạt hoặc sợi nguyên khối. Với những kỹ thuật
này, có sự kiểm soát tối thiểu đối với sự phân phối protein trong các sản
phẩm thu được [12]. Tuy nhiên, các phương pháp pha trộn EHD ít phức
tạp hơn so với các quy trình đồng trục (Hình 1C và D), trong đó cần có
một máy kéo sợi hai kim chuyên dụng để tạo ra các cấu trúc sợi và hạt lõi-
vỏ. Với tổ chức lõi-vỏ này, có thể giới hạn quá trình định vị protein
trong lõi để giảm thiểu sự giải phóng bùng nổ, vì vậy hệ thống có thể
hoạt động như một bể chứa [13–15]. Ví dụ, lactate dehydrogenase đã được nạp vào polymỹ phẩm [24], phụ gia thực phẩm, vật liệu sinh học và công thức thuốc [25].
trong
(vinyl alcohol) (PVA) sử dụng sợi điện quay đồng trục và phân phối bền
vững trong hơn 20 ngày đã được quan sát [16]. Ngoài ra, các phân tử sinh
học được gói gọn trong lõi có thể được bảo vệ tốt hơn khỏi sự phân hủy
và có tương tác tối thiểu với dung môi hữu cơ trong quá trình chế tạo
[17,18]. Điều này trái ngược với việc sử dụng một giải pháp duy nhất để
xử lý EHD, trong đó protein và dung môi chắc chắn sẽ tiếp xúc với nhau.
Protein tiếp xúc với dung môi hữu cơ thường gây ra sự mất cấu trúc bậc
ba, dẫn đến sự biến tính và mất chức năng [19]. Ví dụ, Mickova et al. một
số lipo chứa peroxidase cải ngựa được đóng gói trong các sợi quay điện
[20]. Các hệ thống liposome sợi nano được pha trộn với PVA hoặc được bao
bọc dưới dạng vật liệu lõi-vỏ, với PVA và liposome tạo thành lõi và poly-
ε-caprolactone (PCL) làm vỏ. Họ phát hiện ra rằng các liposome được nhúng
trong các sợi vỏ lõi bảo tồn tốt hơn hoạt động enzym của peroxidase cải
ngựa, trong khi hệ thống pha trộn không bảo tồn được các liposome nguyên
vẹn và dẫn đến mất hoạt tính enzym [20].
Quá trình xử lý EHD cũng thuận lợi về phạm vi rộng của các vật liệu
sinh học tự nhiên và tổng hợp có thể được sử dụng để hình thành sợi và
hạt [4]. Poly(ethylene oxide) (PEO) là một polyme [21] bán tinh thể,
không độc hại và tương thích sinh học [22,23] tổng hợp được sử dụng

Hình 1. Quay điện và phun điện một trục (A, B) và đồng trục (C, D). Các phương pháp này dựa trên việc đùn dung dịch polyme hoặc làm tan chảy qua một máy
quay, được áp dụng một hiệu điện thế cao, gây ra sự phóng dung dịch về phía bộ thu kim loại nối đất. Trong quỹ đạo này, dung môi bay hơi và các sợi khô
(A, C) hoặc các hạt (B, D) được lắng đọng, tùy thuộc vào dung dịch và điều kiện xử lý. Quay và phun điện đơn trục lần lượt tạo ra các sợi và hạt nguyên
khối, trong khi quá trình xử lý EHD đồng trục tạo ra các cấu trúc vỏ-lõi.

2
Machine Translated by Google
LC Onyekuru và cộng sự.
Các tính chất hóa lý của polyme, chẳng hạn như độ nhớt trong dung
dịch, độ hòa tan và phạm vi trọng lượng phân tử rộng có sẵn, làm cho
nó phù hợp cho cả quay điện và phun điện [26]. PEO đã được sử dụng
rộng rãi để chế tạo EHD các vật liệu sinh học chứa protein [27,28].
Tính phù hợp của quá trình xử lý EHD để đóng gói protein đã được
chứng minh với nhiều chất sinh học (gần đây đã được xem xét trong tài
liệu tham khảo [29,30]), bao gồm albumin huyết thanh bò [31], các yếu
tố tăng trưởng [32–34], hormone [35] và các enzym như lysozyme [36]
và kiềm phos phatase (ALP) [12]. ALP là một metallicoenzyme dimeric có
trọng lượng phân tử khoảng 115–165 kDa [37,38], trong đó hai tiểu đơn
vị giống hệt nhau khoảng 56 kDa hoạt động để xúc tác quá trình thủy
phân monoeste phốt phát và liên kết diester trong môi trường kiềm
[39]. ALP được tìm thấy trong nhau thai, gan, niêm mạc ruột, thận,
màng tế bào thần kinh, xương, mô khối u và thậm chí ở các loài vi
khuẩn như Escherichia coli [40–42]. Trong ruột, ALP thực hiện tác dụng
bảo vệ, chống viêm bằng cách giải độc lipopolysacarit (LPS, một thành
phần của màng ngoài của vi khuẩn gram âm), điều chỉnh độ pH của tá
tràng và góp phần điều hòa hệ vi sinh vật đường ruột, gợi ý một tình
trạng tiêu chảy. ứng dụng điều trị dự kiến của enzyme trong các rối
loạn viêm và nhiễm trùng đường ruột [43,44]. Các nghiên cứu trước đây
chỉ ra rằng khả năng giải độc LPS của ALP cũng có thể đóng vai trò
trong điều trị nhiễm trùng huyết [45,46].
Một nghiên cứu của Ji et al. trước đây đã khám phá quá trình đóng
gói ALP trong hỗn hợp và quay điện đồng trục trong sợi PCL và sợi
poly(ethylene glycol) [12]. Các sợi được chế tạo dưới dạng công thức
lõi-vỏ giữ lại khoảng 76% hoạt tính enzym, trong khi các sợi pha trộn
chỉ thể hiện 49% hoạt tính ALP mới. Các sợi lõi-vỏ cũng hiển thị hình
thái đơn dạng với sự giải phóng chùm thấp hơn so với các sợi pha
trộn. Ở đây, ALP sẽ được sử dụng làm mô hình để hiểu tác động của quá
trình xử lý EHD đối với hoạt động của protein được bao bọc, vì đây là
một loại enzyme được nghiên cứu rộng rãi và phổ biến rộng rãi với xét
nghiệm hoạt động khá đơn giản [12,47,48] . Do khả năng hòa tan trong
nước cao, quá trình thu hồi enzyme sau xử lý từ hệ thống phân phối dựa
trên PEO phải đơn giản, do đó tạo điều kiện thuận lợi cho việc đánh
giá hoạt động của protein sau quy trình đóng gói. Do đó, mục đích chính
của công việc này là kiểm tra tiềm năng sử dụng các kỹ thuật xử lý EHD
để chế tạo các hạt và sợi chứa protein bằng cách sử dụng ALP làm thuốc mẫu. 23 kV và khoảng cách 15–20 cm. Các điều kiện để trộn và phun đồng trục
Các mục tiêu cụ thể là tối ưu hóa sự hình thành các sợi và hạt được
nạp ALP bằng cả phương pháp xử lý EHD đơn trục và đồng trục, kiểm
tra tác động của các kỹ thuật đối với các đặc tính vật lý của sợi và
hạt, đồng thời khám phá tác động của các phương pháp xử lý khác nhau
về hoạt động ALP.
2. Phương pháp
Các công thức được chuẩn bị trong nghiên cứu này và danh pháp của chúng được trình
bày chi tiết trong Bảng 1.
2.1. Tối ưu hóa các thông số quay điện
Giao thức tuân theo để tối ưu hóa các tham số quay điện được điều
chỉnh từ nghiên cứu của Jin [49]. Các dung dịch PEO (600 kDa, Sigma-
Aldrich, UK) (3% w/v trong etanol:nước, 7:3 v/v) được điều chế và
khuấy trong 48 giờ ở 30 C để thu được hỗn hợp đồng nhất . Dung dịch
PEO/enzyme được tạo ra bằng cách thêm dung dịch ALP (Sigma-Aldrich, UK) (5% sợi hoặc hạt trung bình [50]. Ít nhất 100 phép đo riêng biệt cho mỗi
Bảng 1
Khóa dữ liệu cho các sợi và hạt được nạp ALP được mô tả trong bài viết này.
chi tiết mẫu
Sợi được chuẩn bị bằng cách sử dụng điện quay đồng trục
Sợi được chuẩn bị bằng cách sử dụng hỗn hợp điện quay
Các hạt được điều chế bằng phun điện đồng trục
Các hạt được chuẩn bị bằng cách sử dụng hỗn hợp phun điện
Phosphatase kiềm, như được cung cấp
Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592
w/v trong 0,5 mL dung dịch muối đệm phốt phát (PBS, pH 7.4, Thermo
Fisher Khoa học, Vương quốc Anh)) vào 3,5 mL dung dịch PEO và khuấy
nhẹ cho đến khi đồng nhất, ngay trước khi kéo sợi. Đối với kéo sợi
điện hỗn hợp một trục (sợi EFB), dung dịch PEO hoặc PEO/enzym được nạp
vào ống tiêm nhựa và kéo sợi từ kim có đường kính trong 0,61 mm (20G)
sử dụng dải điện áp từ 9–15 kV, tấm thu kim phạm vi khoảng cách là 12–
22,5 cm và tốc độ dòng chảy là 0,5–1 mL/h. Các sợi được thu thập dưới
dạng một tấm thảm trên lá nhôm, để trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng để
dung môi bay hơi thêm, sau đó được bảo quản trong bình hút ẩm trên
phốt pho pentoxit trước khi phân tích và mô tả đặc điểm thêm.
Xơ đồng trục (EFC) được kéo thành sợi với 3% w/v PEO (dung dịch
vỏ, ethanol:nước, 7:3 v/v) và 5% w/v ALP (dung dịch lõi, PBS), sử dụng
một máy kéo sợi đồng trục có đường kính trong 2 mm (mao quản ngoài)
và 1 mm (mao quản trong). Tốc độ dòng lõi thay đổi từ 0,1 đến 0,5 mL/h
và tốc độ dòng vỏ từ 0,6 đến 1,0 mL/h. Dải điện áp được khám phá là 9–
18 kV và khoảng cách 12–20 cm. Các sợi thu được được thu thập và lưu
trữ theo cách tương tự như các sợi pha trộn. Các điều kiện để kéo
sợi đơn trục và đồng trục được mô tả tương ứng trong Bảng 2 và Bảng
3.
2.2. Tối ưu hóa các thông số phun điện
Đối với phun điện hỗn hợp (hạt EPB), 250 μL ALP (10% w/v trong PBS)
đã được thêm vào dung dịch PEO (20 kDa, Sigma-Aldrich, UK) (10% w/v
trong ethanol:nước, 7: 3 v/v, 3,75 mL) để tạo thành chất lỏng phun,
sau đó được nạp vào một ống tiêm nhựa dùng một lần. Loại thứ hai được
truyền với dải tốc độ dòng chảy là 0,3–1,5 mL/h, khoảng cách giữa kim
và tấm thu thập là 10–20 cm và điện áp đặt vào từ 9 đến 25 kV. Đối với
phun điện đồng trục (EPC), chất lỏng vỏ là dung dịch PEO ở 10% w/v
trong ethanol:nước (7:3 v/v) và ALP (5% w/v) được hòa tan trong PBS
và được sử dụng làm chất giải pháp cốt lõi. Các giải pháp ALP và
polymer đã được chuẩn bị mới trước khi phun điện. Các hạt lõi-vỏ ALP/
PEO được điều chế bằng kim đồng trục (đường kính trong của lõi là 1
mm và đường kính trong của vỏ là 2 mm), qua đó hai chất lỏng được
phân phối đồng thời. Tốc độ dòng vỏ thay đổi từ 0,6 đến 1,0 mL/h và
tốc độ dòng lõi từ 0,02 đến 0,15 mL/h. Dải điện áp được khám phá là 17–
được mô tả tương ứng trong Bảng 4 và Bảng 5.
Quay điện và phun điện đơn trục và đồng trục được thực hiện ở
nhiệt độ phòng (25 ± 2 C) và ở độ ẩm tương đối 30 ± 1%. Ít nhất ba
lô của mỗi công thức đã được chuẩn bị để đảm bảo khả năng tái lập.
2.3. đặc điểm hình thái
2.3.1. Kính hiển vi điện tử quét (SEM)
Đối với sợi quay điện, các mẫu nhỏ khoảng 1 × 1 cm được cắt từ mỗi
tấm thảm. Đối với các hạt, một diện tích tương tự của lá nhôm với các
hạt lắng đọng đã được sử dụng. Các mẫu sau đó được phủ một lớp phún
xạ vàng 20 nm (Q150T, Quorum Technologies, UK) và được chụp ảnh bằng
kính hiển vi Quanta 200F (FEI, USA) được kết nối với máy dò điện tử
thứ cấp (máy dò Everheart-Thornley). Sau khi chụp ảnh, phần mềm ImageJ
(Viện Y tế Quốc gia, Hoa Kỳ) đã được sử dụng để xác định đường kính
mẫu đã thu được. Dữ liệu thu thập được sau đó
Bảng
kích thước đầy đủ
Khóa đã sử dụng
EFC
tham số quá trình Giá trị
EFB
EPC Vôn 10kV
EPB Khoảng cách 22,5cm
ALP Lưu lượng dòng chảy 0,8mL/giờ
3
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự. Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

Bảng 3 2.5. Định lượng protein và đánh giá hoạt động

Các điều kiện xử lý được tối ưu hóa để hình thành EFC.

2.5.1. Điện di trên gel polyacrylamide natri dodecyl sulphate (TRANG SDS)

tham số quá trình Giá trị

Dung dịch đệm mẫu LDS NuPAGE® (6 μL) (Invitrogen, Thermo Fisher Khoa học,
Vôn 12kV
Khoảng cách 15 cm Vương quốc Anh) đã được thêm vào dung dịch (20 μL) protein cần thử nghiệm.
Tốc độ dòng chảy (lõi) 0,1 mL/giờ Hỗn hợp này được xoáy trong 3–5 giây và được nạp vào gel đúc sẵn Novex® Bis-
Tốc độ dòng chảy (vỏ) 0,6 mL/giờ
Tris 4–12% (Invitrogen, Thermo Fisher Khoa học, Vương quốc Anh) được gắn trong

bể điện di. Chất chuẩn trọng lượng phân tử đã nhuộm màu trước (5 μL) được thêm

vào giếng đầu tiên. Dung dịch đệm chạy (dung dịch đệm NuPAGE® MOPS SDS được pha
Bảng 4 loãng trong nước cất, 1:20 v/v; Novex®, Life Technologies, UK) đã được thêm vào
Các điều kiện xử lý được tối ưu hóa để hình thành EPB. bể. Điện áp 200 V và dòng điện 70 mA đã được áp dụng và thử nghiệm được phép

chạy trong 50 phút. Loại bỏ gel, nhuộm bằng Coomassie blue trong 1 giờ, sau đó

tham số quá trình Giá trị rửa bằng nước cất trong 1 giờ.

Vôn 15,5 kV
Khoảng cách 15 cm
Lưu lượng dòng chảy 0,6 mL/h 2.5.2. MicroBCA™

Để định lượng protein có trong mẫu, Bộ xét nghiệm Protein Pierce™ Micro BCA

(ThermoFisher Khoa học, Vương quốc Anh) đã được sử dụng, tuân theo giao thức

Bảng 5 khuyến nghị của nhà sản xuất. Các xét nghiệm được thực hiện trong các đĩa 96

Các điều kiện xử lý được tối ưu hóa để hình thành EPC. giếng trong suốt (Corning, Hoa Kỳ). Để làm cho chất phản ứng hoạt động MicroBCA™

(WR), thuốc thử A, B và C được cung cấp được trộn theo tỷ lệ 25:24:1 v/v/v. Các

Giá trị mẫu protein 150 μL đã được thêm vào các giếng riêng lẻ của đĩa, sau đó là một
tham số quá trình
thể tích WR tương đương. Đĩa được lắc bằng máy lắc đĩa trong 30 giây. Các
Vôn 22,5kV
Khoảng cách 17 cm
biện pháp kiểm soát bao gồm polyme được sử dụng trong quá trình xử lý, không xử

Tốc độ dòng chảy (lõi) 0,02 mL/giờ lý (PBS), ALP và dung môi được sử dụng để xử lý. Sau khi lắc, tấm được ủ ở 37
Tốc độ dòng chảy (vỏ) 0,3 mL/giờ C trong 2 giờ, để nguội ở nhiệt độ phòng trong 5 phút và đọc độ hấp thụ ở bước
sóng 562 nm bằng đầu đọc tấm SpectraMax M2e (Molecular Devices, USA). Khoảng

định lượng chính xác nhất khi sử dụng BCA nằm trong khoảng nồng độ từ 5–40 μg/
được vẽ thành biểu đồ bằng phần mềm OriginLab (Phiên bản 9.1, Origin OEM, USA).
mL. Do đó, để định lượng protein hiện diện, một đường cong chuẩn đã được tạo

cho ALP trong phạm vi này.

2.3.2. Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM)

Trong quá trình chế tạo hạt, các mẫu được thu thập trực tiếp trên lưới TEM
2.5.3. Tải lượng
đồng 2030C 300 lưới được phủ formvar (SPI Supplies, Hoa Kỳ) trong khoảng 20
thuốc Tải lượng thuốc được tính bằng Công thức (1), với khối lượng protein
giây. Các mẫu sau đó được phân tích bằng thiết bị JEM-2100F (JEOL, Nhật Bản).
được xác định bằng phương pháp MicroBCA™ như được trình bày chi tiết trong Phần
2.5.2.

phương trình 1
2.4. đặc tính hóa lý
khối lượng protein trong các hạt hoặc sợi
DL% = × 100 tổng trọng lượng của mẫu (1)
2.4.1. Quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR)
FTIR được thực hiện ở chế độ suy giảm tổng phản xạ (ATR) trên khoảng 3 mg

mẫu sử dụng máy quang phổ Spectrum 100 (Perkin Elmer, Hoa Kỳ), với 20 lần quét 2.5.3.1. Hiệu suất đóng gói Hiệu quả đóng gói được tính toán bằng phương trình
được thu thập trên mỗi mẫu ở độ phân giải 1 độ sáng 2 cm trên dải bước sóng (2), một lần nữa dựa trên định lượng protein từ xét nghiệm MicroBCA™.
4000 –650 cm các mẫu độc lập đã được nghiên cứu trên mỗi công thức 1 . Ba

và một phổ đại diện được hiển thị cho mỗi mẫu. phương trình 2

tổng khối lượng protein chiết xuất

EE% = ×100 (2)
khối lượng lý thuyết của protein trong công thức
2.4.2. Nhiễu xạ bột tia X (XRD)
Các mẫu được đặt trên các tấm nhôm và các mẫu nhiễu xạ thu được bằng thiết
2.5.3.2. Xét nghiệm hoạt động. Hoạt tính ALP được đo bằng chất nền p-nitro
bị Miniflex 600 (Rigaku, Nhật Bản) được cung cấp bức xạ Cu Kα ở 40 kV và 15 mA.
Các mẫu được ghi lại trong phạm vi 2θ 3–40 với tốc độ 5 mỗi phút (bước kích phenyl phosphate (p-NPP). P-NPP không màu bị thủy phân thành p-nitrophenol (p-NP)

màu vàng khi có ALP và các điều kiện kiềm, và p-NP có thể được định lượng ở độ
thước = 0,02 ). Ba mẫu độc lập đã được nghiên cứu trên mỗi công thức và một
hấp thụ 405 nm. Giao thức chuẩn đã được sửa đổi trên cơ sở các phương pháp
mẫu đại diện được hiển thị cho mỗi mẫu.
được mô tả bởi Ji et al. [12]. Các sợi và hạt (10 mg, n = 3) được hòa tan trong

nước khử ion (5 mL). Các phần dịch chiết (80 μL) được ủ với 2-ami no-2-metyl-1-

propanol (1,5 M trong H2O khử ion, 20 μL; Acros Or ganics, Vương quốc Anh) và
2.4.3. Phép đo nhiệt lượng quét vi sai (DSC)
nạp vào đĩa 96 giếng. Dung dịch chất nền lỏng p-NPP (100 μL; Sigma Aldrich, UK)
Khoảng 5 mg của mỗi mẫu được niêm phong trong chảo nhôm Tzero (T130425) có
đã được thêm vào hỗn hợp ban đầu.
nắp đậy kín có lỗ ghim (dụng cụ TA, Hoa Kỳ). Q2000 DSC (Dụng cụ TA) đã được sử

dụng để thu thập dữ liệu ở tốc độ gia nhiệt là 10 C mỗi phút, từ 20 C đến ca.
Sau 5 phút, NaOH (1 M, 20 μL) đã được thêm vào để dừng xúc tác ALP và độ hấp
140 C. Tất cả các thí nghiệm được hình thành trong điều kiện thanh lọc nitơ
thụ của p-NPP được đo bằng đầu đọc vi bản SpectraMax M2 (Thiết bị phân tử, Hoa
50 mL/phút. Ba mẫu độc lập đã được nghiên cứu trên mỗi công thức và một biểu đồ
Kỳ) ở bước sóng 405nm. Tỷ lệ phần trăm hoạt động ALP tương đối sau đó được
nhiệt độ DSC đại diện cho mỗi mẫu được trình bày.
xác định bằng Công thức (3): Công thức 3

4
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự. Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

Tải ALP được xác định bằng xét nghiệm hoạt động ALP vẽ biểu đồ được thực hiện bằng phần mềm OriginLab. Ý nghĩa thống kê được đánh giá
Hoạt động ALP (%) = × 100
Tải ALP được tính bằng MicroBCA™ bằng phân tích phương sai một chiều (ANOVA) bằng cách sử dụng bài kiểm tra sau đại

(3) học của Tukey. Ý nghĩa được đặt ở giá trị p (p) < 0,05 (*); ** biểu thị p < 0,01, ***

biểu thị p < 0,001 và **** biểu thị p < 0,0001.

2.6. Phân tích thống kê

Tất cả dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn (SD) từ ba

mẫu độc lập trừ khi có chỉ định khác. phân tích thống kê và

Hình 2. Ảnh SEM và phân bố kích thước tương ứng (n = 100) của (a–c) EFB, (d–f) EFC, (g–i) EPB và (j–l) EPC. Đường kính trung bình ± SD cho mỗi công thức
lần lượt là 236 ± 79 nm, 316 ± 127 nm, 730 ± 160 nm và 1290 ± 240 nm.

5
Machine Translated by Google
LC Onyekuru và cộng sự.
3. Kết quả và thảo luận
3.1. đặc điểm hình thái
Hình thái của các công thức quay điện bị ảnh hưởng bởi một số yếu tố
như lựa chọn dung môi, tính chất vật liệu, nồng độ của vật liệu cấu thành
và các thông số xử lý [51]. Sử dụng các tham số trong Bảng 2, các sợi không
có hạt (EFB) mịn, đồng nhất bao gồm ALP và PEO có thể được tạo ra bằng
phương pháp quay điện hỗn hợp, với đường kính trung bình là 236 ± 79 nm
(Hình 2 a và b). Biểu đồ trong Hình 2c cho thấy đường kính sợi pha trộn có
phân bố bình thường.
Các kích thước được ghi chú ở đây phù hợp với tài liệu: trong một nghiên
cứu của Wongsasulak và cộng sự, sợi PEO pha trộn quay điện có chứa ovalbumin
có đường kính từ 188 đến 470 nm [52].
Các sợi ALP-PEO (EFC) lõi-vỏ (Hình 2d và e), được chuẩn bị bằng cách sử
dụng các điều kiện tối ưu được trình bày trong Bảng 3, cho thấy các cấu
trúc hình trụ không có hạt. Các sợi này có đường kính trung bình là 316 ±
127nm, lớn hơn một chút so với EFB và ít phân bố chuẩn hơn (xem Hình 2f).
Trong một nghiên cứu của Tiwari và Venkatraman, sự hình thành sợi nguyên khối
và sợi lõi-vỏ đã được so sánh [53]. Nhóm nghiên cứu đã suy luận rằng sự khác
biệt về độ nhớt của các dung dịch được sử dụng trong cả hai quy trình đều
ảnh hưởng đến các sợi được tạo ra. Đối với EFB, độ nhớt của dung dịch
polyme đã giảm (xem EFC) do việc bổ sung dung dịch protein trước khi kéo
sợi. ALP được hòa tan trong PBS, dẫn đến dung dịch có độ nhớt thấp hơn
nhiều so với dung dịch PEO và khi cả hai được kết hợp để quay điện, độ nhớt
tổng thể của dung dịch hỗn hợp sẽ nằm ở đâu đó giữa hai dung dịch ban đầu.
Độ nhớt giảm này dẫn đến EFB có các sợi hẹp hơn EFC.
Ảnh SEM của các hạt ALP-PEO pha trộn (EPB; Hình 2g và h) cho thấy các hạt
PEO đơn phân tán với kích thước hạt trung bình là 730 ± 160 nm. Biểu đồ
kích thước hiển thị phân phối bình thường (Hình 2i) với hầu hết các hạt có
kích thước từ 500 đến 1000nm. Đổi lại, hình ảnh của các hạt ALP-PEO lõi-vỏ
(EPC) trong Hình 2j và k cho thấy các hạt có bề mặt thường nhẵn và kích
thước trung bình là 1290 ± 240nm.
Dường như có một quần thể thứ cấp gồm các hạt vệ tinh nhỏ hơn được gắn vào
khối lớn hơn (xem Hình 2k). Biểu đồ kích thước hạt trong Hình 2l một lần
nữa cho thấy phân phối bình thường. So sánh các công thức pha trộn và đồng
trục, hệ thống EPB dường như được tổng hợp nhiều hơn EPC. Sự gắn kết cao
hơn này có thể là do sự hiện diện của protein tại giao diện hạt trong EPB,
làm thay đổi tính chất sức căng bề mặt [54,55].
Cả các hạt và sợi được chế tạo theo quy trình đồng trục đều có đường
kính lớn hơn so với các đối tác pha trộn của chúng. Việc giảm đường kính
vật liệu có thể là do nồng độ PEO giảm khi dung dịch protein và polyme được
trộn trực tiếp [56]. Hơn nữa, sự hiện diện của các protein tích điện trên
bề mặt của sợi và giọt trong thí nghiệm đơn trục làm giảm tính ổn định của
dòng phản lực di chuyển, thúc đẩy sự đứt gãy hoặc phân hạch và dẫn đến đường
kính nhỏ hơn [57] .
Điều này được chứng minh bởi các tài liệu: Reardon et al. lõi-vỏ đã chuẩn bị
và pha trộn các vi hạt PLGA bằng kỹ thuật xử lý EHD. Các hạt pha trộn có
đường kính trung bình là 550 ± 80 nm, trong khi các hạt lõi-vỏ có đường
kính trung bình là 850 ± 200 nm [58].
Ảnh TEM của sợi EFB cho thấy các cấu trúc có kích thước khác nhau (Hình
3a). Đường kính sợi được đo bằng TEM phù hợp với kết quả tìm được suy ra
từ kết quả SEM, tại ca. 300nm. Các sợi pha trộn được biết là có bản chất
nguyên khối, điều này đúng với các sợi EFB ở đây [59]. Ngược lại, các hình
ảnh TEM trong Hình 3b cho thấy cấu trúc lõi-vỏ của mẫu EFC, với đường kính
trong xấp xỉ 185 nm và đường kính vỏ là 235 nm. Đường kính EFC 235nm nằm
trong phân bố kích thước dự kiến cho mẫu này từ SEM (như chi tiết trong
Hình 2f). Thực tế là đường kính TEM nhỏ hơn một chút so với giá trị SEM
trung bình có thể được quy cho số lượng quan sát thấp trong thử nghiệm TEM.
Trong ảnh TEM của cả EFB và EFC, dường như có một số tập hợp có trong sợi,
có khả năng tương ứng với sự kết tụ ALP.
Ảnh TEM của các hạt được phun điện được hiển thị trong Hình 3c
6
Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592
(EPB) và Hình 3d (EPC). Các hình ảnh cho EPB cho thấy sự hình thành các hạt
đồng nhất. Ảnh TEM của các hạt đồng trục phù hợp với cấu trúc lõi-vỏ đã được
hình thành, có lẽ với ALP được định vị trong lõi hạt và được bao bọc bởi
lớp vỏ PEO.
Những phát hiện này đều phù hợp với các nghiên cứu trước đây của các
nhóm khác. Văn và cộng sự. đã sử dụng phương pháp quay điện đồng trục để
bao bọc lõi BSA/chitosan trong lớp vỏ natri alginate và PEO, và đạt được cấu
trúc lõi-vỏ riêng biệt [60]. Các ví dụ khác về các hạt lõi-vỏ sử dụng quy
trình EHD đồng trục đã được mô tả, bao gồm cả việc đóng gói tế bào gốc trong
collagen [61] và đóng gói BSA trong PLGA [62].
3.2. đặc tính hóa lý
Phổ FTIR được hiển thị trong Hình 4. Các đỉnh hấp thụ PEO tại được gán
1 khoảng 1341 cm cho các dao động của liên kết CH. Các ban nhạc ở mức 1
1 khoảng 1064 cm và ca. 1100 cm là các dao động kéo dãn nhóm COC và
1
CC. Đỉnh ở 1460 cm phát sinh từ sự uốn cong CH [22]. Các đỉnh chính được
xác định trong ALP bao gồm một đỉnh rộng ở 3283 tương ứng với sự có mặt của
1cm amin bậc hai (NH). Dải amin chính nằm ở 1641 cm (amide I) và gần
1
1 . Cả hai
tiếp theo là amide II, một đỉnh uốn NH2 ở khoảng 1530 cm các đỉnh
này hiện diện – mặc dù yếu – trong tất cả các sợi và hạt được nạp ALP, xác
nhận sự bao bọc protein. Cường độ giảm của các đỉnh ALP trong các công thức
có lẽ là do protein bao gồm một tỷ lệ tương đối nhỏ trong tổng khối lượng
của vật liệu [63].
Tất cả các dải chính của PEO được quan sát thấy trong quang phổ của dạng
1
các mối quan hệ được tạo ra bởi các quá trình EHD. Đỉnh hấp thụ ở 2881 cm
1 đối với sợi và 2868 cm đối với các hạt được cho là do CH2 dao động uốn
cong trong cả polyme và protein [22]. Trong quang phổ của sợi hỗn hợp và sợi
vỏ lõi, một đỉnh hấp thụ yếu được xác định 1 ở 1733 cm
. Đỉnh này không có trong polyme hoặc protein và là dấu hiệu
của sự kéo dài carbonyl. Sự kéo dài carbonyl này có thể phát sinh do sự thay
đổi vị trí dải amit ban đầu hoặc nó có thể xuất hiện do quá trình thủy phân
hoặc oxy hóa protein do sự phức tạp của cấu trúc đang được xử lý [63] .
Dữ liệu DSC và XRD cũng được thu thập trên các công thức (Thông tin bổ
sung bổ sung, Hình S1 và S2). Chúng bị chi phối bởi các tính năng của PEO,
như được mong đợi vì nó bao gồm phần lớn khối lượng của các hạt và sợi.
Tất cả các công thức chứa ALP được phân bố vô định hình trong ma trận PEO
bán tinh thể.
3.3. Hiệu quả đóng gói và tải thuốc
Tải ALP của cả sợi pha trộn và sợi đồng trục đã được xác định
sử dụng xét nghiệm MicroBCA™ (Bảng 6).
Bảng 6 cho thấy rằng sợi pha trộn chứa ít ALP hơn so với sợi lõi-vỏ.
Hiệu quả đóng gói cũng thấp hơn đối với EFB, điều này có thể là do phương
pháp phân tán cơ học được sử dụng cho cấu trúc pha trộn: trộn nhẹ nhàng
được sử dụng, điều này có thể không tạo ra dung dịch đồng nhất hoàn toàn
(sự đồng nhất của phân phối protein trong dung dịch polyme có thể khó đạt
được nếu không sử dụng thiết bị cắt cao)
[64]. Ngoài ra, việc protein tiếp xúc trực tiếp với dung môi hữu cơ trong
công thức pha trộn có thể dẫn đến kết tủa một số enzyme [65].
Chew và các đồng nghiệp đã điều tra việc đóng gói yếu tố tăng trưởng
thần kinh β của con người (NGF) và BSA trong các sợi nguyên khối quay điện.
Họ đã tính toán tải trọng lý thuyết lần lượt là 0,0123 và 4,08% cho NGF và
BSA [57], nhưng quan sát thấy mức NGF được đóng gói thấp hơn đáng kể (3,10
4
× 10 khả năng của phản lực %), quy sự khác biệt này cho insta
protein-polyme trong quá trình quay điện. Mức BSA không được xác định. Bằng
chứng từ Nghiên cứu của Chew gợi ý rằng các vật liệu tích điện, chẳng hạn
như protein, có thể hoạt động rất khác so với chất mang polyme trong trường
điện từ, khiến chúng lắng đọng trên các bề mặt có thể không được dự định thu
thập.
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự.

Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

Hình 3. Ảnh TEM của a) EFB, với mũi tên màu xanh biểu thị sự hình thành sợi có đường kính nhỏ hơn và mũi tên màu cam xác nhận sự hình thành sợi nguyên khối, b)
EFC, với mũi tên màu cam cho thấy sự hình thành cấu trúc lõi-vỏ, c) EPB, hiển thị các hạt đồng nhất và d) EPC, hiển thị cấu trúc vỏ-lõi (được đánh dấu bằng các
đường đứt nét màu vàng).

7
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự. Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

Hình 4. Phổ FTIR của a) như PEO (600 kDa), ALP, EFB và EFC được cung cấp. b) Phổ FTIR của PEO (20 kDa), ALP, EPB và EPC được cung cấp. Quang phổ cho thấy các dải ALP
có trong cả sợi và hạt.

với nó đến bộ thu, do đó quá trình sấy thường xảy ra trước khi protein
Bảng 6
có thể di chuyển lên bề mặt của vật liệu. Các kết quả từ nghiên cứu của
Hiệu quả nạp và đóng gói thuốc Các sợi quay điện và các hạt phun điện được nạp
Chew chứng thực những phát hiện trong Bảng 6, vì hiệu quả đóng gói được
ALP (dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± SD, n = 3).
cải thiện trong các cấu trúc lõi-vỏ [57].
tải lý thuyết nạp thuốc hiệu quả đóng gói Theo quan sát đối với các chế phẩm sợi, hiệu quả đóng gói của EPB
EFB 19,2% 16,6 ± 0,6% (w/w) 86,2 ± 2,9% thấp hơn so với EPC (Bảng 6). Tuy nhiên, tải ALP đối với EPB lớn hơn
EFC 21,7% 20,6 ± 1,2% (w/w) 94,6 ± 5,4%
EPC, do tốc độ dòng chảy thấp phải được sử dụng cho lõi của EPC. Khi so
EPB 5,9% 5,0 ± 0,2% (w/w) 85,0 ± 4,0%
sánh lượng thuốc nạp vào sợi với lượng thuốc nạp vào hạt, ALP được nạp
EPC 3,0% 3,0 ± 0,4% (w/w) 99,0 ± 12,0%
nhiều hơn trước đây. Sự khác biệt về tải thuốc phát sinh do nồng độ
protein trong dung dịch gốc và tỷ lệ polyme so với protein trong nguyên
hiệu quả nạp cho các hoạt chất protein có thể được cải thiện bằng cách liệu đầu vào, điều này ảnh hưởng đến nồng độ protein như được mô tả
xử lý các dung dịch protein và dung dịch polyme riêng biệt trong quá trong Phần 2.1 và 2.2, và đến tốc độ dòng chảy của nguồn cấp protein
trình kéo sợi điện đồng trục [66]. Hiệu quả đóng gói protein thường được [ 67]. Ví dụ, dung dịch vỏ để hình thành sợi chảy nhanh hơn 6 lần so với
tăng lên trong các cấu trúc lõi-vỏ vì dung dịch lõi nằm trong vỏ và được mang dung dịch protein lõi,

Hình 5. SDS-PAGE tạo gel cho ALP sau khi đóng gói thành a) hạt và b) sợi. M biểu thị làn đánh dấu. Các dải trong a) tương ứng với: 1) ALP, 2) EPB và 3) EPC.
Các vạch ở b) đại diện cho: 1) ALP, 2) EFB và 3) EFC.

số 8
Machine Translated by Google
LC Onyekuru và cộng sự.
trong khi đối với các hạt vỏ chảy nhanh hơn 15 lần. Nó được phát hiện
là dễ hình thành sợi hơn hạt và việc tối ưu hóa quá trình sản xuất
hạt yêu cầu giảm đáng kể tốc độ dòng lõi, dẫn đến giảm tải protein ở
phần sau (Bảng 6).
3.4. TRANG SDS
Các thí nghiệm đã được thực hiện để xác định ảnh hưởng của từng
quy trình EHD đối với ALP. Các gel hiển thị các dải protein rõ ràng ở
khoảng 56 kDa từ ALP, cho cả ALP mới và sau khi hòa tan các hạt EPB và
EPC (Hình 5a). Vì ALP dự kiến sẽ tồn tại dưới dạng dime có trọng lượng
phân tử 115–165 kDa, nên vị trí của các dải cho thấy ALP được cung
cấp đã bị phân hủy thành các monome [ 68], trong quá trình đông khô
được sử dụng bởi nhà sản xuất hoặc bởi SDS được sử dụng trong gel.
Tuy nhiên, điều này cho thấy rằng việc chuẩn bị hỗn hợp chứa ALP
Hình 6. Kết quả của thử nghiệm hoạt động ALP đối với a) các hạt phun điện và b) sợi quay điện. Dữ liệu được báo cáo là trung bình ± SD (n = 3). Phần lớn ALP vẫn
hoạt động sau khi chế tạo ngoại trừ trường hợp EPC. ALP tươi được sử dụng làm đối chứng dương và ALP đun sôi trong nước ở 100
tính) là đối chứng âm. *** biểu thị p < 0,001, **** biểu thị p < 0,0001.
9
Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592
và các hạt lõi-vỏ không gây ra bất kỳ sự phân mảnh hoặc tổng hợp nào
của protein.
Đối với các sợi (Hình 5b), dữ liệu SDS-PAGE khá khác nhau: ALP mới
hòa tan hiển thị các dải ở mức 100–120 kDa (bộ điều chỉnh độ sáng),
cũng như khoảng 55 kDa (đơn phân). Điều này có thể được giải thích
bởi thực tế là các lô ALP khác nhau đã được sử dụng để chế tạo sợi và hạt.
Sau khi quay, tất cả các dải này vẫn còn, nhưng một dải mới xuất hiện
với kích thước khoảng 30 kDa. Đây có thể là kết quả của các sản phẩm
phân hủy cũng có thể được liên kết với dải FTIR C ––O bổ sung được
1 1733 cm ghi chú sau khi quay điện (Hình 4). Tuy nhiên, cả phương
pháp quay điện và phun điện hỗn hợp và đồng trục dường như thường duy
trì tính toàn vẹn của ALP sau khi xử lý và không có sự khác biệt rõ
ràng nào được ghi nhận giữa các phương pháp đồng trục và đơn trục.
Để kiểm tra xem sự khác biệt về ALP chưa qua xử lý được quan sát thấy trong
hai loại gel trong Hình 5 có thể là do các lô protein riêng biệt được sử dụng hay không
C trong một giờ (ALP biến
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự. Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

đối với các hạt và sợi, thí nghiệm này được lặp lại với lô pro tein thứ ba và (22–25 kV) làm giảm thêm chức năng enzym của lysozyme, cho đến khi chỉ còn 36%

gel tương ứng có trong Hình S3 (Đang hình thành). Cấu hình dải thứ ba này khác hoạt tính được giữ lại sau khi quay điện. Ngược lại, Kim et al. sợi quay điện của

với cả hai dải được trình bày trong Hình 5: có thể quan sát thấy một dải bổ sung lysozyme trong PCL và PEO sử dụng phương pháp đơn trục ở điện áp 15 kV và hỗn

có trọng lượng phân tử cao hơn (gần 260 kDa) và ba dải riêng lẻ ở khoảng 35 kDa hợp dung môi chloroform và DMSO, nhưng họ chỉ thấy hoạt động của lysozyme giảm

trong gel này, cho thấy rằng ALP được cung cấp như có thể đã bị một số sửa đổi khoảng 5–10% [11] .

cấu trúc, chẳng hạn như tập hợp và thủy phân. Sự thay đổi trong thành phần của

các lô ALP này phù hợp với dữ liệu DSC (Hình S1). Những tiến bộ trong công nghệ thực phẩm đã dẫn đến việc sử dụng điện trường
xung (PEF) như một phương pháp không dùng nhiệt để giảm thiểu sự phát triển của

Tuy nhiên, rõ ràng là ALP được giải phóng từ EFB và EFC có các dải tương tự với vi khuẩn nhưng vẫn bảo toàn giá trị dinh dưỡng của thực phẩm lỏng và bán lỏng

các dải của enzyme mới hòa tan, do đó xác nhận rằng quá trình xử lý EHD không có [71]. Shamsi và cộng sự. đã nghiên cứu ảnh hưởng của PEF đối với việc khử hoạt tính ALP.

tác động bất chính rõ ràng nào đối với tính toàn vẹn của protein. Nhóm đã phát hiện ra rằng các phương pháp xử lý PEF 25–35 kV ở 15 C làm giảm 24–

42% hoạt tính xúc tác ALP [72]. Một nghiên cứu khác cho thấy các xung 22,3 kV làm

3.5. hoạt động ALP giảm 44% hoạt động của ALP [73]. Những nghiên cứu này chỉ ra rằng có thể có những

thay đổi trong hoạt động của ALP do tiếp xúc với điện áp cao. EPC được chuẩn bị ở

Các thử nghiệm hoạt động ALP đã được sử dụng để đánh giá xem có bất kỳ sự mất điện áp cao nhất là 22,5 kV và cũng sử dụng tốc độ dòng chảy tương đối chậm, dẫn

mát hoạt động nào do quá trình xử lý EHD gây ra hay không. Hoạt động được tính đến thời gian tiếp xúc của ALP với điện trường tăng lên. Các công thức còn lại

tương ứng với nồng độ ALP, được xác định trước đó từ xét nghiệm MicroBCA™. Các được xử lý bằng cách sử dụng điện áp thấp hơn đáng kể là 10–15,5 kV. Do đó, việc

kết quả trong Hình 6a chỉ ra rằng ALP trong EPB giữ lại gần như toàn bộ hoạt động mất hoạt động ALP được quan sát thấy đối với EPC nhưng không phải đối với EFC có

của nó, trong khi đó trong EPC giữ lại khoảng 60%, với sự khác biệt có ý nghĩa thể chủ yếu là do tiếp xúc lâu với điện áp cao trong trường hợp trước. Các hệ

thống kê (p < 0,0001) trong hoạt động của protein khi so sánh với ALP mới. Ngược thống được xử lý đồng trục, đặc biệt là các hạt, thường yêu cầu điện áp cao hơn

lại, trong Hình 6b, có thể thấy rằng cả sợi điện âm hỗn hợp và vỏ lõi đều giữ lại các hệ thống EHD hỗn hợp. Do đó, mặc dù công việc này cho thấy rằng có thể đạt

khoảng 100% hoạt động ALP. được hiệu quả đóng gói cao hơn bằng cách sử dụng các quy trình vỏ lõi, nhưng

phải cẩn thận trong quá trình xử lý EHD để không gây ra sự bất hoạt protein do

Trong một nỗ lực để hiểu rõ hơn về khía cạnh nào của quá trình xử lý EHD có điện trường gây ra.

thể dẫn đến mất hoạt tính (tiếp xúc với dung môi hữu cơ hoặc ứng dụng của điện

trường), một thí nghiệm kiểm soát đã được thực hiện với ALP được hòa tan trực

tiếp trong ethanol, dung môi được sử dụng cho EHD . Có sự khác biệt rõ rệt giữa 4.Kết luận

hoạt tính enzym của ALP tươi được hòa tan trong etanol trong hai thí nghiệm,

điều này có lẽ là hệ quả của việc sử dụng các lô khác nhau (Phần 3.4). Hơn nữa, Các sợi và hạt ALP-PEO được chế tạo bằng các quy trình EHD đơn trục và đồng

có thể hòa tan lô ALP được sử dụng để sản xuất hạt (Hình 5a) trực tiếp trong trục. Cái trước dẫn đến các sản phẩm nguyên khối và cái sau dẫn đến hệ thống lõi/

ethanol, trong khi lô được sử dụng để chế tạo sợi (Hình bổ sung S3) phải được hòa vỏ, như mong đợi. Tất cả các công thức bao gồm ALP được phân phối vô định hình

tan trước trong một thể tích nhỏ nước khử ion trước khi pha loãng trong etanol trong chất mang PEO bán kết tinh. Hiệu suất đóng gói đối với các công thức pha

tuyệt đối. Điều này càng chứng tỏ rằng sự dao động cố hữu về tính toàn vẹn cấu trộn thấp hơn so với các chất tương tự lõi-vỏ, bởi vì việc trộn trực tiếp

trúc liên quan đến ALP được cung cấp dẫn đến các tính chất vật lý khác nhau. protein và polyme có thể khiến tia nước lắng đọng ở các khu vực khác ngoài bộ thu

trong quá trình quay điện và phun. Quay điện dẫn đến tải ALP cao hơn so với phun

điện, nhưng không có sự khác biệt lớn nào được tìm thấy giữa hiệu quả đóng gói

Sau khi chiết xuất từ EFB và EFC, hoạt tính của ALP giống hệt hoặc cao hơn hoạt của sợi và hạt. Kết quả từ các thử nghiệm hoạt động cho thấy rằng các quy trình

tính của ALP mới được hòa tan trong etanol, do đó khẳng định rằng sự có mặt của EHD được sử dụng để chuẩn bị cả hạt và sợi duy trì hoạt động ALP, ngoại trừ

etanol trong dung dịch polyme không ảnh hưởng đến tính toàn vẹn của protein. trường hợp dung dịch đang được xử lý tiếp xúc với điện áp rất cao (trong trường

hợp các hạt EPC lõi/vỏ từ đồng trục phun tro điện tử). Sau khi xử lý EHD, cấu trúc

Do đó, người ta không mong đợi rằng việc mất hoạt tính ALP trong công thức bậc ba của ALP dường như không thay đổi trong các cuộc điều tra SDS-PAGE, nhưng

EPC (Hình 6a) là do sự tiếp xúc của enzyme với ethanol có trong dịch vỏ: điều này hoạt động của nó đã giảm khoảng 40% khi sử dụng phương pháp phun điện đồng trục

cũng xảy ra trong quá trình sản xuất EFC và thậm chí còn lớn hơn mức độ, trong để chuẩn bị các hạt.

quá trình quay điện hỗn hợp (EFB) và phun (EPB). Do đó, người ta đưa ra giả

thuyết rằng việc giảm hoạt động ALP trong các hạt lõi-vỏ có thể là do điện áp cao

(22,5 kV) cần thiết cho quá trình xử lý. Trong tài liệu, Krishnaswamy và Kenkare

đã nghiên cứu ảnh hưởng của các dung môi hữu cơ như dioxane (25% v/v trong nước) Công việc này đặt nền tảng cho việc điều tra các hệ thống phân phối protein và

và formamide (25% v/v trong nước) đối với hoạt động của ALP [69] . ALP dường như peptide và để xem xét một kỹ thuật EHD tối ưu sẽ được sử dụng trong một môi

duy trì hoạt động khi tiếp xúc với các hệ dung môi hữu cơ hỗn hợp nước. Mặc dù có trường nhất định. Có vẻ như việc protein tiếp xúc với một số dung môi hữu cơ

thể có một số sự biến tính protein nhưng khả năng biến đổi chất nền p-NPP của trong quá trình pha trộn không nhất thiết làm giảm hoạt tính và tính toàn vẹn của

enzyme vẫn được duy trì [69]. Đây cũng có thể là trường hợp của ALP khi có hỗn cấu trúc, và do đó không phải lúc nào cũng cần đến các phương pháp đồng trục.

hợp nhị phân của etanol và nước, giải thích việc duy trì hoạt động của EPB, EFB Trong trường hợp ALP, các kỹ thuật pha trộn đã được chứng minh là có hiệu quả

và EFC. Các kết quả được trình bày ở đây, cùng với những kết quả từ nghiên cứu bằng hoặc hiệu quả hơn trong việc bảo tồn hoạt tính của protein so với quá trình

của Krishnaswamy, gợi ý rằng các quy trình vỏ lõi không phải lúc nào cũng cần thiết xử lý EHD đồng trục, mang đến cơ hội khám phá các phương pháp tạo công thức

và tính ổn định của protein trong hệ dung môi cần được nghiên cứu trước tiên protein ít phức tạp hơn.

trước khi xác định kỹ thuật EHD thích hợp nhất sẽ được sử dụng.
Báo cáo tín dụng

LCO: khái niệm hóa, phân tích chính thức, điều tra, phương pháp luận, xác

Ngược lại, Tiwari và Venkatraman đã nghiên cứu tác động của dung môi hữu cơ nhận, trực quan hóa, viết – bản thảo gốc, viết – đánh giá & chỉnh sửa. AM: khái

(hỗn hợp chloroform và dimethylformamide) đối với lysozyme được bao bọc trong sợi niệm hóa, phân tích chính thức, điều tra, phương pháp luận, xác nhận, trực quan

PLGA hỗn hợp được chế tạo bằng phương pháp kéo sợi điện [70]. Người ta thấy hóa, viết – bản thảo gốc, viết – đánh giá & chỉnh sửa. JZ – điều tra, phương

rằng việc tăng nồng độ dime thylformamide làm giảm 30% hoạt tính của lysozyme, có pháp, viết – đánh giá và chỉnh sửa. UA – khái niệm hóa, phương pháp luận, xác

lẽ là do mất cấu trúc bậc ba của enzyme [70]. Sự có mặt của dung môi hữu cơ cộng nhận, viết – xem lại và chỉnh sửa PFC – giám sát, mua tài trợ, quản lý dự án,

với điện trường mạnh viết – xem xét và chỉnh sửa. SB - khái niệm hóa, chính thức

10
Machine Translated by Google

LC Onyekuru và cộng sự. Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592

phân tích, mua tài trợ, quản lý dự án, giám sát, viết - đánh giá và chỉnh [17] I.-C. Liao, S. Chen, JB Liu, KW Leong, Cung cấp gen virus bền vững thông qua các sợi vỏ lõi, J.
Contr. Phát hành 139 (2009) 48–55, https://doi.org/10.1016/j. jconrel.2009.06.007.
sửa. GRW – khái niệm hóa, phân tích chính thức, mua tài trợ, quản lý dự
án, giám sát, viết – xem lại và chỉnh sửa. [18] A. Saraf, LS Baggett, RM Raphael, FK Kasper, AG Mikos, Quy trình cung cấp gen phi vi-rút từ giàn
giáo lưới sợi quang điện đồng trục, J. Contr. Phát hành 143 (2010) 95–103, https://doi.org/
10.1016/j.jconrel.2009.12.009.
[19] Y. Yu, J. Wang, Q. Shao, J. Shi, W. Zhu, Tác dụng của dung môi hữu cơ đối với
con đường gấp nếp và nhiệt động lực học liên quan của protein: một cái nhìn vi mô, Sci. Dân
Tuyên bố về lợi ích cạnh tranh biểu 6 (2016) 19500, https://doi.org/10.1038/srep19500.
[20] A. Mickova, M. Buzgo, O. Benada, M. Rampichova, Z. Fisar, E. Filova, M. Tesarova, D. Lukas, E.
Amler, Sợi nano lõi/vỏ với các liposome được nhúng dưới dạng phân phối thuốc hệ thống,
Các tác giả xác nhận rằng họ không có xung đột lợi ích.
Biomacromolecules 13 (2012) 952–962, https://doi.org/10.1021/ bm2018118.

[21] M. Pakravan, M. Heuzey, A. Ajji, Các sợi nano PEO-chitosan có cấu trúc lõi - vỏ bằng cách quay
Sự nhìn nhận
điện đồng trục, 2012.
[22] C. Zhou, R. Chu, R. Wu, Q. Wu, Electrospun polyetylen oxit/cellulose

Dự án này đã nhận được tài trợ từ chương trình nghiên cứu và đổi thảm sợi nano hỗn hợp tinh thể nano có vi cấu trúc đồng nhất và không đồng nhất,
Biomacromolecules 12 (2011) 2617–2625, https://doi.org/ 10.1021/bm200401p.
mới Hori zon 2020 của Liên minh Châu Âu theo thỏa thuận tài trợ Marie
Skło dowska-Curie số 824007. Các tác giả cũng xin cảm ơn Tiến sĩ Andrew [23] K. Garg, GL Bowlin, Máy bay phản lực quay điện và cấu trúc sợi nano, Biomicrofluidics

Weston về các hình ảnh SEM và TEM. Các tác giả báo cáo không có xung đột 5 (2011) 1–19, https://doi.org/10.1063/1.3567097.
[24] DL Berthier, I. Schmidt, W. Fieber, C. Schatz, A. Furrer, K. Wong, L. De Chimie, Kiểm soát giải
lợi ích.
phóng các phân tử hương thơm dễ bay hơi từ các mixen copolyme khối PEO- b -PPO- b -PEO trong
hỗn hợp etanol - nước, Langmuir 26 (11) (2010) 7953–7961, https://doi.org/10.1021/
la904832d.
Phụ lục A. Dữ liệu bổ sung
[25] H.-J. Jang, CY Shin, K.-B. Kim, Đánh giá an toàn của hợp chất polyetylen glycol (PEG) dùng
trong mỹ phẩm, Toxicol. độ phân giải 31 (2015) 105–136, https://doi.org/ 10.5487/TR.2015.31.2.105.
Dữ liệu bổ sung cho bài viết này có thể được tìm thấy trực tuyến tại https://doi.
[26] TGM Van De Ven, MA Qasaimeh, J. Paris, Sự kết bông mịn do PEO gây ra: ảnh hưởng của điều kiện
org/10.1016/j.jddst.2021.102592.
hòa tan PEO và lịch sử cắt, Chất keo. Bề mặt, Hóa lý. Tiếng Anh Khía cạnh 248 (1–3)
(2004) 151–156, https://doi.org/10.1016/j. colsurfa.2004.09.010.

Người giới thiệu

[27] J. Xie, Y. Lo Hsieh, Màng sợi bề mặt cực cao từ quá trình quay điện của protein tự nhiên: enzyme
casein và lipase. J. Mater. Khoa học, Springer, 2003, trang 2125–2133, https://doi.org/
[1] T. Tong, L. Wang, X. You, J. Wu, Nano và nền tảng phân phối vi mô cho
10.1023/A:1023763727747.
tăng cường khả dụng sinh học peptide/protein đường uống, Biomater. Khoa học. (2020), https://
[28] L. Romano, A. Camposeo, R. Manco, M. Moffa, D. Pisignano, Sợi quay điện vỏ lõi bao bọc các chất
doi. org/10.1039/d0bm01151g.
mang màu hoặc protein phát quang để giải phóng phân tử được kiểm soát bằng kính hiển vi,
[2] B. Kuhlman, P. Bradley, Những tiến bộ trong thiết kế và dự đoán cấu trúc protein, Nat.
Mol. dược phẩm. 13 (2016) 729–736, https://doi.org/ 10.1021/acs.molpharmaceut.5b00560.
Mục sư Mol. Tế bào sinh học. 20 (2019) 681–697, https://doi.org/10.1038/s41580-019- 0163-x.

[29] A. Moreira, D. Lawson, L. Onyekuru, K. Dziemidowicz, U. Angkawinitwong, P.

[3] C. Ye, S. Venkatraman, Việc cung cấp protein và peptide lâu dài bằng cách sử dụng
F. Costa, N. Radacsi, GR Williams, Đóng gói protein bằng cách quay điện và phun điện, J. Contr.
vi hạt/hạt nano: tổng quan và quan điểm, Ther. Deliv. 10 (2019) 269–272, https://doi.org/10.4155/
Phát hành (2020), https://doi.org/10.1016/j. jconrel.2020.10.046.
tde-2019-0016.
[4] M. Zamani, MP Prabhakaran, S. Ramakrishna, Những tiến bộ trong việc phân phối thuốc thông
[30] A. Tanhaei, M. Mohammadi, H. Hamishehkar, MR Hamblin, Phun điện như một phương pháp mới của kỹ
qua vật liệu nano quay điện và phun điện, Int. J. Nanomed. 8 (2013) 2997–3017, https://
thuật hạt cho phương tiện vận chuyển thuốc, J. Contr. Bản phát hành 330 (2021) 851–865, https://
doi.org/10.2147/IJN.S43575.
doi.org/10.1016/j.jconrel.2020.10.059.
[5] GR Williams, NP Chatterton, T. Nazir, DG Yu, LM Zhu, CJ Branford-White, Sợi nano quay điện trong
[31] Y. Wang, X. Yang, W. Liu, F. Zhang, Q. Cai, X. Deng, Hành vi giải phóng có kiểm soát của các vi
phân phối thuốc: những phát triển và quan điểm gần đây, Ther. Deliv. 3 (2012) 515–533, https://
hạt chứa protein được điều chế thông qua phun điện đồng trục hoặc nhũ tương, J.
doi.org/10.4155/tde.12.17.
Microencapsul. 30 (2013) 490–497, https://doi.org/10.3109/
[6] R. Goyal, LK Macri, HM Kaplan, J. Kohn, Hạt nano và sợi nano để vận chuyển thuốc tại chỗ.
02652048.2012.752537.
https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2015.10.049.Hạt nano, 2016, 77–92.
[32] W. Zhu, F. Masood, J. O'Brien, LG Zhang, Giàn giáo nanocompozit liên kết cao bằng cách quay điện
và phun điện để tái tạo mô thần kinh, Nanomed.
[7] RJ Stoddard, AL Steger, AK Blakney, KA Woodrow, Theo đuổi các vật liệu quay điện chức năng cho
công nghệ nano. sinh học. y tế. 11 (2015) 693–704, https://doi.org/10.1016/j.
các ứng dụng lâm sàng ở người, Ther. Deliv. 7 (2016) 387–409, https://doi.org/10.4155/
nano.2014.12.001.
tde-2016-0017.
[33] R. Li, Y. Ma, Y. Zhang, M. Zhang, D. Sun, Tiềm năng của khung Zein/PLLA được nạp rhBMP-2 và
[8] L. Wei, R. Sun, C. Liu, J. Xiong, X. Qin, Sản xuất hàng loạt sợi nano từ
dexamethasone để tăng cường quá trình tạo xương trong ống nghiệm của tế bào gốc trung mô,
quay điện không cần thiết bằng máy quay tròn hình khuyên mới, Mater. Des. 179 (2019) 107885,
Colloids Surf. B Biointerfaces 169 (2018) 384–394, https://doi.org/ 10.1016/
https://doi.org/10.1016/j.matdes.2019.107885.
j.colsurfb.2018.05.039.
[9] MK Kim, JY Lee, H. Oh, DW Song, HW Kwak, H. Yun, IC Um, YH Park, K.
[34] G. Cheng, C. Yin, H. Tu, S. Jiang, Q. Wang, X. Zhou, X. Xing, C. Xie, X. Shi, Y. Du, H. Deng, Z.
H. Lee, Ảnh hưởng của độ nhớt cắt đối với việc chuẩn bị các vi hạt sợi tơ hình cầu bằng
Li , Đồng phân phối có kiểm soát các yếu tố tăng trưởng thông qua việc lắp ráp từng lớp sợi
cách phun điện, Int. J. Sinh học. Macromol. 79 (2015) 988–995, https://doi.org/10.1016/
nano lõi-vỏ để cải thiện quá trình tái tạo xương, ACS Nano 13 (2019) 6372–6382, https://doi.org/
j.ijbiomac.2015.05.040.
10.1021/acsnano.8b06032 .
[10] RM Nezarati, MB Eifert, E. Cosgriff-Hernandez, Ảnh hưởng của độ ẩm và độ nhớt của dung dịch đối
[35] MG Lancina, RK Shankar, H. Yang, Sợi nano Chitosan để vận chuyển insulin qua da, J. Biomed. mẹ.
với hình thái sợi quay điện, Tissue Eng. Phương pháp C 19 (2013) 810–819, https://doi.org/
độ phân giải 105 (2017) 1252–1259, https://doi.org/10.1002/ jbm.a.35984.
10.1089/ten.tec.2012.0671.
[11] TG Kim, DS Lee, TG Park, Kiểm soát giải phóng protein từ quay điện
[36] X. Liu, LH Nielsen, H. Qu, LP Christensen, J. Rantanen, M. Yang, Tính ổn định của lysozyme
lưới sợi phân hủy sinh học bao gồm poly(ε-caprolactone) và poly(ethylene oxide), Int.
được tích hợp vào thảm sợi điện để chữa lành vết thương, Eur. J.
J.Pharm. 338 (2007) 276–283, https://doi.org/10.1016/j. ijpharm.2007.01.040.
dược phẩm. dược phẩm sinh học. 136 (2019) 240–249, https://doi.org/10.1016/j.
ejpb.2019.01.003.
[12] W. Ji, F. Yang, JJJP Van den Beucken, Z. Bian, M. Fan, Z. Chen, JA Jansen,
[37] RB Mccomb, GN Bowers, Nghiên cứu các điều kiện đệm tối ưu để đo hoạt tính phosphatase kiềm
Giàn giáo dạng sợi được nạp protein được chuẩn bị bằng cách trộn hoặc quay điện đồng trục,
trong huyết thanh người, Clin. hóa học. (2) (1972) 97–104.
Acta Biomater. 6 (2010) 4199–4207, https://doi.org/10.1016/j. hành
[38] S. Sekiguchi, Y. Hashida, K. Yasukawa, K. Inouye, Enzyme và vi sinh vật
động.2010.05.025.
Công nghệ Ảnh hưởng của amin và rượu amino lên hoạt tính phosphatase kiềm trong ruột bò,
[13] M. Andersson Trojer, L. Nordstierna, M. Nordin, M. Nyd´en, K. Holmberg,
Enzym. Vi khuẩn. công nghệ. 49 (2011) 171–176, https://doi. org/10.1016/j.enzmictec.2011.04.019.
Đóng gói các hoạt chất để giải phóng lâu dài, Phys. hóa học. hóa học. vật lý. 15 (2013) 17727,
https://doi.org/10.1039/c3cp52686k.
[39] JE Coleman, Cấu trúc và cơ chế của phosphatase kiềm, Annu. Mục sư
[14] X. Huang, B. Voit, Tiến bộ về viên nang cao phân tử nhiều ngăn, Polym.
lý sinh học. (1992) 441–483, https://doi.org/10.1146/annurev.
hóa học. 4 (2013) 435–443, https://doi.org/10.1039/C2PY20636F.
bb.21.060192.002301.
[15] SR Abulateefeh, MY Alkawareek, FR Abdullah, AM Alkilany, Chuẩn bị dung dịch nước lõi-poly(D,L-
[40] A. Bannister, RL Foster, Sự kích hoạt chất đệm gây kiềm trong ruột bê
Lactide-co-Glycolide) vi nang vỏ có lõi đơn nhân bằng cách tách pha bên trong:
photphataza, Eur. J. Hóa sinh. 113(1)(1980) 199–203, https://doi.org/10.1111/
tối ưu hóa các tham số của công thức, J. Pharm . Khoa học. 106 (2017) 1136–1142, https://
j.1432-1033.1980.tb06156.x .
doi.org/10.1016/j. xphs.2016.12.027.
[41] MJ Weiss, K. Ray, P. Henthorn, B. Lamb, T. Kadesch, H. Harris, Cấu trúc của gen phosphatase kiềm
´ ´ gan/xương/thận người, J. Biol. hóa học. 263 (1988)
[16] I. Moreno, V. Gonzalez-Gonz alez, J. Romero-García, Kiểm soát sự giải phóng lactate
12002–12010.
dehydrogenase được gói gọn trong sợi nano poly (vinyl alcohol) thông qua quay điện, Eur.
polyme. J. 47 (2011) 1264–1272, https://doi.org/10.1016/j.
europolymj.2011.03.005.

11
Machine Translated by Google
LC Onyekuru và cộng sự.
[42] Đăng ký TC, FM Mclean, MG Lows, RE Wuthier, Vai trò của phosphatase kiềm và khoáng chất bên trong
không bền trong trung gian túi ma trận, Vôi hóa 261 (1986) 9354–9360.
[43] SB Singh, A. Carroll-Portillo, C. Coffman, NL Ritz, HC Lin, Intestinal alkaline phosphatase phát
huy tác dụng chống viêm đối với lipopolysacarit bằng cách gây ra bệnh autophagy, Sci.
Dân biểu 10 (2020) 1–15, https://doi.org/10.1038/s41598- 020-59474-6.
[44] JP Lall`es, Intestinal alkaline phosphatase: new functions and protection effects, Nutr. Rev. 72
(2014) 82–94, https://doi.org/10.1111/nure.12082.
[45] K. Poelstra, WW Bakker, PA Klok, MJ Hardonk, DK Meijer, Sinh lý học
chức năng của phosphatase kiềm: giải độc nội độc tố, Phòng thí nghiệm. Đầu tư. 76 (1997)
319–327.
[46] K. Poelstra, WW Bakker, PA Klok, JA Kamps, MJ Hardonk, DK Meijer,
Khử phospho của nội độc tố bằng phosphatase kiềm in vivo, Am. J. Pathol. 151 (1997) 1163–1169.
[47] AL Clausi, A. Morin, JF Carpenter, TW Randolph, Ảnh hưởng của cấu trúc protein và sự
tổng hợp tá dược đến hiệu quả của tá dược nhôm hydroxit trong vắc-xin phosphatase
kiềm mẫu, J. Pharm. Khoa học. 98 (2009) 114–121, https://doi.org/10.1002/jps.21433.
[48] WL Hinrichs, M. Prinsen, H. Frijlink, Kính Inulin để ổn định
protein trị liệu, Int. J.Pharm. 215 (2001) 163–174, https://doi.org/10.1016/ S0378-5173(00)00677-3.
[49] M. Jin, D. Yu, X. Wang, CFGC Geraldes, GR Williams, SWA Bligh, Các sợi được nạp chất tương phản
Electrospun cho MRI nhắm mục tiêu đại tràng, Adv. Sức khỏec. mẹ. 5 (2016) 977–985, https://
doi.org/10.1002/adhm.201500872.
[50] Phần mềm ImageJ, (nd).
[51] S. Megelski, JS Stephens, DB Chase, JF Rabolt, Hình thái bề mặt cấu trúc vi mô và cấu trúc
nano trên sợi polyme quay điện, Macromolecules 35 (2002) 8456–8466, https://doi.org/10.1021/
ma020444a .
[52] S. Wongsasulak, KM Kit, DJ McClements, T. Yoovidhya, J. Weiss, Ảnh hưởng của các đặc tính dung
dịch đến hình thái học của sợi tổng hợp albumen-PEO quay điện cực siêu mịn, Polymer 48 (2007)
448–457, https : //doi.org/10.1016/j. polyme.2006.11.025.
[53] SK Tiwari, SS Venkatraman, Tầm quan trọng của các thông số độ nhớt trong
quay điện: của sợi nguyên khối và lõi-vỏ, Mater. Khoa học. Tiếng Anh C 32 (2012) 1037–1042,
https://doi.org/10.1016/j.msec.2012.02.019.
[54] Y. Xu, M. Skotak, M. Hanna, Electrospray đóng gói protein hòa tan trong nước bằng polylactide.
I. Ảnh hưởng của công thức và quy trình đến hình thái và kích thước hạt, J. Microencapsul. 23
(2006) 69–78, https://doi.org/10.1080/ 02652040500435048.
[55] AL Yarin, Quay điện đồng trục và quay điện nhũ tương của sợi lõi-vỏ, Polym. quảng cáo công
nghệ. 22 (2011) 310–317, https://doi.org/10.1002/ pat.1781.
[56] DN Nguyen, C. Clasen, G. Van den Mooter, Ứng dụng dược phẩm của
phun điện, J. Pharm. Khoa học. 105 (2016) 2601–2620, https://doi.org/10.1016/j. xphs.2016.04.024.
[57] SY Chew, J. Wen, EKF Yim, KW Leong, Giải phóng bền vững protein từ các sợi có thể phân hủy
sinh học bằng cách quay điện, Biomacromolecules 6 (2005) 2017–2024, https://doi.org/
10.1021/bm0501149 .
12
Tạp chí Khoa học và Công nghệ Phân phối thuốc 64 (2021) 102592
[58] PJ Reardon, M. Parhizkar, AH Harker, RJ Browning, V. Vassileva, E. Stride, R.
B. Pedley, M. Edirisinghe, JC Knowles, Chế tạo điện thủy động lực học các hạt nano PLGA vỏ lõi
với việc giải phóng cisplatin có kiểm soát để điều trị ung thư tăng cường, Int. J. Nanomed. 12
(2017) 3913–3926, https://doi.org/10.2147/IJN.
S134833.
[59] Z. Li, L. Song, X. Huang, H. Wang, H. Shao, M. Xie, Y. Xu, Y. Zhang, Tough và giàn giải phóng
VEGF bao gồm thảm sợi tơ nhân tạo và tự nhiên ma trận tế bào, RSC Adv. 5 (2015) 16748–
16758, https://doi.org/10.1039/ C4RA16146G.
[60] P. Ôn, Y. Ôn, X. Hoàng, M.-H. Zong, H. Wu, Chuẩn bị và mô tả đặc tính của thảm sợi quay điện nạp
protein và động học giải phóng của nó, J. Agric. Hóa chất thực phẩm 65 (2017) 4786–4796, https://
doi.org/10.1021/acs.jafc.7b01830.
[61] J. Olmos Buitrago, RA Perez, A. El-Fiqi, RK Singh, JH Kim, HW Kim, Chất mang tế bào gốc dạng
sợi vỏ lõi kết hợp các tín hiệu hạt nano tạo xương cho kỹ thuật mô xương, Acta Biomater. 28
(2015) 183–192, https://doi.org/ 10.1016/j.actbio.2015.09.021.
[62] M. Zamani, MP Prabhakaran, ES Thian, S. Ramakrishna, Các hạt có cấu trúc vỏ-lõi được bao bọc
bởi protein được chuẩn bị bằng phun điện đồng trục: nghiên cứu về vật liệu và các biến xử lý,
Int. J.Pharm. 473 (2014) 134–143, https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2014.07.006 .
[63] A. Barth, Quang phổ hồng ngoại của protein, Biochim. lý sinh học. Năng lượng sinh học Acta. 1767
(2007) 1073–1101, https://doi.org/10.1016/j.bbabio.2007.06.004.
[64] S. Wang, X. Huang, C. Yang, Tăng cường trộn cho chất lỏng có độ nhớt cao trong buồng vi
lỏng, Lab Chip 11 (2011) 2081, https://doi.org/10.1039/c0lc00695e .
[65] Y. Yuan, K. Choi, S.-O. Choi, J. Kim, Kiểm soát giải phóng giai đoạn đầu của thuốc chống ung
thư bằng khả năng trộn lẫn thuốc-polyme trong hệ thống phân phối thuốc dựa trên sợi kỵ
nước, RSC Adv. 8 (2018) 19791–19803, https://doi.org/10.1039/C8RA01467A.
[66] Y. Zhang, ZM Huang, X. Xu, CT Lim, S. Ramakrishna, Chuẩn bị sợi nano hai thành phần PCL-r-gelatin
có cấu trúc lõi-vỏ bằng cách quay điện đồng trục, Chem. mẹ. 16 (2004) 3406–3409, https://
doi.org/10.1021/cm049580f.
[67] W. Chen, A. Palazzo, WE Hennink, RJ Kok, Ảnh hưởng của kích thước hạt đối với động học nạp và
giải phóng thuốc của vi cầu PLGA nạp gefitinib, Mol. dược phẩm. 14 (2017) 459–467, https://
doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.6b00896.
[68] M. Fosset, D. Chappelet-tordo, M. Lazdunski, Intestinal alkaline phosphatase, Phys.
Thích hợp. Quát. cấu trúc. 13 (1974) 1783–1788.
[69] M. Krishnaswamy, UW Kenkare, Ảnh hưởng của độ pH, nhiệt độ và chất hữu cơ
dung môi trên các thông số động học của Escherichia coli kiềm phosphatase, J. Biol.
hóa học. 245 (1970) 3956–3963.
[70] SK Tiwari, S. Venkatraman, Electrospinning dung dịch protein tinh khiết trong sợi lõi-vỏ, Polym.
quốc tế 61 (2012) 1549–1555, https://doi.org/10.1002/pi.4246.
˜
[71] S. Toepfl, C. Siemer, G. Saldana-Navarro, V. Heinz, Tổng quan về xử lý điện trường xung cho
thực phẩm, trong: Emerg. công nghệ. Food Process., Elsevier, 2014, trang 93–114, https://
doi.org/10.1016/B978-0-12-411479-1.00006-1.
[72] K. Shamsi, C. Versteeg, F. Sherkat, J. Wan, Alkaline phosphatase và bất hoạt vi sinh vật bằng
điện trường xung trong sữa bò, Innovat. Khoa học thực phẩm nổi lên.
công nghệ. 9 (2008) 217–223, https://doi.org/10.1016/j.ifset.2007.06.012.
[73] GVB-C. Barbosa-Canovas, QH Zhang, Điện trường xung trong chế biến thực phẩm: Các khía cạnh cơ
bản và ứng dụng, tái bản lần đầu, Nhà xuất bản CRC.