Điện hóa sinh học 132 (2020) 10740 9

Danh sách nội dung Khoa

có t
sẵn tại họcDirec
Điện hóa sinh học

Trang chủ tạp chí:www.elsevier.com/locate/bioeleche

m
Pyranose oxidase: Một oxidoreductase đường đa năng cho các ứng dụng điện hóa sinh học
Annabelle T. Abrera a,b, Leander Sützl a,c, Dietmar Haltrich a,c,⇑
một

Phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học thực phẩm, Khoa Khoa học và Công nghệ Thực phẩm, BOKU - Đại học Tài nguyên và Khoa học Đời sống Vienna, Muthgasse 11, A-1190 Wien, Áo
b
Đại học Philippines Los Banos, Cao đẳng Laguna, Philippines
c

Chương trình tiến sĩ BioToP - Công nghệ phân tử sinh học của protein, BOKU - Đại học Tài nguyên và Khoa học Đời sống Vienna, Muthgasse 18, A-1190 Wien, Áo

article info abstract

Lịch sử bài viết: Pyranose oxidase (POx) là một oxidoreductase phụ thuộc FAD, và giống như glucose oxidase (GOx), nó là thành viên của
Đã nhận 27 Tháng Tư 2019 siêu họ glucose-methanol-choline (GMC) của oxidoreductase. POx oxy hóa một số monosacarit bao gồm D-glucose, D-
Nhận được trong mẫu sửa đổi ngày 9 tháng 10 năm 2019 galactose và D-xylose, trong khi oxy đồng thời bị khử thành hydro peroxide. Ngoài hoạt động oxidase này, POx cho thấy hoạt
Đã chấp nhận 15 Tháng Mười 2019 động rõ rệt với các chất nhận electron thay thế bao gồm các quinone khác nhau hoặc các ion kim loại (phức tạp). Ngay cả
Có sẵn trực tuyến 29 Tháng Mười Một 2019
though POx nói chung cho thấy các tính chất thuận lợi hơn so với GOx (ví dụ: hiệu suất xúc tác cao hơn đáng kể (kcat / K m)
đối với D-glucose, hằng số Michaelis thấp hơn đáng kể K m đối với D-glucose, phản ứng với cả hai dạng anomeric của D-
Từ khoá: gluco se) nó ít được sử dụng cho cả ứng dụng cảm biến sinh học và pin nhiên liệu sinh học hơn GOx. POx đã được áp dụng
Pyranose 2-oxidase trong cảm biến sinh học của D-glucose, D-galactose và D-xylose, và kết hợp với a-glucosidase cũng maltose. Một ứng
Đường oxidoreductase
dụng hấp dẫn là trong biosensors được xây dựng để đo 1,5-anhydro-D-glucitol, một dấu ấn sinh học được công nhận trong
Cảm biến glucose
Cảm biến 1,5-anhydroglucitol bệnh tiểu đường. Các ứng dụng điện hóa sinh học của POx đã bị hạn chế đối với các enzyme có nguồn gốc nấm. Khám phá và
mô tả gần đây của POx từ các nguồn vi khuẩn , cho thấy các đặc tính rất khác biệt với các enzyme nấm, có thể mở ra những
khả năng mới cho các ứng dụng tiếp theo trong điện hóa sinh học.
2019 Các tác giả. Được xuất bản bởi Elsevier B.V. Đây là một bài viết truy cập mở thuộc CC BY-NC-ND

giấy phép (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Nội dung

1. Về enzyme....................................................................................................................................................................................................................................................................... 2
...............................................................................................................................................................................................................................................................................................
2. Sử dụng trước đây và hiện tại trong cảm biến sinh học..................................................................................................................................................................................................... 3
...............................................................................................................................................................................................................................................................................................
3. Các ứng dụng khác trong ví dụ như chuông nhiên liệu sinh học, xúc tác điện sinh học.................................................................................................................................................... 7
...............................................................................................................................................................................................................................................................................................
4. Lợi ích lớn nhất của enzyme và cảm biến sinh học........................................................................................................................................................................................................... 8
...............................................................................................................................................................................................................................................................................................
5. Vấn đề lớn nhất của enzyme và cảm biến sinh học........................................................................................................................................................................................................... 8
...............................................................................................................................................................................................................................................................................................
6. Outlook về possib................................................................................................................................................................................................................ le cải tiến và sử dụng thay thế
............................................................................................................................................................................................................................................................................................. 8
...............................................................................................................................................................................................................................................................................................
Tuyên bố về lợi ích cạnh tranh............................................................................................................................................................................................................................................. 9
....................................................................................................................................................................................................................................................................................
Lời cảm ơn........................................................................................................................................................................................................................................................................... 9
....................................................................................................................................................................................................................................................................................
dự án 9...................................................................................................................................................................................................................................................................................

Tên viết tắt: 1,4-BQ, 1,4-benzoquinone; 1,5-AG, 1,5-anhydro-D-glucitol; MộtGOx, glucose oxidase từ Aspergillus niger; NhưPOx, pyranose oxidase từ Arthrobacter siccitolerans; BFC, pin nhiên
liệu sinh học; CNT, ống nano carbon; CPE, điện cực dán carbon; Cs POx, POx từ Coriolus sp.; DCIP, dichlorophenolindophenol; DET, chuyển điện tử trực tiếp; DNS, axit 3,5-dinitrosalicylic; EC, lớp
phủ enzyme; EPC, lớp phủ kết tủa enzyme; FAD, flavin-adenine dinucleotide; Fc, ferrocen; Fc +, ion ferrocenium; FcMeOH, ferrocenemethanol; GCE, điện cực carbon thủy tinh; GMC, siêu họ
glucose-methanol-choline của oxidoreductase; GNP, hạt nano vàng; GOx, glucose oxidase; CsPOx, pyranose oxidase từ Coriolus sp.; HRP, peroxidase cải ngựa; KaPOx, pyranose oxidase từ
Kitasatospora aureofaciens; MET, chuyển điện tử qua trung gian; PcPOx, pyranose oxidase từ Phanerochaete chrysosporium; POx, pyranose oxidase; ĐểPOx, pyranose oxidase từ Trametes ochracea.
2 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409

⇑ Tác giả tương ứng tại: Phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học thực phẩm, Khoa Khoa học và Công nghệ thực phẩm, BOKU - Đại học Tài nguyên và Khoa học Đời sống Vienna,
Muthgasse 11, A-1190 Wien, Áo.

Địa chỉ email: dietmar.haltrich@boku.ac.at (D. Haltrich).

https://doi.org / 10.1016 / j.bioelechem.2019.107409

1567-5394/ 2019 Các tác giả. Được xuất bản bởi Elsevier B.V.
Đây là một bài viết truy cập mở theo giấy phép CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Sung. 1. Hai tiểu đơn vị của tetrameric pyranose oxidase từ Trametes ochracea (1TT0) cho thấy khoảng trống trung tâm (khung màu đen) cách ly các lối vào s ite hoạt độngvới bên ngoài. Mũi tên
màu xanh lam chỉ ra các kênh nền dẫn từ bên ngoài đến khoảng trống trung tâm. Bảng điều khiển bên trái: Các lối vào trang web đang hoạt động với vòng lặp trang web đang hoạt động của nó (dư
lượng 452–456) trong xác nhận đóng của nó được đánh dấu (Ser455 màu đỏ). Bảng điều khiển bên phải: FAD được tô sáng trong biểu diễn hoạt hình này để cho biết vị trí của trang web đang hoạt
động.
1. Về enzyme monosacarit. Ngoài ra, một vòng lặp vị trí hoạt động trong vùng lân cận trực
tiếp của isoalloxazine, có thể thay đổi giữa một lỗ mở
Pyranose oxidase (POx; pyranose 2-oxidase, glucose 2-oxidase; EC
1.1.3.10, pyranose: oxy 2-oxidoreductase) là một flavindependent
oxidoreductase của siêu họ glucose-methanol-choline (GMC) của
oxidoreductase. Nó oxy hóa D-glucose cũng như các chất nền monosacarit khác
ở vị trí C2 trong khi khử oxy phân tử thành hydro peroxide. Siêu họ GMC bao
gồm cácoxidoreductase đường đặc trưng wel l khác như glucose oxidase,
glucose dehydrogenase phụ thuộc FAD, cellobiose dehydrogenase hoặc
pyranose dehydrogenase [1]. POx thường được tìm thấy trong nấm phân hủy gỗ,
nơi nó được liên kết ngoại bào với các túi liên kết màng hoặc các cấu trúc màng
khác trong không gian periplasmic của sợi nấm [2]. Là một nhà sản xuất hydro
peroxide, POx được coi là nhiên liệu cho các enzyme khác để thoái hóa
lignocellulose, và do đó nó cũng là thành viên của hoạt động phụ trợ family 3
(AA3_4) trong cơ sở dữ liệu của Carbohydrate-Active enZYmes (CAZy;
http://www.cazy.org/) [3]. Các báo cáo đầu tiên về enzyme này quay trở lại năm
1968, khi một carbohydrate oxidase được tìm thấy trong mycelia của
Spongipellis unicolor (trước đây là Polyporus obtusus) [4]. POx từ các nguồn
nấm là một enzyme được nghiên cứu kỹ lưỡng về mặt sinh hóa với cấu trúc tinh
thể có sẵn từ Trametes ochracea (đồng nghĩa Trametes nhiều màu; PDB 1TT0), Sung. 2. Cận cảnh lối vào kênh dẫn vào khoảng trống bên trong của pyranose oxidase từ Trametes
Peniophora sp. (PDB 1TZL) và Phanerochaete chrysosporium (PDB 4MIF). ochracea (1TT0).
Ngoài ra, cấu trúctừ một số biến thể POx đã được xác định [5–7]. Giống như
các thành viên khác của gia đình GMC, POx bao gồm hai miền, miền liên kết (liên kết electron-nhà tài trợ) và xác nhận kín (liên kết chấp nhận điện tử), rất
flavin và miền liên kết chất nền. Miền liên kết flavin chứa nếp gấp Rossmann quan trọng đối với liên kết chất nền và tính đặc hiệu của POx [6,9]. Các hành
kinh điển hoặc b ab mô típ liên kết thủy triều mononucleo, và được bảo tồn động giữa các tiểu đơn vị đơn lẻ để tạo thành homo-tetramer được thực hiện
cao trong suốt flavoprotein. Miền liên kết chất nền cho thấy nhiều biến thể trình bởi các cấu trúc oligome hóa bao gồm một nhánh oligome hóa kéo dài để ôm
tự hơn, phản ánh sự ưu tiên đối với các chất nền electron-nhà tài trợ khác nhau. lấy một tiểu đơn vị lân cận cũng như một vòng lặp cung cấp các tương tác
Một POx nấm được hình thành bởi bốn monome giống hệt nhau, mỗi monome tiểu đơn vị-tiểu đơn vị và một domain nhỏ gọi là miền đầu [6].
chứa một dinucleotide flavinadenine (FAD) ở vị trí hoạt động được liên kết Ngoài nấm, POx cũng được tìm thấy trong các loài vi khuẩn
cộng hóa trị với dư lượng histidine [8]. Cấu trúc tứ phân của POx nấm cho thấy actinobacteria, proteobacteria và trực khuẩn [10]. Mặc dù nguồn gốc vi
một khoảng trống trung tâm lớn được kết nối với cả bốn vị trí hoạt động riêng lẻ khuẩn của gen thủy đậu nấm đã được đề xuất vào năm 2008 bởi Kittl et al.
(Hình 1). Thông qua khoảng trống trung tâm này, các chất nền có thể đi vào các [11], gần đây đã chỉ ra rằng trình tự POx cũng thường được tìm thấy ở vi
vị trí hoạt động thông qua các kênh nền hẹp (Hình 2) [5,6]. Do đó, các vị trí khuẩn có nhận dạng trình tự từ 39–24% đối với POx nấm. Một nghiên cứu
hoạt động trong POx bị chôn sâu trong cấu trúc tứ phân và bị cô lập với môi phát sinh loài gần đây cho thấy POx là enzyme GMC duy nhất được chia sẻ
trường xung quanh, và sự truy cập hạn chế này của vị trí hoạt động thông qua giữa cả nấm và vi khuẩn [12]. Điều này được chứng minh từ mối quan hệ
kênh chất nền và khoảng trống dường như hạn chế hoạt động của POx đối với chặt chẽ của các gen POx của vi khuẩn với nhánh trình tự POx của nấm và
 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409
hỗ trợ bootstrap tối đa (100%) cho mối quan hệ này (Hình 3). Cây phát sinh
loài này của trình tự POx cho thấy các gen mã hóa pyranose oxidase giả định
đượctìm thấy trong ngành Firmicutes và đặc biệt là trong Actinobacteria.
POx vi khuẩn đầu tiên được đặc trưng sinh hóa là từ Arthrobacter
siccitolerans (AsPOx) [13]. Vi khuẩn As POx cho thấy một số tính chất khác
biệt rõ rệt so với các đối tác f ungal của nó, ví dụ FAD không liên kết cộng
hóa trị và tái tổ hợp VìPOx được sản xuất trong E. coli là đơn phân trong
dung dịch [13].
Một trình tự actinobacteria có liên quan chặt chẽ với POx nấm đã được
chứng minh là từ Kitasatospora aureofaciens (trước đây là Streptomyces
aureofaciens). So sánh trình tự của K. aureofaciens POx (Ka POx) và từ
Trametes ochracea (To POx), mà h là POx nấm đặc trưng nhất cho đến nay,
cho thấy nhận dạng trình tự là 38,7% và kết quả khớp truy vấn là 545 trong
số 623 dư lượng POx. KaPOx được tái tổ hợp sản xuất trong E. coli và
nghiên cứu sinh hóa, và một lần nữa một số khác biệt rõ rệt với POx nấm đã
được hiển thị. Ka POx tái tổ hợp tạo thành các dimer hoạt động trong dung
dịch trong khi FAD được gắn cộng hóa trị [10].
Cơ chế phản ứng tổng thể của POx tương tự như các oxidoreductase
GMC phụ thuộc FAD khác và bao gồm hai nửa phản ứng. Quá trình oxy hóa
Su gar bao gồm chuyển hydride trực tiếp từ C2 của chất nền sang nguyên tử
N5 của moiety isoalloxazine của FAD [14] và dẫn đến giảm FADH2 (phản
ứng nửa khử). FADH2 sau đó được tái oxy hóa bởi một chất nhận electron
thích hợp (phản ứng nửa oxy hóa). Cơ chế phản ứng tổng thể tuân theo loại
Ping Pong Bi Bi [14]. Chất nền cho electron ưa thích của POx được đánh giá
từ các hằng số xúc tác là D-glucose, được oxy hóa ở cả dạng a- và b-
anomeric [15] tạo ra glucose 2-keto D (2-dehydro-D-glucose, D-arabino-
hexopyranos-2-ulose ) làm sản phẩm. Phản ứng này với cả hai anome của
D-glucose trái ngược với glucose oxidase (GOx), được sử dụng thường xuyên
hơn trong điện hóa sinh học nhưng chỉ phản ứng với b-anomer. Các
monosacarit khác ở dạng aldopyranose của chúng cũng có thể bị oxy hóa bởi
POx ở vị trí C2 thành đường keto tương ứng [16,17]. Các chất nền đường bổ
sung này bao gồm ví dụ D xylose, D-galactose, L-sorbose và L-arabinose
(Table 1). POx oxy hóa các hợp chất thiếu nhóm OH C2 hoặc có quyền truy
cập hạn chế vào vị trí này, chẳng hạn như 2-deoxy-D-glucose, 2-keto-D-
glucose hoặc methyl b-D-glucopyranoside, ở vị trí C3, mặc dù với tỷ lệ thấp
hơn đáng kể [18]. Michaelis constant cho D-glucose K m, Glc của các
oxidase pyranose khác nhau dao động từ 0,74 đến 5,0 mM, thấp hơn đáng kể
và do đó thuận lợi hơn so với các giá trị được báo cáo cho Aspergillus niger
glucose oxidase (AnGOx), 22–28 mM [19] hoặc 33–248 mM [20]. Số lượng
doanh thu cho D-glucose (kcat, Glc) của POx từ các nguồn nấm khác nhau dao
động từ 1,48 đến 111 s1. POx vi khuẩn từ A. siccitolerans khác với các đối
tác nấm của nó về mặt này vì nó chỉ cho thấy một con mèo k, Glc của 0,152
s 1 trong khi vi khuẩn KaPOx có một con mèo k, Glc của 15,4 s1. Các hằng số
xúc tác này thấp hơn các hằng số đo được đối với GOx loại hoang dã tái tổ
hợp (kcat, Glc từ 55–190 s1; [19]), nhưng nhìn chung, hầu hết các oxidase
pyranose được đặc trưng bởi hiệu suất xúc tác (k cat / Km) đối với D-glucose
cao hơn đáng kể so với GOx. Một báo cáo gần đây đã so sánh cụ thể POx từ
T. ochracea và AnGOx, và cho thấy rằng enz yme trước đây chohiệu quả
xúc tác cao hơn mười lần đối với D-glucose trong các điều kiện phản ứng giống
hệt nhau (oxy từ không khí, 30 C, pH 6,5) [21].
Chất nhận electron tự nhiên giả định của POx là oxy, có thể hấp thụ hai
electron, và do đó bị khử thành hydro peroxide. Nó đã được chứng minh mặc
dù các quinone khác nhau, các ion kim loại phức tạp và các gốc cũng có thể
được sử dụng làm chất nhận electron bởi POx. Thật vậy, một số chất nhận
electron này cho thấy hiệu quả xúc tác tốt hơn đáng kể so với oxygen (Bảng
2). Sự gia tăng này được gây ra bởi cả hằng số Michaelis thuận lợi hơn cũng
như số doanh thu cho các chất nhận electron thay thế. Hiệu suất xúc tác k
cat, O2 / K m, O2 cho To POx và POx từ P. chrysosporium (PcPOx) là 790
và 89,2 mM 1 s 1, trong khi hiệu quả xúc tác cho 1,4-benzoquinone (1,4-
BQ), ion ferrocenium (FC +) và dichlorophenolindophenol (DCIP) cho hai
enzyme này trong điều kiện tối ưu là 900 và 11.990 mM 1 s 1, 574 và 1.890
mM 1 s 1, và 1.600 và 2.150 mM 1 s 1, đặcbiệt
[16,17] .
3
Thế oxy hóa khử của ToPOx được xác định bằng phương pháp xanthine /
xanthine oxidase là –105 mV so với NHE ở pH 6,5. Loại bỏ liên kết cộng hóa
trị giữa FAD và dư lượng histidine (His167 trong To POx) dẫn đến giảm tiềm
năng oxy hóa khử và giá trị –150 mV so với NHE được đo ở pH 6,5 đối với
biến thể H167A của ToPOx [22]. Vi khuẩn AsPOx, thiếu cộng hóa trị Phần đính
kèm của Ngài, thể hiện tiềm năng oxy hóa khử - 50 mV so với NHE ở pH 7,6
[13]. Để so sánh, AnGOx cho thấy tiềm năng oxy hóa khử lần lượt là –51 mV
và –99 mV so với NHE ở pH 6,5 và 7,6 [23].
2. Sử dụng trước đây và hiện tại trongcảm biến sinh học s
Sự phát triển của các cảm biến sinh học dựa trên POx cải tiến, bao gồm việc
phát hiện ra các enzyme mới, sản xuất các biến thể với các đặc tính cải tiến
mong muốn, tăng cường chuyển electron giữa vị trí oxy hóa khử và điện cực,
cũng như huy động im hiệu quảtrên các điện cực, là chủ đề nghiên cứu ngày
càng tăng trong những năm qua. Sự quan tâm chủ yếu là do một loạt các ứng
dụng ngày càng tăng để phát hiện các phân tử sinh học khác nhau bằng các thiết
bị dựa trên POx, với các ứng dụng được tìm thấy trong thực phẩm hoặc
cácngành công nghiệp xác thực, chẩn đoán bệnh, giám sát quá trình sinh học và
sàng lọc các chất ô nhiễm môi trường [24,25]. Hiệu quả của POx như một thành
phần sinh học cho cảm biến sinh học đã được đánh giá và chứng minh trên
nhiều loại điện cực khác nhau bao gồm carbon thủy tinh, vàng, bạch kim và
điện cực in màn hình, và hiện vẫn đang được đánh giá trên các nền tảng khác để
cải thiện hiệu suất tổng thể của cảm biến sinh học.
Sự quan tâm đến POx như một cảm biến sinh học chủ yếu là do phản ứng
của nó với glucose. Tuy nhiên, vì POx cũng có thể phát hiện các loại đường
khác, ứng dụng POx làm cảm biến sinh học cũng được mở rộng để phát hiện
các carbohydrate khác. POx độc quyền khác nhau có nguồn gốc nấm đã được sử
dụng trong các nghiên cứu cảm biến sinh học này vì tính chất và cấu trúc của
chúngđã được nghiên cứu rộng rãi. Một trong những nghiên cứu đầu tiên về ứng
dụng POx trong cảm biến sinh học được thực hiện bởi Lidén et al. [26]. Trong
nghiên cứu của họ, POx từ P. chrysosporium (PcPOx) được đồng cố định với
peroxidase cải ngựa (HRP) trên điện cực dán carbon (CPE). Cảm biến sinh học
bienzym được xây dựng đã phát hiện cả H 2 O2 và glucose. POx phản ứng với
glucose và tạo thành H 2 O 2, sau đó được HRP hấp thụ, tiếp theo là chuyển
electron trực tiếp giữa HRP và điện cực than chì. Cảmbiến sinh học bi-enzym
tic này đã chứng minh phản ứng tốt với các carbohydrate khác nhau như D-
glucose (đáp ứng 840 nA và độ nhạy 30,2 m A cm 2 mM1), D-xylose (80 nA) và
D-galactose (36 nA). Ngược lại, cảm biến sinh học chỉ có phản ứng cận biên
hoặc không có phản ứng với d-gl uconolactone, D-mannose, L-arabinose và
cellobiose. Cả độ nhạy của cảm biến sinh học bienzym để phát hiện glucose và
độ ổn định của nó đều được cải thiện với tác dụng kết hợp của phụ gia lactitol
và polyethyleneimine. Cảm biến bi-enzym bi nàyđược tích hợp vào hệ thống sắc
ký lỏng (LC) để phát hiện hỗn hợp tiêu chuẩn của glucose, xylose và galactose.
Do tính chọn lọc cao của điện cực HRP-POx trong hệ thống LC, nó được sử
dụng để theo dõi các enration conc cơ chất trongquá trình lên men.
Một thập kỷ sau, cảm biến sinh học dựa trên POx chủ yếu được nghiên cứu
để phân tích thực phẩm và đồ uống và giám sát các quá trình thực phẩm khác
nhau. POx từ Coriolus sp. (CsPOx) cố định trên điện cực dán carbon lần đầu
tiên được áp dụng để phát hiện glucose (độ nhạy 0,429 m A mM 1), galactose
(độ nhạy 0,050 m A mM 1), mannose (độ nhạy 0,005 m A mM 1), xylose (độ
nhạy 0,084 m A mM 1) và maltose (độ nhạy 0,010 m A mM 1). Cảm biến sinh
học dựa trên POx cũng được sử dụng để ngăn chặnhàm lượng glucose trong các
mẫu rượu vang đỏ. Tuy nhiên, nó cho giá trị glucose thấp hơn một chút (tối đa
7%) so với phương pháp DNS tiêu chuẩn (axit 3,5-dinitrosalicylic), có thể là do
4 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409

Sung. 3. Cây khả năng tối đa của không gian trình tự n hiện đã biết của POx, xảy ra ở nấm và vi khuẩn. Vòng tròn màu đen biểu thị các chuỗi đặc trưng sinh hóa và / hoặc cấu trúc. Một loại nấm
cellobiose dehydrogenase (CDH) và một loại cholesterol oxidase của vi khuẩn (COx) đã được sử dụng cho nhóm ngoài. PhyMLsuy ra từ căn chỉnh MAFFT G-INS-I, được cắt cho các vị trí có khoảng
trống >95%. Hỗ trợ nút được cung cấp bởi hỗ trợ giống như SH (không được hiển thị).
tính đặc hiệu của enzyme [27]. Ngay sau đó, CsPOx đã được cố định trên các sor phát hiện nồng độ glucose tương đương với nồng độ được đo bằng phản
điện cực carbon thủy tinh (GCE) để phân tích glucose trong các loại nước ép ứng Trinder, được sử dụng làm phương pháp tham chiếu. Mặc dù phản ứng
khác nhau (lựu, đào, cam và trái cây hỗn hợp), trà xanh, nước tăng lực, nước Trinder là một xét nghiệm glucose nhanh và hiệu quả được sử dụng từ năm
ngọt và rượu vang. Các biosen- 1969, cảm biến sinh học dựa trên POx có
 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409 5

Tabl1
Hằng số động học trạng thái ổn định rõ ràng của pyranose oxidase từ các nguồn khác nhau cho các chất nền đường được chọn. Hằng số động học được đo bằng oxy dưới dạng chất nhận electron ở
nồng độ không đổi (oxy từ không khí và áp suất môi trường xung quanh).

D -Glucose D -galactose D -xylose

Cơ thể Km (mM) KMèo kmèo / Km Km KMèo kmèo / Km Km (mM) KMèo kmèo / Km Điều kiện Ref.
(s1) (mM 1 giây1) (mM) (s1) (mM 1 giây1) (s1) (mM 1 giây1) (pH, T)
Arthrobacter siccitolerans 1.1 0.153 0.140 N.R. N.R. N.R. N.R. N.R. N.R. 6,5, 37 C [13]
Aspergillus nidulans 1.77 35.44 20.0 19.2 1.95 0.1 66.9 1.39 0.02 6,5, 30 C [60]
Aspergillus oryzae 2.86 1.48 0.52 13.0 0.02 0.002 18.1 0.27 0.015 6,5, 30 C [60]
Irpex lacteus 0.74 33.8 15.4 45.6 7.73 2.7 13.1 1.70 25.9 25.4 6.8 0.98 [62]
6,5, 25 C
Kitasatospora aureofaciens 1.50 6.92 10.0 3.84 11.9 4.4 32.4 5.48 0.21 [10]
7,0, 30 C [61]
Lyophyllum shimeji Peniophora 0.314 55.5 9.4 22.1 8.2 1.02 0.265 6.30 22.7 1.3 0.867
gigantea Peniophora sp. 1.1 83.1 50.5 N.R. 2.80 0.342 29.4 40 44.9 0.772 6,5, 30 C [63]
Phanerochaete chrysosporium 5.0 40.5 1.88 2.94 N.R. N.R. 20.9 22.2 17.7 0.033 6,5, 30 C [64]
Phlebiopsis gigantea Trametes 0.84 1.2 33 98.9 N.R. 4.87 1.66 N.R. N.R. 2.15 6,5, 30 C [17]
ochracea Tricholoma matsutake 0.76 54 33.8 6.1 N.R. N.R. 30 30 0.8 6,5, 30 C [65] [9]
0.74 111 43 73 9.2 1.7 0.27 45.8 55.8 N.R. [16]
6,5, 30 C
1.28 87 45.0 3.1 0.33 1.0 [66]
6,5, 30 C
22.5 0.5 1.2
6,5, 30 C
7,0, 37 C
n.r. = không được báo cáo.

Bảng 2 dichlorophenolindophenol. Hằng số động học được đo bằng

Hằng số động học trạng thái ổn định rõ ràng của pyranose oxidase từ các nguồn khác nhau cho các chất nhận electron của nó 1,4-benzoquinone, ion ferrocenium , được sử dụng như
D- glucose được sử dụng ở nồng độ bão hòa. (FC+FcPF6) , và 2,6-
1,4-Benzoquinone Ferrocenium ion 2,6-Dichlorophenolindophenol

Cơ thể Km KMèo kmèo / Km pH, T Km KMèo kmèo / Km pH, T Km KMèo kmèo / Km pH, T Ref.
(mM) (s1) (mM 1 giây1) (mM) (s1) (mM 1 giây1) (mM) (s1) (mM 1 giây1)
Arthrobacter 0.12 0.39 3.25 6,5, 37 C N.R. N.R. N.R. – N.R. N.R. N.R. – [13]
siccitolerans
Aspergillus nidulans 0.15 186 1240 4,5, 30 C 0.67 158 235 8,0, 30 C 0.39 13.1 33.6 6,5, 30 C [60]
Aspergillus oryzae 0.32 3.04 9.4 4,5, 30 C 1.12 1.7 1.5 8,0, 30 C N.R. N.R. N.R. – [60]
Irpex lacteus 0.045 228 5085 6,5, 25 C N.R. N.R. N.R. – 0.16 269 1695 6,5, 25 C [62]
Kitasatospora 0.08 24.9 311 7,5, 30 C 1.03 214 208 7,5, 30 C 0.03 9.4 313 7,5, 30 C [10]
aureofaciens
Lyophyllum shimeji 0.033 92.3 2760 6,5, 30 C 0.187 39.9 213 6,5, 30 C 0.187 67.3 361 6,5, 30 C [61]
Phanerochaete 0.11 400 3640 11,900 6,5, 30 C 0.33 228 691 6,5, 30 C 8,0, 0.051 108 2150 6,5, 30 C [17]
chrysosporium 0.042 477 4,5, 30 C 0.29 549 1890 30 C N.R. N.R. N.R. – [17]
Trametes ochracea 0.253 225 895 6,5, 30 C 0.507 291 574 6,5, 30 C 0.413 42 102 6,5, 30 C [61]
0.31 210 690 6,5, 30 C N.R. N.R. N.R. – 0.065 20 300 6,5, 30 C [16]

0.3 270 900 4,5, 30 C N.R. N.R. N.R. – 0.094 150 1,600 4,5, 30 C [16]

n.r. = không được báo cáo.
Lợi thế của việc tương thích với việc giám sát trực tuyến các quy trình thực
phẩm và đồ uống [28]. CsPOx cũng được đồng cố định với glucosidase để phát
hiện maltose hoặc maltodextrin trong bia. Cảm biến sinh học bienzym bao gồm
POx và a-glucosidase, phân tách malto-oligosacarit thành glucose, được xây
dựng bằng cách cố định cả hai enzyme trên điện cực than chì với sự trợ giúp
của chitosan và glutaraldehyde. Cảm biến sinh học bi-enzym phát hiện D-
glucose (độ nhạy 10,77 m A mM 1), D-galactose (độ nhạy 6,14 m A mM 1), D-
xylose (độ nhạy 5,84 m A mM 1) và sucrose (độ nhạy 0,321 m A mM 1). Khi
thử nghiệm trên các mẫu bia,cảm biến sinh học hai enzyme cho thấy nồng độ
glucose cao hơn 3-12% so với nồng độ được đo bằng phương pháp DNS tiêu
chuẩn [29].
Một ứng dụng bổ sung đã được tìm thấy cho các cảm biến sinh học dựa
trên CsPOx trên các điện cực vàng trong việc giám sát các ion canh tác lò
phản ứng sinh họccủa Saccharomyces cerevisiae. Kết quả phân tích tương
quan tốt với xét nghiệm glucose được thực hiện bằng cách sử dụng HPLC
làm phương pháp tham chiếu. Tuy nhiên, cảm biến sinh học không đặc biệt
ổn định, với việc mất 72% hoạt động ban đầu sau một tháng khi chuyển
sangmàu đỏ trong dung dịch đệm [30]. Các nghiên cứu tiếp theo đã báo cáo
việc xây dựng thêm các cảm biến sinh học dựa trên Cs POx, tất cả đều được
sử dụng để phân tích glucose trong một số đồ uống như nước ngọt, trà đá,
nước tăng lực, sữa và nước ép trái cây. Tất cả các cảm biến sinh học này cho
thấy kết quả so sánh tốt với phương pháp tham chiếu được áp dụng
[28,31,32].
Trong khi POx có ái lực tốt với glucose và các carbohydrate khác, chỉ có
cảm biến sinh học thế hệ thứ hai dựa trên chuyển điện tử qua trung gian (MET)
mới có thể được xây dựngd với enzyme này. Không thể đạt được sự truyền
electron trực tiếp (DET) giữa nhóm giả hoạt động oxy hóa khử và điện cực vì vị
trí hoạt động được nhúng vào bên trong protein và được che chắn khỏi điện cực
[33]. Các chất trung gian thường được sử dụng cùng với POx bao gồm các
quinone khác nhau như 1,4-benzoquinone (1,4-BQ) hoặc các ion kim loại phức
tạp khác nhau, chẳng hạn như ferrocen (Fc). Hình 4 cho thấy phản ứng xúc tác
điện sinh học (voltammograms) của điện cực carbon thủy tinh và cố định Đối
vớiPOx khi không có hoặc có sự hiện diện của ba chất trung gian khác nhau,
1,4-BQ, DCIP và ferrocenemethanol (FcMeO), rõ ràng thiếu bất kỳ phản ứng
nào của điện cực trong trường hợp không có chất trung gian và chỉ có glucose,
và quá trình oxy hóa glucose hiệu quả trong pre của hòa giải viên. Để cải thiện
MET, các nghiên cứu gần đây về cảm biến sinh học dựa trên POx đã sử dụng
các polyme dẫn điện khác nhau làm chất trung gian. Các polyme dẫn điện cung
cấp một ma trận ba chiều để lắng đọng phân tử sinh học, giúp tăng cường truyền
điện tích giữa enzyme và điện cực, đồng thời bảo vệ cấu trúc ba chiều và do đó
ổn định của enzyme. Hơn nữa, chúng thúc đẩy sự hấp phụ ổn định của enzyme
vào điện cực [31]. Do đó, một lượng đáng kể enzyme hoạt động được lắng đọng
hoặc kết hợptrên điện cực, dẫn đến giá trị đáp ứng cao hơn và phạm vi nồng độ
rộng
6 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409

Sung. 4. Phản ứng điện phân sinh học (voltammograms ) của Trametes ochracea POx (ToPOx) cố định trên điện cực carbon thủy tinh trong trường hợp không có và sự hiện diện của cácchất trung
gian t he 1,4-benzoquinone (1,4-BQ), dichlorophenolindophenol (DCIP) và ferrocenemethanol (FcMeOH). D-glucose đã được thêm vào làm chất nền của nhà tài trợ điện tử như được chỉ định. Năm m

L hỗn hợp enzyme chứa 8 mg mL1 Đến POx trong 50 mMdung dịch đệm natri citrat pH 5.0 đã được cố định trên điện cực bằng cách sử dụng chitosan và glutaraldehyde. (a) 1,4-BQ làm chất trung
gian: màu đen, phản ứng trống của 100 mM natri photphat đệm và To POx; màu vàng, To POx và 50 mM glucose; màu xanh lá cây, To POx và 1,0 mM 1,4,-BQ; màu cam,
ToPOx, 1,0 mM 1,4,-BQ và 50 mM glucose. (b) DCIP làm trung gian: đen và vàng, như trên; màu xanh , To POx và 1,0 mM DCIP; đỏ, To POx, 1,0 mM DCIP và 50 mM glucose. (c)
FcMeOH làm trung gian: đen và vàng, như trên; màu vàng đậm , To POx và 1,0 mM FcMeOH; màu tím, ToPOx, 1,0 mM FcMeOH và 50 mM glucose và 50 mM glucose.
phân tích phát hiện. Sự kết hợp của polyme oxy hóa khử osmi I, poly (1-
vinylimidazole) 12- [osmium (4,4 0-dimethyl-2,2 0-bipyridyl)2 Cl2]2+/+, trong
cảm biến sinh học dựa trên Cs POx trên các thanh than chì quang phổ cho phép
phát hiện một số carbohydrate khác nhau. Cụ thể, phát hiện cao hơn đã được
quan sát thấy đối với D-glucose (64,7 nA mM 1), cellotriose (30,6 nA mM 1)
và D-xylose (14,2 nA mM 1). Việc sử dụng polymer oxy hóa khử osmium II,
một poly
(vinylpyridine) - [osmium-(N, N'-methylated-2,2 0-biimidazol
e)3]2+/3+ phức tạp, tăng độ nhạy cảm với D-glucose (710 nA mM 1) và D-xylose
(329 nA mM 1). Độ ổn định của cảm biến sinh học dựa trên POx cũng được cải
thiện bởi polyme oxy hóa khử osmium II, chỉ có khoảng 6% phản ứng ban đầu
bị mất sau 18 giờ đo. Việc sử dụng một loại polymer dẫn điện khác, HKCN [4-
ami no-N- (2,5-di (thiophen-2-yl) -1H-pyrrol-1yl) benzamide] trong chế tạo
cảm biến sinh học dựa trên CsPOx trên các điện cực than chì đã dẫn đếnđộ nhạy
cảm đối với D-glucose là 102 nA mM 1. Sự ổn định hoạt động tốt của cảm biến
sinh học chế tạo mà không làm giảm hoạt động với glucose sau 81 phép đo đã
được quan sát bổ sung [34]. Việc sử dụng polyme poly dựa trên selen (4,7-bis
(thieno[3,2-b]thiophen-2-yl) benzo [c][1,2,5] selenadiazole; poly (BSeTT))
trong chế tạo cảm biến sinh học dựa trên CsPOx trên các điện cực vàng cho độ
nhạy cao 1390 nA mM 1 đối với D-glucose. Polyme cũng góp phần vào sự ổn
định của cảm biến sinh học dựa trên POx với chỉ 1 1% hoạt động giảm sau 5 giờ
đo [31]. Các chất trung gian khác như FcMeOH đã góp phần làm tăng độ nhạy
của cảm biến sinh học dựa trên Cs POx đối với glucose từ 0,9 ± 0,06 đến 31 ±
5,6 mA mM1 cm 2 (Nazaruk và Bilewicz, 2007). 1,4-BQ tăng độ nhạy của cảm
biến sinh học dựa trên Cs POx đối với glucose Dtừ 3,7 lên 59 mA M1 cm2 [35].
Một cải tiến đáng kể được đánh giá bởi độ nhạy cao hơn đáng kể đã đạt
được khi một chế phẩm thương mại của Coriolus sp. POx (Cs POx) đã được
thay thế bằng một chế phẩm POx tái tổ hợp thử nghiệm, tinh khiết cao từ T.
ochracea (ĐếnPOx) trongquá trình cắt fa của cảm biến sinh học trên các điện
cực than chì cùng với polymer oxy hóa khử osmium I, cho độ nhạy 2480 nA
mM1 cho D -Glucose. Cảm biến sinh học dựa trên To POx kết hợp với polymer
oxy hóa khử osmium I được tìm thấy ổn định dưới các conditi lưu trữ khôở 4 C
và chỉ mất 10% hoạt động sau 7 ngày [36]. Theo cách tương tự, việc kết hợp
osmium oxy hóa khử polymer III ([Os (bpy) 2 (PVI) 10 Cl] 2 +/+) vào cảm biến
sinh học dựa trên To POx dẫn đến dòng điện tối đa 1917 nA mM 1 và 820 nA
mM 1 với D glucose và D-galactose làm chất nền, tương ứng [37].
Trong suốt những năm qua, công nghệ nano đóng một vai trò ngày càng
quan trọng trong việc cải thiện hiệu suất của cảm biến sinh học. Do đó, các vật
liệu nano khác nhau - ống nano carbon, dây nano, cấu trúc nano, hạt nano vàng
và oxit kim loại - cũng góp phần tạo ra các cảm biến sinh học dựa trên POx hiệu
quả và ổn định hơn [24]. Các ống nano carbon (CNT) đã được nghiên cứu
chuyên sâu để cải tiến các cảm biến sinh học dựa trên POx vì chúng được biết là
góp phần tăng cường truyền điện tử, dẫn điện cao, tính chất cơ học tốt, cũng như
xây dựng các thiết bị nano. Một trong những nghiên cứu được báo cáo đầu tiên
về việc sử dụng CNT trong chế tạo cảm biến sinh học dựa trên Cs POx là công
trình của Odaci et al. [27]. Một điện cực biến đổi CNT dựa trên POx đã được
điều chế bằng cách trộn CNT nhiều lớp, bột than chì và dầu khoáng. Các phép
đo vôn kế theo chu kỳ cho thấy hoạt động điện xúc tác của điện cực dựa trên
POx được sửa đổi CNT cao hơn so với điện cực dán carbon chưa biến đổi. Các
giá trị dòng điện cao hơn thu được với các điện cực dựa trên POx được sửa đổi
CNT này (2,3 m A) so với điện cực enzyme không biến đổi (0,732 mA) với sự
có mặt của D-glucose (4 mM), cho thấy sự cải thiện hiệu quả của quá trình
chuyển electron. Cảm biến sinh học dựa trên CNTmodified, POx cũng có thể
được sử dụng như một máy dò đa phân tích vì nó cho thấy phản ứng được cải
thiện như được chỉ ra bởi độ nhạy của nó với các chất phân tích khác nhau so
với cảm biến sinh học không biến đổi khi được thử nghiệm với các chất nền như
D-mannose (tăng từ 0,005 đến 0,020 m A mM 1), D-xylose (từ 0,084 đến 0,294
m A mM 1), và D-galactose (từ 0,050 đến 0,194 m A mM 1). Loại cảm biến
sinh học này cũng ổn định khi được giữ trong tế bào phản ứng ở 35 C trong 8
giờ. Trong một stud y khác của Odaci và các đồng nghiệp [29], CNT đã được
thêm vào hệ thống bi-enzym của CsPOx / aglucosidase, nhằm cải thiện hiệu
quả của cảm biến sinh học. Nó đã được tìm thấy rằng sự hiện diện của CNT chỉ
góp phần vào sự ổn định của enzyme bằng cách cung cấp một nền tảng ổn định
hơn, trong khi phản ứng amperometric của cảm biến sinh học không được ứng
biến. Kết hợp các hạt nano vàng (GNP) trong chế tạo cảm biến sinh học dựa
trên POx trên GCE tạo ra tín hiệu cao hơn, tăng từ 1,25 m A lên 1,75 m A với
sự có mặt của 0,8 mMglucose. GNP cùng với sự kết hợp của gelatin, poly mer
dẫn điện (polyaniline) và nanocomposite vô cơ (AgCl) đã góp phần ổn định cảm
biến sinh học, cho thấy phản ứng cảm biến sinh học giảm 12% sau 6 giờ đo
[28]. Sử dụng carbon mesoporous (MSU-F-C) trong chế tạo cảm biến CsPOx
bi trên giá đỡ GCE cho thấy độ nhạy 590 nA mM 1 đối với glucose [38]. Các hạt
nano Pt lắng đọng điện trên màng MnO2 trên GCE đã tăng cường hiệu suất của
cảm biến sinh học dựa trên Cs POx, thể hiện độ nhạy 6,10 m A mM 1. Độ ổn
định của cảmbiến bi osensor cũng được cải thiện với tổn thất khoảng 5% hoạt
động sau >200 phép đo [32].
Trong thập kỷ qua, một số nghiên cứu đã được thực hiện để làm sáng tỏ
các kỹ thuật cố định tối ưu cho các cảm biến sinh học dựa trên POx. Cố định
enzyme là một bước quan trọngvì nó ảnh hưởng lớn đến độ nhạy, tính chọn
lọc và sự ổn định hoạt động của cảm biến sinh học enzyme [39]. Năm 2007,
một pha lập phương tinh thể lỏng dựa trên monoolein đã được sử dụng để cố
định CsPOx trên các điện cực Pt. Cảm biến sinh học dựa trên Cs POx ổn
định trong ma trận này, không cho thấy sự thay đổi đáp ứng trong ít nhất 6
ngày và cho độ nhạy 900 nA mM 1 đối với D-glucose. Tuy nhiên, người ta đã
quan sát thấy rằng số doanh thu (56 ± 10 s 1) thấp hơn một chút so với số đo
quang phổ của enzymetự do t he (71 s 1; [16]) [40]. Một nghiên cứu gần đây
so sánh các kỹ thuật cố định khác nhau cho thấy lớp phủ kết tủa enzyme
(EPC) là một phương pháp tốt hơn cho cảm biến sinh học dựa trên POx trên
CNT so với gắn cộng hóa trị (CA) hoặc lớp phủ enzyme (EC) được hiển thị
bởi một lớp enzyme rộng hơn trên điện cực được quan sát bằng kính hiển vi
điện tử quét phát xạ trường (FE-SEM). Cảm biến sinh học dựa trên EPC POx
hiển thị độ nhạy 3,7 mA M 1 cm 2, tốt hơn 2,3 lần so với các cảm biến sinh
học do CA hoặc EC chuẩn bị
[35] .
Tính đặc hiệu cơ chất rộng của POx có thể được khai thác cho các ứng
dụng khác ngoài việc theo dõi đường, chẳng hạn như đo huyết thanh 1,5-
anhydro-D-glucitol (1-deoxy-D-glucopyranose, 1,5-anhydroglucitol, 1,5-
 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409
AG) như một dấu hiệu cho ndex đường huyết i và bệnh tiểu đường. 1,5-AG
là một polyol chính trong huyết thanh của con người với cấu trúc tương tự
như glucose. Với thời gian bán hủy từ 1 đến 2 tuần, 1,5-AG được tiết ra
trong nước tiểu nhưng tái hấp thu ở thận mà không bị chuyển hóa. Khi nồng
độ glucose trở thành hig h, sự tái hấp thu 1,5-AG bị ức chế và nó được bài
tiết qua nước tiểu khiến mức độ của nó trong huyết thanh giảm. Do đó, phép
đo của nó là một dấu hiệu gián tiếp của thời kỳ tăng đường huyết. Giải thích
mức 1,5-AG là một dấu hiệu hữu ích và nhạy cảm của các đợt tăng đường
huyết acu te và sau ăn trong bệnh tiểu đường và tim mạch [41], cung cấp một
góc nhìn độc đáo về các chuyến du ngoạn tăng đường huyết gần đây của
bệnh nhân, có thể không rõ ràng từ các dấu hiệu đường huyết tiêu chuẩn.
POx xúc tác quá trình oxy hóa nhóm hydroxyl C-2 của 1,5-AG tạo thành
1,5-anhydro-D-fructose, với sự khử oxy thành H 2 O 2 (Sơ đồ 1). Bộ dụng cụ
xét nghiệm enzyme dựa trên POx hiện có sẵn trên thị trường để đo 1,5-AG
và đã được FDA chấp thuận [42,43]. Hơn nữa, người ta thấy rằng 1,5-AG
cũng có thể được phát hiện trong nước bọt và nó phản ánh mức 1,5-AG
trong máu, cho thấy rằng nó có thể được sử dụng như một dấu hiệu không
xâm lấn của kiểm soát đường huyết ngắn hạn [44].
Một xét nghiệm enzyme dựa trên POx đã được sử dụng để phân tích 1,5-
AG, cũng được so sánh với sắc ký khí-lỏng (GLC) và các phép đo HPLC.
Mặc dù các phương pháp sắc ký cho kết quả chính xác hơn, nhưng chúng tốn
thời gian và không phù hợp để xác định mức 1,5-AG trong nhiều mẫu
trongthực hành lâm sàng thông thường. Chế tạo một cảm biến sinh học dựa
trên POx cải tiến để đo mức 1,5-AG vẫn đặt ra một giải pháp thay thế tốt
hơn vì nó dễ dàng hơn, nhanh hơn và không tốn kém [45]. Gần đây, một cảm
biến sinh học dựa trên bóng bán dẫn hiệu ứng trường hữu cơ (OFET) đượcsử
dụng như một cảm biến điện hóa điện áp đo cả 1,5-AG và glucose. Một cảm
biến sinh học dựa trên OFET, kết hợp với điện cực màu xanh Phổ được sửa
Sơ đồ 1.
đổi bằng CsPOx, đã được sử dụng và cả glucose và 1,5-AG có thể được đo
trong phạm vi nồng độ từ 1 mM trở lên [46]. Do đó, việc thiết lập một
phương pháp điện hóa nhanh chóng và đáng tin cậy để đo 1,5-AG trong máu
hoặc nước bọt có thể mang lại tiềm năng trong phân tích lâm sàng bệnh nhân
tiểu đường.
3. Các ứng dụng khác trong ví dụ như chuông nhiên liệu sinh học, xúc tác điện
sinh học
Pyranose oxidase có vai trò đầy hứa hẹn như một thành phần sinh học trong
pin nhiên liệu sinh học (BFC) để sản xuất năng lượng quy mô nhỏ. Điều này
dựa trên khả năng oxy hóa hiệu quả các carbohydrate khác nhau (Bảng 1)
thường được tìm thấy trong thủy phân lignocellulose [47]. Mặc dù nó được
phân loại là oxidase, POx có hoạt động cao với các chất nhận electron thay thế
như ion ferrocenium (Fc +), các ion kim loại phức tạp khác hoặc quinone (Bảng
2), tạo điều kiện thuận lợi cho việc đưa các electron từ vị trí hoạt động đến điện
cực trong quá trình truyền electron qua trung gian [35]. Điều này là ví dụ minh
họa trong nghiên cứu của Kwon et al. [38], trong đó hiệu suất của điện cực dựa
trên POx được đánh giá và comp ared với hiệu suất của điện cực dựa trên
GOx,cả hai enzyme đều cố định trên carbon mesoporous (MSU-FC). Nghiên
cứu này cho thấy, bất kể sự vắng mặt hoặc sự hiện diện của 1,4-BQ làm chất
trung gian, cực dương dựa trên POx tạo ra mật độ công suất tối đa cao hơn 30–
40% so với cực dương dựa trên GOx. Điện cực dựa trên POx có mật độ công
suất tối đa là 11,3 và 40,7 mW cm 2, trong khi điện cực dựa trên GOx cho thấy
các giá trị thấp hơn lần lượt là 8,4 và 31,4 mW cm 2 khi không có và có sự hiện
diện của trung gian 1,4 BQ. Mặc dù el ectrode dựa trên POx có hoạt tính thấp
hơn so với hoạt động dựa trên GOx, nhưng nó tạo ra dòng điện cực đại cao hơn,
7
có thể do tốc độ truyền electron cao hơn và / hoặc tốc độ vận chuyển khối lượng
cao hơn. Sahin và cộng sự. [48] cũng minh họa rằng biến thể To POx, T169G
tạo ra đầu ra dòng điện cao hơn với sự có mặt của bộ trung gian qua GOx trong
BFC. Các điện cực được điều chế bằng cách cố định các enzyme trên các điện
cực in màn hình (SPE). Fc được sử dụng làm chất trung gian vì độc tính thấp,
trong khi CNT nhiều thành được sử dụng để tăng cường tính chất chuyển
electron của hỗn hợp Fc-Nafion. Các phép đo Chronoamperometric cho thấy
GOx tạo ra dòng điện ban đầu cao hơn 55 m A so với POx T169G (dòng điện
ban đầu là 10 mA). Tuy nhiên, trước đây đã mất hầu hết hoạt động y (khoảng
90%) trong giờ đầu tiên của tổng thời gian hoạt động là 12 giờ. Mặt khác, POx
T169G duy trì > 70% dòng điện ban đầu trong giờ đầu tiên. Đối với hiệu suất
pin nhiên liệu của chúng, cả hai cực dương đều cho thấy điện áp mở c ban đầu
tương tự nhau (0,442 V đối với POx T169G và 0,444 V đối với GOx) nhưng
POx T169G cho thấy công suất đầu ra cao hơn 25% (giá trị tối đa 1,06 m W) so
với GOx (0,8 mW) trong dung dịch khí. Trong một nghiên cứu khác, Spadiut et
al. [49] Cácbiến thể To POx được báo cáo có đầu ra urrent c tối đa cao hơnso
với enzyme loại hoang dã. Đối vớibiến thể POx, H450G sản xuất 0,610 và
28,8 m A, trong khi V546C sản xuất 0,862 và 30,7 m A, trong trường hợp không
có và sự hiện diện của 1,4-BQ, tương ứng. Wild-type ToPOx chỉ tạo ra 0,285 và
12,62 mA, một lần nữa không cód với 1,4-BQ, tương ứng.
Cố định hiệu quả trên các điện cực cũng nâng cao hiệu quả của POx như
một thành phần trong BFC. Mật độ năng lượng tối đa của cực dương dựa trên
POx được điều chế bằng lớp phủ kết tủa enzyme (53 m W cm 2) lớn hơn mật độ
được điều chế bằng cách gắn cộng hóa trị (41 m W cm 2) và lớp phủ enzyme
(47 m W cm 2). Hình ảnh SEM đã xác nhận sự gia tăng tải enzyme, điều này rõ
ràng dẫn đến mật độ năng lượng tối đa cao hơn. Điều này có thể dẫn đến số
lượng electron cao hơn được tạo ra trên một đơn vị diện tích bề mặt hình học
của cực dương dựa trên POx cho BFC. Sản lượng điện tối đa cho tất cả các cực
dương dựa
trên POx này
đã được tăng
thêm với sự
có mặt của bộ
trung gian
1,4-BQ (lần
lượt là 500,
330 và 260
mW cm2 cho
EPC, EC và CA) [35].
4. Lợi ích lớn nhất của enzyme và cảm biến sinh học
POx đã thu hút được nhiều sự quan tâm hơn như một thành phần của cảm
biến sinh học trong những năm qua và nó đang dần nổi lên như một sự thay thế
hấp dẫn cho GOx, vẫn được sử dụng trong hầu hết các nghiên cứu về BFC. Trái
ngược với nấm GOx, POx là điển hìnhy không glycosyl hóa [50,51], cả hai đều
tạo điều kiện cho việc sản xuất quá mức tái tổ hợp của enzyme và hỗ trợ chuyển
electron từ enzyme sang điện cực, có lẽ là do khoảng cách ngắn có thể đạt được.
Khía cạnh sau này là để kiểm trale cũng được hiển thị cho AnGOx, được nghiên
cứu ở cả dạng bản địa, glycosyl hóa và dạng enzyme khử glycosyl hóa [52].
Trong các nghiên cứu so sánh sâu hơn, Cs POx không glycosyl hóa và
glycosylated AnGOx đã được sử dụng để chế tạo cảm biến sinh học trên GCE
với sự trợ giúp của MSU-F-C. Độ nhạy glucose của cảm biến sinh học dựa trên
POx là 0,59 ± 0,04 m A mM 1, cao gấp sáu lần so với cảm biến sinh học GOx
[38]. Cảm biến sinh học Cs POx trên CNT cho thấy độ nhạy glucose 3,7 mA
M1 cm2, cao gấp năm lần so với BFC sử dụng glycosylated GOx trên CNT.
Ngoài ra, sự cải thiện tốc độ truyền điện tử đã được chứng minh, tăng từ 0,031 s
1 đối với cảm biến sinh học sed GOx-balên 0,046 s1 đối với cảm biến sinh học
POx [35]. Sự chuyển electron hiệu quả hơn này có lẽ là kết quả của khoảng cách
ngắn hơn từ nhóm giả hoạt động oxy hóa khử ở vị trí hoạt động đến bề mặt điện
cực, là 11 Å đối với POx (nonglycosylated) so với 13–15 Å được hiển thị cho
GOx glycosyl hóa [6,52]. Sự vượt trội này của POx so với GOx trong các ứng
dụng điện hóa sinh học cũng được chứng thực trong các nghiên cứu so sánh
khác. Một cảm biến sinh học dựa trên POx trên các điện cực vàng cho thấy độ
8 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409
nhạy D-glucose tốt hơn so với cảm biến sinh học sử dụng GOx và được chế tạo
theo cách tương tự (độ nhạy lần lượt là 3,36 và 1,54 m A mM 1 đối với POx và
GOx) [30].
Do đó, POx có thể phát hiện hiệu quả D-glucose và có thể tạo ra sản lượng
điện cao hơn từ quá trình oxy hóa glucose. Nó có thể làm giảm hiệu quả cả a-
và b-anome của D-glucose trái ngược với GOx, chỉ xúc tác quá trình oxy hóa b-
D-glucose [53]. Như đã nêu ở trên, cả hằng số Michaelis K m và hiệu suất xúc
tác kcat / Km đều được ưu tiên hơn cho POx như được minh họa bằng một nghiên
cứu so sánh về ToPOx và AnGOx, cho thấy hiệu quả xúc tác cao gấp mười lần
đối với enzyme cũ trong các điều kiện giống hệt nhau [21] . Kết hợp với nhau,
những dữ liệu này cho thấy ToPOx có thể tạo ra sản lượng điện cao hơn AnGOx
với D-glucose làm chất nền trong các ứng dụng BFC. POx xúc tác quá trình oxy
hóa chất nền đường của nó ở vị trí C-2 tạo ra keto-glucose, không gây ra bất kỳ
sự thay đổi pH nào trái ngược với GOx và sản phẩm phản ứng cuối cùng của nó
axit gluconic [18]. Việcchuyển sang các giá trị pH thấp hơn do phản ứng xúc tác
GOx gây ra có thể gây bất lợi cho cảm biến sinh học và BFC [54]. Hơn nữa,
cảm biến sinh học dựa trên POx có tiềm năng được áp dụng như một máy dò đa
phân tích vì nó có khả năng phản ứng tuyệt vời với các loại đường khác ngoài D-
glucose, chẳng hạn như D-galactose, sorbose, mannose, D-xylose và d-
gluconolactone [47]. Một lần nữa, điều này làm nổi bật các đặc tính thuận lợi
của enzyme này so với GOx.
5. Vấn đề lớn nhất của enzyme và cảm biến sinh học
Mặc dù POx cótỷ lệ chuyển đổi t oxy thấp hơn GOx, nhưng nó cho thấy hoạt
động đáng kể với oxy, được khử thành hydro peroxide trong quá trình xúc tác.
Điều này có thể can thiệp vào độ nhạy của nó, đặc biệt là khi hoạt động ở điện
thế thấp. Mặc dù oxy có sẵn, phản ứng với oxy không phải là một đặc tính mong
muốn cho các ứng dụng cảm biến sinh học và BFC vì nó có thể gây rò rỉ
electron. Ngoài ra, H 2 O 2 được sản xuất từO 2 có thể gây tổn thương oxy hóa
và do đó làm bất hoạt enzyme [55]. Một cách tiếp cận đầy hứa hẹn cho vấn đề
này có thể là kỹ thuật enzyme và nó đã được chứng minh rằng phản ứng oxy
của POx có thể bị thay đổi bằng kỹ thuật này. Các biến thể To POx T166R,
L545C, Q 448H, L545C và N593C đã được xác định theo cách tiếp cận kỹ thuật
nhằm giảm phản ứng của enzyme với oxy. Để đạt được mục tiêu này, các dư
lượng axit amin khác nhau trong vùng lân cận trực tiếp của isoalloxazine đã
được nhắm mục tiêu bởi esis đột biến bão hòa, và sau đó được sàng lọc để giảm
hoạt động O 2 và phản ứng bảo tồn với chất nhận electron thay thế DCIP [56].
Các nghiên cứu điện hóa của một cảm biến sinh học được chế tạo bằng SPE và
biến thể ToPOx N593C cho thấy sự ức chế hoàn toànhành động tái tạo với oxy
như được minh họa trong vôn đồ tuần hoàn. Hoạt tính đối với glucose vẫn được
bảo tồn với K M là 2,5 ± 0,5 mM đối với glucose N593C, tương đương với
hoạt tính của POx loại hoang dã (K M = 2,3 ± 0,1 mM) [57]. Một biến thể To
POx khác, T169G, với hoạt động oxy giảm được báo cáo so với loại hoang dã
đã được sử dụng làm thành phần của pin nhiên liệu enzyme. T169G BFC tạo ra
sản lượng điện tối đa là 1,06 mW trong dung dịch glucose khí 5,5 mM, cao hơn
25% sovới BFC dựa trên GOx [48].
6. Outlook về những cải tiến có thể có và sử dụng thay thế
POx, mặc dù nó là một enzyme nấm, có thể dễ dàng biểu hiện và sản xuất
trong vật chủ vi khuẩn Escherichia coli với năng suất cao. Một nghiên cứu so
sánh của Spadiut et al. [58], đánh giá ba hệ thống biểu hiện dựa trên E. coli
khác nhau, kết luận rằng năng suất cao nhất có thể đạt được trong chế độ
canh tác hàng loạt bằng cách sử dụng hệ thống pET21d + (năng suất 31 U / L
h, ~ 1000 U mỗi L môi trường tương ứng với 125 mg POx / L), trong khi ở
chế độ lô cho ăn, hệ thống pCOLD vượt trội (năng suất 206 U / L h, 3300 U
/ L, ~ 400 mg / L). Sự dễ dàng sản xuất tái tổ hợp này trong hệ thống biểu
hiện E. coli làm cho enzyme có thể sửa đổi các kỹ thuật khác nhau của sinh
học phân tử và có thể đóng vai trò làcơ sở cho một số phương pháp tiếp cận
để thiết kế POx hướng tới các đặc tính mong muốn. POx cho thấy phản ứng
tốt đối với quinone và các ion kim loại phức tạp như FC + hiện đang được sử
dụng làm chất trung gian. Thiết kế protein hợp lý và bán hợp lý có thể được
sử dụng để tạo ra các biến thể e POx có khả năng phản ứng cao đối với các
chất trung gian thường được sử dụng trong các ứng dụng điện hóa sinh học
và các chất nền đường khác nhau để cải thiện hiệu suất của cảm biến sinh
học dựa trên POx hoặc BFC. Các ví dụ gần đây trong tài liệu cho thấy rằng
những lời tuyên bố ap kỹ thuật này thực sự có thể rất thành công. POx đã
được thiết kế theo hướng cải thiện hoạt động với D-galactose và ba biến thể
của To POx trong đó bốn đến sáu vị trí axit amin quan trọng đã được sửa đổi
cho thấy hoạt động được cải thiện đáng kể với galactose. Các biến thể này
được so sánh với ToPOx loại hoang dã cho các ứng dụng cảm biến sinh học.
Trong khi loại hoang dã không thể được áp dụng cho cảm biến galactose, các
cảm biến sinh học amperometric dựa trên than chì và có dây với các polyme
Os khác nhau cho thấy hiệu suất có thể trồng trọt với các cảm biến sinh học
galactose khác với giới hạn phát hiện trong phạm vi micromol thấp, giới hạn
định lượng khoảng 10 m M và phạm vi tuyến tính trong khoảng 0,1 đến 10
mM galactose [37]. Theo cách tương tự, kỹ thuật bán hợp lý của ToPOx
results trong các biến thể cho thấy phản ứng giảm đáng kể với oxy trong khi
hoạt động dehydrogenase, tức là phản ứng với các chất nhận electron thay
thế khác nhau và glucose, được duy trì hoặc thậm chí tăng lên. Các biến thể
To POx L545C và T166R thấym là ứng cử viên thú vị nhất cho ứng dụng
điện hóa sinh học khi mong muốn cải thiện hoạt động với chất trung gian.
Khi so sánh với To POx loại hoang dã trên cơ sở hiệu suất xúc tác k cat / K
m, L545C chỉ cho thấy hoạt động tương đối 19% với oxy trong khi các giá trị
kcat / Km với DCIP, 1,4-BQ và FC + là 184, 413 và 202% so với ToPOx loại
hoang dã. Giá trị kcat / Km tương đối cho biến thể To POx T166R với O2,
DCIP, 1,4-BQ và FC + là 39, 334, 192 và 48% [56]. Mặc dù các biến thể này
là chất xúc tác sinh học hấp dẫn dựa trên các đặc tính được cải thiện của
chúng, chúng chưa được đánh giá cho các ứng dụng điện hóa sinh học. Tuy
nhiên, chúng cho thấy rõ tính khả thi của các phương pháp kỹ thuật để điều
chỉnh POx theo hướng và ứng dụng chống đỡ mong muốn.
Ngoài các tính chất động học của enzyme, tính ổn định của chúng được
quan tâm cao đối với các khía cạnh ứng dụng khác nhau. Tùy thuộc vào
nguồn enzyme, POx cho thấy độ ổn định nhiệt từ trung bình đến tốt như
được chỉ ra bởirature tempe nóng chảy T m. Ví dụ, giá trị này được xác định
cho các enzyme nấm ToPOx (60,7 C; [59]), POx từ A. niger (67 C; [60]) và
PcPOx (75,4 C; [61]), cũng như đối với các enzyme vi khuẩn AsPOx (43 C;
[13]) và KaPOx (56,1 C; [10]). Tính khả thi của kỹ thuật enzy me một lần
nữa được chứng minh là cải thiện độ ổn định nhiệt của POx. Đột biến đơn
To POx E542K cho thấy giá trị T m là 74,7 C, cải thiện 14 so với To POx
loại hoang dã, trong khi hoạt động bán rã của E542K ở 70 C T 1 /2,70 là 55
phút (ít hơn 1 phút đối với loại hoang dã). Một sự ổn định hơn nữa có thể đạt
được bằng cách giới thiệu một đột biến bổ sung, L537W / E542K. Đột biến
kép này cho thấy hành vi nóng chảy hai pha, do đó không thể xác định nhiệt
độ nóng chảy của nó, trong khi giá trị T1/2,70 của nó là 105 phút [59].
Có lẽ tiềm năng đáng kể nhất cho các ứng dụng và cải tiến trong tương
lai có thể được tìm thấy trong sự đa dạng của các oxidase pyranose nấm và
vi khuẩn khác nhau. POx hiển thị một phân bố phân loại rộng rãi và nó cũng
cho thấy một lev el đặc biệt caocủa biến đổi trình tự khi so sánh với các
oxidoreductase GMC khác [12]. Hiện tại, khoảng mười POx nấm đã được
nghiên cứu về mặt sinh hóa, nhưng hầu hết trong số này có liên quan chặt
chẽ. POx vi khuẩn cung cấp một nguồn tài nguyên chưa được khai thác thậm
chí còn lớn hơn, chỉ có hai thành viên đặc trưng sinh hóa, không ai trong số
đó đã được thử nghiệm cho một ứng dụng trong cảm biến sinh học hoặc
BFC. Đặc biệt là các enzyme vi khuẩn sau này có thể cho thấy các tính chất
điện hóa sinh học rất khác so với các đối tác nấm của chúng. Tất cả các POx
nấm được nghiên cứu cho đến nay cho thấy hình học tứ phân với quyền truy
cập hạn chế vào vị trí hoạt động, trong khi hai đại diện vi khuẩn là đơn phân
(As POx) và dimeric (Ka POx) trong dung dịch. Do đó, vị trí hoạt động có
thể cởi mở hơn và acc tốt hơn,dẫn đến giao tiếp được cải thiện với điện cực
hoặc trung gian.
Tuyên bố về lợi ích cạnh tranh
Các tác giả tuyên bố rằng không có Xung đột lợi ích.
 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409
Lời cảm ơn
Công trình này được hỗ trợ bởi Chương trình Tiến sĩ BioToP của Quỹ
Khoa học Áo (FWF) - Công nghệ phân tử sinh học của protein (FWF
W1224). ATA rất biết ơn khoản tài trợ Ernst-Mach ASEAUninet, được hỗ trợ
bởi Đại học Học thuật ASEAN-Châu Âu Network (ASEA-Uninet), Áo. Bộ
Khoa học, Nghiên cứu và Kinh tế Liên bang Áo, Áo và Cơ quan Hợp tác
Quốc tế về Giáo dục và Nghiên cứu (OeAD), Áo.
Tham khảo
[1] L. Sützl, C. Laurent, A.T. Abrera, G. Schütz, R. Ludwig, D. Haltrich, Đa dạng các chức năng
enzyme trong họ CAZy AA3 , Appl. Microbiol. Công nghệ sinh học. 102 (2018) 2477–2492.
[2] G. Daniel, J. Volc, E. Kubátová, T. Nilsson, Siêu cấu trúc và nghiên cứu hóa học miễn dịch
về enzyme pyranose oxidase sản xuất H 2 O2 i n Phanerochaete chrysosporium được
trồng trong điều kiện nuôi cấy lỏng, Appl. Environ. Vi sinh vật. 58 (1992) 3667–3676.
[3] A. Levasseur, E. Drula, V. Lombard, P.M. Coutinho, B. Henrissat, Mở rộng các tiết mục
enzyme của cơ sở dữ liệu CAZy để tích hợp các enzyme oxy hóa khử phụ trợ , Biotechnol.
Nhiên liệu sinh học 6 (2013) 41.
[4] H.W. Ruelius, R.M. Kerwin, F.W. Janssen, Carbohydrate oxidase, một loại enzyme mới từ
Polyporus obtusus. I. Phân lập và thanh lọc, Biochim. Sinh lý. Acta 167 (1968) 493–500.
[5] M. Bannwarth, S. Bastian, D. Heckmann-Pohl, F. Giffhorn, G.E. Schulz, Cấu trúc tinh thể
của pyranose 2-oxidase từ nấm thối trắng Peniophora sp, Hóa sinh 43 (2004) 11683–11690.
[6] B.M. Hallberg, C. Leitner, D. Haltrich, C. Divne, Cấu trúc tinh thể của enzyme pyranose 2-
oxidase phân hủy 270 kDa homotetrameric lign, J. Mol. Biol. 341 (2004) 781–796.
[7] N. Hassan, T.C. Tan, O. Spadiut, I. Pisanelli, L. Fusco, D. Haltrich, C.K. Peterbauer, C.
Divne, Cấu trúc tinh thể của Phanerochaete chrysosporium pyranose 2-oxidase cho thấy đầu
N hoạt động như một propeptide hỗ trợ i n lắp ráp homotetramer, FEBS Open Bio. 3
(2013) 496–504.
[8] P. Halada, C. Leitner, P. Sedmera, D. Haltrich, J. Volc, Xác định vùng liên kết cộng hóa trị
flavin adenine dinucleotide in pyranose 2-oxidase từ Trametes nhiều màu, Anal. Biochem.
314 (2003) 235–242.
[9] O. Spadiut, TC Tan, I. Pisanelli, D. Haltrich, C. Divne, Tầm quan trọng của đoạn gating
trong vòng nhận dạng chất nền của pyranose 2-oxidase, FEBS J. 277 (2010) 2892–2909.
[10] P.L. Herzog, L. Sützl, B. Eisenhut, D. Maresch, D. Haltrich, C. Obinger, C.K. Peterbauer,
Hoạt động oxidase và dehydrogenase linh hoạt của pyranose 2-oxidase vi khuẩn tạo điều
kiện cho chu kỳ oxy hóa khử với mangan peroxidase in vitro, Appl. Environ. Vi sinh vật. 85
(2019), https://doi.org/10.1128/AEM.00390-19.
[11] R. Kittl, C. Sygmund, P. Halada, J. Volc, C. Divne, D. Haltrich, C.K. Peterbauer, Nhân bản
phân tử ba gen mã hóa pyranose dehydrogenase từ Agaricus meleagris và phân tích biểu
hiện của chúng bằng RT-PCR thời gian thực, Curr. Genet. 53 (2008) 117–127.
[12] L. Sützl, G. Foley, E. Gillam, M. Bodén, D. Haltrich, Siêu họ oxidoreductase GMC được
xem xét lại: phân tích và tiến hóa của nấm GMC oxidoreductase, Biotechnol Biofuels 12
(2019) 118.
[13] S. Mendes, C. Banha, J. Madeira, D. Santos, V. Miranda, M. Manzanera, M.R. Ventura, W.J.
van Berkel, L.O. Martins, Đặc tính của pyranose 2-oxidase vi khuẩn từ Arthrobacter
siccitolerans, J. Mol. Catal. B-Enzym. 133 (2016) S34–S43.
[14] M. Prongjit, J. Sucharitakul, T. Wongnate, D. Haltrich, P. Chaiyen, Kinetic cơ chế của
pyranose 2-oxidase từ Trametes nhiều màu, Hóa sinh 48 (2009) 4170–4180.
[15] I. Nishimura, K. Okada, Y. Koyama, Nhân bản và biểu hiện của pyranose oxidase cDNA từ
Coriolus versicolor trong Escherichia coli, J. Biotechnol. 52 (1996) 11–20.
[16] C. Leitner, J. Volc, D. Haltrich, Thanh lọc và mô tả đặc tính của pyranose oxidase từ nấm
thối trắngs Trametes multicolor, Appl. Environ. Vi sinh vật 67 (2001) 3636–3644.
[17] I. Pisanelli, M. Kujawa, O. Spadiut, R. Kittl, P. Halada, J. Volc, MD Mozuch, P. Kersten, D.
Haltrich, C. Peterbauer, Pyranose 2-oxidase từ Phanerochaete chrysosporium–biểu hiện ở E.
coli và đặc tính sinh hóa, J. Công nghệ sinh học. 142 (2009) 97–106.
[18] S. Freimund, A. Huwig, F. Giffhorn, S. Köpper, Rare keto-aldoses from enzym oxy hóa: chất
nền và các sản phẩm oxy hóa của pyranose 2oxidase, Chem. Eur. J. 4 (1998) 2442–2455.
[19] G. Kova cevic, M.Blazic, B. Draganic, R. Ostafe, M. Gavrovic-Jankulovic, R. Fischer, R.
Prodanovic, Nhân bản, biểu hiện dị thể, thanh lọc và mô tả đặc tính của đột biến M12 của
Aspergillus niger glucose oxidase trong yesst Pichia pastoris KM71H, Mol. Biotechnol. 56
(2014) 305–311.
[20] CM Wong, K.H. Wong, X.D. Chen, Glucose oxidase: sự xuất hiện tự nhiên , chức năng, tính
chất và ứng dụng công nghiệp, Appl. Microbiol. Công nghệ sinh học. 78 (2008) 927–938.
[21] K. Decamps, I. Joye, D. Haltrich, J. Nicolas, C. Courtin, J. Delcour, Đặc điểm
sinh hóa
của Trametes pyranose oxidase nhiều màu và Aspergillus niger glucose oxidase và
giấyphép imp cho chức năng của chúng trong bột mì, Food Chem. 131 (2012) 1485–1492.
[22] M. Kujawa, H. Ebner, C. Leitner, B.M. Hallberg, M. Prongjit, J. Sucharitakul, R. Ludwig, U.
Rudsander, C. Peterbauer, P. Chaiyen, D. Haltrich, C. Divne , Cơ sở cấu trúc cho liên kết
chất nền và quá trình oxy hóa regioselectiveof monosacarit tại C3 bởi pyranose 2-oxidase, J.
Biol. Chem. 281 (2006) 35104–35115.
[23] S. Vogt, M. Schneider, H. Schäfer-Eberwein, G. Nöll, Xác định thế oxy hóa khử phụ thuộc
pH của glucose oxidase bằng quang phổ, Anal. Chem. 86 (2014) 7530–7535.
[24] B. Perez-Lopez, A. Merkoci, Hạt nano để phát triển các hệ thống cảm biến (sinh học) cải
tiến, Hậu môn. Sinh học. Hóa học. 399 (2011) 1577–1590.
9
[25] N. Plumeré, J. Henig, W.H. Campbell, Hệ thống loại bỏ O2 xúc tác enzyme để phân
tích điện hóadưới không khí xung quanh: ứng dụng trong cảm biến sinh học nitrat
amperometric, Anal. Chem. 84 (2012) 2141–2146.
[26] H. Lidén, J. Volc, G. Marko-Varga, L. Gorton, Điện cực dán carbon biến đổi pyranose
oxidase để xác định monosacarit, Phân tích điện 10 (1998) 223–230.
[27] D. Odaci, A. Telefoncu, S. Timur, Cảm biến sinh học pyranose oxidase dựa trên các điện cực
dán carbon biến đổi ống nano carbon (CNT), Sens. Thiết bị truyền động. B Chem. 132
(2008) 159–165.
[28] C. Ozdemir, F. Yeni, D. Odaci, S. Timur, Cảm biến sinh học glucose điện hóa bằng pyranose
oxidase cố định trong ma trận nanocomposite hạt nano vàng-polyaniline / AgCl / gelatin ,
Food Chem. 119 (2010) 380–385.
[29] D. Odaci, A. Telefoncu, S. Timur, Maltose biosensing dựa trên sựđồng cố định của alpha-
glucosidase và pyranose oxidase,
Hóa sinh 79 (2010) 108–113.
[30] M. Yuksel, M. Akin, C. Geyik, D.O. Demirkol, C. Ozdemir, A. Bluma, T. Hopfner, S.
Beutel, S. Timur, T. Scheper, Giám sát sinh học glucose ngoại tuyến trong nuôi cấy nấm men
bằng điện cực vàng biến đổi polyamidoamine / cysteamine, Biotechnol. Prog. 27 (2011)
530–538.
[31] TC Gokoglan, S. Soylemez, M. Kesik, S. Toksabay, L. Toppare, Selen chứa cảm biến sinh
học pyranose oxidase dựa trên polym er để phát hiện glucose, Food Chem. 172 (2015)
219–224.
[32] K.V. Ozdokur, B. Demir, E. Yavuz, F. Ulus, Ç. Erten, tôi_. Aydın, D.O. Demirkol, L. Pelit,
S. Timur, F.N. Ertas, Pyranose oxidase và điện cực nanocomposite sinh học Pt-MnOx được
bắc cầu bởi chất lỏng ionic cho các ứng dụng cảm biến sinh học, Sens. Thiết bị truyền động.
B Chem. 197 (2014) 123–128.
[33] M. Wooten, S. Karra, M. Zhang, W. Gorski, Về sự chuyển electron trực tiếp , cảm nhận và
hoạt động của enzyme trong ống nano glucose oxidase / carbon sy thân, Anal. Chem. 86
(2014) 752–757.
[34] E. Guler, H.C. Soyleyici, D.O. Demirkol, M. Ak, S. Timur, Một polymer dẫn điện chức năng
mới như một nền tảng cố định, Mat. Sci. Eng. C 40 (2014) 148–156.
[35] J.H. Kim, SG Hong, Y. Wee, S. Hu, Y. Kwon, S. Ha, J. Kim, Lớp phủ kết tủa enzyme của
pyranose oxidase trên ống nano carbon và các ứng dụng điện của chúng, Biosens. Điện tử
sinh học. 87 (2017) 365–372.
[36] F. Tasca, S. Timur, R. Ludwig, D. Haltrich, J. Volc, R. Antiochia, L. Gorton, Cảm biến sinh
học amperometric để phát hiện đường based trên dây điện của các oxidase pyranose khác
nhau và dehydrogenase pyranose với polyme oxy hóa khử osmium trên điện cực than chì,
Điện phân tích 19 (2007) 294–302.
[37] S. Kurbanoglu, M.N. Zafar, F. Tasca, I. Aslam, O. Spadiut, D. Leech, D. Haltrich, L.
Gorton, Phân tích phun dòng amperometric của glucose và galactose dựa trên pyranose 2-
oxidase và polyme osmium được thiết kế cho các ứng dụng cảm biến sinh học ,
Electroanalysis 30 (2018) 1496–1504.
[38] K.Y. Kwon, J.Y. Kim, J. Youn, C. Jeon, J. Lee, T. Hyeon, H.G. Park, H.N. Chang, Y. Kwon,
các điện cực d dựa trên
S. Ha, H.-T. Jung, J. Kim, Nghiên cứu hoạt động điện hóa của
glucose oxidase (GOx) và pyranose oxidase (POx) in carbon mesoporous: hướng tới các
ứng dụng cảm biến sinh học và pin nhiên liệu sinh học, Electroanalysis 26 (2014) 2075–
2079.
[39] A. Sassolas, L.J. Blum, B.D. Leca-Bouvier, Chiến lược cố định để phát triển cảm biến sinh
học enzyme, Biotechnol. Adv. 30 (2012) 489–511.
[40] E. Nazaruk, R. Bilewicz, Hoạt động xúc tác của cácidase bò được lưu trữ trong các pha khối
lipid trên các điện cực, Bioelectrochemistry 71 (2007) 8–14.
[41] AM Da ̨browska, JS Tarach, M. Kurowska, 1,5-Anhydroglucitol (1,5-AG) và tính hữu ích
của nó trong thực hành lâm sàng, Med. Biol. Sci. 26 (2012) 11–17.
[42] JB Buse, JL Freeman, S.V. Edelman, L. Jovanovic, JB McGill, Serum 1,5 anhydroglucitol
(GlycoMark): một chất đánh dấu đường huyết ngắn hạn, Diabetes Technol. Ther. 5 (2003)
355–363.
[43] W. Nowatzke, M.J. Sarno, N.C. Birch, D.F. Stickle, T. Eden, T.G. Cole, Đánh giá xét nghiệm
huyết thanh 1,5-anhydroglucitol (GlycoMark) và xác định khoảng thời gian tham chiếu trên
máy phân tích Hitachi 917, Clin. Chim. Acta 350 (2004) 201–209.
[44] D.O. Mook-Kanamori, M.M. Selim, A.H. Takiddin, H. Al-Homsi, K.A.Al Mahmoud, A. Al-
Obaidli, M.A. Zirie, J. Rowe, N.A. Yousri, E.D. Karoly, T. Kocher, W. Sekkal Gherbi,
O.M. Chidiac, M.J. Mook-Kanamori, S. Abdul Kader , W.A. Al Muftah, C. McKeon, K.
Suhre, 1,5-Anhydroglucitol trong nước bọt là một dấu hiệu không xâm lấn của kiểm soát
đường huyết ngắn hạn, J. Clin. Nội tiết. Metab. 99 (2014) E479–E483.
[45] G.D. Chusney, M. Philippa, J.C. Pickup, So sánh các phương pháp sắc ký lỏng vi enzyme và
hiệu suất cao để xét nghiệm anhydroglucitol huyết thanh 1,5 , Clin. Chim. Acta, 235 (19,
95), 91–99.
[46] H. Furusawa, Y. Ichimura, K. Nagamine, R. Shiwaku, H. Matsui, S. Tokito, Phát hiện 1,5-
anhydroglucitol như một dấu ấn sinh học cho bệnh tiểu đường bằng cách sử dụng cảm biến
sinh học ed bóng bán dẫn hiệu ứng trường hữu cơ, Công nghệ 6 (2018) 77.
[47] S. Timur, Y. Yigzaw, L. Gorton, Dây điện của pyranose oxidase với polyme oxy hóa khử
osmium, Sens. Thiết bị truyền động. B Chem. 113 (2006) 684–691.
[48] S. Sahin, T. Wongnate, L. Chuaboon, P. Chaiyen, E.H. Yu, Tế bào nhiên liệu enzyme với
biến thể kháng oxy của pyranose-2-oxidase làm chất xúc tác sinh học cực dương, Biosens.
Điện tử sinh học. 107 (2018) 17–25.
[49] O. Spadiut, I. Pisanelli, T. Maischberger, C. Peterbauer, L. Gorton, P. Chaiyen, D. Haltrich,
Kỹ thuật pyranose 2-oxidase: cải tiến cho tế bào nhiên liệu sinh học và các ứng dụng thực
phẩm thông qua thiết kế protein bán hợp lý, J. Biotechnol. 139 (2009) 250–257.
10 A.T. Abrera và cộng sự / Điện hóa sinh 132 (2020) 107409

[50] T.H. de Koker, MD Mozuch, D. Cullen, J. Gaskell, P.J. Kersten, Phân lập và tinh
chếpyranose 2-oxidase từ Phanerochaete chrysosporium và đặc tính của cấu trúc và quy
định gen, Appl. Environ. Vi sinh vật. 70 (2004) 5794–5800.
[51] F. Giffhorn, Nấm pyranose oxidase: sự xuất hiện, tính chất và ứng dụng kỹ thuật sinh
học trong hóa học carbohydrate, Appl. Microbiol. Công nghệ sinh học. 54 (2000) 727–740.
[52] O. Courjean, F. Gao, N. Mano, Deglycosyl hóa glucose oxidase để điện hóa glucose trực
tiếp và hiệu quả trên điện cực carbon thủy tinh, Angew. Hóa học. Quốc tế Ed. Engl. 48
(2009) 5897–5899.
[53] N. Kiba, A. Itagaki, S. Fukumura, K. Saegusa, M. Furusawa, Xác định dòng chảy tiêm
glucose trong huyết tương có độ nhạy cao bằng cách sử dụng pyranose oxidase cố định và
cảm biến peroxidase hóa học, Hậu môn. Acta 354 (1997) 205–210.
[54] J. Rocker, M. Schmitt, L. Pasch, K. Ebert, M. Grossmann, Việc sử dụng glucose oxidase và
catalase để giảm enzyme hàm lượng ethanol toàn phần trong rượu vang, Food Chem.
210 (2016) 660–670.
[55] P. Halada, D. Brugger, J. Volc, C.K. Peterbauer, C. Leitner, D. Haltrich, Quá trình oxy hóa
Phe454 trong phân đoạn gating làm bất hoạt Trametes pyranose oxidase nhiều màu trong
quá trình quay vòng chất nền, PLoS One 11 (2016) e0148108.
[56] D. Brugger, I. Krondorfer, C. Shelswell, B. Huber-Dittes, D. Haltrich, C.K. Peterbauer, Kỹ
thuật pyranose 2-oxidase chophản ứng oxy mo, PLoS One 9 (2014) e109242.
[57] D. Brugger, L. Sützl, K. Zahma, D. Haltrich, C.K. Peterbauer, L. Stoica , Đặc tính điện hóa
của pyranose 2-oxidase variant N593C cho thấy sự mất hoàn toàn chức năng oxidase với
việc bảo quản đầy đủ chất nền (dehydrogenase) activit y, Phys. Chem. Chem. Phys. 18
(2016) 32072–32077.
[58] O. Spadiut, G. Posch, R. Ludwig, D. Haltrich, C.K. Peterbauer, Đánh giá các hệ thống biểu
hiện khác nhau cho biểu hiện dị thể của pyranose 2oxidase từ Trametes nhiều màu trong E.
coli, Microb. Thực tế tế bào. 9 (2010) 14.
[59] O. Spadiut, C. Leitner, C. Salaheddin, B. Varga, B.G. Vertessy, TC Tan, C. Divne, D.
Haltrich, Cải thiện khả năng chịu nhiệt và hoạt động xúc tác của pyranose 2oxidase từ
Trametes nhiều màu bằng thiết kế hợp lý và bán hợp lý, FEBS J. 276 (2009) 776–792.
[60] I. Pisanelli, P. Wührer, Y. Reyes-Dominguez, O. Spadiut, D. Haltrich, C. Peterbauer,
Biểu
hiện dị thể và đặc tính sinh hóa của pyranose 2-oxidase mới từ ascomycetes
Aspergillus nidulans và Aspergillus oryzae, Appl. Microbiol. Biotechnol. 93 (2012)
1157–1166.
[61] C. Salaheddin, Y. Takakura, M. Tsunashima, B. Stranzinger, O. Spadiut, M. Yamabhai, C.K.
Peterbauer, D. Haltrich, Đặc tính của recombinant pyranose oxidase từ mycorrhizal
basidiomycete Lyophyllum shimeji (hon-shimeji), Microb. Thực tế tế bào. 9 (2010) 57.
[62] M.Q. Ai, F.F. Wang, Y.Z. Zhang, F. Huang, Thanh lọc pyranose oxidase từ nấm thối trắng
Irpex lacteus và sự hợp tác của nó với laccase trong thoái hóa lignin, Quy trình Biochem. 49
(2014) 2191–2198.
[63] S. Bastian, M.J. Rekowski, K. Witte, DM Heckmann-Pohl, F. Giffhorn, Kỹ thuật pyranose
2-oxidase fro m Peniophora gigantea hướng tới cải thiện khả năng chịu nhiệt và hiệu quả
xúc tác, Appl. Microbiol. Công nghệ sinh họcl. 67 (2005) 654–663.
[64] M. Bannwarth, D. Heckmann-Pohl, S. Bastian, F. Giffhorn, G.E. Schulz, Hình học phản ứng
và biến thể chịu nhiệt của pyranose 2-oxidase từ nấm thối trắng Peniophora sp, Hóa sinh 45
(2006) 6587–6595.
[65] A. Schäfer, S. Bieg, A. Huwig, G.-W. Kohring, F. Giffhorn, Thanh lọc bằng sắc ký ái lực
miễn dịch, đặc tính và phân tích cấu trúc của một pyranose oxidase chịu nhiệt từ nấm thối
trắng Phlebiopsis gigantea, Appl. Environ. Vi sinh vật. 62 (1996) 2586–2592.
[66] Y. Takakura, S. Kuwata, Thanh lọc, mô tả và nhân bản phân tử của một pyranose oxidase từ
cơ thể quả của basidiomycete, Tricholoma matsutake, Biosci. Công nghệ sinh học. Hóa
sinh. 67 (2003) 2598–2607.